VETAGRO SUP CAMPUS VETERINAIRE DE LYON

Année 2017 - Thèse n°035

EVALUATION DE L’EFFET DE L’ALLERMYL® LOTION, DU DERMACOOL®, DE L’ALLERDERM® SPOT ON

ET DE L’HUMIDERM® DE VIRBAC, SUR LA REPARATION DE LA BARRIERE CUTANEE

DANS UN MODELE DE RUPTURE CHRONIQUE DE LA BARRIERE CUTANEE CHEZ LE CHEVAL

THESE

Présentée à l’UNIVERSITE CLAUDE-BERNARD - LYON I (Médecine - Pharmacie)

et soutenue publiquement le 06 Octobre 2017 pour obtenir le grade de Docteur Vétérinaire

par

TOUIN Cyrielle

Née le 04 Mars 1991 à Foix

VETAGRO SUP CAMPUS VETERINAIRE DE LYON

Année 2017 - Thèse n°035

EVALUATION DE L’EFFET DE L’ALLERMYL® LOTION, DU DERMACOOL®, DE L’ALLERDERM® SPOT ON

ET DE L’HUMIDERM® DE VIRBAC, SUR LA REPARATION DE LA BARRIERE CUTANEE

DANS UN MODELE DE RUPTURE CHRONIQUE DE LA BARRIERE CUTANEE CHEZ LE CHEVAL

THESE

Présentée à l’UNIVERSITE CLAUDE-BERNARD - LYON I (Médecine - Pharmacie)

et soutenue publiquement le 06 Octobre 2017 pour obtenir le grade de Docteur Vétérinaire

par

TOUIN Cyrielle

Née le 04 Mars 1991 à Foix

3

4

5

REMERCIEMENTS

Anotrejury,

AMonsieurleProfesseurJean-FrançoisNICOLAS,DelafacultédemédecinedeLyon,

Quinousafaitl’honneurd’accepterlaprésidencedenotrejurydethèse,Hommagesrespectueux.

AMonsieurleProfesseurDidierPIN,DeVetAgroSup,CampusvétérinairedeLyon,

Poursonencadrement,sadisponibilitéetsesconseilsprécieux,Toujoursdanslabonnehumeur,

Avectoutemagratitudeetmessincèresremerciements.

AMonsieurleDocteurAntoninTORTEREAU,DeVetAgroSup,CampusvétérinairedeLyon,

Quinousafaitl’honneurd’accepterdeparticiperànotrejurydethèse,Sincèresremerciements.

6

7

AMadameleDocteurMarionMOSCA,AMadameleDocteurPaulinePANZUTTI,EtàMonsieurleDocteurClémentPARLOUER,DeVetAgroSup,CampusvétérinairedeLyon,Pourm’avoiraccompagnéetoutaulongdecetravail,Pourleuraideprécieuse,leurdisponibilitéetleurgentillesse,Travailleravecvousaétéunréelplaisir.AMadameleDocteurCarolineDIDELOT,EtaulaboratoireVirbac,Pourm’avoirproposéetfinancécetteétude,Pourleursoutien,Sincèresremerciements.Auxtechniciennesdulaboratoired’hématologieetd’histologie,DeVetAgroSup,CampusvétérinairedeLyon,Mercipourvotreaide.

Amesproches,

Amesparents,Pourleursoutiensansfailleetleuramouràtoutesépreuves,

Larouteaétélonguemaistellementbelle,Mercipourtout.

AHélèneetJérémy,Pourréussiràmesupporter,

Atoutesnospetitesdégustationsdegâteaux,Mercid’êtrelà.

AInes,JulietteetSophie,Pourvotreaidesiprécieuse.

Atoutemafamilleettousmesamis,Mercipourtouscesjolismomentsàvoscôtés.

8

9

TABLEDESMATIERES

TABLEDESFIGURES....................................................................................................................15

TABLEDESTABLEAUX................................................................................................................16

TABLEDESGRAPHIQUES...........................................................................................................17

TABLEDESANNEXES...................................................................................................................18

LISTEDESABREVIATIONS.........................................................................................................19

INTRODUCTION.............................................................................................................................21

PARTIEI:ETUDEBIBLIOGRAPHIQUE...................................................................................23I. Structuredelapeau........................................................................................................23A. Rappelsanatomiquesetspécificitésdelapeauducheval.........................................23B. L’épiderme......................................................................................................................................241. Couchebasaleoustratumbasal........................................................................................25a. Leskératinocytes................................................................................................................25b. Lesmélanocytes..................................................................................................................26c. LescellulesdeMerkel.......................................................................................................26

2. Coucheépineuseoustratumspinosum..........................................................................26a. LescellulesdeLangerhans.............................................................................................26

3. Couchegranuleuseoustratumgranulosum................................................................274. Couchecornéeoustratumcorneum................................................................................275. Lefilmhydrolipidiquesuperficiel....................................................................................28

C. Lajonctiondermo-épidermique............................................................................................29D. Lederme..........................................................................................................................................29E. L’hypoderme..................................................................................................................................29

II. Fonctionbarrièrecutanée............................................................................................30A. Définitionetfonctiondelabarrièrecutanée...................................................................301. Lestratumcorneum...............................................................................................................31a. Lescornéocytes:unebarrièremécanique..............................................................31i. Lacellule............................................................................................................................31ii. L’enveloppecornée.......................................................................................................32iii. Lescornéodesmosomes..............................................................................................35

b. Leslipidesintercellulaires..............................................................................................35i. Composition.....................................................................................................................35ii. Organisationenlamelles............................................................................................35

2. Importancedel’épidermenucléé.....................................................................................38a. Lesjonctionsserrées........................................................................................................38b. Lesjonctionsadhérentesetlesdesmosomes........................................................39c. LesjonctionsGAP...............................................................................................................39

10

B. Miseenplacedelabarrière.....................................................................................................391. Processusdecornificationoukératinisation..............................................................392. Processusdedesquamation...............................................................................................413. Acteursdelarégulation........................................................................................................41a. Lescytokines........................................................................................................................41b. Lecalcium..............................................................................................................................41c. La3’,5’adénosinemonophosphatecyclique(AMPc).........................................43d. LepH........................................................................................................................................43e. Autresfacteurs....................................................................................................................44

III. Altérationdelabarrièrecutanée...............................................................................44A. Altérationexpérimentaledelabarrièrecutanée...........................................................441. Procédédutape-stripping...................................................................................................442. Conséquencesd’unerupturedelabarrièrecutanée...............................................46

B. Altérationpathologiquedelabarrièrecutanéeeteffetsdeshydratants............471. Lesdermatoses.........................................................................................................................472. Lesréhydratantscutanés.....................................................................................................49a. Différentstypesderéhydratantsoud’émollientscutanés...............................49b. Hydratationdelapeaueteffetssurlafonctionbarrière..................................51c. Propriétés..............................................................................................................................54i. Allermyllotion®............................................................................................................54ii. Allerderm®spot-on.....................................................................................................55iii. Dermacool®.....................................................................................................................56iii. Humiderm®.....................................................................................................................57

IV. Evaluationdelafonctionbarrière........................................................................58A. Laperteinsensibleeneau(PIE)............................................................................................581. Définitiondelaperteinsensibleeneau........................................................................582. MesuredelaPIE......................................................................................................................58a. Appareilàchambreouverte..........................................................................................59b. Appareilàchambrefermée............................................................................................60

3. PIEetévaluationdelafonctiondebarrière................................................................604. VariationsdelaPIE................................................................................................................61

B. Letauxd’hydratationdelapeau...........................................................................................621. Tauxd’hydratationetévaluationdelafonctionbarrière......................................622. Mesuredutauxd’hydratation............................................................................................623. Variationsdutauxd’hydratation......................................................................................63

C. MesuredupHcutané..................................................................................................................631. DéfinitiondupH.......................................................................................................................632. GradientdepHdanslestratumcorneum......................................................................643. pHetévaluationdelafonctionbarrière.......................................................................64

11

PARTIEII:ETUDEEXPERIMENTALE......................................................................................65I. Principeethypothèses..................................................................................................65II. Matérieletméthode.......................................................................................................65A. Sujetsdel’étude............................................................................................................................65B. Déterminationetpréparationdessitesd’étude.............................................................65C. Phased’induction:créationdelarupturechroniquedelabarrièrecutanéepartape-stripping..................................................................................................................................66D. Phasederécupération:applicationdesproduits(Allermyl®lotion,Allerdermspot-on®,Humiderm®,Dermacool®)..................................................................67E. Suividelafonctiondelabarrièrecutanée........................................................................681. Examenclinique.......................................................................................................................692. Histopathologie........................................................................................................................693. Perteinsensibleeneau.........................................................................................................704. Tauxd’hydratationcutanée................................................................................................725. pH...................................................................................................................................................73

F. Analysesstatistiques..................................................................................................................74III. Résultats.............................................................................................................................75A. Rupturechroniquedelabarrièrecutanée........................................................................751. Observationscliniques..........................................................................................................752. Histopathologie........................................................................................................................77a. Biopsiepeausaineavanttape-stripping..................................................................77b. Critèresdenotationutiliséspourleslecturesdebiopsies...............................77c. Biopsiesàt0,aprèsletape-stripping,avantl’applicationdesproduitsétudiés...............................................................................................................................................78d. MarquagecellulaireKi67:indexdeprolifération...............................................78

3. Perteinsensibleeneau.........................................................................................................79a. Etudedescriptivegraphique.........................................................................................79b. Etudestatistique.................................................................................................................80i. EtudedesdifférencesdevaleursdePIEàt0,aprèsletape-stripping,avantl’applicationdesproduits,entrelessitestraités,lessitestémoinsetlapeausaine..............................................................................................................................80

4. Tauxd’hydratation.................................................................................................................81a. Etudedescriptivegraphique.........................................................................................81

5. pH...................................................................................................................................................81B. Effetsdel’Allermyl®lotion.....................................................................................................821. Observationscliniques..........................................................................................................822. Histopathologie........................................................................................................................82a. Biopsiesaprèsapplicationsquotidiennesduproduit........................................82i. t0+48h................................................................................................................................82ii. t0+96h................................................................................................................................83

12

b. MarquagecellulaireKi67:Indexdeprolifération...............................................84c. ImmunomarquageCD3....................................................................................................84

3. Perteinsensibleeneau.........................................................................................................85a. PIEcorrigée...........................................................................................................................85b. Etudedescriptivegraphique.........................................................................................86c. Etudestatistique.................................................................................................................87i. Etudedel’évolutiondesvaleursdePIEtoutaulongdel’étude...............87ii. EtudedesdifférencesdevaleursdePIEàt0+1h30.......................................88

4. Tauxd’hydratation.................................................................................................................88a. THcorrigé..............................................................................................................................88b. Etudedescriptivegraphique.........................................................................................89c. Etudestatistique.................................................................................................................90

5. pH...................................................................................................................................................90a. Etudedescriptivegraphique.........................................................................................90b. Etudestatistique.................................................................................................................91

C. Effetsdel’Allerderm®spot-on..............................................................................................921. Observationscliniques..........................................................................................................922. Histopathologie........................................................................................................................92a. Biopsiesaprèsapplicationsquotidiennesduproduit........................................92i. t0+48h................................................................................................................................92ii. t0+96h................................................................................................................................92

b. MarquagecellulaireKi67:Indexdeprolifération...............................................93c. ImmunomarquageCD3....................................................................................................93

3. Perteinsensibleeneau.........................................................................................................94a. PIEcorrigée...........................................................................................................................94b. Etudedescriptivegraphique.........................................................................................94c. Etudestatistique.................................................................................................................95

4. Tauxd’hydratation.................................................................................................................95a. THcorrigé..............................................................................................................................95b. Etudedescriptivegraphique.........................................................................................96c. Etudestatistique.................................................................................................................97

5. pH...................................................................................................................................................97a. Etudedescriptivegraphique.........................................................................................97b. Etudestatistique.................................................................................................................98

D. Effetsdel’Humiderm®..............................................................................................................981. Observationscliniques..........................................................................................................982. Histopathologie........................................................................................................................98a. Biopsiesaprèsapplicationsquotidiennesduproduit........................................98i. t0+48h................................................................................................................................98ii. t0+96h................................................................................................................................98

b. MarquagecellulaireKi67:indexdeprolifération...............................................99c. ImmunomarquageCD3....................................................................................................99

3. Perteinsensibleeneau......................................................................................................100

13

a. PIEcorrigée........................................................................................................................100b. Etudedescriptivegraphique......................................................................................100c. Etudestatistique..............................................................................................................101

4. Tauxd’hydratation..............................................................................................................101a. THcorrigé...........................................................................................................................101b. Etudedescriptivegraphique......................................................................................102c. Etudestatistique..............................................................................................................103

5. pH................................................................................................................................................103a. Etudedescriptivegraphique......................................................................................103b. Etudestatistique..............................................................................................................104

E. EffetsduDermacool®.............................................................................................................1061. Observationscliniques.......................................................................................................1062. Histopathologie.....................................................................................................................106a. Biopsiesaprèsapplicationsquotidiennesduproduit.....................................106i. t0+48h.............................................................................................................................106ii. t0+96h.............................................................................................................................106

b. MarquagecellulaireKi67:Indexdeprolifération............................................107c. ImmunomarquageCD3.................................................................................................108

3. Perteinsensibleeneau......................................................................................................108a. PIEcorrigée........................................................................................................................108b. Etudedescriptivegraphique......................................................................................108c. Etudestatistique..............................................................................................................109

4. Tauxd’hydratation..............................................................................................................109a. THcorrigé...........................................................................................................................109b. Etudedescriptivegraphique......................................................................................110c. Etudestatistique..............................................................................................................111

5. pH................................................................................................................................................111a. Etudedescriptivegraphique......................................................................................111b. Etudestatistique..............................................................................................................112

PARTIEIII:DISCUSSION...........................................................................................................115I. Lesmanipulationssurleschevaux..........................................................................115A. Echantillonnage.........................................................................................................................115B. Choixdessites............................................................................................................................115C. Problèmesdusauxsujets......................................................................................................115D. Paramètresd’ambiance:hygrométrieettempérature............................................116E. Etablissementdumodèlederupturechroniquedelabarrièrecutanée..........116

II. Histopathologie..............................................................................................................118

14

III. Paramètresmesurés....................................................................................................118A. Perteinsensibleeneau...........................................................................................................118B. Tauxd’hydratationcutanée..................................................................................................119C. pHcutané......................................................................................................................................120

