Tests immunologiques : les auto-anticorps anticorps Tests

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  • Tests immunologiques pour le praticienTests immunologiques pour le praticienQue mesureQue mesure--tt--on ?on ?Quelle spcificit ?Quelle spcificit ?

    Tests immunologiques pour le praticienTests immunologiques pour le praticienQue mesureQue mesure--tt--on ?on ?Quelle spcificit ?Quelle spcificit ?

    17 novembre 201117 novembre 2011

    Pascale Roux-LombardLaboratoire dImmunologie et

    dAllergologie Clinique

    Tests immunologiques :Tests immunologiques :les autoles auto--anticorpsanticorps

    Tests immunologiques :Tests immunologiques :les autoles auto--anticorpsanticorps

    Que mesure-t-on ?Que mesure t on ? Rappels sur les auto-anticorps Mthodes de mesure

    Quelle spcificit ?

    Novembre 2011

    Les anti-nuclaires (ANA) Les ANCA

  • Novembre 2011

    Affinit haute Affinit faible

    Affinit / Avidit des Ac

    Ac Ac

    Novembre 2011

    Ag Ag

  • Rponse Rponse polyclonalepolyclonale : plusieurs : plusieurs pitopespitopes dun dun antigne sont reconnus par des antigne sont reconnus par des AcAc daffinit daffinit

    diffrentesdiffrentes

    Rponse Rponse polyclonalepolyclonale : plusieurs : plusieurs pitopespitopes dun dun antigne sont reconnus par des antigne sont reconnus par des AcAc daffinit daffinit

    diffrentesdiffrentes

    Novembre 2011

    Affinit / Avidit des AcAvidit : force avec laquelle un anticorps multivalent se lie un antigne multivalent

    Novembre 2011

    Affinit :104 KeqAvidit : 104

    Affinit :104Avidit : 106

    Affinit :104Avidit : 1010

  • Pour un autoPour un auto--AcAc : un titre ou : un titre ou l itl itune valeur en units ne une valeur en units ne

    reprsente pas une quantit reprsente pas une quantit en nombre de molcules en nombre de molcules mais rsulte de la quantit mais rsulte de la quantit ET de laviditET de lavidit

    Novembre 2011

    ET de l avidit ET de l avidit

    Dtection des auto-anticorpsPrincipe

    Lavages

    serum

    Novembre 2011

    Ag

    m

  • Dtection des auto-anticorpsPrincipe

    Dtection

    Novembre 2011

    ApplicationsApplicationsApplicationsApplications

    Mthode Substrat Dtection

    I fl C ll l ti Fl hImmunofluorescence indirecte

    Cellules ou tissus Fluorochrome + microscope

    Elisas Protines ou peptides (Purifis, synthtiques, ou recombinant) dans puits de polystyrne

    Enzyme + DO

    Immunoblots Protines ou peptides Enzyme + DO

    Novembre 2011

    p p(Purifis, synthtiques, ou recombinant) sur membrane de cellulose

    y

    Multiplex Protines ou peptides Sur billes

    Fluorochrome + laser

  • AUTOAUTO--ANTICORPS ANTIANTICORPS ANTI--NUCLEAIRESNUCLEAIRESQuelques dfinitionsQuelques dfinitions

    AUTOAUTO--ANTICORPS ANTIANTICORPS ANTI--NUCLEAIRESNUCLEAIRESQuelques dfinitionsQuelques dfinitions

    AAN = ANA = Anticorps Anti-NuclairesAAN ANA Anticorps Anti NuclairesAuto-anticorps spcifiques pour les antignes du noyau

    cellulaire, mais comprenant aussi certains Ac dirigs contre des Ag de localisation cytoplasmique

    FAN = Facteur Anti-Nuclaireterme utilis pour dsigner les ANA dpists par i fl i di t

    Novembre 2011

    immunofluorescence indirecteSubstrat : cellules humaines gros noyau (Hep-2)

