Thèse Pharmacien. SOMMAIRE - African Index Medicusindexmedicus.afro.who.int/iah/fulltext/Thesis_Bamako/05P38.pdf · - Caractère botanique ... des personnes sécrétrices ... La

Thèse Pharmacien.

Etude de l’activité hémagglutinante des lectines. 1

SOMMAIRE :

Dédicaces Remerciements Abréviations et sigles

Première partie :

- Introduction ………………………………………………………… 10-11 - Objectifs ……………………………………………………………. 12

Deuxième partie :

1 -Revue de la littérature sur les plantes étudiées et aperçu générale sur quelques lectines connues : ……………………………………… 14

1-1 Erythrina senegalensis : ……………………………………….. 14

- Systématique de la plante …………………………………… 14 - Nom vernaculaire …………………………………………….. 14 - Habitat …………………………………………………………. 14 - Caractère botanique ……………………………………………. 14 - Cycle végétatif ………………………………………………… 15 - Drogue ………………………………………………………… 15 - Usage en médecine traditionnelle ……………………………… 15

1-2 Cassia sieberiana : ……………………………………………… 17

- Systématique de la plante ……………………………………… 17 - Noms vernaculaire et synonyme ……………………………… 17 - Caractère botanique …………………………………………… 17 - Habitat ………………………………………………………… 18 - Emplois ……………………………………………………… 18 - La drogue …………………………………………………… 18 - Chimie ………………………………………………………… 19 - Pharmacologie ………………………………………………… 20

1-3 Abrus precatorius : ……………………………………………… 22

- Systématique de la plante ……………………………………… 22 - Caractère botanique …………………………………………… 22 - Habitat ………………………………………………………… 22 - Noms vernaculaires et synonymes ……………………………. 23 - Usage en médecine traditionnelle ……………………………… 23 - La drogue ……………………………………………………… 23 - Phytochimie …………………………………………………… 23 - Pharmacologie de la graine …………………………………… 25

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1-4 Prosopis africana : …………………………………………… 28

- Systématique de la plante ………………………………….… 28 - Caractère botanique …………………………………………. 28 - Habitat ………………………………………………………. 29 - Usage en médecine traditionnelle …………………………… 29 - La phytochimie ……………………………………………… 30 - La drogue ……………………………………………………. 30 - Pharmacologie de la graine …………………………………. 30

1 -5 Les lectines : ………………………………………………… 34

- Terminologie et définition ……………………………………. 34 - Classification …………………………………………………. 34 - Mise en évidence du rôle des lectines chez les plantes ………. 35 - Activités insecticide des lectines des plantes ………………… 37 - Découvertes et applications ………………………………….. 38 - Spécificités chimiques ………………………………………. 38-39

2 -Quelques notions sur le système A.B.O. : ……………………… 43

Troisième partie

3 - Notre étude : ……………………………………………………… 45

3-1- Matériel et méthode ………………………………………… 45 3-1-1- Matériel : ……………………………………………. 45

- Matériel végétal ……………………………………… 45 - Matériel humain ……………………………………… 45 - Matériel technique …………………………………… 46-47

3-1-2– Méthodes : …………………………………………… 48 - Récolte et triage des échantillons ……………………… 48 - Extractions : ……………………………………………. 48

• Broyage ……………………………………….. 48 • Extraction par macération à l eau distillée ……. 49 • Extraction par macération à l eau physiologique … 50 • Extraction par une solution saline NACL ……… 51 • Extraction par le phosphate disodique pur (PDS) 52

- Test d’agglutination : …………………………………… 53 • Collecte des hématies ………………………….. 53 • Lavage des hématies …………………………… 53 • Dilution des hématies …………………………. 53 • Technique d’agglutination …………………… 54

- Purification des extraits bruts positifs ………………… 57-58 - Test d’inhibition : ……………………………………… 58

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A - Essai sur l’extrait Ulex europaeus : ……………… 58 ��Essai par la salive : ………………………. 58 Principe du test ……………………………… 59 Préparation de l’échantillon …………………. 59 Test en tube …………………………………. 59 Interprétation ………………………………… 60

B - Essai sur l extrait d E. senegalensis. ……………… 60 ��Essai par la salive …………………………. 60 Principe du test ……………………………….. 60 Test en tube …………………………………… 60 Interprétation …………………………….… 60-61 ��Essai par le fucose : …………………..… 61 Principe du test …………………………..… 61 Test en tube ……………………………..…. 61 Interprétation …………………………….… 61

3 2- Résultats : ………………………………………………..…. 62

- Recherche d’agglutination dans quelques extraits bruts de plantes 62-65 - Purification par précipitation différentielle ……………………….. 66 - Purification des extraits bruts positifs par des solvants organiques 67-68 - Inhibition d’agglutination du réactif de Ulex europaeus par la salive des personnes sécrétrices ……………………………………………. 69 - Recherche d’inhibition de l’agglutination de l’extrait d’E. senegalensis par la salive ……………………………….…….... 69 - Recherche d’inhibition de l’agglutination de l’extrait d’E. senegalensis par le fucose, le galactose et le glucose ……….…. 69

Quatrième partie

4 – Commentaire et discussion : ……………………………………… 71-74

5 – Conclusion : ………………………………………………………… 74

Cinquième partie

6 – Référence Bibliographiques : ……………………………………. 76-78

Sixième partie

7 – Annexe : ………………………………………………………..… 79-84

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DEDICACES :

- Au tout Puissant Dieu, le clément, le Miséricordieux, qui nous a donné la santé, la force nécessaire pour réaliser ce travail.

- A ma mère Feue Doussouba TRAORE. Nous n’oublierons jamais la tendresse par laquelle vous nous avez traitée. Vous vous êtes battus pour notre réussite. Vous avez sacrifié votre vie, votre bonheur pour nous réserver un meilleur avenir. Merci Mâh pour vos nombreux cadeaux, que vous nous avez attribués pour nous encourager à étudier. Merci encore Dawa pour tout. Dors en paix Doussouba que la terre vous soit légère. - a toutes les femmes africaines. - A mon père Vous avez opté pour l’inscription de vos enfants à l’école. Je me rappelle encore, vous avez dit « aucun de mes fils ne me dira qu’il n’a pas été à l’école ». votre détermination dans la réussite de vos enfants, votre qualité humaine font de vous un père respecté et adoré. Merci ancien pour les cours du soir que vous nous avez donné pendant nos études primaires. Merci Bâh pour tous. - A tous les enseignants. - A Mr Karim TRAORE à Sanankoroba, Mr Coulibaly dit Coulou

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REMERCIEMENTS:

- A ma grand-mère Gniné TRAORE. - A mes Oncles et Tantes : • Oncle Balla TRAORE • Oncle Moriba TRAORE • Tante Mariame TOURE • Tante Djénéba TOURE • Tante Djinéssira TRAORE

- A tous les membres de la familles Doumbia à Sanankoroba : - Djénémoussa DOUMBIA, Doussouba TRAORE (Feue), Téba

TRAORE, Yacouba DOUMBIA, Rokia TRAORE, Aïssata DOUMBIA, Seydou DOUMBIA, Séba TRAORE, Daouda DOUMBIA, (Feue) Djénébou DOUMBIA, Awa DOUMBIA, Ibrahima DOUMBIA, Assana DOUMBIA, Teniba DOUMBIA, Ami DOUMBIA, Fanta DOUMBIA, et tous les enfants.

- A tous les membres de la familles Doumbia à Banankabougou : - Madigui DOUMBIA, mama TRAORE, Soumba TRAORE, Oumar

DOUMBIA, Modibo DOUMBIA, Fatoumata DOUMBIA, Yiriba DOUMBIA, Oumou DOUMBIA, Smadjié DOUMBIA, ladji.

- A tous les membres de la famille Doumbia au Camp para de Koulouba :

- Aliou DOUMBIA, Ramatou TRAORE, Siaka DOUMBIA, Rokia DABO, Youssouf DOUMBIA, Youssouf KONE, Awa DOUMBIA, Sira BAGAYOKO, Binta et tous les enfants.

- A tous les membres de la famille Traoré au Point « G » : - Mamadou B TRAORE, Assitan DOUMBIA, et tous les enfants. - A tous les membre de la familles Doumbia à Sikasso : - Mahamadou DOUMBIA, Nakani TRAORE, et tous les enfants. - A tous les membres de la famille Doumbia à Ségou : - Lamine DOUMBIA, Atoumata TRAORE, et tous les enfants. - A tous les membres de la famille Dougoutigui DOUMBIA à

Djélibougou. - A toute la famille Laser, Kassim, Guiélou, Soriba au Camp Para de

Koulouba. - A tous le village Digato, Sido, Sanankoroba. - A mon beau frère Drahamane SABADOGO (Feu)

Je voudrais exprimer ma sincère reconnaissance, votre prévenance, vos conseils, vos encouragements, votre efficace et bienveillance m’ont été d’un précieux secours à ma formation. J’en garderai un excellent souvenir.

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- A mes ami(es) : Ichaïka Ambara TRORE, Souleymane TRAORE, Assétou TRAORE, Abdoulaye GOUALE, Ticoussa dit Dougoutigui DOUMBIA, Soumaïla TRAORE, Moussa DOUMBIA (Digato), Souleymane DOUMBIA (Digato)°,

- A mes camarades et promotion de la FMPOS. - A tous les internes du CNTS : Amadou DIAWARA, Hamidou

TRAORE, Abdoulaye TRAORE, Soumaïla GUINDO, Nadji OUEDRAOGO, Moctar DJIGUIBA, Eves TANGARA, Tékété, Abdrahamane DIARRA.

- A tous les internes du DMT : - A Dr Sangaré Awa SIDBE, Dr Adama BERTHE, Dr Sinamadou, Dr

Mahamadou KEÏTA (info), Mr Soleymane DEMBELE Ingénieur des Eaux et forêts en service au DMT, Mr N’golo BALLO Technicien des Eaux et Forêts.

Je rappelle que « toutes les grandeurs de ce monde ne valent pas un bon ami ».

- au corps professoral et au personnel de la FMPOS ainsi qu’à tous les enseignants.

- Au Directeur et personnel du CMTS. - Au Directeur et personnel du DMT de l’INRSP. - A l’université d’OSLO. - A l’Etat Malien.

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Au membre du Jury : A notre maître et Directeur de thèse :

• Professeur Anatole TOUNKARA • Maître de conférence agrégé en Immunologie à la FMPOS. • Chef de DER de sciences fondamentales à la FMPOS. • Professeur chargé de cours d’immunologie à la FMPOS. • Directeur du Centre National de Transfusion Sanguine. • Directeur du Projet Anti-VIH à la FMPOS.

Honorable maître vous nous avez accueilli à bras ouvert en nous confiant ce travail. Vous n’avez ménagé ni votre temps, ni votre énergie pour nous, guider dans sa réalisation. Nous avons toujours apprécié votre rigueur scientifique et vos qualités humaines. Votre détermination dans l’encadrement des étudiants et du travail bien fait, font de vous un maître adoré et respecté. Recevez ici cher Maître toute notre reconnaissance et nos vifs remerciements. A notre maître et co-Directeur de thèse :

• Professeur Drissa DIALLO. • Maître de conférence agrégé en pharmacognosie. • Professeur chargé de cours de pharmacognosie à la FMPOS. • Directeur du Département de Médecine Traditionnelle.