IV. Testsstatistiquesutilisés.......................................................................................121V. Interprétationdesrésultatsobtenus......................................................................122A. Préambule....................................................................................................................................122B. Effetsdel’Allermyllotion®..................................................................................................122C. Effetsdel’Allerderm®spot-on...........................................................................................122D. EffetsduDermacool®.............................................................................................................123E. Effetsdel’Humiderm®...........................................................................................................124

CONCLUSION.................................................................................................................................125

BIBLIOGRAPHIE..........................................................................................................................127

ANNEXES........................................................................................................................................131

15

TABLEDESFIGURESFigure1:Représentationschématiquedelastructuredelapeau............................................23Figure2:Couped’épidermecoloréeàl’hémalun-éosine(x400)...............................................25Figure3:Structureschématiquedelabarrièrecutanée...............................................................30Figure4:Modèledeformationdel’enveloppecornée...................................................................34Figure5:Corpslamellaired’épidermedesourisobservéaumicroscopeélectronique(x300000)etschémad’interprétationparlemodèledeLandmann......................................36Figure6:Organisationdeslamelleslipidiquesdansl’espaceintercellulairedelacouchecornéedel’épidermedesouris,observéenmicroscopieélectronique(x200000)........................................................................................................................................................................37Figure7:Voiedesynthèsedeslamelleslipidiquesintercellulairesdelacouchecornée...................................................................................................................................................................38Figure8:Différenciationdeskératinocytes........................................................................................40Figure9:Modificationdugradientcalciquedansl’épidermelorsd’unealtérationdelafonctionbarrière..............................................................................................................................................42Figure10:Implicationsphysiopathologiquesdugradientcalcique........................................42Figure11:Restaurationdelarécupérationdelabarrièrecutanée.........................................46Figure12:Chevalatteintd'unefolliculitebactérienne..................................................................47Figure13:Chevauxatteintsdedermatophilose...............................................................................48Figure14:Chevalatteintdedermatiteestivalerécidivante........................................................49Figure15:Gradientdutauxd’hydratationdel’épidermeenfonctiondelaprofondeurchezunhommeenbonnesanté................................................................................................................51Figure16:Allermyl®lotion.......................................................................................................................54Figure17:Allerderm®spot-on................................................................................................................56Figure18:Dermacool®...............................................................................................................................56Figure19:Humiderm®...............................................................................................................................57Figure20:SchémadelasondedeTewameter®..............................................................................59Figure21:SchémadelasondeduVapoMeter®...............................................................................60Figure22:Représentationschématiquedudispositifmesurantlacapacitancelorsdel’évaluationdel’hydratationdelacouchecornée.............................................................................63Figure23:Sitespréparéssurlecheval3etreprésentationschématiquedessites..........66Figure24:Réalisationduprocédédetape-stripping.....................................................................67Figure25:Sitesbiopsiés..............................................................................................................................70Figure26:VapoMeter®(DelfinTechnologiesLTD).......................................................................71Figure27:MesuredelaPIEsurundeschevauxàl’aideduVapoMeter®............................71Figure28:Corneometer®..........................................................................................................................72Figure29:Mesuredutauxd’hydratationsurundeschevauxàl’aideducornéomètreCM825..................................................................................................................................................................73Figure30:MesuredupHàl’aidedupH-mètreHI83141............................................................74Figure31:AspectdelapeausaineàJ-5...............................................................................................75Figure32:AspectdelapeauàJ-5,aprèsl’applicationdesstrips..............................................76Figure33:AspectdelapeauàJ-1............................................................................................................76

16

Figure34:Coupedepeau,coloréeàl'HE,x100,obtenueaucoursdenosobservations.......................................................................................................................................................77Figure35:Présencedeplagesdeparakératoseaprèsladernièreséancedetape-stripping,àt0,x250HE.................................................................................................................................78Figure36:Acanthoseetorthokératose,x250,HE............................................................................83Figure37:Foyersd’exfoliationorthocompacte(gauche)àorthonormale(droite),x100,HE...............................................................................................................................................................83Figure38:Spongiose,x250,HE................................................................................................................92Figure39:Foyerdeparakératoseetœdèmeduderme,x250,HE.........................................107

TABLEDESTABLEAUXTableauI:Planningdedéroulementdel’étude.................................................................................68TableauII:Planningdesbiopsies............................................................................................................69

17

TABLEDESGRAPHIQUESGraphique1:EvolutiondelaPIEchezlecheval3aucoursdelaphased’induction........79Graphique2:Evolutiondutauxd’hydratationcutanéeaucoursdelaphased’inductionchezlecheval2........................................................................................................................81Graphique3:EvolutiondupHaucoursdelaphased’inductionchezlecheval1.............82Graphique4:Histogrammedesindexdeproliférationcalculésparjouretparsitetraitéàl’Allermyl®.........................................................................................................................................84Graphique5:HistogrammedunombredelymphocytesTcomptésparjouretparsitetraitéàl'AllermylÒ.........................................................................................................................................84Graphique6:SuividelaPIEenpeausaineetdel’hygrométrieambiantesurlecheval1................................................................................................................................................................85Graphique7:EvolutiondelaPIEenfonctiondutempschezles5chevaux(Allermyl®)........................................................................................................................................................87Graphique8:EvolutionduTHenfonctiondutempschezles5chevaux(Allermyl®)...90Graphique9:EvolutiondupHenfonctiondutempschezles5chevaux(Allermyl®)....91Graphique10:Histogrammedesindexdeproliférationcalculésparjouretparsitetraitéàl’Allerderm®......................................................................................................................................93Graphique11:HistogrammedunombredelymphocytesTcomptésparjouretparsitetraitéàl’Allerderm®.............................................................................................................................93Graphique12:EvolutiondelaPIEenfonctiondutempschezles5chevaux(Allerderm®)....................................................................................................................................................95Graphique23:EvolutionduTHenfonctiondutempschezles5chevaux(Allerderm®)....................................................................................................................................................96Graphique14:EvolutiondupHenfonctiondutempschezles5chevaux(Allerderm®)...................................................................................................................................................97Graphique15:Histogrammedesindexdeproliférationcalculésparjouretparsitetraitéàl’Humiderm®....................................................................................................................................99Graphique16:HistogrammedunombredelymphocytesTcomptésparjouretparsitetraitéàl’Humiderm®............................................................................................................................99Graphique17:EvolutiondelaPIEenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®)................................................................................................................................................101Graphique18:EvolutionduTHenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®)................................................................................................................................................102Graphique19:EvolutiondupHenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®)................................................................................................................................................104Graphique20:HistogrammedesindexdeproliférationcalculésparjouretparsitetraitéauDermacool®.................................................................................................................................107Graphique21:HistogrammedunombredelymphocytesTcomptésparjouretparsitetraitéauDermacoolÒ.........................................................................................................................108Graphique22:EvolutiondelaPIEenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®)................................................................................................................................................109

18

Graphique23:EvolutionduTHenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®)................................................................................................................................................110Graphique24:EvolutiondupHenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®)................................................................................................................................................112Graphique25:Evolutiondutauxd’hydratationmoyenenfonctiondutemps(Humiderm®)................................................................................................................................................120

TABLEDESANNEXESANNEXE1:Agrémentducomitééthique..........................................................................................131ANNEXE2:Tableauxdesmesures.......................................................................................................132ANNEXE3:Tableaud’observationdeslamesd’histologie........................................................139ANNEXE4:ComptagedesindexdeproliférationKi67etdeslymphocytesT.................140ANNEXE5:ScriptR.....................................................................................................................................141ANNEXE6:Lesdifférentestechniquesdecolorationenhistopathologie..........................143

19

LISTEDESABREVIATIONSAMPc:3’-5’-AdénosineMonophosphateCycliqueDER:DermatiteEstivaleRécidivanteHE:Colorationàl’Hémalun-EosineNMF:NaturalMoisturizingFactorNO:Monoxyded’azotePAR2:Récepteur2protéine-activéPIE:PerteInsensibleenEauTEWL:TransEpidermalWaterLossTH:Tauxd’HydratationX100,x200,x400:Grossissementaumicroscopex100,x200,x400

20

21

INTRODUCTION La peau est l’organe le plus vaste desmammifères. Elle a un rôle principal debarrière,enagissantcommeinterfaceentrel’organismeetlemilieuextérieur.Lapeauest un système dynamique assurant le maintien de l’homéostasie cutanée et del’intégritédecettebarrière.

Lorsdedermatose,lafonctionbarrièrecutanéepeutêtrealtérée.Lapeaun’étantpasunorganecomplètement imperméable, l’applicationde réhydratants cutanéspeutêtreenvisagéecommelorsdutraitementdesdermatoses.

L’objectif de cette thèse est d’étudier les effets de topiques hydratants sur la

réparation de la barrière cutanée dans un modèle d’altération chronique de cettebarrière chez le cheval. Les quatre produits testés sont indiqués dans le cas dedermatoses,caninesetfélines,etcommercialisésparlelaboratoireVirbac:Allerderm®spot-on,Allermyl®lotion,Dermacool®etHumiderm®. Dansunepremièrepartie,aprèsavoirrappelérapidementlastructuredelapeau,nousétudieronslescomposantsdelabarrièrecutanée,samiseenplaceetsesfonctions.Nous nous intéresserons, ensuite, aux différentes méthodes permettant d’évaluer lafonction barrière ainsi que les mécanismes, pathologiques et expérimentaux,aboutissantàunerupturedelabarrièrecutanée. Dansunesecondepartie,nousprésenteronsnotreétudeexpérimentale.Dansunpremiertemps,unmodèled’altérationcutanéechroniqueseramisenœuvregrâceàlaméthodedu«tape-stripping».Dansundeuxièmetemps,nousétudierons leseffetsdel’application des topiques sur la restauration de la barrière cutanée via lamesure detémoinsvariablesde l’étatde la fonctionbarrière: laperte insensibleeneau, le tauxd’hydratation et le pH cutanés. Des examens histologiques et des immunomarquagesserontégalementréalisés. Enfin dans une dernière partie, nous présenterons nos résultats suivis de leurdiscussion. Nous pourrons, ainsi, conclure quant à l’efficacité des produits sur laréparationdelabarrièrecutanéechezlechevaletleurséventuellesindications.

22

23

PARTIEI:ETUDEBIBLIOGRAPHIQUEI. Structuredelapeau

Lapeauest l’organe leplus volumineuxet leplus visibledesmammifères. Elle

joue de nombreux rôles importants, en particulier celui de barrière anatomique etphysiologique entre l’animal et l’environnement. La peau apporte une protectionphysique, chimique et microbienne, d’une part, et, d’autre part, ses composantessensoriellespermettentdesentirlefroid,lachaleur,ladouleur,letoucherouencoreleprurit.

A. Rappelsanatomiquesetspécificitésdelapeauducheval

Lapeauest constituéed’unépiderme,dudermeainsiquede l’hypoderme.Elleest, également, composée de nombreuses annexes telles que les follicules pileux, lesglandessébacées,lesglandessudoriparesetlesappendicesdigitaux(châtaignes,ergots,sabots)(fig1)(KnottenbeltandPascoe,2009).

Figure1:Représentationschématiquedelastructuredelapeau

Il existe des singularités raciales et, également, individuelles, comme la densité

dupoil,saqualitéetsarépartition,ainsiquel’épaisseurdelapeau.Cesvariationssonttellementimportantesqu’ilfauttenircomptedelarace,delarobeainsiquedelasaisonaucoursd’unexamendermatologiquechez lecheval.L’épaisseurde lapeauduchevalestde3,8mmenmoyenne,maisvarieenfonctiondelazoneconcernée.Lapeauetlespoilssontplusfinsetmoinsdensessurleventre,lapartiemédialedescuissesetautourdesyeux,etplusépaissurledosetleresteducorps(KnottenbeltandPascoe,2009).

Unedesparticularitésmajeuresde lapeaudes chevauxpar rapportauxautres

espècesestqu’ellecontientunnombretrèsimportantdeglandessudoripares:environ810 glandes sudoripares par cm2 de peau (Jenkinson et al., 2006). Chez le cheval, la

24

sudation est le principal mécanisme de thermorégulation afin de combattre le stressthermiqueetrégulerlatempératurecorporelle.Lorsd’unexerciceouunstress,90%dela chaleurmétaboliqueestdissipée,dont70%par sudationet20%par lemécanismerespiratoire (polypnée). Le taux de sudation est directement corrélé au tauxd’hydratation cutanée, à la chaleur environnante, à la température ambiante et àl’intensitédel’exercice,etpeutatteindredesvaleurscomprisesentre10et12L.h-1.

Laperteeneaudueàlasudationintervientdanslamesuredelaperteinsensible

en eau. Il est donc nécessaire de la prendre en compte lors de l’étude de la fonctionbarrièrecutanée.

B. L’épiderme

L’épiderme est un épithélium malpighien kératinisé pluristratifié et estfermementattachéaudermeparunemembranebasale,lajonctiondermo-épidermique(Knottenbelt and Pascoe, 2009). Il forme la partie la plus externe de la peau et serenouvelleenpermanenceduranttoutelavieducheval.

L’épidermeest composédequatre couchescellulaires,de laprofondeurvers la

surface(fig2):- lacouchebasale(stratumbasal),- lacoucheépineuse(stratumspinosum),- lacouchegranuleuse(stratumgranulosum),- lacouchecornée(stratumcorneum).L’épiderme estmince sur l’ensembledu corpsdesmammifèresdomestiques. Il

estcomposédecinqàseptassisescellulairesetauneépaisseurde30à95µmchezlecheval(Bensignoretal.,2012).

L’épidermeestconstituédequatretypescellulaires:- 85à95%dekératinocytes,- 5%demélanocytes,- 3à8%decellulesdeLangerhans,- 2%decellulesdeMerkel(ScottandMiller,2011).

25

Figure2:Couped’épidermecoloréeàl’hémalun-éosine(x400)(obtenuelorsdenosobservations)

1. Couchebasaleoustratumbasal

Lacouchebasaleestlacouchelaplusprofondedel’épiderme.Elleestconstituée

d’uneseulecouchedecellulesreposantsur lamembranebasalede la jonctiondermo-épidermique. Elle sépare ainsi l’épiderme du derme. Cette couche a un rôle deproliférationetderéparationdel’épiderme.Troistypescellulairescomposentlacouchebasale:leskératinocytes,lesmélanocytesetlescellulesdeMerkel.

a. Leskératinocytes

Leskératinocytessontmajoritaires.Ils’agitdutypecellulairedominantdanstoutl’épiderme. Les kératinocytes basaux sont en constante multiplication et donnentnaissance aux cellules filles des couches supérieures. Ils sont de forme cubique oucylindriqueetontunrapportnucléoplasmiqueélevé.Lecytosquelettedeskératinocytessecomposedetroistypesdefilamentscytoplasmiques:lesfilamentsintermédiaires,lesfilaments d’actine et lesmicrotubules (tubulines). Leurs fonctions sont diverses et ilsinterviennent dans la forme, la structure, la mobilité, la résistance mécanique,l’élasticité,l’orientation,lapolarisationdescellulesetlatransductiondessignaux.