    FAN/ANA

    membranaire centromrefuseau mit.homognemouchetnuclolaire

    Novembre 2011

  • ANA par IFI (FAN)ANA par IFI (FAN)ANA par IFI (FAN)ANA par IFI (FAN)

    Avantages Inconvnients

    Trs sensible(sauf SSA)

    Dtection de trs nombreux auto-AC

    Peu spcifiqueOprateur dpendant et subjectifUn aspect peut en

    Novembre 2011

    Ag dans sa conformation naturelle

    Un aspect peut en masquer un autre

    AutoAuto--anticorps anticorps ANA ANA dans la population normaledans la population normale

    AutoAuto--anticorps anticorps ANA ANA dans la population normaledans la population normale

    Pourcentage de positivit en fonction du titre

    Titre 1/10 1/40 1/80 1/160 > 1/320

    % de positivit

    32 % 13 % 3 %

    Novembre 2011

    positivit

    Adapt de EM Tan et al., ANA in healthy individuals Arthritis Rheum. 1997

  • AutoAuto--anticorps et vieillissementanticorps et vieillissementAutoAuto--anticorps et vieillissementanticorps et vieillissement

    Pourcentage de positivit en fonction de l ge

    Age < 59 60-69 70-79 80-89 > 90

    ANA 3 % 10 % 12 % 12 % 20 %

    Novembre 2011

    FR 1 % 3 % 5 % 10 % 23 %

    ANA

    Scl-70fibrillarineRNA-pol

    nRNP,SmSSA, SSB

    tRNA synth.

    ADNnatifhistones

    nuclosomes

    laminepores nuclaires

    (gp120)

    CENPNUMA

    centrioles

    membranaire centromrefuseau mit.homognemouchetnuclolaire

    Novembre 2011

    p y (gp )

    SclrodermieMCTDLED

    MCTDLED

    Sjgrendivers

    LEDmdicamentssclrodermie

    Atteintes hpatiques

    Vasculites

    SclrodermieCRESTtumeurs

    connectivites

  • ApplicationsApplicationsApplicationsApplicationsMthode Substrat Dtection

    Immunofluorescence indirecte

    Cellules ou tissus Fluorochrome + microscope

    Elisas Protines ou peptides (Purifis, synthtiques, ou recombinant) dans puits de polystyrne

    Enzyme + DO

    Immunoblots Protines ou peptides (Purifis, synthtiques, ou

    Enzyme + DO

    Novembre 2011

    ( , y q ,recombinant) sur membrane de cellulose

    Multiplex Protines ou peptides Sur billes

    Fluorochrome + laser

    Antigne naturel Antigne recombinant

    Variabilit des tests : Importance du substrat

    Novembre 2011

    multiples pitopes

    Ac polyclonaux 1 seul pitope

  • Variabilit des tests

    Novembre 2011

    Pr R. Humbel, Luxembourg

    Utilit clinique des ANAUtilit clinique des ANAUtilit clinique des ANAUtilit clinique des ANAMaladies pour lesquelles les ANA sont utiles au diagnostic

    LED (95 -100 %)Sclrose systmique (Sclrodermie) (60 - 80%)Syndrome de Sjgren (60 - 80%)Hpatites auto-immunes (60 - 90%)

    Maladies pour lesquelles les ANA sont ncessairesau diagnostic

    LED induit par mdicaments (~100 %)MCTD (100 %)

    Novembre 2011

    MCTD (100 %)

    Maladies pour lesquelles les ANA sont utiles au pronostic ou au suivi

    Raynaud (20 - 60 %)Arthrite juvnile chronique avec uvite (20 - 50 %)

  • Valeur pronostique des ANAValeur pronostique des ANAValeur pronostique des ANAValeur pronostique des ANA

    Raynaud Probabilit de dvelopper une maladie systmique

    ANA 7 %sans ANA : 7 %avec ANA : 30 %

    Arthrite juvnile chronique avec uvite

    la positivit des ANA augmente significativement le

    Novembre 2011

    la positivit des ANA augmente significativement le risque duvite

    GrossesseLa prsence danti-SSA/Ro augmente lincidence des blocs de conduction congnitaux