Epris du travail bien fait, vous ne ménagez aucun effort pour en créer les conditions. Votre sens aigu de la recherche, votre rigueur dans le travail, votre désir de transmission du savoir forcent notre admiration. Cher Maître nous vous prions respectueusement d’accepter l’expression de notre sincère reconnaissance et nos vifs remerciements.

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LISTE DES ABREVIATIONS OU ABREVIATION ET SIGLES : CNTS : Centre National de Transfusion Sanguine DMT : Département de Médecine Traditionnelle. INRSP : Institut National de Recherche en Santé Publique. Kg : Kilogramme. g : Gramme mg : Milligramme. ml : Millilitre. µg: Microgramme. °C: Degré celsuis. T° : température. cc : Millilitre. % : pourcent NaCl : Chlorure de Sodium. m : Mètre cm : Centimètre. � : Alpha �: Béta. Fig : figure nm:: Nanomètre. Syn : Synomime. Ma : Mandé. Ba : Bambara. Vern : Vernaculaire. NAAN : Acide N-acetylneuraminique. h: Heure. P.D.P: Phosphate Disodique Pur. tpm : Tour par minute. mn: minute (NH4)2SO4 : Sulfate d’ammonium.

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PREMIERE PARTIE

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Introduction

Les lectines sont des substances de nature protéique extraits de plantes d’animaux ou

d’insectes. Ces substances sont capables de se fixer de façon spécifique et réversible

à des résidus osidiques des membranes cellulaires sans montrer d’activité

enzymatique (Bruneton, 1993).

Les lectines des plantes sont des protéines possédant au moins un domaine non

catalytique de liaison réversible à des mono-ou oligossaccharides spécifiques. Elles

peuvent se classer en trois groupes selon le nombre de domaines liaison aux sucres

et la présence ou non d’une activité catalytique spécifique (Abovie .com2004)

La plupart des lectines des végétaux supérieurs sont localisés dans la graine : elles se

forment au cours de la maturation et disparaissent au cours de la germination. Elles

sont surtout fréquentes chez les FABACEAE (arachide, soja, lentille, canavalia,

haricot etc.). ( Bruneton ,1993 ).

En 1888 Stilmark a découvert des agglutinines dans la graine de haricot. Mais c’est

60 ans plu tard qu’il a été reconnu que certaines agglutinines de graines possédaient

la spécificité de groupe sanguin humain (Bird, 1974).

La famille des Légumineuses offre le plus grand nombre d’espèces contenant des

lectines végétales (Makela .1954) quant aux lectines animales c’est le genre

helicidae qui paraît la source la plus utile des agglutinines « invertébrées. »

(Nouguchi 1974).

La famille des légumineuses est assez représentée dans les pays tropicaux comme le

Mali (Kerharo,Adam 1974).

La flore malienne à notre connaissance est très peu explorée dans le but d’extraire

des lectines et de les répertorier. Notre flore est incontestablement composée d’une

riche variété de plantes non encore répertoriées.

Beaucoup de lectines sont déjà décrites dans la littérature scientifique. De

nombreuses lectines sont capables de se fixer aux cellules sanguines et provoquer

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leur agglutination. On parle alors de phyto-agglutination et plusieurs d’entre elles le

fond avec une spécificité de groupe. C’est pourquoi celles-ci sont utilisées comme

réactif de groupage : c’est le cas de la lectine de Dolichos biflorus qui agglutine

spécifiquement les hématies A1(Bird,1951) alors que celle d’Arachis hypoguea

Agglutine les hematies B.

Certaines lectines sont mitogènes quelques-unes peuvent différencier les cellules

normales et les cellules tumorales ; leur toxicité est parfois importante.

La mise au point de la technique d’extraction de la lectine à partir des graines de la

flore malienne peut apporter un outil précieux pour permettre de rechercher des

lectines à activités hémagglutinantes.

Le centre national de transfusion sanguine (CNTS) a des difficultés de groupage

parfois dont la solution pourrait être trouvée dans la mise à disposition de lectine à

activité hemaglutinante.

C’est pourquoi nous avons entrepris cette activité d’extraction de lectine au

Département de Médecine Traditionnelle de l’INRSP sur les plantes suivantes :

Erythrina senegalensis

Arbrus precatorius

Prosopis africana

Cassia sieberiana

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OBJECTIFS : OBJECTIF GENERALE : Etudier l’activité hémagglitinante des lectines des plantes OBJECTIFS SPECIFIQUES :

1 Décrire la technique d’extraction

2 Extraire les lectines à partir de différentes variétés de plantes.

3 Déterminer l’activité agglutinante des lectines extraites au CNTS sur les

hématies humaines.

4 Purifier par méthode phyto-chimique les extraits bruts donnant une réaction

positive.

5 Déterminer de nouveau l’activité agglutinante après purification.

6 Déterminer la spécificité en sucre de nos extraits.

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DEUXIEME PARTIE

REVUE DE LA LITTERATURE

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1 - Revue de la littérature sur les plantes étudiées et quelques commentaires

sur les lectines.

1-1 Erythrina senegalensis :(DC)

��Systématique de la plante:

• Embranchement : -spermaphytes

• Sous embranchement : -angiospermes

• Classe : -Dicotylédone

• Ordre : -leguminosales

• Famille : - fabacees (Papilionacees)

• Genres : - Erythrina

• Espèce : - senegalensis

�� Noms vernaculaires :

Ba : béru, ntenbileni.

Ma : ntimini, timéba.

�� Habitat :

Il est peu commue et disséminée en savanes soudaniennes et soudano-guineennes.

�� Caracteurs botaniques :

Ce sont des arbustes ou petits arbres à cime étroite et ouverte.

L’écorce se présente sous forme liégeuse crevassée brune, l’épine en formes

aplaties, peu courbeés (1 cm de long).

Les feuilles sont alternes trifoliées, les fleurs rouges vif en long racème (jusqu'à

30cm). Les fruits sont irréguliers en chaînes courbeés de petites boules successives

renfermant de petites graines rouges.

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�� Cycle végétatif :

La floraison apparaît dès fin octobre jusqu’en mars, avant les feuilles qui se

développent aussitôt après, les fruits de novembre à avril.

�� La drogue : Elle est constituée par les graines.

�� Pharmacopée traditionnelle :

• Racines : -réduites en poudre dans du lait frais sont utilisées dans le

traitement de l’onchocercose.

-en décoction on l’utilise contre les maux de ventre, les coliques,

les dysenteries, les douleurs rénales.

-fibres de l’écorce réduite en poudre sont des remèdes pour les

hépatites, les troubles hepato-biliaires, l’ictère, cirrhose du foie, les douleurs

rénales, l’entéralgie, les coliques, les dysenteries.

-fibres de l’écorce de racines macérées dans l’eau est utilisé contre

les vomissements.

• Ecorces du tronc : -réduites en poudre (avec sel et noix de cola) sont utilisées

contre l’enrouement de la voix.

-macérées dans l’eau est utilisé dans le traitement du

paludisme, les affections hepato-biliairees ; dans les aménorrhées.

- les écorces du tronc bouillires sont utilisées contre les

maux de ventre, le fibrome de l’utérus.

• Le bois se mâche comme aphrodisiaque.

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Graine d’Erythrina senegalensis

Plante entière d’Erythrina senegalensis.

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1- 2 CASSIA SIEBERIANA :

��Systématique de la plante :

• Embranchement : -Spermaphytes

• Sous embranchement : - Agiospermes

• Classe : - Dicotylédones

• Ordre : - Légumineuses

• Famille : - Caesalpinacées

• Genre : - Cassia

• Espèce : - Sieberiana

��Noms vernaculaire et synonyme :

• Vulgo = Sindian

• Syn = Cassia kotschynana

• Ma : Sind�

• Bamb : Sind�

��Caractère remarquable :

C’est un petit arbre de 8 à 10 cm et souvent moins, à fût court, contourné,

fréquemment près de la base.

L’écorce est fissurée lamelleuse, foncée chez les vieux sujets.

Les feuilles sont composées pennées avec 6 à 12 paires de folioles oblongues

lancéolées, largement acuminées mais obtuses au sommet, à poils apprimés à la

face inférieure.

Ce sont des longues grappes pendantes de fleurs jaunes apparaissant en saison sèche

pendant la défeuillaison ou au commencement de celle-ci, pédicelles pubescents.

Les gousses sont longues, cylindriques atteignant 60 cm de long sur 10 à 15 mm de

diamètre, droites, brun-foncées ou noirâtres à maturité, persistant très longtemps sur

l’arbre, avec une graine par loge.

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��-Habitat :

IL est très commun dans toutes les savanes boisées ou arbustes soudaniennes

jusqu’en lisière de la forêt guinéennes en Casamance. Il est très rare dans le sud du

Sahel ou il persiste encore dans les galeries sèches et les sols sablonneux du Cayor.

��-Emplois :

Le sindjan est un purgatif diurétique très connu et très estimé dans tout le Sénégal ou

il est employé comme tel en médecine populaire et plutôt comme purgatif de

dérivation en médecine de guérisseurs. Pour certain de ces derniers c’est une

véritable panacée et un vieux Balantnous a même déclaré en prônant les vertus du

mellite de sa fabrication à base de Cassia sieberiana que « dzoa dzé avait été le

médicament du prophète comme la datte sa nourriture ».

Les indications principales découlent des propriétés purgatives et diurétiques

proprement dites ainsi que conceptions sémiologiques et étiologiques sur les

maladies.

Cassia sieberiana est en effet surtout prescrit dans les constipations opiniâtres,

anurie, dysurie et aussi dans les cas d’entéralgies, parasitismes intestinaux, lèpre,

oedèmes, maladies vénériennes, bilharziose, impuissance, stérilité, douleurs rénales,

courbatures fébriles.

Ce sont presque toujours les racines qui entrent dans les préparations d’où le nom de

Saba Sinda, c’est à dire racine de Sinda, donné au Cassia sieberiana quant on parle

de l’espèce en tant que drogue médicinale. De plus l’amertume des préparations est

généralement masquée par du sucre ou mieux du miel et on a alors à faire à des

mellites simples ou composés avec d’autres espèces actives telles que kinkéliba,

tamarinier, Burkea africana. Les rameaux feuillés (macérés ou décoctés en bain de

bouche) sont plus spécialement réservés à la médecine infantile en qualité de

purgatif, fébrifuge, anti anémique et anti kwashiorkor (Kerharo J. et Adam G. 1974).

��La drogue : Elle est constituée par les graines.

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��La chimie : a- Feuilles :

Les premiers travaux de Balansard puis de Vignoli signalaient dans les tissus

l’abondance de l’oxalate de calcium et de minimes quantités d’acide cyanhydrique ;

dans les feuilles la présence de dérivés anthraquinoniques et d’un hétéroside mal

définie.