Lesstructuresd’adhésionentreleskératinocytespermettentàlafoisd’assurerla

solidité de l’épiderme et la communication entre les cellules. Les structures les plusimportantes sont les desmosomes et les hémidesmosomes. Ils sont constitués d’uneplaqueintracellulairesur laquelles’insèrentd’unepart les filaments intermédiairesdekératine et, d’autre part, les protéines transmembranaires formant les desmosomes.L’ancrage de l’épiderme au derme est permis grâce aux hémidesmosomes reliés auxfilamentsdecollagènedelamembranebasale,eux-mêmesreliésauxfibresdecollagèneduderme(Pin,2014).

26

b. LesmélanocytesLesmélanocytessontledeuxièmetypedecellulestrouvéesdanslacouchebasale

mais on les retrouve également dans les matrices des follicules pileux, les conduitssébacéesetlesconduitssudoripares.

Chaquemélanocyte est en communication étroite avec 20 à 25 kératinocytes,qui, ensemble, forment une unité structurale et fonctionnelle appelée l’unité demélanisationépidermique.Ils’agitd’unestructuredynamique,répondantfortementauxstimuli endogènes et exogènes (Scott andMiller, 2011). Cette structure permet, entreautres, de conférer une protection de la peau, vis-à-vis des ultra-violets (Wickett andVisscher,2006).

Lesmélanocytesproduisentdes granulespigmentaires: lesmélanosomes, sitesdemélanogénèse.Cesonteuxquicontiennentlamélanine,conférantainsilacouleuràlapeauetauxpoilsdesmammifères.

c. LescellulesdeMerkel

Enfin,lescellulesdeMerkelconstituentlederniertypecellulairerencontrédanslacouchebasale.Ils’agitdecellulesspécialiséesquijouentlerôledemécanorécepteuràadaptationlente.

2. Coucheépineuseoustratumspinosum

Lacoucheépineuseestconstituéedescellulesfillesdelacouchebasale.Elleestcomposée,enmoyenne,detroisàcinqcouchescellulaires,maiscenombrevarieselonlarégionanatomique.Elleestplusépaisseauniveaudesjonctionscutanéo-muqueuses,dumuseau et du bourrelet coronaire. Les cellules filles sont légèrement éosinophiles àbasophiles, nucléées, polygonales. Il s’agit, en majorité, de kératinocytes, connectésentre eux par des liaisons intercellulaires. Les kératinocytes de la couche épineusesynthétisent les corps lamellaires (ou corps d’Odland), qui jouent un rôle importantdans la fonction barrière de l’épiderme. Les corps lamellaires sont des organitessécrétoiresovoïdesdélimitésparunemembraneàdeuxcouches(Darlenskietal.,2011).

Lacoucheépineusedoitsonnomàl’aspectenépinesdesdesmosomesentrelescellulesenmicroscopieoptique.

a. LescellulesdeLangerhans

Les cellules de Langerhans sont des cellules mononucléées dendritiques. Ellesproviennentdelamoelleosseuseetsontdelamêmelignéecellulairequelesmonocytesetlesmacrophages.

27

Ces cellules présentatrices d’antigène sont capables de présenter de manièreprimaire les antigènesaux lymphocytesT, enparticulier lorsdes contacts allergisants(WickettandVisscher,2006).

Onpeutégalementlesretrouverdanslacouchebasale.

3. Couchegranuleuseoustratumgranulosum

La couche granuleuse est constituée d’une à deux assises cellulaires (Scott andMiller, 2011) et est plus épaisse au niveau des jonctions cutanéo-muqueuses et desinfundibulumsdesfolliculespileux.Lescellulesdecettecouchesontbasophiles,aplatiesetproduisentdesgrainsdekératohyaline.Cesgrainsapparaissentdensesetbasophileset donnent leur nom à la couche granuleuse. Ces derniers ne possèdent pas demembrane et sont décrits comme des agrégats insolubles. Ils sont principalementconstituésdeprofilaggrine,deloricrineetdeprotéinesrichesenrésiduscystéine.

Lesgrainsdekératohyalinejouentunrôleimportantdanslakératinisationetlafonctionbarrière.

La profilaggrine est le précurseur de la filaggrine. La première fonction de la

filaggrine est d’aligner et d’unir les filaments de kératine produisant la matriceintracellulaire remplissant les cornéocytes. La deuxième fonction de la filaggrine estd’être une source d’acides aminés libres, essentiels à l’hydratation de la peau et à lafonctionbarrière. Laloricrineestsynthétiséeenassociationaveclesgrainsdekératohyalineetestimpliquéedanslaformationdel’enveloppecornéeetl’ancragedesfilamentsdekératinedanscettemêmecouche.

Lamatrice extracellulaire est composée de protéines, de sucres et, surtout, delipides(céramides,acidesgrasetcholestérol),etestorganiséeenlamelleslipidiques.Laproportiondelipidesestdeplusenplusimportantequandons’approchedelacouchecornée.

4. CouchecornéeoustratumcorneumLa couche cornée est constituée de cellules complètement kératinisées, en

constantedesquamation.Cescellules,aplaties,anuclééesetéosinophilessontappeléescornéocytes,kératinocytesaustadeterminaldedifférenciationcellulaire.

Au niveau de la couche granuleuse, les kératinocytes subissent les

transformations suivantes: lysedunoyau et des organites intracellulaires, disparitiondu cytoplasme, relargage des lipides dans l’espace intercellulaire, agrégation desfilaments intermédiairesdekératinesenmicro fibrilles, ainsique remplacementde lamembranecellulaireparuneenveloppecellulairecomposéedeprotéinesetde lipidesensurfaceliéspardesliaisonscovalentes.Ceprocessusaboutitainsiàlaformationdescornéocytes(WickettandVisscher,2006).

28

La couche cornée est en permanente desquamation, mais ce phénomène estcontrebalancéparlaproliférationdecellulesbasales,l’ensemblemaintenantl’épaisseurdel’épidermeconstante.Celle-civariede12à55µmenfonctiondesrégionsducorps,cequireprésentelamoitiédel’épidermenucléésous-jacent.Lacornéogenèse,outempsderenouvellementcellulairedel’épiderme,estévaluéà17jours(Barkeretal.,1988).

Le cytoplasme des cornéocytes est composé de filaments intermédiaires dekératines,agrégésentreeuxàleurpériphérieparlafilaggrineetorientésparallèlementàlasurfacedelapeau.Lescornéocytespossèdentunestructurehautementdifférentiée,l’enveloppe cornée, qui assure un rôle de protection. Elle est composée de protéinesfortement réticulées, notamment la loricrine, l’involucrine et la filaggrine. Lescornéocytes ne possèdent, donc, pas de véritable membrane cellulaire, en particuliersansphospholipides. Les espaces intercornéocytaires sont comblés par une matrice lipidique àstructure lamellaire. Les lipides lamellaires proviennent des corps lamellaires de lacouche granuleuse. Ces lamelles sont organisées en couches hydrophiles ethydrophobes. La structure de l’épiderme est, souvent, comparée à celle d’un mur debriques(cornéocytes)etdemortier(lipides). Deuxpartiespeuventêtredistinguéesdanslestratumcorneum(ScottandMiller2011):

- le stratumcompactum,en profondeur, composé de cellules cohésives, grâceauxcornéodesmosomes.

- le stratum disjunctum, en surface, composé de cornéocytes en cours dedesquamation, où les cornéodesmosomes subissent une dégradation lentepermettantl’exfoliation.

5. Lefilmhydrolipidiquesuperficiel

Le film hydrolipidique est une émulsion de sébum, sueur et lipides

intercellulaires; la phase lipidique étant composée du sébum sécrété par les glandessébacéesetleslipidesintercellulairesetlaphaseaqueuseayantpouroriginelasueuretl’eau provenant de la perte insensible en eau (Humbert, 2003). Les lipides du sébumsont constitués de cires, de triglycérides, d’acides gras, de squalènes et, en faiblequantité,decholestéroletd’estersdecholestérol.Lesébumjoueunrôleimportantsurle pouvoir mouillant de la surface cutanée et intervient dans les phénomènesd’étalement etd’adhésivitédes substancesen contact avec lapeau.Lapeauétantunesurfacehydrophobe,lesébumtendàlarendreplushydrophile(Humbert,2003).

29

C. Lajonctiondermo-épidermique

La jonctiondermo-épidermiquepermetd’assurer la cohésionentre ledermeetl’épiderme. Elle comprend le pôle basal des kératinocytes de la couche basale, lamembranebasaleépidermiqueetlazonesous-basaledudermesuperficiel.

Cettejonctionintervientdansl’adhésiondermo-épidermique,latransmissionde

signaux moléculaires, le maintien d’un épiderme fonctionnel, la conservation del’architecturetissulaireetlesinteractionsderme-épiderme(ScottandMiller,2011).

D. Lederme

Ledermeestuntissuconjonctifdesoutien,dense,richeencollagènes.Ilsupportestructurellementetnutritionnellementl’épiderme.Ilcontientlesvaisseauxsanguinsetlymphatiques,lesnerfs,lesmusclesérecteursdespoilsainsiquedesstructuresannexestellesquelesfolliculespileux,lesglandessébacéesetlesglandessudoriparesapocrines(ScottandMiller,2011).

E. L’hypoderme

L’hypodermeestlacouchelaplusprofondeet,généralement,laplusépaissedelapeau.Iln’estcependantpastoujoursprésent(lèvre,joue,paupière,anus)et,danscecas,ledermeestencontactdirectaveclesmusclesetlesfascias.

L’hypoderme est composé d’adipocytes regroupés en lobules séparés par destravées conjonctives en continuité avec lederme. Il est composé à90%, enmasse, detriglycérides. Ses principales fonctions sont la réserve d’énergie, un rôle dans lathermogenèseetl’isolation,ainsiquedanslaprotectionetlesoutien(ScottandMiller,2011).

30

II. Fonctionbarrièrecutanée

A. Définitionetfonctiondelabarrièrecutanée

La barrière cutanée protège directement l’organisme contre les facteursextérieurs:physiques(traumatismesmécaniques,thermiques,etrayonsUV),chimiques(tensioactifs,xénobiotiques,allergènes)etbiologiques(bactéries,virus…).Lapeaun’estpas simplement une enveloppe inerte mais elle accomplit d’importantes fonctions:défensive,thermorégulation,excrétoire,résorptive,métaboliteetsensorielle.Deplus,lapeau, en tant que barrière défensive, assure l’homéostasie cutanée en prévenant lespertesd’eaupassives,d’ionsetdeprotéinessériques(WickettandVisscher,2006).

Leconceptdebarrièrecutanéeestenperpétuelleévolution.Selon ladéfinition,

unebarrièreestunobjetséparantdeuxespacesdistinctsquiprévientlepassageentredeux environnements (fig 3) (Darlenski et al., 2011). La notion de barrière cutanéerépondbienàcettedéfinitionpuisqu’elleassure l’intégritéducorpset le contrôledeséchanges avec l’environnement. On considère actuellement que 90% de la fonctionbarrière cutanée réside dans l’épiderme et, plus particulièrement, dans le stratumcorneum.

Figure3:Structureschématiquedelabarrièrecutanée(Darlenskietal.,2011)

31

B.Lescomposantsdelabarrièreépidermique1. Lestratumcorneum

Eliasaproposélemodèlede«briquesetmortier»,danslequellacouchecornée

estcomposéedecellulesaplaties(briques)entouréesd’unematricelipidique(mortier)(Elias,1983).

Larésistancemécaniquedelabarrièrecutanéeestconféréeparlescornéocytes,eux-mêmesincorporésdansuneenveloppecornée.Dufaitdesacompositionlipidique,lamatrice extracellulaire confère un caractère hydrophobe à la couche cornée, ce quireprésente labarrièreprincipaledesmouvements transcutanésd’eauetd’électrolytes(Feingold,2008).

a. Lescornéocytes:unebarrièremécanique

i. Lacellule

La couche cornée est composéed’éléments aplatis et anucléés, les cornéocytes.Ceux-cisontgorgésd’unematricefilamenteusedense,denatureprotéique,forméepardesfilamentsdekératineagrégésparlafilaggrine.Ensemble,lakératineetlafilaggrineconstituent près de 80 à 90% de la masse protéique de l’épiderme des mammifères(Prokschetal.,2008).

Les kératines forment les filaments intermédiaires du cytosquelette des

cornéocytes.Lesprincipaleskératinesexpriméesdanslescouchessuprabasalessontleskératines1,2fet10,représentant80%dupoidsducornéocyte(Darlenskietal.,2011)Leskératines1et10,participantaucytosquelette,sontliéesàladesmogléine1etàladesmocolline 1 des desmosomes par l’intermédiaire des protéines de la plaquedesmosale – des plakoglobines et des desmoplakines, notamment. Les kératinesinteragissentaussiaveclesprotéinesdel’enveloppecornée,cequicontribuedavantageàlastabilitédelabarrièrecutanée. La filaggrine appartient à la famille des protéines S100 liant le Ca2+. Latransformation enzymatique de la profilaggrine, contenue dans les grains dekératohyaline du stratum granulosum, mène à la formation de deux produits: lafilaggrine et le peptide N-terminal. La filaggrine permet l’agrégation des filaments dekératine en macro fibrilles, localisées dans la partie basse de la couche cornée. Ellepossèdeunrôleimportantdanslemaintiendel’hydratationdecettecouche.Eneffet,ens’approchantdelasurfacedelapeau,lafilaggrineestdégradéeenacidesaminéeslibres,composantsdebased’uncomplexetrèshygroscopique,lefacteurnatureld’hydratationouNMF(NaturalMoisturizingfactor)(Darlenskietal.,2011).LeNMFestaussiconstitué

32

de lactates,d’acidepyrrolidonecarboxylique(dérivantd’unacideaminé, laglutamine)etd’acideurocanique.

Une petite partie de la filaggrine se lie à la loricrine pour former l’enveloppecornéedescornéocytes.