    ANA et atteintes spcifiques dorganesANA et atteintes spcifiques dorganesANA et atteintes spcifiques dorganesANA et atteintes spcifiques dorganes

    LED : anti-ADNn et/ou anti-Sm ---> atteinte rnaleanti-rRNP ---> atteinte SNCanti-SSA/Ro ---> atteinte nonatale

    ---> dficit C2, C4Sclrodermie

    anti-Scl-70 ---> atteinte diffuseanti-ARN polymrase ---> atteinte rnale (moins atteinte pulmonaire)

    Novembre 2011

    ANTI-U3RNP HTAP /fibrose pulmonaire

    Polymyositeanti-ARNt synthtases ---> fibrose pulmonaire

  • Aspects cytoplasmiquesAspects cytoplasmiquesAspects cytoplasmiquesAspects cytoplasmiques

    Anti-rRNP (ribo-RNP) LEDAnti-SRPAnti-synthtase

    Novembre 2011Jo-1 PL-12 PL-7

    Les antiLes anti--synthtasessynthtasesLes antiLes anti--synthtasessynthtases

    Auto-anticorps dirigs contre des enzymes i li d l t d ti d lARNimpliques dans la traduction de lARNm

    Enzymes : aminoacyl tRNA synthetase 1 par AA

    Novembre 2011

  • Les Ac antiLes Ac anti--synthtasessynthtasesLes Ac antiLes Ac anti--synthtasessynthtases

    Nom Antigne cible Prvalence

    Anti-Jo1 (PL-1) Histidyl-tRNA synth 20-30 %( ) y y

    Anti-PL-7 Threonyl-tRNA synth 5%

    Anti-PL-12 Alanyl-tRNA synth 5%

    Anti-EJ Glycyl-tRNA synth < 1%

    Anti OJ Isoleucyl tRNA synth < 1%

    Novembre 2011

    Anti-OJ Isoleucyl-tRNA synth < 1%

    Anti-KS Asparaginyl-tRNA synth < 1%

    Anti-Ha Tyrosyl-tRNA synth < 1%

    Anti-Zo Phenylalanyl-tRNA synth < 1%

    Syndrome AntiSyndrome Anti--synthtasesynthtaseSyndrome AntiSyndrome Anti--synthtasesynthtase

    Myosites (90%)Pneumopathie intersticielle (60%)Arthrites (50%)Raynaud (40%)Mains de mcanicien (hyperkeratose fissuraire) (30%) Fivre (20%)

    Novembre 2011http://www.orpha.net/data/patho/Pro/en/Antisynthetase-FRenPro8611.pdf

  • AntiAnti--synthtase et atteinte synthtase et atteinte interstitielle interstitielle pulmonaire pulmonaire

    AntiAnti--synthtase et atteinte synthtase et atteinte interstitielle interstitielle pulmonaire pulmonaire

    Une atteinte pulmonaire est trs frquemment associe la prsence dacanti-synthtase (surtout Jo-1) : 60-70%Parfois latteinte pulmonaire est isole (amyositique)

    Novembre 2011

    La prsence danti-synthtase doit faire rechercher une atteinte pulmonaire

    AntiAnti--synthtase et atteinte synthtase et atteinte interstitielle interstitielle pulmonairepulmonaire

    AntiAnti--synthtase et atteinte synthtase et atteinte interstitielle interstitielle pulmonairepulmonaire

    Possibilit datteinte interstitielle en labsence danti-synthtase ?

    Tous les anti-synthtase ne sont pas identifisDautres auto-Ac sont associs aux tt i t l i

    Novembre 2011

    M Fathi et al. Ann Rheum Dis, 2004

    atteintes pulmonaires

  • Atteinte interstitielle pulmonaireAtteinte interstitielle pulmonaireet antiet anti--synthtasesynthtase

    Atteinte interstitielle pulmonaireAtteinte interstitielle pulmonaire