Par ailleurs Cubukcu avait noté la présence de dérivés flavoniques et tanins

catéchiques condensés : dans les feuilles 4.2 % de catéchine et 10.8 % de tanins

catéchiques.

Les recherches postérieures de Duquénois et Anton ont élucidé la constitution des

feuilles.

Les auteurs ont décelé dans les folioles provenant du Mali :

- Des dérivés anthraquinoniques à fonction caboxylique : rhéine et

rhéine-8-glucoside, mais ni anthrones, ni dianthrones, ni dérivés non

carboxyliques.

- Des dérivés flavonoides qui sont des O-flavonolosides parmi lesquels

se trouvent de notables quantités de quercitrine et d’isoquercitrine.

- Une leuco-anthocyane.

- Des tanins catéchiques en faible proportion

b- racines :

L’existence d’oxalate de calcium, de mucilage, de stérols, de tanins,

d’anthroquinones a été signalée par Vignoli et Balansar. En 1966 Taylor Smith en a

isolé le �-sistostérol.

Plus récemment Paris et Etchepar ont étudié les racines de l’espèce ivoirienne sous

l’angle des composés polyphénoliques dont la drogue est particulièrement riche :

elle contient en effet de petites quantités de dérivées anthracemiques (0,15%) elle

renferme des leuco-anthocyanes et notamment du leucopélargonidol, de

l’epicatéchol et des flavonols voisins (gallate de l’epicatéchol et traces de

gallocatéchol.

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��-Pharmacologie :

Duquenois et Anton estiment que la composition des folioles peut expliquer leur

emploi empirique car elles sont légèrement purgatif par leur dérivés anthracéniques

et surtout diurétiques par la prédominance de leur flavonoides.de même Paris et

Chepare, pour la graine, estiment que les substances mises en évidences dans les

racines expliquent, tout au moins en partie, les emplois thérapeutiques .Pour ce qui

concerne les racines, Anton et Duquenois considèrent que les stérols, les mucilages,

les nombreux polyphenols catéchiques ajoutent leurs effets à ceux des dérivés

rhéiniques et des flavonoides.

Les extraits de fruits murs montrent une certaine activité insecticide. Les extraits aqueux de racines de l’espèce Nigériane montrent une certaine activité

antibiotique Gram+.

Plante avec fleure Cassia sieberiana

La graine de Cassia sieberiana

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1-3 Abrus precatorius :


• Embranchement : -Spermaphytes

• Sous Embranchement : -Angiospermes

• Classe : -Dicotylédones

• Ordre : -Leguminosales

• Famille : -Fabacées

• Genre : -Arbus

• Espèce : -précathorius

��Caractères remarquables :

C’est une liane volubile, vivace, de 3 à 4 m, à rameaux greles, gable ou glabrescents,

ligneux à base, s’enroulant autour des arbustes.

Les feuilles sont alternes,paripennées, avec 7 à 10 m paire de folioles finement

pubescentes ,oblongues , de 10 mm sur 6 mm, arrondies ou obtuses au sommet et à

la base.

Ce sont des courtes grappes axillaires pédonculées de fleurs roses, avec des bractées

caduques à la base du calice. Les gousses sont de 3 sur 1 cm, tomenteuses, contenant

5 à 6 graines ovoïdes rouge vif, avec une tâche noire à la base.

��-Habitat :

Il existe éparsément dans toutes les régions du Sénégal, mais surtout commun sur

les buissons le long du littoral, de Saint-Louis à la Guinée portugaise.

Il se trouve disséminé dans la vallée du fleuve, les galeries et les forêts sèches ou

humide.

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��-Noms vernaculaires et synonymes :

Noms vulgaires : -Jéquirity, liane reglisse, œil de paon, graine d’eglise, arbre à

chapelet.

Synonymes : Abrus minor Desv.

Abrus moculatus Noronha.

��–Emplois :

Les graines de Jéguirity sont considérées, à juste titre, comme toxique pour les

hommes et les animaux dans tout le Sénégal et leur usage, uniquement externe, est

très peu signalé.

A part une indication chez les floups de Casamance pour les brûlures, les autres

indications émanent de wolof du Cayor et du Cap-Vert : Frisions avec les graines

écrasées pour les abcès et inflammations des bras et jambes.

Le décocté ou le macéré de feuilles est quelque fois prescrit pour les conjonctivites

par les wolof et Lébou du cap-vert. Les feuilles à goût sucre sont mâchées en

qualités antitussives et antigastralgiques.

��La drogue : C’est la graine.

��La chimie :

• Graines : Jusqu’à la moitié de ce siècle, les connaissances sur la chimie des graines étaient

anciennes. On savait partout qu’elle contenait :

-Une phytotoxine de nature protéique, l’arbrine.

-Un aminoacide, malencontreusement dénommé abrine également et qui est le

N-methyltryptophane C12H14O7N2 (4.5 %).

-De l’acide abrine

-Un glucoside

-Une hemagglutinine agissant comme enzyme lipolytique.

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On a constaté que la toxalbumine abrine était formée de deux fractions globulines et

albumine. Hameed Khan et coll. ont isolé en 1961 une fraction protéinique active

dénommée abruline. Elle est stable à 80°C et n’est pas hydrolysée de façon sensible

par la trypsine et la pepsine. De leur côté Desai et coll. ont isolé 5 fractions

protéiques, tandis que Vincent et Segozae ont trouvé par électrophorèse que

l’arbrine était localisée dans la zone située entre �2 et � 2 globulines. Selon Lin et

coll.. Le poids moléculaire de l’arbrine serait de 65000 et au point de vue structure

les restes terminaux d’amino-acides seraient pour N et C la leucine.

En 1971 Genest a mis en évidence dans les graines par chromatographie trois

composés indoliques : N-methyltryptamine N-methylptophane hypaphorine.

Les analyses pratiquées par l’auteur sur 18 échantillons de diverses origines

montrent que les pourcentages d’indols totaux exprimés en N-methyltrytophane

varient de 0.58 % (Graines noires de Florides) à 0.89 % (graines de Mexico).

Dans la liqueur mère de la préparation, de l’abrine, Akira Yokoo a obtenu en 1941

deux produits cristallisés, l’un de formule brute C30H50O2 qui parait être un

triterpene pentacyclique et l’autre qui est un dérivé de la 4’, 5, 67

tétrahydroxyflavone.

On a obtenu à partir des graines deux fractions stéroidiques, une huile une fraction

cristallisée et signale la présence de terpène, de � sistostéreol, de stigmastérol, de 0,6

à 0,8 % d’acide gallique et alcaloïde.

La graine et ses substances pectidiques ont été étudiées par Orillard Roudier. La

substance renferme 0,86 % d’acide polygalacturonique, 9,21 % de pentosane et 32

% de sucres réducteurs composés, de galactose raminose et xylose.

��Autres organes :

Les racines, les feuilles, les tiges contiennent de la glycyrrizine C42H62O16

donnant par hydrolyse de l’acide glycyrrhétique et deux molécules d’acide

glucuronique *. Ce sont les feuilles qui sont les plus riches : 5 à 10 % et ensuite les

racines : 1,5 %. Il a été décelé dans les racines stérol et terpène. Les feuilles de la

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région de Bouaké (Côte d’ivoire) ont fait l’objet d ‘une analyse diététique de

Busson qui a trouvé pour le produit sec 26,7 % de protéine.

��-Pharmacologie : • Graines et extrait de graines :

L’innocuité de la graine absorbée souvent par les enfants, avait frappé les chercheurs

du siècle dernier et Dujardin Beaumetz en concluant qu’elles « avaient donc une

action différente suivant qu’elles sont portées dans le torrent de la circulation ou

qu’elles sont en contact avec la muqueuse alimentaire » . En fait, si la graine peut

effectivement être avalée impunément c’est parce que, possédant un tégument

externe dur, le testa, elle échappe à la désintégration et que de fait la toxine n’est pas

libérée. On admet d’ autre part que la toxicité de l’arbrine per os n’est pas certaine

car pour agir, il serait nécessaire qu’elle soit fractionnée. Mais d’après certains

auteurs une moitié graine mâchée avant d’être avalée serait suffisante pour

empoisonner un homme.

Le cheval serait également très sensible alors que les bovins, les chèvres et les

chiens le seraient moins. Les lésions anatomopathologies macro et microscopiques

observées dans l’intoxication expérimentale des souris ont été décrites en 1961 par

Niyogi.

Harst relate cinq cas d’intoxication survenu en 1962 et signale qu’il n’y a pas de

thérapeutique efficace si ce n’est l’emploi d’anti-arbrine, préparé avec le sérum

d’animaux immunisés. Mais cette méditation présente de nombreuses difficultés.

Les travaux de Diacono ont montré que les graines les plus anciennes (vielle de 5

ans) possèdent sur le cobaye une valeur toxique atténuée par rapport aux graines

plus recentres qui sont douées de la capacité antigénique la plus élevée.

Ces résultats sont en rapport avec nos connaissances sur la valeur antigénique de

certaines toxines atténuées ou même devenues inoffensives comme les anatoxines.

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De leur côté, Desai et Sirsi ont particulièrement étudié le pouvoir antigénique de

l’extrait aqueux brut des graines injecté à divers animaux et ont détermine les

composants antigéniques par des techniques d’immuno-diffusions.

C’est ainsi qu’ils ont dans ces extraits cinq fractions protéiniques.

Ils ont constaté aussi que l’extrait de graine est doté de propriétés abortives et

tératogènes. Des examens histopathologiques détailles ont été pratiqués à cet effet

sur les fœtus, les placentas et les utérus des animaux d’expérience, rats souris.

L’étude de la cytotoxicité des même extraits sur Pœcilocera piota a révelé des

aberrations mitotiques et mérosique touchant les chromosomes ainsi que des effets

particuliers sur les spermatozoïdes. Par contre l’extrait alcoolique des graines s’est

révélé atoxique pour les mêmes animaux, mais inhibeur de la croissance pour

certains microbes et champignons pathogène. L’extrait éthanolique inhibe la

croissance du Staphylococus aureus, Escherichia coli, Salmonella paratyphus A et

B, des dermatophites pathogènes etc.

Des essais pratiques séparément sur graines entières, téguments cotylédons ont

montré que le maximum d’activité antibactérienne est donné par les téguments.

A l’occasion de ces travaux, Desai et Sirri ont noté que pour les souris la dose létale

de l’extrait aqueux par voie sous-cutané est de 2 mg par kg et celle des extraits

alcooliques de 100 mg par kg.

Par la suite, les mêmes auteurs ont expérimenté l’huile stéroidique retirée

des graines pour son action anti-fertilité et ont constaté qu’une simple dose

orale de 150 mg d’huile à la période post-coitale produisait 80% de stérilité

chez le rat*.

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La plante et fruit d’abrus precatorius

Les graines d’abrus precatorius

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1-4 Prosopis africana :


Embranchement : -Spermaphytes

Sous embranchement : -Angiospermes

Classe : -Dicotyledones

Ordre : -Leguminosales

Famille : -Mimosacées

Genre : -Prosopis

Espèce : -africana

Synonyme : Coulteria ,africana Guill et Perr. Taub.