Le peptideN-terminal est, lui, impliqué dans la régulation de la différenciationcellulairedescornéocytes.

ii. L’enveloppecornée

L’enveloppecornéeestconstituéed’uneenveloppeprotéiqueetd’uneenveloppe

lipidique.Ellereprésente7%delamassesèchedustratumcorneum.Cetteenveloppeestinsolubleettrèsrésistanteauxenzymesprotéolytiques(Kalininetal.,2002).

v L’enveloppeprotéique

Elleestcomposéededifférentesprotéinesstructuralestellesquel’involucrine,laloricrineetdepetitesprotéinesrichesenproline.

L’involucrineestlapremièreprotéinestructuraleàavoirétéidentifiée.Elleaun

rôle important dans la liaison des céramides formant l’enveloppe lipidiquecornéocytaire.L’involucrineestexpriméedanslescouchessupra-basales.

Laloricrineestlaprincipalecomposanteprotéiquedel’enveloppecornée(70%

enmasse)(Darlenskietal.,2011).L’envoplakineet lapériplakine fontpartiede la familledesplakines.Cesprotéines

s’associentauxfilamentsintermédiaires,auxmicrotubulesetaucytosqueletted’actine.L’expressiondel’envoplakineestrestreinteetlimitéeauxcellulesépithélialesenfindedifférenciationcellulairealorsquelapériplakineestpluslargementexprimée.Cesdeuxcellules sont recrutées en périphérie des cellules pendant les stades précocesd’assemblagedel’enveloppecornéedanslescellulesépithéliales(Kalininetal.,2002).

L’ensembledecesprotéinesestorganiséenunréseauordonnétapissantlaface

interne de la cellule grâce à la mise en place de liaisons covalentes par destransglutaminases.Lasurfaceinternedel’enveloppeprotéiqueestliéeauxfilamentsdekératinequiremplissentlecytoplasmedescornéocytes(Madison,2003).

v L’enveloppelipidiquecornéocytaire

L’enveloppe lipidique cornéocytaire est formée d’une couche d’w-hydroxycéramides, liés de manière covalente à l’enveloppe protéique (Kalinin et al.,2002).Lescéramidessontsynthétisésetstockésdanslescorpslamellaires.Al’interfacestratumgranulosum/stratumcorneum,lecontenudescorpslamellairesestdéversédansl’espace interkératinocytaire. Les w-hydroxycéramides s’insèrent alors dans la

33

membrane plasmique des kératinocytes et remplacent les phospholipides.Parallèlement, les céramides se lient de manière covalente à la surface externe del’enveloppeprotéique.L’involucrine,l’envoplakineetlapériplakinesontalorsliéesparl’intermédiairederésidusglutamineayantsubisunetrans-estérificationaveclesesterslinoléiques des céramides. Les céramides, ainsi liés, interviennent dans la formationordonnéedeslamelleslipidiquesintercellulaires(Kalininetal.,2002).

v Assemblagedel’enveloppecornée

L’assemblage de l’enveloppe cornée est un processus finement régulé etdéclenché par une augmentation de la concentration intracellulaire en ions calciumcoïncidant avec les signaux initiant la différenciation terminale dans les épithéliumsstratifiéssquameux.

L’assemblagealieuentroisétapes(fig4). La première étape, correspondant au stade terminal de différenciation deskératinocytes, s’accompagne de l’expression d’envoplakine et de periplakine quis’associentaveclesfilamentsintermédiairesdekératinesetlesdesmosomes.Commelaconcentration en ions calcium augmente, l’envoplakine et la periplakine forment deshétérotétramèresqui s’associent à lamembraneplasmique. Cet auto-assemblagepeutêtrefacilitéparlaprésenced’annexinesetd’autresprotéinesdeliaisondépendantesducalcium sur lesmembranes. L’expression de la transglutaminase 1 et de l’involucrinedébutepeuaprèsetelless’associentspontanémentaveclamembrane.Laconcentrationenionscalciumcontinuantd’augmenter,desliaisonspeptidiquesseformentauseindeschaines d’involucrine, ainsi que des liaisons interpeptidiques entre l’envoplakine etl’involucrine. Une couche constituée d’involucrine et d’envoplakine commence à seformer et à récouvrir l’ensemble de la surface interne de la membrane plasmiqueformantunesorted’échaffaudage. La deuxième étape, qui peut être concomitante de la première, consiste en lafusion des corps lamellaires avec la membrane plasmique. Cela va permettre lerelargage des céramides et leur incorporation au sein de la membrane. Lesphospholipides de la membrane plasmique sont ainsi remplacés par les w-hydroxycéramides. La troisième et dernière étape est le renforcement de l’enveloppe cornée. Laloricrineetlespetitesprotéinesrichesenprolinevonts’accumuler,jusqu’àreprésenterprès de 80% du poids total de l’enveloppe cornée, et entrent dans la constitution del’échaffaudage(Kalininetal.,2002). Ainsi, l’enveloppecornée,composéede l’enveloppeprotéique liéeétroitementàl’enveloppelipidique,constitueuneinterfaceessentielleentrelemilieuhydrophiledescornéocytesetleslipidesextracellulairesnonpolaires.

34

Figure4:Modèledeformationdel’enveloppecornée(Kalininetal.,2002)

35

iii. Lescornéodesmosomes

Lescornéodesmosomessontconstituésdedifférentesprotéines: lescadhérinesdesmosomales,desmogléinesetdesmocollines,lesprotéinesdelaplaquedesmosaleetcornéodesmosine(protéineextracellulaire).Lacornéodesmosine,sécrétéeparlescorpslamellaires, se fixe aux protéines des desmosomes qui deviennent descornéodesmosomes.Ellejouedoncunrôlecentraldanslacohésiondelacouchecornée,maisaussiun rôledans leprocessusphysiologiquededesquamation (Darlenski et al.,2011).

b. Leslipidesintercellulaires

i. Composition

Les principaux lipides composant le stratum corneum sont (en masse): lescéramides (50%), le cholestérol et ses esters (25%), les acides gras libres (15%) etd’autrescomposéslipidiquesmineurs(Darlenskietal.,2011).

Les céramides forment une famille de lipides structurellement hétérogènescontenant des acides gras à longues chaînes, des W-hydroxy acides et une basesphingoïde (sphingosine, phytosphingosine…). Le céramide 1, céramide le moinspolaire de la couche cornée, joue un rôle capital dans l’organisation de la couchelipidique intercornéocytaire: une bicouche d’W-hydroxy céramides est liée par desliaisons covalentes aux protéines de l’enveloppe cornée, ce qui assure ainsil’homogénéitéetl’unitédustratumcorneum.

Le cholestérol, quant à lui, augmente la fluidité des lipides intercellulaires etcontribuedoncauxpropriétésélastiquesdelapeau(Prokschetal.,2008).

Lesébum,composantprincipaldufilmhydrolipidiquesuperficiel,participeaussi

àlaformationdelabarrièrecutanée.

ii. Organisationenlamelles

Lesprécurseursdestroisprincipalesclassesdelipidesdelacouchecornéesontdesphospholipides, des glucosylcéramides, la sphingomyéline et des stérols libres. Ilssont libérés à l’interface entre la couche cornée et la couche granuleusepar les corpslamellaires.

Les corps lamellaires sont des organites sécrétoires ovoïdes, délimités par unemembraneconsistantenunebicouchelipidique,etvisiblesuniquementenmicroscopieélectronique(fig5)(Darlenskietal.,2011). Ilssontélaborésdans leskératinocytesencoursdedifférenciationetsontstockésauniveaudelacouchegranuleuse. Ils formentdesstructurestubulo-vésiculairesde0,2x0,3µm.Leurmécanismeexactdeformation

36

n’estpasencorebienconnu.Ilssontissusdel’appareildeGolgi,enparticulierduréseautrans-golgien,oùilssontlibérésparbourgeonnement.

Figure5:Corpslamellaired’épidermedesourisobservéaumicroscopeélectronique(x300000)etschéma

d’interprétationparlemodèledeLandmann.Flèches:membranelimitanteducorpslamellaire(Madison,2003)

Les corps lamellaires ont un rôle clé dans la formation de lamatrice lipidique.

Ceux-cicontiennentdeslipidesorganisésenlamelles–oudisqueslamellaires-telsquedes phospholipides, du cholestérol et des glucosylcéramides, qui sont tous trois lesprécurseurs des lipides intercellulaires de la couche cornée. Sont aussi présentes, ausein des corps lamellaires, un grand nombre d’enzymes telles que la b-glucocérébrosidase, la sphingomyélinase acide et la phospholipaseA2 sécrétoires, deslipasesetdesprotéases(Madison,2003).Cesdernièresinterviennentdanslarégulationdeladestructiondescornéodesmosomesetdoncdanslephénomènededesquamation.

C’estaucoursdephénomènesd’exocytose,intervenantplustardivementdansleprocessusdedifférenciationépidermique,que lescorps lamellairesvontdéverser leurcontenu dans l’espace intercellulaire par fusion de leurmembrane avec lamembraneplasmique.Ceprocessusalieuauniveaudel’interfacedelacouchegranuleuseetdelacouchecornée.

Les corps lamellaires contiennent des enzymes importantes, comme leshydroxylases et les protéases, responsables de la synthèse des lipides de la couchecornéeainsiqueduprocessusphysiologiquededesquamation(Darlenskietal.,2011).

Une foisexcrétésdans lesespaces intercornéocytaires, lesprécurseurspolairessubissent une conversion biochimique par des enzymes libérées par les corpslamellaires. La b-glucocérébrosidase convertit les glucosylcéramides en céramides, lasphingomyélinaseacidemodifie lasphingomyélineencéramideset lesphospholipaseshydrolysent les phospholipides en acides gras libres et en glycérol (Feingold, 2008;

37

Feingold and Elias, 2014). Le glycérol, ainsi formé, permet de retenir l’eau dans lacouchecornée,jouantunrôledanslemaintiendesonhydratation.

Uneorganisationencoucheslipidiquessemetenplaceetdifférentsmodèlessont

actuellementproposés:en«sandwich»,en«mosaïque»,ouen«gel»(fig6).

Figure6:Organisationdeslamelleslipidiquesdansl’espaceintercellulairedelacouchecornéedel’épidermedesouris,observéenmicroscopieélectronique(x200000)(Madison,2003).Flèches:enveloppecornée,ICS:espace

intercellulaire,K:kératinesdelamatriceintracornéocytaire.

Beaucoupdefacteurs,telsqu’unchangementd’aciditédelasurfacedelapeauou

une perturbation mécanique de la barrière cutanée, influencent le processus deformationdes lipides(fig7). Inhiber l’activitésécrétoirede laphospholipaseaboutitàun défaut de structure de la couche lipidique intercellulaire et donc à un défautfonctionnelde labarrière cutanée. Lorsd’unealtérationexpérimentalede labarrièrecutanée, on observe une augmentation rapide de la synthèse de cholestérol del’épiderme, associée à un accroissement de l’activité de l’enzymeHMG-CoA-reductase(enzymeclédanslasynthèseducholestérol)(Darlenskietal.,2011).

Demême, lorsd’une rupturede labarrière cutanée, la synthèse et la sécrétiondes corps lamellaires sont rapidement stimulées permettant une réparation de labarrièrecutanée.Onestimeque70à90%descorpslamellairesstockésdanslacouchegranuleusesontalorslibérés(Feingold,2008).

38

Figure7:Voiedesynthèsedeslamelleslipidiquesintercellulairesdelacouchecornée(FeingoldandElias,2014)

2. Importancedel’épidermenucléé

Bienque lacouchecornéesoitreconnuecommeayant lerôle leplus important

dans la fonction barrière cutanée, l’épiderme nucléé sous-jacent intervient aussi. Ilprévientlespertesd’eauexcessivesetl’entréedesubstancesnociveslorsderupturedelacouchecornée.Unealtérationaiguëouchroniquedelabarrièrecutanéeengendreuneaugmentationde la synthèsed’ADNet une augmentationdu tauxdeproliférationdeskératinocytesayantpourconséquenceunehyperplasiedel’épiderme.

a. Lesjonctionsserrées

Lesjonctionsserréessontdesjonctionsquiconnectentlescellulesvoisinesentre

elles, contrôlent les flux moléculaires (fonction barrière) et séparent l’espaceintercellulairedupôleapicaletceluidupôlebasaldesmembranescellulaires(fonctiondecloisonnement)(Brandner,2007;Prokschetal.,2008).

UneétudemenéeparProkschetal.apermisdedémontrerlerôledesjonctionsserrées. Des souris porteuses d’une mutation de la claudine, une protéine impliquéedanslastructuredesjonctionsserrées,mourraient,danslespremiersjours,d’uneperted’eautransépidermiqueexcessive.

Lesjonctionsserréesontdoncunrôleessentielenprévenantlespertesd’eauviaun cloisonnement intercellulaire, établissant une barrière paracellulaire (Brandner,2007).

39

b. Lesjonctionsadhérentesetlesdesmosomes

Cesontdesjonctionsd’ancragequipermettentdefixerdeuxcellulesépithélialesvoisines entre elles, via la fixation des filaments intermédiaires de kératine sur lesdesmosomesetdesfilamentsd’actinesurlesjonctionsadhérentes,departetd’autredesjonctions.

Cesjonctionssontprincipalementconstituéesdeglycoprotéines,enparticulierladesmogléinepourlesdesmosomesetl’E-cadhérinepourlesjonctionsadhérentes.Unealtérationdecesstructuresconduitàunealtérationdelafonctionbarrièrecutanée(Prokschetal.,2008).

c. LesjonctionsGAP

LesjonctionsGAP,oujonctionscommunicantes,permettentlepassaged’ionsoude petites molécules entre les cellules et ont un rôle clé dans les mécanismes decommunication cellulaire. Elles sont composées de protéines transmembranaires,appeléesconnexines,quis’associentpourformerdesconnexons(Prokschetal.,2008).

B. Miseenplacedelabarrière

1. ProcessusdecornificationoukératinisationLa cornification correspond à la différenciation des kératinocytes des couches

inférieures vers les couches supérieures de l’épiderme. De nombreux changementsmorphologiquesetphysiologiquesontlieuetaboutissentàlaformationdecornéocytes.Quatreévénementssedistinguentaucoursduprocessusdecornification(fig8)(ScottandMiller,2011):

- La kératinisation au sens propre: synthèse des principaux composants ducytosquelette,àsavoirleskératinocytes.

- La synthèsedesgrainsdekératohyaline, contenant laprofilaggrine,précurseurde la filaggrine, dont le rôle est essentiel dans la formation de la matricecytoplasmique,fibreuseetdense,descornéocytes.