Vernaculaire : Bamb : guélé.

Mal. : guélé, guélé n’dou

Sen. : bilé, g’bélé.

��Caractères remarquables :

C’est un l’arbre de 12 à 15 m, a fût droit, cylindrique, robuste.

L’écorce est brun clair s’écaillant par petites plaques plus ou moins circulaires.

Les branches sont contournées et la cime ovoïde.

Les feuilles sont alternées bipennées, 2 à 4 paires de pinnules opposées avec une

glande à l’insertion de chacune d’elle et de 6 à 12 paires de folioles lancéolées

elliptiques, mucronee, de 1,5 cm à 2 cm sur 5 à 8 m, finement pubescente sur les

deux faces.

Les épis axillaires sont solitaires de 15 cm de long sur 1,5 cm de diamètre,

courtement pédoncules avec des fleures blanc crème ou jaunâtre, parfumées.

Les gousses sont ligneuses, pendantes, brun rouge, lisse, vernissées à maturité, de10

à 12 cm de long sur 1,5 à 2 cm de diamètre, transversalement circulaires ou ovoïde

dans la plus grande largeur.

Les graines libres dans les loges quand elles sont à maturité et faisant alors un bruit

caractéristique de grelot contre les parois quand on secoue les fruits.

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��Habitat :

Il est présent assez communément dans toutes les forêts sèches et savanes boisées

de la région soudanienne, abondant dans le Sine –Saloum ou il peut former des

peuplements (Niombato).

Il se raréfie et disparaît dans le domaine Soudano-Sahelien, mais existe encore au

nord de la voie ferrée Dakar –Kidira.

��Emplois :

Les indications du Prosopis en médecine populaire et en médecine de guérisseurs

peuvent se repartir en quatre grands groupes selon l’emploi qui en est fait, par voie

interne comme diurétique et anti-entéralgie, par voie externe comme parasiticide et

anti-odontalgie.

Les racines et plus particulièrement celles des jeunes plantules (ou oiseau ne s’est

pas encore posé), c’est à dire ne dépassent pas 15 à 20 cm, auraient une excellente

action dans diverse affection urinaire s comme diurétique, mais aussi comme

diurétique spécifique (favorisant élimination des urates, oxalate, urée etc..) voire

même diurétique anti-inflammatoire et désinfectant (cystites, gonococcies).

Ce sont encore les racines et aussi les écorces qui sont conseillées dans différents

maux de ventre comme anti-diarrhéique et vermifuge.

Dans le sine une préparation très réputée pour ses propriétés diurétiques et laxatives

est le macéré de douze heures de racines de P. africana, Zizyphus mauritiana,

Borreria verticillata, et Euphorbia balsamifera.

Les bains de vapeur à base de racine, de même que les cataplasmes, de feuilles, sont

utilisés dans différentes dermatoses et parasitoses externes, mycoses filarioses.

Les applications de feuilles bouillies et encore chaudes ont, par ailleurs, la réputation

de donner de bons résultats dans tous les maux de la partie supérieure du corps

concernant la tête (migraines vertiges), le cuir chevelu (la teigne par exemple), les

yeux les oreilles les dents, compris même la fétidité de l’haleine.

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C’est incontestablement l’emploi stomatologie qui est le plus courant. Les tiges

constituent au premier chef un frotte–dent très prise dans tout le Sénégal, à la ville

comme en brousse.

Les feuilles et les écorces sont recommandées comme anti-odontalgique en

masticatoires , gargarismes ,inhalations, l’écorce assez fortement colorée en rouge,

serait actif contre les caries dentaires. Elle est en tout cas incontestablement

sialagogue car après mastication intense la salive est abondante, spumeuse et rosâtre.

��La drogue : Elle constituée par les graines.

��La chimie :

On savait peu de chose jusqu’à présent sur la chimie de cette espèce très connue

pour son bois imputrescible.

L’impérial Bureau en 1906 a signalé dans les écorces une teneure en tanin de 14 à

16%. Busson a pratiqué une analyse diététique complète de graines à Tambacounda

(Sénégal oriental) de laquelle ressort la richesse en glucides (68%) et en l’acide

glutamique (19%des aminoacides totaux).

En 1966 Ratle et Coll ont retiré des feuilles deux nouveaux alcaloïdes dérives de la

pipéridine : La prosopine C18H37O3N à trois fonctions alcool et une fonction amine

secondaire ;la prosopinine C18H35O3N à deux fonctions alcool, une fonction amine

secondaire et une fonction cétone .

��Pharmacologie :

La pharmacologie de la prosopine et de la prosopinine a été étudiée en 1968 par

Bourrined et Guevauvillier.

1. Prosopine :

La toxicité a été déterminée par voie intraveineuse sur la souris pour lesquelles les

DL50 est de 87,5 mg par kg.

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La prosopinine se comporte comme un léger excitant du système nerveux central

dont l’action s’exerce au niveau des centres moyens et supérieurs .Elle diminue, en

effet, chez les souris, l’hypnose barbiturique et n’est pas inhibée par un sédatif

médullaire.

Elle est douée d’une légère activité anesthésique locale : l’installation sur la cornée

de lapin d’une solution de prosopine à 0,5 % correspondant sensiblement à l’action

d’une solution de chorydrate de cocaïne à 0,25 %.

Mais elle est irritante pour la cornée.

Sur le chat chloralose, elle entraîne à la dose de 2,4 ou 8 mg par kg une légère

hypertension. Cette action hypertensive se manifeste probablement par

vasoconstrictions puisque, par ailleurs, elle ne modifie pas l’action des médiateurs

du système nerveux autonome.

2. Prosopinine :

La toxicité aigue de cet alcaloïde a été déterminée chez la souris et le cobaye.

Chez la souris par voies intraveineuses, sous cutanée et orale les doses létales 50

sont respectivement 57,5 mg par kg, 590 mg par kg, et 820 mg par kg. Chez le

cobaye, par perfusion lente dans la veine jugulaire, la dose minimum mortelle est de

l’ordre de 60,2 mg par kg.

Contrairement à la prosopine, elle exerce une action sédative sur le système nerveux,

principalemnet au niveau des centres moyens et supérieurs et n’exerce aucune

activité anticonvulsivante.

Elle possède une activité anesthésique locale intéressante aussi bien en surface ou en

infiltration. Dans le premier cas l’action sur la cornée de lapin d’une solution 0,5 %

est équivalente à celle d’une solution de cocaïne à 1,5 %. Dans le second cas,

l’action par infiltration dans le derme de cobaye d’une solution à 0,10% est

équivalente à celle d’une solution de procaine à 0,18 %.

L’anesthésie locale d’infiltration de la prosopinine est environ deux fois plus forte

que celle de la procaine, mais elle est irritante.

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Elle est légèrement hypotensive, vasodilatatrice et elle exerce des effets

parasympatholytiques. Elle montre aussi une action spasmolytique sur la fibre

musculaire lisse (duodénum isolé du rat) ; mais moins que celle de la papavérine.

Elle exerce également une certaine activité antibiotique qui correspond pour une

concentration de 50 mg par ml, à 0,25 µg de pénicilline vis-à-vis de staphylococus

aureus et 200 µg de streptomycine vis-à-vis de Shigella Sennei

Par ailleurs à la concentration de 1mg par ml, elle inhibe la culture de Trichomonas

vaginals. A des concentrations de 4 mg par ml elle n’exerce aucune activité sur

Trichophyton rubrum et sur Candida albicans.

Les actions antipaludéennes et anti- bactériennes ont été recherchées sans résultats

positifs.

Un essai clinique préliminaire du chloridrate de prosopinine effectué chez quelques

malades a montré que cette base était mal tolérée aussi bien par la muqueuse rectale

que par la muqueuse gastrique. Il en va de même pour les dérivés isoprosopinine et

desoscoprosopinine qui exercent une activité anesthésique locale moindre et qui sont

également irritants.

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Les plantes entières de Prosopis africana

Les graines de Prosopis africana

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1-5 Les lectines :

��Terminologie et définition : A l’origine le terme lectine faisait référence à la propriété de certaines protéines se

liant à des glucides, d’agglutiner les hématies humaines (de façon sélective selon le

groupe sanguin). L’utilisation de ce terme pour designer des protéines responsable

d’une agglutination a conduit à son remplacement par la notion d’agglutinine.

Cependant, la confusion fréquente entre les termes de lectines et d’agglutinine nous

pousse à définir de façon claire ce que l’on va designer par lectine : Les lectines (des

plantes) peuvent être définies comme des protéines possédant au moins un domaine

non catalytique de liaison réversible à des glucides (mono- ou oligosaccharides

spécifiques).

��Classification : On peut distinguer trois types majeurs des lectines chez les plantes :

Mérolectines

Les mérolectines sont de petits peptides, formés d’une seule chaîne polypeptidique

et ne possédant qu’un seule domaine de liaison aux glucides (exemple : héveine,

protéines d’orchidées).

Les mérolectines sont incapables de précipiter les glycoconjugates ou d’agglutiner

les cellules.

Les hololectines :

Les hololectines contiennent deux domaines (ou plus) de liaison aux glucides quasi-

identiques, ou du moins très homologues.

Les hololectines peuvent précipiter les glucoconjugates ou agglutiner les cellules. La

majorité des lectines de plantes connues sont des hololectines.

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Les chimérolectines :

Les chimérolectines possèdent un ou plusieurs domaines de liaison aux glucides

ainsi qu’un domaine ayant une activité catalytique bien définie et agissant

indépendamment du cite de liaison. Selon le nombre de liaison aux glucides, les

chimerolctines se conduisent comme des mèrolectines (exemple : chitinase classe I)

ou comme des hololectines (exemple : type 2-Rip Ribosom Inactivating Proteine :

Protéine Inactivant les Ribosomes comme la ricine)

De plus, des subdivisions peuvent être faites à l’intérieur de ses trois groupes

lorsqu’on considère les propriétés de liaison aux mono-ou oligosaccharides

(exemple : liaison à des oligosaccharides ayant des résidus mannose ou glucose,

distinction des manomères � et � …)

��Mise en évidence du rôle des lectines chez les plantes :

Depuis la découverte des lectines des pantes, les scientifiques se sont posés de

nombreuses questions quant à leur rôle dans les plantes. Il semblerait qu’elles

n’agissent uniquement dans cette derrière mais qu’elles puissent aussi interférer avec

les glycoconjugates d’autres organismes. Il est ainsi probable que les lectines jouent

un rôle dans la défense des plantes.

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��Arguments indirects en faveur du rôle des lectines dans la défense des

plantes :

1. On peut raisonnablement penser que le rôle physiologique des lectines s’appuie

sur leurs propriétés de liaison aux sucres.

Bien que la recherche de récepteurs aux lectines endogènes aux plantes ait été

infructueuse, on peut imaginer que ces derniers sont formés de glycoconjugate ayant

un site de liaison complémentaire au domaine glucidique de la protéine. Cet

argument peut être étayé par le fait que les lectines peuvent reconnaître et lier à des

glycoconjugates présent à la surface des microorganismes ou se trouve le long de

l’intestin des insectes et mammifères herbivores. De plus, les lectines ont une

affinité plus élevée pour les oligosaccharides non présents (généralement) dans la

plante.

2 La stabilité des lectines in vitro sous des conditions défavorables (pH, action de

protéase d’insectes ou d’animaux supérieurs…) les apparente à d’autre protéines de

défense.

3 Les lectines se trouvent dans de nombreux tissus mais sont très abondant dans les

parties susceptibles de subir une attaque par les organismes étrangers, comme les

organes intervenant dans la survie de l’individu ou de l’espèce.

��Arguments directs en faveur du rôle des lectines dans la défense des

plantes :

Des arguments directs peuvent être apportés par l’utilisation de protéines purifiées

dans des tests en laboratoire (insectes soumis à des régimes contenant des protéines

de défense) ou par l’utilisation des plantes transgéniques.

Les lectines sont solubles, ce qui leur permet d’agir dans des milieux aqueux. Par

exemple, quant une graine est imbibée d’eau, elle peut libérer ses lectines et ainsi

établir un cordon sanitaire entre elle et son environnement. De même si une plante

est ingérée par un herbivore, les cellules lysées libèrent des lectines dans l’intestin

de l’herbivore et cause ainsi des troubles qui peuvent être grave. Enfin, un

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champignon qui se développe dans les tissus végétaux peut déchirer une vacuole

contenant des lectines qui vont inhiber sa croissance.

Exemple : type 2-RIP, des agents cytotoxiques puissants envers les eucaryotes

Structure : 1 chaîne A responsable de la toxicité (ayant une activité N glucosidase).

1 Chaîne B responsable de la liaison aux glucides.

Mécanisme :

1 Fixation de la chaîne B à un récepteur (glycoconjugate) de la surface de la cellule.

1 Reconnaissance et pénétration de la chaîne A dans le cytoplasme.

2 Inactivation des ribosomes par clivage à l’extrémité N-glycosidique d’un résidu

d’adénosine ; bien que certains insectes aient développe des mécanismes de

résistance à ces chimerolectines (les lépidoptères, Sopodoptera litoralis et

Heliothis virescens n’étant pas sensible a la ricine), ces dernières offrent une

bonne protection à la plante.

��Activités insecticides des lectines des plantes :

Les cellules épithéliales tapissant le tube digestif des insectes sont en contact avec

le contenu du bol alimentaire et sont donc des cibles potentielles des protéines de

défense des plantes. Plus précisément, lorsque l’on sait que les glycoproteines sont

les constituants majoritaires des membranes de ces cellules, on peut imaginer que la

lumière de l’intestin est littéralement couverte de sites de liaisons potentiels pour

les lectines contenues dans le bol alimentaire.

A la suite d’une interaction lectine-glycoproteine, des liaisons locales du tube

digestif seraient susceptibles d’apparaître, ces dernières ayant pour conséquences de

rendre la plante moins appétante pour l’insecte, de retarder le développement de ce

dernier, voire entraîner la mort.

Exemple :

Ostrinia nubilabis et Diabrotica undecimpunctata se nourrissent sur le maïs. La

lectine du blé et la lectine des graines Bauhinia purpurea ont des effets létaux pour

ces deux insectes, l’action des lectines pouvant se faire à de relativement faibles

concentrations.

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��Découverte et application des lectines :

Depuis la découverte par STILLMARK en 1888, de nombreux travaux ont été

consacrés aux lectines (Renkonen.K.O 1948, Boys.W.F 1949, Bird. 1951).

(Histoire des lectines est résumée au tableau n°I). Soixante ans plus tard la

spécificité de groupe sanguin humain de quelques lectines fut connue.

(Le tableau n0 III nous montre quelques spécificités de groupes sanguins).

Les applications plus élargies aux leucocytes, plaquettes, spermatozoïdes, cellules

des tissus, cellules de tumeurs, bactéries, virus, champignons et aux plantes elles

même ont apporté un plus grand intérêt à l’étude des lectines

(Nowell, 1960 ; Oikawa, Yanagnimachi, et Nicolson, 1973).

Certaines lectines se sont révélées être inhibitrices de fertilisation d’ovaires de

mammifère (Oikawa, Yanagnimachi., et Nicolson, 1973).

C’est alors que les lectines deviennent des outils scientifiques pour l’investigation

des sites de fixations spécifiques et un modèle pour l’étude des réactions

d’agglutinations (Gold et Balding, 1975).

Elles permettent les études structurales des polymères de carbohydrates et

mucopolysaccharides et des réactifs spécifiques pour l’isolement de ces substances.

La plus importante de leur utilisation est pour l’investigation de l’architecture des

surfaces cellulaires (Bird, 1954).

La capacité des lectines à se combiner spécifiquement avec un seul monosaccharide

a grandement aidé à élucider la structure des récepteurs cellulaires et à établir la base

chimique de l’interaction cellule lectine (Margan et Watkins, 1953).

��SPECIFICITES CHIMIQUES DES LECTINES :

Le tableau n°II nous montre la spécificité chimique des lectines.

La structure chimique des lectines elles même est entrain d’être largement étudiée.

Le terme lectine s’est élargi à d’autre protéines provenant également des animaux

(Nouguchi 1903, Johoson 1964)

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La première agglutinine provenant d’invertébré a été rapporte par NOGUCHI à

partir de l’hémolymphe (Nouguchi 1903, Johoson 1964) On avait espéré qu’une

grande partie des spécificités de groupe sanguin seraient découverte avec les

lectines. Cet espoir n’a pas été comblé. Par contre d’autre utilisation des lectines ont

été trouvées, principalement élucidation de la poly agglutination et des variantes

membranaires de l’érythrocyte et des déficits.

Les spécificités des lectines sont limitées du fait de leur combinaison avec des

sucres simples. Il y a seulement des monosaccharides qui sont les composants.

Les monosaccharides sont en terminaison de la chaîne. Les sites récepteurs de

certaines lectines sont structurellement similaires, ainsi il n’est pas surprenant

d’observer de nombreuses réactions croisées. Des recherches récentes ont de

novelles fonctions de certaines lectines.

Ainsi BURKS AW et COLL. Ont parle d’une réaction d’hypersensibilité chez les

due à la lectine d’Arachis hypogeae. RYDERSD et ont trouvé que la lectine de

l’arachide est un mitogène pour les cellules épithéliales du colon et pour les cellules

cancéreuses appelées H T29. (112).

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Tableau N° I : histoire de la découverte des lectines

AUTEURS ANNEE MATERIEL REMARQUES

STILLMARK 1888 Ricinus communis L première plante à lectine

(Graine)

NOGUCHI 1930 Limulus polyphemus Première lectine

(hemolymphe ) « Invertébré »

ASSMANN 1911 Canavalia ensiformis « Concanavalinea A) la plus

(Graines) largement étudiée en biochimie

et en recherche générale cellulaire.

SUGISHITA 1935 Anguilla japonica Première lectine venant des invertébrés

(Sérum) inférieurs

RENKONEN 1948 Cytisus sessilifolires Première lectine spécifique du groupe

(Graine) sanguin humain

BOYS and

REGUERA 1949 Phaseolus limensis Découvert en 1945 rapporté en 1969

(Graine)

BIRD 1951 Dolichos biflo (graines) Lectine la plus utilisée dans

les banques de sang

JOHNSON 1964 Saxidomus giganteus (beurre) Premiere agglutinine

Spécifique invertebre**

BIRD 1964 Arachis hypogeae (graine) premiere application des lectines dans

L’élucidation de la polyagglutination

Érythrocytaire.

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TABLEAU NoII : La spécificité chimique des lectines Specificite en Position Sucre probable Nom ou sucre du sucre Remarque Spécifique sur la chaine Rapporté independemment [D5] ; [109] dirigé aussi au Niveau du materiel précuseurs de ABH/Levis Ricinus � ou �-galactosyl terminale si le test a été fait non sur comminus les cellules rouges mais sur Les subtances du groupe Sanguin. Cavanalia �-Mannosyl � Terminale ensiformis Glucosyl Solanum N-Acetyl-�- Sub- Pomme deterre teberosum glucosaminyl Terminale Tritricum N-Acetyl-�- Sub- Germe de blé Vulgare glucosaminyl Terminale Glycine soja � ou galactosyl � ou � –N-a Cetyl-�- galactosominyl Dolichos �-N-Acetyl-D- Terminale Par consequentA-,Tn- et biflorus galactosominyl cad-spécifique Phlomis �-N-Acetyl-D- Terminale fruticosa galactosaminyl Terminale Fomes �-Galactosyl Terminale fomentarius Lotus Fucosyl Terminale Anti-h et Anti-l [91] tetragonolobus Ulex 1-Fucosyl terminale [ ?] Voir réf. [M10] europaeus 11-n-acetyl-D- glucosaminyl Cytisus N-Acetyl-D- sessilifolius glucosaminyl Vicia �-galactosyl Dembéle ,1996. gramineo Bauhinia � ou �-N-Acetyl-D-

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purpurea galactosaminyl �uo �-galactosyl Arachis �-galactosyl Terminale Apres déplacement de Hypogae NAAN(exception:cellules1212)

Tableau N0 III : Lectines spécifique de groupe sanguin les plus connues.

Spécificités Source de la lectine Noms

Anti-A Plante Phaseolus limensis

Anti-B Seaweed Ptita plumosa

Anti-A+B Plante Crotalaria striata

Anti-H Plante Lotus tetragonolobus

Ulex europaeus

Anti-M Plante Iberis amaras

Anti-N Plante Vicia graminea

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��Quelques notions sur le Système ABO :

En 1900, Landsteiner observe que les globules rouges de certains individus sont

agglutinés par le sérum de certains autres ; il découvre ainsi les antigènes A et B

leurs anticorps respectifs. La découverte du système ABO signe la date de naissance

de l’ immunogénétique et a été à l origine de progrès considérable en médecine en

permettant d’envisager des transfusions compatible chez l’homme .A cause de sa

large distribution tissulaire, le système ABO représente aussi l’antigène

d’histocompatibilité majeur en transplantation d’organe .

Phénotype ABO courants :

A1, A2, B, A1B, A2B et O

Les antigènes A et B détectés par des anticorps spécifiques définissent quatre

groupes sanguins principaux : A, B, AB, O (absence d’antigènes A et B). Dans le

sérum on trouve toujours l’anticorps correspondant aux antigènes ou à l’antigène

absent des globules rouges. Ainsi, les sujet du groupes A ont toujours un anti-B ; les

sujets du groupes B ont toujours un anti-A ; les sujet de groupe AB n’ont pas

d’anticorps et les sujets de groupe O ont les deux anticorps anti-A et anti-B.

En utilisant des extraits de plantes (lectines) on peut subdiviser des sujets A en deux

sous groupes A1 et A2.

Les hématie de sujets A1 (80% des A) sont fortement agglutinées par la lectine anti-

A1 de Dolichos biflorus mais faiblement agglutinées par la lectine anti-H Ulex

europaeus. Au contraire, les hématies des sujetsA2 (20%des A) ne sont pas

agglutinées par Dolichos biflorus mais faiblément agglutinées par Ulex europaeus.