- La formation de l’enveloppe cornée, insoluble et résistante à la plupart desenzymesprotéolytiques.

- L’exocytose des corps d’Odland et la formation des lamelles lipidiquesextracellulaires,dontlerôleestdecomblerl’espaceintercornéocytaire.

La balance est finement régulée entre la croissance et la différenciation des

kératinocytes.Lorsd’unealtérationdelabarrièrecutanée,laproliférationestactivéeetdoit retourner au stade d’homéostasie avec le phénomène de régénération. Lerenouvellementcompletdel’épidermedureenmoyenne17jourschezlecheval(ScottandMiller,2011).

40

Figure8:Différenciationdeskératinocytes(Fardouet,2011)

41

2. Processusdedesquamation

L’épidermeayantuneépaisseurconstante,leprocessusdedesquamationvientcontrebalancerlamultiplicationdeskératinocytesbasaux.

3. Acteursdelarégulation

a. Lescytokines

La couche cornée contient des cytokines pro-inflammatoires préformées (TNF,IL-1, IL-6) qui interviennent dans le signalement de la restauration de la barrièrecutanée.Uneadministrationdecytokinesàdesanimaux,aprèsaltérationdelabarrièrecutanée, accélère la réparation, certainement en stimulant la synthèse de lipidesépidermiqueset la formationdecorps lamellaires.Demême,unefaiblehumiditédansl’environnementengendreunrelargagedesmédiateurspro inflammatoires (Darlenskietal.,2011).

b. Lecalcium

Le calcium est essentiel pour le fonctionnement physiologique des barrièresbiologiques. La distribution du calcium dans l’épiderme est hétérogène. Laconcentrationencalciumestfaibledanslescouchesbasaleetépineuse,etatteintunpicdans lacouchegranuleuse,pourrediminuerdans lacouchecornée(fig9)(Feingoldetal.,2007).Legradientcalciquejoueunrôlecapitaldansleprocessusderéparationdelabarrièrecutanéeaprèsunealtération.Unerupture, aiguëouchronique,de labarrièrecutanéeentraîneunesortied’eauàtraverslacouchecornéeléséeetdoncunesortiedecalciumverslasurface.Celaprovoqueuneréductiondelaconcentrationcalciquedanslacouchegranuleuse,stimulantlasécrétiondecorpslamellairespréformésàl’interfacecouche granuleuse/couche cornée et donc les processus de récupération (Feingold,2008).Cetteréponseprécoceestsuivieparlastimulationdelasynthèsedelipidesdansl’épiderme sous-jacent, la production et la sécrétion de corps lamellaires ainsi quel’organisationdes lipides, produits et sécrétés, enmembranes lamellaires (Elias et al.,2002).Touscesphénomènesmènentà larestaurationdelabarrièrecutanée,partielleen6heures,totaleen12à24heures(Eliasetal.,2002).

42

Figure9:Modificationdugradientcalciquedansl’épidermelorsd’unealtérationdelafonctionbarrière(Prokschetal.,

2008)

En revanche, la récupérationde la fonctionbarrièreest inhibéedansunmilieu

riche en calcium. On constate, en effet, que lors d’un apport exogène de calcium, lasécrétiondescorpslamellairesn’apaslieuetlaréparationdelabarrièrehydriquenonplus(Feingold,2008).

Le calcium intervient aussi en tant que régulateur de la différenciation des

kératinocytes(fig10).Lesprotéinesrequises(involucrine,loricrine,filaggrine,kératine)sont régulées, invitro et invivo, par un changement de la concentration calcique, auniveautranscriptionnelet,danscertainscas,post-transcriptionnel(Eliasetal.,2002).

Figure10:Implicationsphysiopathologiquesdugradientcalcique(Eliasetal.,2002)

De plus, le calcium est essentiel pour la différenciation cellulaire et le

développementdesliaisonsintercellulairesauseinduderme(Darlenskietal.,2011).

43

c. La3’,5’adénosinemonophosphatecyclique(AMPc)

Lerôledel’AMPcaétémisenévidenceparDendaetal.en2004.Dansunpremiertemps, la barrière cutanée est altérée par tape-stripping ou dissolution des lipides àl’acétone.Descomposéssontensuiteappliqués,quisoitvontactiverlasynthèsed’AMPc,soit l’inhiber. En cas d’application d’agoniste de la synthèse de l’AMPc, un retard derécupération de la barrière cutanée est mis en évidence et on peut observer, aumicroscopeélectronique,unediminutiondesécrétiondescorpslamellaires.Al’inverse,en cas d’administration d’antagoniste de la synthèse d’AMPc, une accélération de laréparation de la barrière cutanée est observée et, en microscopie électronique, unesynthèseaccruedecorpslamellairesestconstatée(Dendaetal.,2004).

En cas d’altération de la couche cornée, une augmentation du taux d’AMPc

intracellulaireestmiseenévidence.Desmécanismesinhibantl’AMPcsontalorsmisenplaceparl’organisme.Lemoded’actiondel’AMPcestaussidécritdansl’étudedeDendaetal.L’augmentationd’AMPcintracellulaireengendreuneactivationdescanauxcalciumvoltage-dépendants, ce qui implique un influx de calciumdans les kératinocytes dansl’épiderme. Cette augmentation de calcium, comme vu précédemment, inhibe lasécrétiondescorps lamellaireset laréparationde labarrièrecutanéeestretardée.Unblocage de ces canaux voltage-dépendants permettra une récupération rapide de labarrière(Dendaetal.,2004;Feingold,2008).

d. LepH

LepHjoueunrôleclédanslemaintiendelafonctionbarrière.LepHsélectionnelapopulationbactérienneàlasurfacedelapeauetpermetlemaintiend’unmicrobiotephysiologique.

Une acidification de la couche cornée est capitale pour la formation d’une

barrière cutanée intacte.UnpHneutreest la caused’une récupération retardéeaprèsune altération. En effet, les bactéries Gram – disparaissent plus lentement en milieualcalinqu’enmilieuacide.UnpHalcalinest,d’autrepart, favorableaudéveloppement,en surface, d’agents pathogènes tels que Staphylococcus aureus et Candida albicans(MatousekandCampbell,2002).Demême,unpHoptimalde5estessentielpourl’activitédelab-glucocérébrosidaseetdelasphyngomyélinaseacide(Feingold,2008). LepHintervientaussidanslesprocessusdecornificationetdedesquamation.Lephénomènen’estpasencorebiendécritmaisonpensequelegradient depHentre lapartiesupérieuredestratumgranulosumetlestratumcorneumapourrôledecontrôlerlesenzymesimpliquéesdanscesprocessus(MatousekandCampbell,2002).

44

e. Autresfacteurs

Desétudesrécentesontétudiélerôledurécepteur2protéine-activé(PAR2)dansl’homéostasie. A la suite d’une altération de la barrière cutanée, le pH du stratumcorneum augmente, ce qui entraîne une stimulation de l’activité de la sérine protéasedans le stratum corneum et l’épiderme supérieur. Le PAR2 est alors activé par destrypsine-likesérineprotéaseset inhibe la sécrétiondecorps lamellaires.Eneffet, lorsd’applicationd’agonisteduPAR2,suiteàunealtérationaiguëdelabarrièrecutanée,lasécrétiondescorps lamellairesest inhibée, retardant lesphénomènesderécupération(Demerjianetal.,2008;Feingoldetal.,2007;Hachemetal.,2006).

Ikeyma(Feingoldetal.,2007)aétudiélerôledumonoxyded’azote(NO)entantque signal de restauration de la barrière cutanée. A la suite d’une altération, laconcentration en NO augmente. Cette augmentation est bloquée par un inhibiteurneuronaldelaNOsynthase(nNOs).Celasuggèrequel’altérationdelabarrièrecutanéestimule ainsi l’activité de la NO synthase. Inversement, l’application d’un topiquecontenant du monoxyde d’azote retarde la récupération de la barrière. Enfin, cettedernière est accélérée chez des souris déficientes en NO synthase. L’ensemble de cesdonnées indique que le NO produit par les NO synthases est un signal négatif derestaurationdelabarrièrecutanée.III. Altérationdelabarrièrecutanée

A. Altérationexpérimentaledelabarrièrecutanée

1. Procédédutape-stripping

Letape-strippingest laméthodederéférencepourétudier lapénétrationet les

effetsdel’applicationdetopiquesoudesubstancesexogènessurlapeau,laphysiologiede la couche cornée, la réparationde l’altérationépidermiqueainsi que l’excrétiondesubstancesexogènes.

v FacteursdevariationsLa quantité de stratum corneum enlevée par un strip dépend de plusieurs

facteurs,intrinsèquesetextrinsèques.Latailledescornéocytesestinfluencéeparlocalisationdusiteanatomique,l’âge

etlesexedel’individu,lasaison,lemomentdelajournée...(Breternitzetal.,2007).Deplus, le nombre de couches épidermiques et de cornéocytes, l’épaisseur du stratumcorneum,lacompositionetlaquantitédelipidesvarientenfonctiondusiteanatomique(Lademannetal.,2009).

45

D’autresfacteursextrinsèquespeuventmodifierlaquantitédestratumcorneumretiréepartape-stripping:letypedescotchutilisé,lapressionappliquéesurlescotchetsurlapeauainsiquesontempsd’applicationetsaforcederetrait. Lasaisonestunfacteurnonnégligeableàprendreencompte(Tokumuraetal.,2005).L’été,lescornéocytessontplushydratésetdoncplusfacilesàenleverparstrips.Demême le stratumcorneum est plus épais en été qu’en hiver. Ainsi, pour unmêmenombre de strips, même si la quantité de cornéocytes retirés est plus importante,l’augmentation de la perte insensible en eau est minime. Enfin les valeurs du tauxd’hydratationsontfausséesparlasudationLesexplicationsquantàlaperteinsensibleeneauetautauxd’hydratationserontexposéesdansleparagrapheIVdecettepartie.

v Pré-requisetétapes:

Le site d’application du scotch doit être préalablement défini, à l’aide d’un

marqueur, par exemple. Pour travailler dans les conditions les plus favorables, il estconseillé de tondre la zone et de ne surtout pas laver la zone, au risque d’enlever lacouche superficielle du stratum corneum. Le scotch est ensuite appliqué avec unepressionuniformesurlapeau.Lescotchutilisédoitavoirunecompositionetunedistributionuniforme.

La vitesse de retrait est un autre facteur important. Celle-ci n’est passtandardisée,maisonestimequelorsd’unretraitlentduscotch,laquantitédestratumcorneumretiréeestplusimportantequelorsd’unretraitrapide.Le biais engendré par l’opérateur est donc multifactoriel, d’où la nécessité d’unestandardisationdesopérations(Loffleretal.,2004).

v MéthodesdequantificationA l’histologie, lepremier scotch retiré contientprincipalementdescornéocytes.

Avecl’augmentationdunombredestrips,lescornéocytesetlesagrégatscornéocytairesdeviennentdemoinsenmoinsnombreux(Bashiretal.,2001).

Différentesméthodes permettent de quantifier la quantité de stratumcorneum

retiréeaucoursdesstrips:peséedustratumcorneum,évaluationdelateneurprotéiquedu stratum corneum, spectroscopie optique, microscopie… Mais la technique deréférence reste la mesure de la perte insensible en eau (PIE). La diminution del’épaisseur de la couche cornée engendréepar le tape-stripping est corrélée avec uneaugmentation de la PIE. Une mesure préalable de la PIE est nécessaire avant decommencer les mesures pour pouvoir suivre l’évolution en fonction du nombre destrips.Unecorrélationentre1/PIEetlamassecumulativedestratumcorneumretiréeaétémiseenévidence(Lademannetal.,2009)etcelle-ciestbaséesurla loideFick,enconsidérantlestratumcorneumcommeunemembranehomogène.Ilest,ainsi,possible

46

decalculerlaquantitédecouchecornéeretirée,aprèsavoirmesurélaperteinsensibleeneau.

2. Conséquencesd’unerupturedelabarrièrecutanée

L’altérationde labarrièrecutanéestimuleuneréponsevisantàsarestauration(fig11).

La première étape de ce processus consiste en une sécrétion rapide des corpslamellairespréformésauseindelacouchegranuleusesupérieure(Feingoldetal.,2007).

Ensuite, une augmentation des taux d’ARNm et de l’activité d’enzymes clés (3-hydroxy-3-méthyl-glutaryl-coenzymeA reductase, squalene synthase, acétyl-coenzymeA carboxylase, acide gras synthase et sérine palmitoyl transférase) aboutissent à uneaugmentationmarquéedelasynthèsedecholestérolépidermique,d’acidegraslibresetde céramides. Cette augmentation de la synthèse lipidique apporte les lipides clés(cholestérol, phospolipides et glucosylcéramides) nécessaires à la formation accéléréede nouveaux corps lamellaires, générant alors les précurseurs des membraneslamellairesdustratumcorneumessentiellesàlafonctionbarrière(Feingoldetal.,2007).

Un point clé demeure toujours inconnu: comment le stratum corneum altéré

signale à l’épiderme sous-jacent vivant d’initier la réponse métabolique visant àrestaurer l’homéostasie de la barrière cutanée. L’ensemble des signaux positifs etnégatifs,constituéspaslesacteurslarégulation(cytokines,calcium,AMPc,pH),régulelaréponse métabolique aboutissant à la récupération de la barrière cutanée après unealtérationaiguë.

Figure11:Restaurationdelarécupérationdelabarrièrecutanée(KennethR.Feingold,Schmuth,andElias2007)

47

B. Altérationpathologiquedelabarrièrecutanéeeteffetsdeshydratants

1. Lesdermatoses

Lespyodermitesduchevalsontunedescausesmajeuresdelésiondelapeaudu

cheval. Elles sont fréquentes, mais souvent sous-diagnostiquées, et peuvent rendrel’animalinapteautravail.Lesbactérieslesplussouventencausesont:

- Staphylococcusaureus,S.pseudintermedius,S.hyicus,- Dematophiluscongolensis,- Corynebacteriumpseudotuberculosis.

Lesformescliniqueslesplusfréquentessontlafolliculiteàstaphylocoquessuiviedeladermatophilose(Pin,2015).

Les folliculites bactériennes sont des pyodermites superficielles. Elles sont

généralement secondaires à des altérations de la fonction barrière de la peau:microtraumatismes,irritationscutanées(surtoutauniveaudupassagedesangleetdelarégion de la selle),mauvais pansage des chevaux (accumulation de la sueur)… Cetteaffection se localise préférentiellement au niveau du tronc (encolure, dos, croupe,garrot),enparticulierlepassagedesangleet,lazonedelaselle,et,parfois,lepaturon.

Les folliculitesbactériennessont,majoritairement,duesàdesStaphylocoquesàcoagulase positive: Staphylococcus aureus, S. pseudintermedius, S. hyicus. Au niveauclinique, la folliculite à Staphylocoques se traduit de petites papules folliculaires,douloureuses, se traduisant par de petites touffes de poils, collées en pinceau etsurélevées. Les papules sont rapidement surmontées d’une pustule qui se romptfacilementdonnantdescroûtesetdescollerettesépidermiques.Lachutedespoilsestàl’origine de dépilations enmouchetures qui donnent au pelage un aspect «mité» (fig12). Les lésions sont plus douloureuses que vraiment prurigineuses (Bensignor et al.,2012).Si l’infections’aggrave,onpeutalorsobserverunefuronculosecaractériséepardespustuleshémorragiquesetdescroûtesrecouvrantdesulcères.Letraitementassocietonteetantibactérien.Onutiliserauntraitementtopiqueavecunshampoing antiseptique régulier suivi d’un réhydratant. On peut aussi associer untraitementsystémiquemaiscelui-ciestsouventpeujustifié.

Figure12:Chevalatteintd'unefolliculitebactérienne(Pin,2015)

48

LadermatophiloseestfréquentechezleséquidésetestdueaudéveloppementdeDermatophilus congolensis. Il s’agit d’un coccobacille mobile présent dansl’environnement,surtoutenmilieuhumide.Ledéveloppementdelabactérieestfavorisépar des microtraumatismes cutanés (arthropodes piqueurs et végétaux vulnérants),l’humiditéetlemanqued’entretiendeschevaux.Certainschevauxpeuventêtreporteursou asymptomatiques et contaminer le reste du troupeau. Elle touche souvent leschevauxaupré,soumisauxintempéries.

Ladermatophilose semanifeste, généralement, sur lapartiedorsaleducheval:dos,croupe,garrot,encolure…-zonesencontactdirectaveclapluie–parfoislepaturon(fig13).Leslésionsinitialessontdespapules,croûteuses,nonfolliculaires,surmontéesde poils hérissés en pinceau, plus ou moins rondes. Par extension, des lésionsnummulaires se forment avec une croûte emprisonnant les poils et recouvrant uneérosion contenant du pus. Comme pour les folliculites bactériennes, les lésions sontsouvent douloureuses et plus rarement prurigineuses. Le traitement consisteessentiellementenuneaméliorationdesconditionsdevieducheval.Onpeutajouteruntraitementtopiqueantibactérien,voiresystémique,sileslésionssontétenduesous’ilyadessignesgénéraux.

Figure13:Chevauxatteintsdedermatophilose(Pin,2015)

Les affections cutanées allergiques sont des affections primitivementprurigineuses. La dermatite estivale récidivante, la plus fréquente, est une dermatoseprurigineuse, saisonnière estivale, intéressant plutôt la ligne supérieure du corps. Lapathogénie fait intervenirdes réactionsd’hypersensibilitéde type IV, àdesallergènessalivairesdeCulicoïdes,principalement.Leslésionsprimitivessontdel’érythèmeetdespapules non folliculaires excoriées. Ces lésions laissent place à des squames, de lalichénification,descroûtes,desérosionsetdesulcères,associésàdesdépilationsavecépaississement cutané et formation de plis (fig 14). Une pyodermite bactériennesecondaireest fréquente.Le traitementreposesur laprotectionde l’animalcontre lespiqûres et le contrôle de la population d’insectes; ainsi que la mise en place d’untraitement anti-inflammatoire et antiprurigineux, symptomatique, topique avecl’application de shampooings doux ou de lotions réhydratantes. Un traitementsystémiquepeutêtreenvisagé.

49

Les affections décrites ici sont donc les principales dermatoses chez le cheval,dont un traitement topique avec un réhydratant cutané peut être envisagé. Lesdermatoses infectieuses virales et fongiques, les dermatoses génétiques ounéoplasiques, peuvent bénéficier de l’applicationd’un réhydratant cutané, en fonctiondescas.

2. Lesréhydratantscutanés

a. Différentstypesderéhydratantsoud’émollientscutanés

Letermederéhydratantcutanéimpliquequelasubstanceajouteouretiennede

l’eauauniveaudelacouchecornée.L’émollient,lipidique,retientl’eaudel’épidermeenempêchant son évaporation. Ces produits se présentent sous différentes formes:pommade,crème,lotion,huile,gel(Lodén,2005).Ilenexistedifférentstypesclassésenfonctiondeleurmoded’action:

- Les émollients: ce sont, le plus souvent, des lipides et des huiles(cholestérol, squalène, acides grascomme l’acide laurique, l’acidestéarique,l’acidelinoléique,alcoolsgras,pseudocéramides).Leseffetsdesémollientssurlespropriétésdelacouchecornéenesontpasencorebiendécrits(Lodén,2005).Ilssontappliquésàlasurfacedelapeauetjouentlerôledeslipidescutanésquel’onretrouvephysiologiquementàlasurfacedelapeau.Ilssontincorporésdansdesliposomesetpermettentderendrelapeauplusdouceetplus lisse(Sethietal.,2016). Deplus, lesqualane,forme saturée du squalène, lui-même naturellement produit dans lesébumcutané,possèdedespropriétésantibactériennes.L’actiondesémollientsestmaximaleauboutde30minutes–1heureetdurejusqu’à4heures.

- Leshumectants:cesontdesmoléculesde faiblespoidsmoléculairesquipossèdentuneforteaffinitépourl’eau,tellesqueleglycérol,lepropylèneglycol, le panthénol, l’urée, le sorbitol, les acides a-hydroxyl (acidelactique,acideglycolique),l’acidehyaluronique(Lodén,2005).Lesacides

Figure14:Chevalatteintdedermatiteestivalerécidivante(Pin,2015)

50

a-hydroxyl et l’urée font partie des Natural Moisturizing Factor. Leshumectantsattirent l’eauvers l’épidermeviadeux sources: lederme, etl’environnement (en conditions humides) (Sethi et al., 2016). Beaucoupd’humectantsontaussidespropriétésémollientes.Le glycérol est l’humectant le plus fréquemment utilisé. Il joue un rôleimportant dans l’hydratation et l’élasticité cutanée ainsi que dans lesmécanismes de réparation de la couche cornée (Fluhr et al., 2008). Onsupposequeleglycérolamélioreladesquamationenfacilitantladigestiondes desmosomes superficiels chez les sujets atteints de sécheressecutanée(Lodén,2005).Eneffet,enactivantlestransaminases,ilmodulelacomposition lipidiquede lacouchecornée.Leglycérolpossèdeaussidespropriétésanti-irritantesetantimicrobiennes.Lesacidesa-hydroxylsontquantàeuxaussipréconisésencasdexérose.L’acide lactique stimule la synthèse de céramides dans le stratumcorneum, renforce labarrière lipidiqueetdiminue la sécheresse cutanée(Sethietal.,2016).

- Lesocclusifs:cesontdeshuilesetdesciresquiconstituentunebarrièrehydrophobe à la surface de la peau, bloquant, physiquement, la perteinsensibleeneauàtraversl’épiderme.Leprincipedesocclusifsestl’ajoutd’unebarrièreexogène,parl’applicationd’unecrème,formantunfilmàlasurface de la peau. Lesmolécules principales sont la vaseline, l’huile decired’abeilles,lesilicone,lalanoline,l’oxydedezinc.

- Les régénérateurs protéiques: ce sont des protéines de faibles poidsmoléculairesquifavorisentlarégénérationcutanéeenapprovisionnantlapeauenprotéinesessentielles (collagène,élastine,kératine) (Sethietal.,2016).

Les réhydratants et émollients, de par leur composition, ont une action

hydratante enmaintenantuneperte insensible en eau correcte. Ils peuvent avoir uneactionanti-inflammatoireen inhibant laproductiondesubstancespro-inflammatoires.Certainspossèdentuneactionantimicrobienne.Certainsémollientsinhibentl’actiondecytokines,cequileurconfèreunrôleantiprurigineux(Sethietal.,2016).

D’autres composants telles que des substances naturelles peuvent être utilisés

dans les formulations. Par exemple, l’Aloe vera (Aloebarbadensis) est utilisé pour sespropriétés anti-inflammatoire, antibactérienne et vasodilatatrice; l’allantoïne (extraitede la Symphytum officinale) en tant qu’agent kératinolytique; ou encore lesbiflavonoïdes pour leur action anti-oxydante (Lodén, 2005; Sethi et al., 2016). Desconservateurs (phénoxyéthanol, parabens, pentylène glycol…) permettent d’inhiber lacroissanceoudetuer lesmicro-organismes.Desantioxydants(vitamineE),desagentschélateurs (acide citrique, acide lactique), des vitamines (A, C, E), des parfums et des

51

agents colorants, des agents émulsifiants et des écrans solaires peuvent égalemententrerdanslacompositiondesréhydratantscutanés.

Toutefois, les réhydratants cutanéspeuventavoirdeseffets secondairesetêtre

responsables d’irritations cutanées et de réactions allergiques. L’urée, le propylèneglycol, la glycérine, l’acide lactique, utilisés régulièrement dans les formulations desréhydratantscutanés, sontaussidesagentsexfoliantscar ilsactivent ladesquamation(Sethietal.,2016).

b. Hydratationdelapeaueteffetssurlafonctionbarrière

L’eau est indispensable pour le fonctionnement physiologique d’un organisme

vivant. De l’intégritéde la couche cornéedépendent lespertes insensibles eneau.Larétention d’eau assure la souplesse et l’élasticité de la peau. La microspectrométrieconfocaleRaman invivoapermisdedéterminer legradienthydriquecutané,avecuneaugmentationprogressive,de15à25%d’eaudans lacouchecornéeàenviron40%àl’interfacecouchecornée/couchegranuleuse.Cetauxaugmenteà70%danslescouchesplusprofondesdel’épiderme(Darlenskietal.,2009).Lafigure15metenévidenceunecourbetypiquedutauxd’hydratationdansl’épidermechezunhommeenbonnesanté.

Figure15:Gradientdutauxd’hydratationdel’épidermeenfonctiondelaprofondeurchezunhommeenbonnesanté

(Darlenskietal.,2009)

Denombreuxprocessusphysiologiquesdépendentdirectementdel’hydratation

de l’épiderme, tels que la desquamation des cornéocytes à la surface cutanée. Lacornéodesmolyseestréguléepardesenzymes, lesglycosidasesetlessérine-protéases,dontlefonctionnementrequiertlaprésenced’eaudanslacouchecornée.

52

Ladégradationdelafilaggrinedépendaussidel’hydratationdelacouchecornée.Un taux d’hydratation faible active, en effet, la dégradation de la filaggrine en acidesaminés libres et dérivés qui, avec des sels spécifiques, forment des facteurs naturelsd’hydratation(NMF)(Darlenskietal.,2009).Unemutation du gène codant de la filaggrine a été identifiée comme un des facteursmajeursprédisposantàladermatiteatopique(Lodén,2012).Lafilaggrineestàl’originedes composants majeurs du NMF et est essentielle pour la formation de l’enveloppecornifiée des cornéocytes. Ainsi, il a été démontré que les individus présentant desmutationsdugènedelafilaggrinesontplusenclinsàlasécheressecutanée.Une mutation du gène de la filaggrine influence aussi la libération de cytokines etfavorise la pénétration d’allergènes environnementaux, accroissant les risques dedévelopperunedermatite.

v Conformitéeteffetsensurface

Après l’applicationd’hydratants sur lapeau, les ingrédientspeuvent rester à lasurface,êtreabsorbés,êtremétabolisés,oudisparaîtreparévaporation,parperteouparcontactavecunautrematériel.L’applicationtopiquedelipidesapporteunemembraneépicutanée,inerteetocclusive,qui réduit les pertes d’eau. Le degré de réduction de la PIE dépend de la quantitéappliquée et du type de lipides. Une réduction approximative de 50% de la PIE estobservée après l’application, sur une peau saine, d’une couche épaisse d’huile deparaffine, tandis que des hydratants classiques engendrent une baisse de la PIE pluslimitée(Ghadiallyetal.,1992;Lodén,2012).

v Absorptiondesprincipesactifs

L’efficacité des principes actifs est liée à leur diffusion à travers la barrièrecutanée et à leur concentrationdans la formulation.Desmolécules solubles, depetitetaille, avec des propriétés lipophile et hydrophile ont une plus grande capacité àtraverser le stratum corneum que des particules, des polymères ou des substanceshautementlipophiles.L’ionisationdécroitaussil’absorptionetl’efficacitédesmolécules.Parexemple,unpHélevédécroîtl’absorptiondel’acidelactique.La pénétration est aussi influencée par la structure de l’émulsion. Par exemple,l’encapsulation d’une substance astringente, l’acide lactique, dans une phase aqueuseinerte d’une émulsion, réduit les propriétés astringentes de la formulation. Changersimplementlecorpsgrasd’unecrèmeestaussiunmoyend’influencerladélivrancedesprincipesactifs.L’absorptiondanslapeauest,enfin,influencéeparledegréd’inflammationcutanéeetletauxd’hydratation.

53

v Hydratation,sécheressecutanéeetdesquamation

L’eaucontenuedanslestopiqueshydrateimmédiatementlestratumcorneumparabsorption.Ceteffetestdecourttermecarl’eauenexcèsestrapidementévaporéesaufsielleestretenuedanslapeaupardesprincipesactifsdelaformulation.

Un traitementavecdeshumectantsaugmente laquantitéd’eauretenuedans lestratum corneum, et les hydratants contenant des humectants sont souvent plusefficacesqueceuxsanshumectantsdanslecasdestraitementsdesécheressecutanée.L’eauestimportantedanslemaintiendelasouplesseetdel’élasticitédelapeau,maisleshumectantspeuventaussimodifierlespropriétésphysiquesdustratumcorneum.LeNMFetlesa-hydroxyacidesaugmentent,parexemple,l’élasticitédelapeau.SileNMFestabsent,l’eauseulenepermetpasderestaurerl’élasticité.La cohésion entre les cornéocytes et leur renouvellement sont influencés par les a-hydroxy acides (acide glycolique et acide lactique) à un pH faible.Uneperte totale etrapide du stratum corneum anormal peut être due à une diminution de la cohésioncellulaireentrelescornéocytessituésleplusprofondément.