Cette subdivision conduit à l’identification de six phénotypes

courant :A1,A2,B ,A1B,A2B,O résultant de la présence de quatre allèles principaux

A1,A2,B,et O.

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TROISIÈME PARTIE NOTRE ETUDE

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3- Notre étude : 3-1-Materiel et méthode : 3-1-1 Matériels : ��Matériel végétal :

Nos travaux ont été effectués sur quatre plantes.

Il s’agit de :

��Erythrina sénegalensis graine

��Arbrus precatorius graine

��Cassia sieberiana graine

��Prosopis africana graine

Les graines d’A. precatorius et C. sieberiana étudiées proviennent de

Sanankoroba,cercle de Kati dans la 2eme région.

Les graines d’E. senegalensis ont été récoltées sur le chantier du DMT à Sotuba

(Bamako).

En ce qui concerne les graines de P. africana elles proviennent de Digato

(Dans la commune de Sanankoroba).

��Matériel humain :

Les études se sont portées sur les hématies humaines.

Il faut noter qu’il existe plusieurs antigènes du groupe sanguin humain, mais nos

études sont effectuées sur les antigènes des hématies humaines appartenant au

système du groupe sanguin ABO.

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Matériel technique :

- Mortier et pilon en bois

- Tamis

- Sachets en plastique

- Ciseau

- Couteau

- Balance de précision électronique de portée maximale

- Becher

- Eprouvettes graduées (1litre, ½ l, 100 ml, 50ml, 25ml, 10ml, 5ml,)

- Entonnoir

- Compresse et coton

- Petites bouteilles récupérées, lavées, stérilisées à l’étuve à 100degre pendant

24 h.

- Flacon de 125 ml

- Etuve

- Ampoule à décanter

- Portoir pour ampoule á décanter

- Papier filtre

- Micropipettes

- Broyer

- Spatules

- Centrifugeuse

- Réfrigérateur

- Rotavapor

- Hexane

- Ether de pétrole

- Butanol

- Ethanol

- Eau distillée

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- Na Cl

- Sulfate d’ammonium

- Phosphate disodique pure

- Tube pour lavage

- Tube à essai.

- Portoir

- Bain-marie

- Balance

- Micropipettes

- Microscope optique muni d’objectifs 10, 40, 100.

- Lames porte-objets.

- Pipettes (5-10ml)

- Marqueur.

- Coton

- Eau de javel

- Centrifugeuses

- Réfrigérateur

- Poire

- Pipette pasteur

- Embouts

- Plaque pour groupage

- Eau physiologique

- Réactifs de groupage

- Réactif de groupage de Ulex europeaus

- Alcool

- Hématies humaines

- Eau distillée

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3 – 1 – 2 : METHODES :

��Récoltes et triage des échantillons :

Les récoltes des échantillons ont été réalisées dans différentes zones.

Pour Erythrina senegalensis, les graines ont été cueillies à Sotuba dans le jardin du

DMT.

Les autres graines ont été récoltées dans la commune de sanankoroba, il s’agit de :

-Cassia sieberiana la graine a été récoltée au village même de sanankoroba.

-Prosopis africana et Abrus précantorius leurs graines ont été récoltées au village de

Digato (commune de Sanankoroba).

Le triage consistait à élimer les graines immatures, pourries, endommagées, et les

morceaux de coques.

��Extractions :

Différentes méthodes d’extractions ont été utilisées :

��Broyage :

L’obtention de la poudre a été très difficile car ces des graines très dures.

A part les graines d’Erythrina senegalensis, qui ont subi un concassage munitieux

dans le mortier puis pulvérisé, les autres graines (P. africana,

C. sieberiana, et A. precatorius) ont été écrasées une à une à l’aide d’un marteau et

broyée par un broyeur.

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. Extraction par macération à l’eau distillée :

Dans un bécher propre, 20g de poudre sont mis à macérer dans 100 ml d’eau

distillée à 4° C pendant 4 heures.

Nous avons ensuite effectué la filtration sur coton hydrophile 3 fois.

Le filtrat est recueilli dans un flacon, bien lavé à l’eau distillée puis stérilisé à

l’étuve à 100° pendant 24 heures.

Le filtrat obtenu est utilisé pour la recherche, il représente l’extrait brut.

Figure No 1 : Macération à l’eau distillée

20g de poudre

Extrait d ’eau distilléeMarc

100 ml d ’eau distilléeà 4 degré

Poudre de graine 20g

Thèse Pharmacien.


��Extraction par macération à l’eau physiologique :

Dans un bêcher propre, 20 g de poudre sont mis à macérer dans 100 ml d’eau

physiologique à 4° C pendant 4 heures.

On effectue ensuite la filtration sur coton 3 fois.

Le filtrat est recueilli dans un flacon, bien lavé et rincé à l’eau distillée puis stérilisé

à l’étuve à 100 degrés pendant 24 heures.

Le filtrat obtenu est utilisé pour la recherche, il représente l’extrait brut.

Figure No 2 : Macération à l’eau physiologique

20gdepoudre

Marc Extrait eau physiologique

100mld ’eau physiologiquea 4 degré


Thèse Pharmacien.


��Extraction par une solution saline Na Cl :

L’extraction début par le dégraissage de la poudre de graine à l’éther de pétrole.

Dans un bêcher propre, 10g de poudre sont mises à dégraisser dans 50ml d’éther de

pétrole à 4° C pendant 18 h.

L’extrait éthéré est recueilli dans un ballon, puis concentré par le rotavapor.

L’extrait lipidique obtenu est pesé.

Ajouter à l extrait dégraissé 100 ml de la solution saline à 1,70 g de Na Cl pour

200ml d’eau distillée, et nous avons laissé au froid à 4° C pendant 18 heures.

Le surnageant liquide est obtenue par centrifugation à10000 tpm pendant 20

minutes.

L’extrait liquide (le surnageant liquide) est récupéré dans un flacon et conserve au

frais pour la suite de nos investigation.

Figure No 3 : Extraction par le chlorure de sodium (Na Cl).

10gdepoudre

Marcou

extrait dégraisser Extrait éthéré

Marc Extrait

Ether de petroleTempérature à 4 degré

Chlorure de sodium


Ether de pétrole 4° C

Marc

Extrait Marc

Thèse Pharmacien.


��Extraction par le phosphate disodique pur : Nous avons utilisé la même technique d’extraction que précédemment.

Dans un bêcher propre, 10g de poudre sont mis à dégraisser dans 50ml d’éther de

pétrole à 4° C pendant 18 h.

L extrait éthéré est recueillie dans ballon, puis concentré par le rotavapor.

L’extrait lipidique obtenu est pesé.

Ajouter à l’extrait dégraissé 100 ml de la solution contenant 1,70g du phosphate

disodique pur, pour 200ml d’eau physiologique, ensuite nous avons laissée au froid

à 4° C pendant 18 heures.

Le surnageant liquide est obtenu par centrifugation à10000 tpm pendant 20 minutes.

L’extrait liquide (le surnageant liquide) est récupéré dans un flacon et conserve au

frais pour la suite de nos investigation.

Figure No 4 : Extraction par le phosphate disodique pur.

10g de poudre

Extrait étheré Marc

Marc Extrait

50 ml d ’éther de petroleTempérature à 4 degré

Phosphate disodique pur P.D.P

Extrait Marc


50 ml d’éther de pétrole à 5° C

Thèse Pharmacien.


��TEST D’AGGLUTINATION :

��Collecte des hématies :

Les hématies ou globules rouges des quatre groupes sanguins du système ABO ont

été obtenues au Centre National de Transfusion Sanguine (CNTS).

Ces échantillons sont prélevés chez des donneurs de sang.

��Lavage des hématies :

Dans un portoir pour tube, nous avons disposé une série de 4 tubes de lavage.

Nous avons porté sur chacun des tubes, le nom du groupe sanguin correspondant.

La quantité de sang est environ 3 cc. Ensuit nous avons ajouté au sang une solution

d’eau physiologique jusqu’au trait limite des tubes.

Après avoir bien bouché nous avons centrifugé à 1000 tpm pendant 4 à 5 mn.

Le surnageant a été versé, puis nous avons ajouté de nouveau l’eau physiologique,

nous avons remis en suspension les hématies tassées au fond du tube, et en fin nous

avons centrifugé.

Cette opération de lavage a été reprise 4 fois dans les mêmes conditions.

A la fin du quatrième lavage nos globules rouges sont mis dans un peu d’eau

physiologique.

��Dilution des hématies :

La dilution des hématies est de 5% (soit une goutte de sang pour 19 gouttes d’eau

physiologiques).

Nous avons disposé sur un portoir une série de 4 tubes à essais.

Chacun des tubes porte le nom du groupe sanguin qu’il contient.

Nous avons procédé ensuite à la distribution des hématies dans les tubes

correspondants à raison d’une goutte de sang par tube.

Nous avons ajouté enfin dans tous les tubes 19 gouttes d’eau physiologique et

secouer doucement.

Nous avons utilisé ces hématies diluées pour le test d’agglutination proprement dit.

Thèse Pharmacien.


��Technique d’agglutination ou procédure d’essais :

A – Méthode sur plaque :

��Le test est réalisé sur une suspension d’érythrocyte préparée à 5%.

��A une goutte d’extrait sur une plaque propre, ajouter un volume d’équivalent de

la suspension des érythrocytes à tester.

��Mélanger l’extrait et les hématies sur une zone environ 2 cm de diamètre en

remuant la plaque doucement et continuellement. Nous avons effectué la lecture

à l’œil nu après 4 à 5 mn.

��Nous avons effectué une lecture au microscope optique de tout test

apparemment négatif après 5 mn.

B – Méthode en tube avec centrifugation :

��A un volume de l’extrait dans un tube à essais étiqueté, ajouter un volume

équivalent de la suspension des érythrocytes à 5%.

��Mélanger la préparation et incuber à température ambiante pendant 5 mn.

��Centrifugez à 1000 tpm pendant 20 secondes.

��Agiter doucement le tube pour détacher les globules rouges et examiner la

préparation à l’œil nu pour détecter une agglutination.

Thèse Pharmacien.


- = pas d’agglutination

+ = faible agglutination.

Thèse Pharmacien.


+ + = forte agglutination.

+++ = très forte agglutination.

Thèse Pharmacien.


��Purification des extraits bruts positifs :

• Première méthode :

Purification par les solvants organiques. Après les tests d agglutination des extraits bruts, les extraits positifs ont été retenus

pour une purification par des solvants organiques : hexane et butanol.

Extraction liquide- liquide :

Dans une ampoule à décanter propre nous avons versé 50 ml d’extrait brut.

Nous avons ajouter ensuit 100 ml du solvant d’extraction qui est l’hexane.

Après agitation et repos pendant au moins 4 heures, les deux phases se sont

séparées nettement.

Nous avons la phase hexanique supérieure, et la phase résiduelle inférieure.

Nous avons soutiré la phase aqueuse et récupérée la phase hexanique.

La phase résiduelle a été reversée dans l’ampoule à décanter puis épuisée à nouveau

par le n-Butanol.