Uneexpositionprolongéeàunexcèsd’eauaugmentel’épaisseurdescornéocytesenlesfaisantgonfler.Cemêmeeffetestobservéencasd’applicationd’huiledeparaffine.Enrevanche,laglycérineinduitunediminutiondelatailledescornéocytessuperficiels,indépendamment de ses effets osmotiques. La glycérine faciliterait la digestion desdesmosomessuperficielschezlesindividusatteintsdesécheressecutanéeetprévientlacristallisationdeslipidescutanésàunfaibletauxd’humidité.L’uréeestaussiutiliséepoursespropriétésdeprotectioncontrelestressosmotiqueenremplaçantl’eauetenretenantlaphasecristallineliquide.

L’absorptiondelaglycérineetdel’uréedansunstratumcorneumsainpeutêtreévaluéeàl’aided’unsimpletape-stripping.Laglycérineesttransportéetrèslentementdans l’épiderme et, en conséquence, son taux de transport est lié à la perméabilitéintrinsèquedelacouchebasaledekératinocytes.Lemoded’actiondelaglycérinedansl’hydratationdelacouchecornéeetdelafonctionbarrièrecutanéesembleêtreliéauxcanauxd’aquaporine3.Lesaquaporinessontunefamilledepetitesprotéinesavecdesmembranesdont lerôleestdetransporter l’eauet,danscertainscas,depetitssolutéspolaires.

La desquamation de la couche cornée n’est pas uniquement influencée par leshumectants mais aussi par la présence d’excipients dans la formulation. Des ionsdivalents - Ca2+ par exemple - et les agents chélateurs - acide édétique - permettent,entreautres,dedissocierlescornéocytesexvivo.

54

v RisquedesécheressecutanéeetdermatitepourunepeausaineDes applications répétées d’hydratants sur une peau saine augmentent

l’hydratationdelapeausansmodifierlaperteinsensibleeneau.

v Effets des hydratants dans les modèles expérimentaux de sécheressecutanée

Danslesmodèlesexpérimentauxdesécheressecutanéeetdepertedelipides,les

hydratants permettent de normaliser la fonction barrière cutanée. Le pourcentage delipidescontenusdans lacrèmesembleêtrecrucialdanscetterécupération. Ilaété,eneffet,démontréque le tauxderécupérationd’unepeaualtéréeexpérimentalementestcorréléavecletauxdelipidesdanslacrème.D’autresétudessuggèrentdesdifférencesentrelestypesdelipidesetd’huiles.L’huiledecanolaetsesfractionsnonsaponifiablesenrichies réduisent le degré d’une irritation aiguë alors que l’huile de paraffine nemodifie pas significativement le degré d’irritation. En revanche, cette dernière estabsorbéedans la couche cornéeappauvrie en lipideset accélère la récupérationde lafonctionbarrière,évaluéegrâceàlaperteinsensibleeneau.

Il a étéprouvéqu’uneassociationd’acidesgras,de céramidesetde cholestérolpermet la récupération de la fonction barrière chez des souris dont la peau avait ététraitéeàl’acétone.Lecholestérol,entantquelipidedominant,accélèrelarécupérationd’unepeaualtérée.Lacompositiondel’hydratantvaainsidéterminers’ilengendreunerécupérationdelafonctionbarrièreoul’accentuationdel’altération.

c. Propriétés

i. Allermyllotion®LeproduitAllermyllotion®estuneémulsionenspray.Ilestcomposéessentiellement(parordredécroissant):

- de mono et oligo-saccharides, qui aideraient au contrôle desmanifestations immunologiques et inflammatoires cutanées. Ilssont sous formes libres et sous formes encapsulées(Sphérulites®).LesSphérulitessontunsystèmed’encapsulationqui permet une libération progressive et contrôlée desingrédientsdanslapeau.

- d’émollient comme l’acide linoléique (oméga 6), égalementréputé pour son activité anti microbienne sur StaphylococcuspseudintermediusetMalasseziapachydermatis.

- d’anti-oxydantscommelavitamineE(tocophérol).LavitamineEest un anti-oxydant liposoluble qui protège la peau des effetsdélétères dus aux rayonnements ultra-violets. Des études

Figure16:Allermyl®lotion

55

expérimentales suggèrent que la vitamine E possède des propriétés anti-tumorigèneetphotoprotectrice(KeenandHassan,2016).

- dechitosanide,polysaccharidenaturelcomposédeglucosamineetderésidusdeN-acétyl glucosamine. Le chitosanide possède des propriétés biologiquesspécifiques:hémostase,granulation,épithélialisation,biodégradableetaunrôleimportantdansleprocessusdecicatrisation.Ilestdégradéparleslysozymesenoligomères, qui activent significativement le processus de cicatrisation. Lechitosanide apporte un microenvironnement approprié, en se comportantcommeunematriceextracellulaireetquiaideàlacroissancetissulaire, initie laproliférationdesfibroblastesetstimulelasynthèsedecollagène.Ilformeunfilmprotecteuràlasurfacedelapeauetdesphanères.Ilpossèdeaussidespropriétésantimicrobiennes(Chhabraetal.,2016).

LepHdel’Allermyl®LotionestunpHneutre.

v Indicationsetrecommandations:Allermyl®Lotionest formulépourrépondreauxbesoinsduchienetduchat. Il

calmeles irritationset lesdémangeaisonsetpossèdeuneffetrestructurantde lapeauléséeetassainit l’épiderme. Ilaideaucontrôledesmanifestations immunologiquesetinflammatoirescutanéesainsiqu’aurenfortde l’intégritécutanéeetaumaintiende lafonctionbarrièredel’épiderme.L’applicationd’Allermyl®consisteenunepulvérisationdeszonesatteintes.Ilpeutêtrenécessairederépartirleproduitenlemassantlégèrement.

ii. Allerderm®spot-onUne nouvelle formulation de l’Allerderm® spot-on a été testée au cours de nosexpériences.L’Allerderm®spot-onestcomposé:

- D’émollientscommelescéramides3,céramides6II,céramides1,cholestérol.IlsformentleComplexeLipideCutané.

- Du complexe Glycotechnologie à base de rhamnose, galactose et mannose,formulépourseseffetsanti-anti-adhésiondesmicro-organismes.

- DelatechnologieDefensines,composéed’extraitsdefeuillesdePeumusboldusetd’extraitdeSpiraeaulmaria,dontlebutestdestimulerlesdéfensesnaturellesdelapeau.

v Indicationsetrecommandations:Allerderm®spot-onestrecommandédanslescasdedermatosescanineset félines

associéesàdes altérations cutanéesde surface. Il contribueà restaurer la fonctiondebarrièredel’épidermeetfavorisesonhydratation,diminuesasensibilitéetrenforceson

56

rôle protecteur. La posologie est d’unepipette par semainependant quatre semaines.Lesdosespeuventêtreaugmentéesenfonctiondelasévéritédeslésions.L’applicationd’unepipetteparmoisestensuiteconseilléeafindelimiterlesrechutes.

Figure17:Allerderm®spot-on

iii. Dermacool®

Dermacool®estunspraycomposéde:

- Menthol, composant organique naturel, extrait de l’huile dementhe. Le menthol est reconnu pour ses propriétés anti-inflammatoires,antiprurigineuses,antiseptiquesetanalgésiques.Le menthol a pour effet de déclencher «chimiquement» unesensationde froid,soulageantainsi lasensationd’inflammation.Ilaugmenteaussilephénomènedevasodilatation,enparticulierauniveaucutané.Labarrièrecutanéeestalorsplusréceptivecequi facilite l’absorption d’autres produits éventuellementcontenu dans le réhydratant (Craighead and Alexander, 2016;Galeottietal.,2002).

- Hamamélis, composant organique naturel. L’hamamélis(Hamamelis virginiae) est utilisé pour ses propriétés astringentes,vasoconstrictricesveineusesetveinotoniques,anti-inflammatoires,antiseptiquesetantioxydantes.Ilpossèdeuncertainpouvoircicatrisant.

- Chlorure de benzalkonium, ammonium quaternaire. Il est connu pour sespropriétés bactéricides à des concentrations faibles (0,1 à 0,2%) sur un largespectredebactériesGram-positivesetGram-négatives.Entopique,lechloruredebenzylakoniumestutilisédansl’antisepsiedesplaies.

Menthol, hamélis et chlorure de benzalkonium sont présents sous formes libres etencapsulées.

- Chitosanide- Para-chloro-méta-xylenol (PCMX), composé phénolique, est connu pour ses

propriétés antiseptiques, antimicrobiennes et désinfectantes. Il estparticulièrement efficace contre les bactéries Gram-positives (Maillard et al.,2001).

Figure18:Dermacool®

57

v Indicationsetrecommandations:

LeDermacool®estrecommandéchezlechienetlechatlorsd’irritationslocales.Ilestàpulvériserdirectementsuretautourdelalésion,deuxàtroisfoisparjour.

iii. Humiderm®L’Humiderm®estunelotionsousformedespray.Ilestcomposé:

- D’humectants comme le propylène glycol, l’urée, la glycérine(glycérol) et l’acide lactique. Le propylène glycol inhibe lafermentationetlacroissancedeschampignonsdontMalasseziasp. Il facilite la pénétration du produit dans la couche cornée(Lodén,2005).Leglycérolpermetdemodulerlacompositionenlipides de la couche cornée ainsi que le phénomène dedesquamation(cfprécédemment).

Du fait de la présenced’acide lactique (AHA) et en l’absencedebaseorganique ou inorganique alcaline, le pH de l’Humiderm® est un pHacide(Lodén,2005).

v Indicationsetrecommandations:

L’Humiderm®estrecommandéchezlechienetlechatpourlerétablissementdel’équilibrehydrolipidiquedel’épiderme.Ils’appliqueenpulvérisationssurtoutlecorpsdel’animal,unefoisparjour.

Figure19:Humiderm®

58

IV. Evaluationdelafonctionbarrière

A. Laperteinsensibleeneau(PIE)

1. DéfinitiondelaperteinsensibleeneauLa perte insensible en eau (PIE), ou Transepidermal Water Loss (TEWL) en

anglais,estdéfiniecommelaquantitéd’eauéchangéeentrelemilieuintérieur–lecorps– et le milieu extérieur – l’environnement – de façon passive, à travers la surfaceépidermique, pour une surface donnéede celle-ci. Ainsi, la PIE représente la quantitéd’eauparunitéd’aireetparunitédetemps,etestmesuréeeng.m-2.h-1.Attentionànepas confondre laperte insensible eneauavec la transpiration. L’eaupeut traverser lapeaudel’intérieurducorpsversl’extérieurducorpsviadeuxvoies:demanièreactivepar la transpiration et demanière passive par diffusion à travers le stratumcorneum(Humbert,2003).Ladiffusionpassiveestuneconséquencedel’existenced’ungradientdepressiondevapeurd’eaudechaquecôtédel’épidermeetestrégieparlapremièreloideFick:

Le flux d’une molécule (J en mol/cm/s) par unité de distance (d en cm) estproportionnnel au gradient de concentration (DC) et au coefficient de diffusion (D encm2/s)decettemolécule. Lestratumcorneumn’étantpasunesimplemembraneinerte, lapremière loideFick est complétée en introduisant un coefficient de partage traduisant l’affinité dustratumcorneumpourl’eau:

Km= !"#$%#&'(&)"#+%,-%(.+(#/,%/&'(&.0$"'#%.01'"2"#+!"#$%#&'(&)"#+%,-%(.+(#/,%/%/1($%/)#&%'$%,,.,()'%/+%,-é1)+%'0%4)4(#&

Onobtientalorslaformulesuivante:

J=-KmxD(DC/d)avecKm=0,06

Cette formule impliquant le gradient de pression en vapeur d’eau entre le corps et lemilieu extérieur, la perte insensible en eau dépend donc de l’humidité relativeextérieure. Par conséquent, plus l’humidité relative sera importante, moins la perteinsensibleeneauseraforte(Gabard,2000).Deplus,letauxdediffusiondel’eaudépenddunombredecouchesdustratumcorneum(Humbert,2003).

2. MesuredelaPIEIl existe plusieurs méthodes de mesure de la perte insensible en eau. La

principale méthode consiste à estimer un gradient de pression en vapeur d’eau(Humbert,2003).Deuxtypesd’appareilsexistentdonc:lesappareilsàchambreouverteetceuxàchambrefermée.

59

a. Appareilàchambreouverte

Laméthodeenchambreouverteestlapluscourammentutiliséepourmesurerlaperteinsensibleeneau(DePaepeetal.,2005).

Unesondeappliquéesurlapeaudélimiteunechambrecylindriqueouverteàl’airambiant. Le gradient de pressionde vapeur d’eau est indirectementmesuré par deuxdétecteurs semi-conducteurs sensibles à l’humidité, chacun d’eux est couplé à unthermistor. La têtede la sondeestplacéehorizontalement sur lapeauàunepressionconstanteetsapetitetailleminimisel’influencedesturbulencesdel’airàl’intérieurdecelle-ci.Laperteinsensibleeneauestalorsexpriméeeng.m-2.h-1(DePaepeetal.,2005).

Le Tewameter® (Courage + Khazada Electronic, Köl, Germany) est l’appareil à

chambreouvertederéférence(fig20).Ilmesurelaperteinsensibleeneauentre0et90g.m-2.h-1avecunécarttypede10%dansdesconditionsd’humiditérelativede0à100%(DePaepeetal.,2005).

Figure20:SchémadelasondedeTewameter®(Yoshiharaetal.,2007)

Cette méthode possède toutefois des inconvénients majeurs. Les appareils à

chambre ouverte sont très sensibles aux mouvements d’air, qu’ils soient causés parl’environnement ou par un mouvement du sujet lui-même. Les turbulences de l’airpeuvententraînerdesvariationsdanslesmesures.Deplus,mêmeaprèstontedupelageauniveaudessitesd’étude, l’humiditéabsorbéepar lespoilsrestantsestdétectéeparlescapteursd’humiditéet impliquealorsaussidesvariationsdemesure(Yoshiharaetal., 2007). L’utilisation des appareils à chambre ouverte est assez contraignante enexpérimentation animale. En effet, ceux-ci ne sont pas portables et il est nécessaired’appliquerlasondeselonunangledonnépendantuntempsde60secondes(DePaepeetal.,2005).