Pour obtenir la phase butanolique nous avons attendu encore plus longtemps que

précédemment (au moins six heures). La phase butanolique supérieure est collectée

de la même façon que pour la phase hexanique.

Les deux phases hexane et butanol ont été ensuite soumises séparément aux tests

d’agglutinations à la manière de ceux des extraits bruts.

Thèse Pharmacien.


• Deuxième méthodes :

La précipitation différentielle au sulfate d’ammonium :

Cette méthode de purification a été réalisée selon les étapes suivantes :

Extraction initiale, précipitation différentielle, et dialyse.

Après le broyage de nos graines, nous avons procédé à extraction par l’eau

physiologique l’extrait a été ensuite clarifié par la centrifugation, pour éliminer les

grosses particules peu ou mal broyées.

Nous avons ajouté au surnageant obtenu du sulfate d’ammonium à 50%.

La solution obtenue a été intensivement dialysée à l’eau pendant 24 heures.

Au repos les deux phases se sont nettement séparées.

La phase supérieure contenant les agglutinines a été conservé au frais pour la pour la

suite de nos investigation.

��TESTS D’INHIBITIONS :

A- Essai sur Ulex europeaus :

��Essai par salive :

La substance H se rencontre sous forme hydro-soluble dans la salive et des liquides

corporels des sujets ,appelés sécréteurs, selon les groupes sanguins ABO .On trouve

la plus grandes quantité de substances H chez les sécréteurs du groupe O, moins

chez les sécréteurs du groupe AB.

Les sujets du groupe sanguin O se prêtent donc le mieux pour la détermination de la

sécrétion H.

Thèse Pharmacien.


��Principe du test :

L’anti-H lectine de Ulex europaeus est neutralisé par la substance

H hydrosoluble.

Si la substance H est présente dans la salive, l’anti-H lectine est ainsi neutralisée et

les hématies ajoutées au test ne peuvent pas agglutiner.

Si la substance H n’est pas présente dans la salive, l’anti-H lectine n’est pas

neutralisée et les hématies peuvent agglutiner.

��Préparation de l’échantillon :

a- Verser de la salive fraîche (environ 2 ml) dans un tube et incuber dans un

bain-marie bouillant pendant 10, minutes.

b- Centrifuger fortement le tube pendant 10 minutes.

c- Utiliser immédiatement le surnageant claire pour l’analyse ou congeler pour

des analyses ultérieures.

d- Laver les hématies 1 fois et préparer une suspension de 4% en solution en

solution physiologique.

��Test en tube :

1- Pipetter 100 µl de salive (surnageant) dans un tube propre.

2- Ajouter 100 µl d’anti-H lectine de Ulex europaeus.

3- Bien mélanger par agitation et incuber à la température ambiante

pendants 10mns.

4- Ajouter 50 ul de la suspension d’hématies.

5- Bien mélanger par agitation et incuber à la température ambiante 5

mns.

6- Bien mélanger par agitation et centrifuger à 1000 tpm

7- Résuspendre le sédiment au-dessus d’un éclairage indirect et observer

l’agglutination macroscopique.

Thèse Pharmacien.


��Interprétation :

a- Agglutination des hématies :

L’anti-H lectine n’a pas été neutralisé : le sujet n’est pas sécréteur.

b- Pas d’agglutination des hématies :

L’anti-H a été neutralisé par la substance H = le sujet est sécréteur.

B- Essai sur l’extrait d’E. senegalensis :

��Essai par la salive :


L’anti-H lectine est neutralisé par la substance H hydrosoluble.

Si l’anti-H lectine est présent dans l’extrait, il sera neutralise par la salive et les

hématies ajoutées au test ne peuvent pas agglutiner.

Si l’anti-H lectine n’est pas présent dans l’extrait, le fucose à la surface des hématies

est libre et les hématies peuvent agglutiner ; dans ce cas l’agglutine est autre que

l’anti-H lectine.


1- Pipeter 100 µ l de la salive dans un tube propre.

2- Ajouter 100 µl d’extrait.

3- Bien mélanger par agitation et incuber à la température ambiante 10 minutes

4- Ajouter 50 µl de la suspension d’hématies

5- Bien mélanger par agitation et incuber à la température ambiante pendant

5 minutes.

6- Bien mélanger par agitation et centrifuger 1 mn à 1000 tpm

7- Résuspendre le sédiment au dessus d’un éclairage indirect et observer




L’agglutinine est autre que l’anti-H lectine.

Thèse Pharmacien.



L’anti-H lectine a été neutralisé par le fucose, ce qui signifie que l’agglutinine est

un anti-H lectine.

��Essai par le fucose :


L’anti-H lectine est neutralisé par le fucose.

Si l’anti-H lectine est présent dans l’extrait, il sera neutralisé par le fucose et les

hématies ajoutées au test ne peuvent pas agglutiner.

Si l’anti-H lectine n’est pas présent dans l’extrait, le fucose à la surface des hématies

est libre et les hématies peuvent agglutiner ; dans ce cas l’agglutine est autre que

l’anti-H lectine.


1- Pipeter 100µl de fucose dans un tube propre.

2- Ajouter 100µl d’extrait.

3- Bien mélanger par agitation et incuber à la température ambiante 10 minutes

4- Ajouter 50 µl de la suspension d’hématies

5- Bien mélanger par agitation et incuber à la température ambiante pendent 5

minutes.

6- Bien mélanger par agitation et centrifuger 1 mn à 1000 tpm

7- Résuspendre le sédiment au dessus d’un éclairage indirect et observer




L’agglutinine est autre que l’anti-H lectine.


L’anti-H lectine a été neutralisé par le fucose, ce qui signifie que l’agglutinine est

un anti-H lectine.

Des essais ont été réalisés de la même manière avec le galactose et le fucose.

Thèse Pharmacien.


3-2 Résultats

��Recherche d’agglutination dans quelques extraits de plantes de la famille

des légumineuses :

Nous avons effectué des extractions avec differents solvants .Ces extraits ont été

utilisé sur les hématies humaines pour la recherche d’agglutinine.

TableauN0IV : Agglutination des hématies humaines par des extraits bruts des

différentes plantes.

Nature de l’extrait Plantes Groupe sanguin

Érythrocytaire

Groupe A : + +

Groupe B : + +

E.senegalensis

Groupe O : + + +

Groupe A : +

Groupe B : + +

A. precatorius

Groupe O : + + +

Groupe A : - -

Groupe B : - -

Extraction par Na Cl

P.africana

Groupe O : - - Groupe A : - -

Groupe B : - -

C.sieberiana

Groupe O : - -

- - = pas d’agglutination + = faible agglutination + + = forte agglutination + + + = très forte agglutination Parmi les extraits de ces quatre plantes utilisées, deux ont fortement agglutinés les hématies humaines. Les deux autres extraits n’ont donné aucune agglutination décelable, ni à l’œil nu ni au microscope optique.

Thèse Pharmacien.


Tableau N° V : Agglutination des hématies humaines par des extraits bruts d’E. senegalensis obtenus à partir des differents solvants. Plantes Nature de l’extrait Groupe sanguin

Erythrocytaire

Macération à l’eau distillée

Groupe A : + + Groupe B : + + Groupe O : + +

Macération à l’eau physiologique

Groupe A : + + + Groupe B : + + + Groupe O : + + +

Erythrina senegalensis

Extraction par le P.D.P


+ + = forte agglutination + + + = très forte agglutination Plusieurs méthodes d’extraction ont été réalisées sur une même plante, dans le but d’avoir de meilleur extrait et d’améliorer le degré d’agglutination. Nous avons constaté que l’extrait obtenu par l’eau physiologique donne de meilleurs résultats. Ces résultats ont été obtenus par rapport au temps d’agglutination des hématies et le degré d’agglutination.

Thèse Pharmacien.


TableauN0VI : Agglutination des hématies humaines par des extraits bruts d’A.precatorius obtenus à partir des differents solvants. Plantes Nature de l’extrait Groupe sanguin

Erythrocytaire




Groupe A : + + Groupe B : + + + Groupe O : + + +

Abus precatorius

Extraction par le P.D.P Groupe A : + + Groupe B : + + Groupe O : + +

+ + = forte agglutination + + + = très forte agglutination Nous observons l’agglutination des hématies avec les differents solvants d’extraction.

Thèse Pharmacien.


Tableau N0VII : Agglutination des hématies par des extraits bruts de C.sieberiana et P.africana obtenus à partir des differents solvants. Plantes Nature de l’extrait Groupe sanguin

Erythrocytaire


Groupe A : - - Groupe B : - - Groupe O : - -


Groupe A : - - Groupe B : - - Groupe O : - -

Cassia.s et Prosopis.a

Extraction par le P.D.P Groupe A : - - Groupe B : - - Groupe O : - -

- - = pas d’agglutination Apres l’extraction par une solution saline Na Cl, ces deux plantes ont été utilisée

pour d’autres extractions.

Cela avait pour but, de connaître avec ces méthodes d’extractions, s’il y avait la

possibilité d’obtenir des lectines à activité hemagglutinantes.

C’etait aussi, pour connaître si une de ces méthodes d’extraction pouvait être retenue

comme méthode spécifique d’extraction des lectines.

Aucune agglutination n’a été observée, donc absence totale d’agglutinine.

Thèse Pharmacien.


Purification des extraits bruts :

Tableau VIII :

A- Purification par précipitation différentielle au sulfate d’ammonium :

Nature de l’extrait Réactif Hématies Purification A : + + + Extraction à l’eau Précipitation différentielle B : + + + Physiologique au (NH4)2SO4 AB : + + +

O : + + +

+ + + : Très forte agglutination.

Avec la purification par précipitation différentielle nous avons observé une forte

agglutination de toutes les hématies.

Thèse Pharmacien.


B- Purification des extraits bruts positifs par des solvants organiques :

Dans le but d’obtenir des lectines pures nous avons procédé aux extractions par des

solvants organiques bien connu comme hexane et le butanol.

Ces extrait purifiés ont été utilises de nouveaux sur les hématies humaines

Tableau IX:

Plantes Solvant Hématies Purification A : + (et légère hémolyse) Hexane B : + (et légère hémolyse) O: + + + (et légère hémolyse) Erythrena .s A: + + Butanol B: + + O: + + +

+: présence d’agglutination

+ +: peu d’agglutination

+ + + : Agglutination nombreuse.

Ces extraits purifiés donnent une agglutination des hématies, mais elle est forte au

niveau des hématies du sujet O

Thèse Pharmacien.


Tableau X :

Agglutination des extraits purs à des dilutions différentes

Dilution Hématies

1/10

1/20

1/40

1/80

1/160

A : B : O :

+ + + + + + + + +

+ + + + + + + + +

+ + + + + + + + +

+ + + + + + + + +

+ + + + + +

Dilution Hématies

1/320

1/400

1/500

1/600

A : B : O :

+ + +

- + +

- - +

- - -

A la dilution de 1/500 nous observons une agglutination des hématies du sujet O.

Absence totale d’agglutinine à la dilution de 1/600

Thèse Pharmacien.


Tests d’inhibitions :

Dans un premier temps nous avons procédé d’abord à la recherche des personnes

sécrétrices.

Nous savons l’anti-H lectine de Diamed est spécifique à la substance H, il a été

utilisé pour la détermination de personnes sécrétrices.

Ensuite nous avons procédé au test d’inhibition de l’agglutinine par la salive

obtenue.

Dans l’extrait brut d’E. senegalensis l’agglutinatinine n’est autre que l’anti-H.

Nous avons effectué aussi le test d’inhibition avec certains sucres simples (fucose,

galactose et glucose) pour déterminer la spécificité en sucre de nos extraits.

Nous n’avons pas trouvé de spécificité précise en sucre de nos extraits en utilisant

l’inhibition de l’agglutination par des sucres simples.

Thèse Pharmacien.


QUATRIÈME PARTIE

COMMENTAIRE ET DISCUSSION

Thèse Pharmacien.


Commentaire et discussion :

De janvier 2004 à décembre 2004, au laboratoire du centre nationale de la

transfusion sanguine et au laboratoire du département de la médecine traditionnelle

nous avons effectué des extractions de lectines dans le but d’obtenir des réactifs

d’agglutination des hématies.

Notre pays ayant des ressources limitées, il nous a paru utile de chercher au niveau

de notre flore locale des possibilités d’obtenir de tels réactifs.

En effet de nombreux auteurs ont déjà montré que les lectines pouvaient discriminer

des groupes sanguins humains (Renkonen, 1948 1) et que la structure reconnue sur

les membranes des globules est actuellement identifiée pour plusieurs lectines (Bird,

1964).

Au niveau du laboratoire du centre national de la transfusion sanguine dans la

section groupage les difficultés de groupage sont souvent solutionnées grâce à

l’utilisation des lectines (Dolichos biflorus).

Dans un premier temps nos moyens ne nous ont permis de tester que quatre plantes

quant à l’existence de lectines hemagglutinantes au niveau de leurs graines.

Nous avons utilisé des hématies de différent phénotype érythrocytaire incubé avec

les extraits bruts des plantes selon le schéma que nous avons décrit.

Le tableau VI (l’agglutination des hématies humaines par les extraits bruts d’A.

precatorius obtenus à partir des différents solvants d’extraction) nous montre que la

plante étudiée contient effectivement des substances à activiter agglutinante sur les

hématies humaines.

Ce résultat est en accord en comparaison avec les travaux réalisés par le

Adjanohoun, 1991.

Thèse Pharmacien.


Le tableau VII (Agglutination des hématies humaines par les extraits bruts de

C.sieberiana et P.africana obtenus à partir des différents solvants) nous montre

l’absence totale d’agglutinine dans les graines de ces plantes.

Ce résultat est en l’accord avec les travaux réalisés par (Fortin.D, Myanart 1990).

Concernant le tableau V, il nous a prouvé la présence de lectines à activiter

hemagglutinante dans la graine d’Erythrina senegalensis. Malheuresement nous ne

pouvons comparer nos résultats à ceux d’autres auteurs pour ce qui concerne cette

plante. Car nos recherches bibliographiques à ce niveau sont restées vaines.

Nous n’avons pas trouvé de revue travaillant spécifiquement sur cette plante pour la

mise en évidence des agglutinines.

Nous n’avons pas testé nos extraits sur des hématies animales autre que humaines

pour plusieurs raisons : le manque de disponibilité de telles hématies du fait de

l’éloignement des abattoirs frigorifiques d’une part ,et d’autre part du fait de

l’objectif qui est d’obtenir des réactifs utilisables en biologie clinique.

Les extraits bruts d’Erythina senegalensis et Arbrus precatorius ont pratiquement

les mêmes degré d’agglutination sur les hématies humaines. (Voir Histogramme I et

II).

Les extraits bruts de Cassia sieberiana et Prosopis africana ne sont pas du tout

agglutinant (tableau VI).

Au regard de nos résultats l’eau physiologique est le meilleur solvant d’extraction

suivie de du chlorure de sodium NaCl puis le phosphate disodique pur. Avec l’eau

distille utilisée comme solvant d’extraction nous remarquons souvent légère

hémolyse des hématies.

Nous observons une véritable agglutination avec nos extraits à l’œil nu.

L’agglutination s’intensifie au fur et à mesure qu’on augmente le temps

d’incubation.

Nos extraits bruts obtenus ont été soumis aux épreuves de purification.

Nos résultats montrent des différences entre l’extrait brut et l’extrait purifié

Thèse Pharmacien.


La première méthode de purification que nous avons réalisée est basée sur la

solubilisation des lectines dans des solvants organiques qui sont l’hexane et le

butanol.

Les hématies des sujets du groupe O ont été fortement agglutinées par ses extraits

purs. L’inter-action hexane-lectine est mal documentée dans la littérature à laquelle

nous avons eu accès. Nous pensons que cette interaction détruit ou altère la lectine

ou encore que l’hexane se fixerait sur le site d’inter-action lectin-recepteur

membranaire du globule rouge ou tout simplement l’hexane n’est pas un très bon

solvant d’extraction des lectines.

Nous pensons que la polyagglutinabilité est due au faite que la lectine reconnaît le

même sucre sur la membrane globulaire des différents groupes sanguins. Ce sucre

présent sur la plupart des hématies, autrement dit un sucre de polyagglutinabilité

comme le fucose, l’acide scialique, etc….

La deuxième méthode de purification donne une solution limpide très concentrée en

agglutinine. La purification par précipitation différentielle se prête mieux à de gros

volumes. Elle est utilisée très souvent immédiatement après l’homogénéisation pour

se débarrasser du gros des contaminants.

Les lectines purifiées sont souvent peu stables et doivent généralement être

conservées dans les conditions les protégeant de la dégradation. La conservation à

basse température est de rigueur. Les protéines particulière ou lectines sont stables

sous forme sèche (en poudre), c’est la meilleure façon de les conserver. A ce niveau

seul les extraits d’E. senegalensis ont fait l’objet de purification et de dilution des

extraits purifiés dans les essais.

L’extrait purifié d’E. senegalensis a donné un résultat discriminant à la dilution au

1/500 sur les hématies du sujet O.

Ceci peut être interprété comme élément de spécificité H de cette lectine. Car le

déterminant antigénique H existe sur toutes les hématies avec une prédominance sur

les hématies du sujet O chez qui ce substrat H n’est pas converti en antigène A et B.

Thèse Pharmacien.


L’extrait d’A. precatorius a été exclus des épreuves de purification. Car il a fait

l’objet de purification plus poussée. Il a été trouvé dans la graine de cette plante

une protéine particulière appelée abrin qui se subdivise en abrin A et abrin B.

L’abrin A provoque l’agglutination des érythrocytes humaines type O à la dose

de 0,8 µg/ml.

L’abrin A, à la dose de 5µg/ml agglutine les cellules du sarcome 180 et les

cellules tumorales de l’axiste d’Ehrlich (Lin, 1978).

��Conclusion :

Nous avons extrait des substances à effet agglutinant sur les hématies que nous

appèlerons lectines.

Tous les solvants que nous avons utilisé, ont pu extraire des agglutinines.

Les lectines d’Erythrena .senegalensis et A. precatorius ont eu des effets de

polyagglutination.

Avec la purification nous avons une forte élévation du degré d’agglutination des

hématies du sujet O.

Le butanol semble être le meilleur solvant d’extraction compte tenu des résultats en

terme de score d’agglutination erythocytaire.

Thèse Pharmacien.


CINQUIEME PARTIE

REFERENCES BIBLIOGRAPHIGUES

Thèse Pharmacien.


REFERENCES BIBLIOGRAPHIGUE :

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Thèse Pharmacien.


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Thèse Pharmacien.


SIXIEME PARTIE

ANNEXE

Thèse Pharmacien.


degré d’agglutination 3 2 1 0 Hématies

A B AB O Histogrammes du degré d’agglutination des extraits bruts d’Erythrina senegalensis degré d’agglutination 3 2 1 0 Hématies

A B AB O Histogrammes du degré d’agglutination des extraits bruts d’Arbres precatorius.

Hématies normales Hématies agglutinées.

Histogrammes du degré d’agglutination des

I

II

Thèse Pharmacien.



A B AB O Histogrammes du degré d’agglutination de l’extraits bruts de Cassia séberiana et Prosopis africana.

IV degré d’agglutination 3 2 1 0 Hématies

A B AB O Histogrammes du degré d’agglutination des extraits purs d’Erythrina senegalensis par l’hexane.

III

Thèse Pharmacien.



A B AB O Histogrammes du degré d’agglutination des extraits purs d’Erythrina senegalensis par le Butanol. degré d’agglutination 3 2 1 0 Hématies

A B AB O Histogrammes du degré d’agglutination des extraits purs d’E. senegalensis par le sulfate d’ammonium.

V

VI

Thèse Pharmacien.


degré d’agglutination 3 2 1 0 Hématies O. 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/400 1/500 Hématies normales. Hématies agglutinées.

VII

Histogrammes du degré d’agglutination des Hématies O par les extraits purs d’E. senegalensis à des dilutions différentes.

Thèse Pharmacien.


Fiche signalétique :

Nom : DOUMBIA

Prénom : Moussa

Titre de la thèse : extraction et Purification de lectine à partir des graines de la flore Malienne.

Année scolaire : 2004-2005.

Ville de Soutenance : Bamako.

Pays d’origine : Mali.

Lieu de dépôt : Bibliothèque Faculté de Médecine de Pharmacie et Odontostomatologie.

Secteur d’intérêt : Immunologie, Hématologie, Phytochimie.

Résumé : - Les lectines sont des substances protéiques extraits de plantes ou

d’animaux. Certaines ont des activités agglutinantes sur les hématies humaines. Existe-t-il dans la flore malienne des plantes contenant des lectines à activité hémagglutinante ?

- Notre but dans ce travail était d’extraire, purifier et vérifier l’activité hémagglutinante des lectines venant de quatre plantes de la flore malienne :

• Erythrina senegalensis • Abrus precatorius ; • Cassia sieberiana ; • Prosopis africana.

L’extraction par broyage et macération a été suivie de purification par précipitation au sulfate d’ammonium à 50%.

Les extraits purifiés ont eu avant dilution un effet de polyagglutinabilité sur les hématies de tous les groupes sanguins du système ABO.

Mais après des dilutions successives seul l’extrait d’Erythrina senegalensis agglutine les hématies de groupe O à la dilution au 1/500 dans du NaCl 0,90/00. Cette agglutination a pu être inhibée par la salive des sujets secrétaire, mais aucun des sucres simples testés n’a pu inhiber l’agglutination. Il y a donc de continuer à rechercher la spécificité de l’agglutinine extraite de Erythrina senegalensis.

Mots clés : Lectine, phytohémagglutinine, hématie humaine, sucre simple, agglutination, polyagglutination, spécificité, groupe sanguin.

Documents

Thèse Pharmacien. SOMMAIRE - African Index Medicusindexmedicus.afro.who.int/iah/fulltext/Thesis_Bamako/05P38.pdf · - Caractère botanique ... des personnes sécrétrices ... La