60

b. Appareilàchambrefermée

Lesappareilsàchambrefermée,commeleVapoMeter®(DelfinTechnologiesLtd,Kuopio,Finland),sontplusrécentsetsemblentplusadaptéspourréaliserdesmesuressurlesanimaux.DePaepeetalontréalisésdescomparaisonsentreappareilsàchambreouverte(Tewameter®)etappareilsàchambrefermée(VapoMeter®):ilenressortqueles résultats obtenus avec le VapoMeter® sont plutôt fiables mais pas aussi précisqu’avec le Tewameter®. L’avantage souligné par les auteurs de l’étude est qu’il s’agitd’unappareilportableetbeaucouppluspratiqueàutiliser.

Leprincipeestlesuivant:unesondeappliquéesurlapeaudélimiteunechambre

ferméecontenantdescapteursdetempératureetd’humiditérelative.Aucontactde lapeau, sur une surface de 1 cm2 environ, l’humidité relative dans la chambre vaaugmenteretpermetainsilamesuredelaperteinsensibleeneau(fig21).Entrechaquemesureun tempsdeventilationde la chambreestnécessaireafinde rétablir dans lachambre le taux d’humidité relative de l’air ambiant (Nuutinen et al., 2003). LeVapoMeter® possède un temps d’application court de 10 secondes. Lors de sonutilisation, certaines conditionsambiantesdoiventêtre respectées: l’humidité relativedoit être comprise entre 10 et 60% et la température entre 20 et 25°C (Site DelfinTechnology).

Les mesures ne sont pas influencées par le microclimat ambiant et les

mouvementsd’air induitspar les sujets, cequi constitueunavantagepar rapport auxappareilsàchambrefermée.

Figure21:SchémadelasondeduVapoMeter®(Imhofetal.2009)

3. PIEetévaluationdelafonctiondebarrière

Denombreusesétudesréaliséeschezl’homme,lasourisetlechienmontrentune

corrélationentrelaperteinsensibleeneauetlafonctionbarrièreépidermique(Fluhretal.,2006;Shimadaetal.,2008;Yoshiharaetal.,2007).

61

Unedesétudesclésdansl’étudedelacorrélationentrelaperteinsensibleeneauet l’évaluation de la fonction barrière a été l’étude menée par Fluhr et al. Celle-ci acomparéexvivoet invivo chez l’hommeet lasouris, lesvaleursenperte insensibleeneau obtenues avec différents appareils (VapoMeter®,H4300 etMEECO®) avec cellesobtenues par gravimétrie. Il en résulte une similarité entre ces données. La fonctionbarrièreépidermiquepeutdoncêtreétudiéegrâceàlamesuredelaperteinsensibleeneau.

Chezlechien,Shimadaetal.aétudiécettecorrélationentrelaperteinsensibleeneauetl’évaluationdelafonctionbarrière.Lestratumcorneumde10chienssainsaétéaltéré par tape-stripping. Parallèlement à cela la fonction barrière épidermique étaitobservée grâce à une coloration fluorescente: le colorant ne traversait pas la peaulorsquelestratumcorneumétaitintact,etàl’inverseilpénétraitdansl’épidermeencasd’altérationdustratumcorneum.Lesmesuresdelaperteinsensibleeneau,réaliséesàl’aided’unappareilàchambrefermée(CC-01),montrèrentlarelationentrel’altérationcroissantedelacouchecornéeetl’augmentationdelaperteinsensibleeneau.

Chez les chevaux, Christel Feydy a mené une thèse dont le but était d’étudier

l’étatdelabarrièrecutanéeparmesuredelaperteinsensibleeneauetdupHetpardesexamenshistopathologiques.Ilenrésultebienunecorrélationentrel’étatdelabarrièrecutanéeetlesvaleursdelaperteinsensibleeneau,cequiapermisd’établirunmodèleaiguëd’altérationdelabarrièrecutanéechezlecheval.

4. VariationsdelaPIE

Lamesurede laperte insensibleeneauestunemesure facileàeffectuergrâce

aux appareils actuels. De nombreuses études ont permis de mettre en évidence lacorrélation entre l’altération de la barrière cutanée et l’augmentation de la perteinsensibleeneau.

Cependant, lavaleurdelaperteinsensibleeneauestsoumiseàdenombreusesvariations. Tout d’abord, le caractère de la peau dépend des conditions ambiantesactuelles et précédentes. Une hygrométrie importante tout au long de la journée faitaugmenter la composante transpiration, la quantité d’eau prisonnière des poils. Ainsilorsquel’hygrométrieambianteaugmente,laperteinsensibleeneaubasalediminueetinversement (Feydy, 2012; Yoshihara et al., 2007). Il est, donc, important d’avoir desconditionsd’ambiancefixéesafind’obtenirdesrésultatsfiables.

Ilaétédémontréque lesvaleursdeperte insensibleeneauvarientdemanière

significativeenfonctiondusiteanatomique,del’individuetdelarace(Lau-Gillardetal.,2010; Yoshihara et al., 2007), du pelage (Hester et al., 2004;Oh andOh, 2009) maisaussienfonctiondel’opérateur. Unprotocoledemesure,standardisé,doitêtremisenplaceafindes’assurerdelarépétabilité des mesures et de s’affranchir des facteurs de variations précédemmentcités.

62

B. Letauxd’hydratationdelapeau

1. Tauxd’hydratationetévaluationdelafonctionbarrière

L’épiderme contient 70% d’eau tandis que la couche cornée n’en contient que15%. Cette perte en eau est due à la différentiation des kératinocytes en cornéocytes(Marks,2004).

L’eau contenue dans la couche cornée est essentielle pour assurer la fonctionbarrièrecutanée.Undéfautdel’intégritédelacouchecornéepeutentrainerdespertesd’eau,induisantunesécheressecutanéeetl’altérationdelafonctionbarrière(Darlenskiet al., 2009).Lamesuredu tauxd’hydratationestdoncuneméthodeappropriéepourévaluerlafonctionbarrière(Hesteretal.,2004).

Ilexisteunecorrélationentreletauxd’hydratationetlaperteinsensibleeneau(Darlenski et al., 2009), telle qu’une perte insensible en eau faible (fonction barrièreintacte)correspondàuntauxd’hydratationnormaldelacouchecornée.LorsquelaPIEaugmente, la peau devient plus sèche (pertes plus importantes), et donc le tauxd’hydratationdiminue.

Hester et al met en évidence que le taux d’hydratation cutanée reste unparamètre plus fiable, car plus reproductible et plus facile à mesurer que la perteinsensibleeneauafind’évaluerl’étatdelafonctionbarrièrecutanée.

2. Mesuredutauxd’hydratation

Différentes méthodes existent pour mesurer le taux d’hydratation de la peau

(Darlenskietal.,2009):laméthodeélectriquequiconsisteàmesurerlaconductance,lacapacitance ou l’impédance; l’utilisation de micro-ondes; ou encore la méthode despectroscopie.

Lapluscourammentutiliséeestleprocédéélectrique(Clarysetal.,2011).Cetteméthodeestbaséesurlarelationexistantentrelespropriétésélectriquesdestissusetleurcontenueneau.Lacornéométriepermetdedéterminer lacapacitancede lapeauc’est-à-dire son habilité à stocker une charge électrique. Le stratum corneum secomporte comme unmilieu diélectrique, dépendant de sa teneur en eau, permettantalors la mesure de capacitance. La base physique de ce dispositif est de mesurer ladifférence entre la constante diélectrique de l’eau et celle des autres substancesrencontrées dans le champ. La faible fréquence de fonctionnement (40-75 Hz) de lasonde la rend sensible aux changements diélectriques de la peau en contact avec lasurfacedel’électrode.Lesmesuressonteffectuéesgrâceàl’applicationd’uneélectroderéceptrice,àunepressionbiendéfinie,horizontalementàlasurfacedelapeautondue.Ilest important de bien s’assurer du contact constant entre la sonde et la surface de lapeau(fig22)(Darlenskietal.,2009).

63

Figure22:Représentationschématiquedudispositifmesurantlacapacitancelorsdel’évaluationdel’hydratationdela

couchecornée(Darlenskietal.,2009)

3. Variationsdutauxd’hydratation

Tout comme la perte insensible en eau, le taux d’hydratation varie sous

l’influence de facteurs extrinsèques (température, hygrométrie, mouvements d’air) etintrinsèques (âge, site de l’étude, pelage, race) (Darlenski et al., 2009; Hester et al.,2004). Ainsi,lorsdelamesuredutauxd’hydratationcutanée,cesfacteursdevariationsdevrontêtreprisencompteparlamiseenplaced’unprotocolestandardisé.

C. MesuredupHcutané1. DéfinitiondupH

LepotentielhydrogèneoupHestdéterminéparlaquantitéd’ionshydrogèneH+

parrapportauxionshydroxydeOH-.En1909,SorensenadéfinilepHcommeétantlenégatifdulogarithmedelaconcentrationmolaireenionsH+,soit:

pH=-log[H+]

Le pH cutané résulte de la combinaison des substances aqueuses du stratum

corneum, des diverses substances produites par les glandes cutanées (sébacées etsudoripares)etdufilmhydrolipidiquedesurface(MatousekandCampbell,2002).

Chezleschevaux,lepHcutanévarieentre5,45et7,13(MatousekandCampbell,2002).Cependant,trèspeud’étudesdupHsontdisponibleschezleséquidés.

64

Lesmoléculescontribuantàl’aciditédelapeausont:lesproduitsdedégradationde la filaggrine (acide urocanique, acide pyrrolydone carboxilique), les acides aminésissusdelatranspiration,dusébumetdustratumcorneum,ainsiquedeslipidesacidestels que le sulfate de cholestérol ou les acides gras libres (Matousek and Campbell,2002). Ils proviennent de trois origines: les sécrétions des glandes sébacées, ladégradation du sébum par les bactéries provenant de la surface de la peau, laproduction à partir des phospholipides lors de la différenciation terminale deskératinocytes (Matousek and Campbell, 2002). A contrario, d’autres moléculesparticipentàl’alcalinitédelapeau:l’ammoniaque,produitparlesglandessudoriparesainsiquedudioxydede carboneetdubicarbonate contenusdans la sueur (Matousekand Campbell, 2002). Comme nous l’avons vu précédemment, la sudation est unmécanismeimportantchezlechevallorsdelathermorégulation.LepHdelasueurestfortementalcalin,del’ordrede8,0à8,9(Jenkinsonetal.,2006).Celapeutentraînerunehausse du pH cutané d’une à deux unités, lors d’un effort ou d’un stress, et le rendreainsineutreoualcalin.

LacombinaisondesfacteursacidifiantsetalcalinisantsaboutitaumaintiendupH

cutanédanslesvaleursphysiologiques.

2. GradientdepHdanslestratumcorneum

LepHà lasurfacedustratumcorneumestacide, tandisqueceluide l’épidermeviable,c’est-à-direunefoislacouchecornéeéliminéepartape-stripping,estde7,4chezl’Homme(Turneretal.,1998).LegradientdepHàtraverslestratumcorneumn’estpasencorebiencaractérisé ; il est complexeetnon linéaire,décroissantdans la couche laplus superficielle puis croissant jusqu’aux valeurs de l’épiderme viable à l’interfacestratumgranulosum/stratum corneum. Turner a étudié en 1998, le gradient de pH àtravers le stratumcorneum chezdes souris, enaltérant lapeaugrâceà laméthodedetape-stripping.OnobservealorsquelepHn’estpasmodifiéaprèsles15premiersstrips,maisaugmentede5,9à7aprèsles5stripssuivants.Celacorrespondaupassageentrelestratum disjunctum, pauvre en eau, et le stratum compactum. Ensuite, le pH cutanéaugmenteaveclenombredestrips(Turneretal.,1998).

3. pHetévaluationdelafonctionbarrière

Chez l’Homme, Öhman et al ont démontré le rôle important du pH dans ledéveloppement et le maintien de la barrière cutanée. L’épiderme, une fois délaminé,présente un caractère alcalin. Le pH cutané décroit ensuite rapidement pendant lespremiersjours,etsenormaliseaucoursdeladeuxièmesemaine.UnedécroissancedelaPIEestnotéeparallèlementà ladiminutiondupH, indiquantque lepHest importantdans la récupération de la barrière (Matousek and Campbell, 2002; Ohman andVahlquist,1994).

65

PARTIEII:ETUDEEXPERIMENTALEI. Principeethypothèses

Lebutde l’étudeestd’étudier lesvaleursde laPIE,dutauxd’hydratationetdu

pHdelacouchecornée,avantetaprèsunealtérationdel’épiderme,àl’aided’unmodèlederupturechroniquede labarrièrecutanéechez lecheval,etdesuivre leurévolutionpendant la phase de réparation de la fonction barrière, spontanée ou aidée parl’application d’Allermyl® lotion, d’Allerderm® spot-on, d’Humiderm® ou deDermacool®.II. Matérieletméthode

A. Sujetsdel’étude

L’étude est menée sur cinq chevaux appartenant au troupeau pédagogique deVetagro Sup Campus Vétérinaire de Lyon. Il s’agit de chevaux de selle, de formatéquivalent, afinde limiter les variationsdues à un échantillonnagenonhomogène. Ilssontâgésde4à25ans,tousdesexemâleetcastrés.Ceschevauxneprésententaucunsigned’atteinte cutanéesur lesépaules, zoned’étude, etn’ontpas reçude traitement,systémiqueoutopique,danslestroismoisprécédantl’étude,autrequ’unantiparasitaireinterne.Ilsviventhabituellementaupréetsontnourrisd’herbeetdefoin.Leschevauxsont rentrés au box dans le cadre de l’étude, afin de s’affranchir des risques liés auxconditionsclimatiques(fortechaleur,pluie).Lesmanipulationsdoiventsefairedanslecalmeafind’élimineraumaximumlefacteurtranspiration.Afindelimitertoutstress,leschevauxsonttoujoursmanipulésdanslemêmeordre.

TouteslesmodalitésdecesexpériencesontétéapprouvéesparlacomitééthiquedeVetAgroSupCampusVétérinairedeLyon(annexe1).

B. Déterminationetpréparationdessitesd’étude

L’encolure devait initialement être la zone d’étude. Or certains des sujetspossèdent des cicatrices à cet endroit-là. C’est pourquoi nous décidons pour tous leschevauxderéalisernosexpériencesauniveaudel’épaule.

Aupréalable, lesépaulesdetousleschevauxsonttondues,àdroiteetàgauche.

Quatrecarrésde2cmsur3cmsontmatérialisésaufeutreindélébileàdroiteetuncarréàgauche,etsontensuiterasés.Lecôtédroitconstituelecôtétraitéetlecôtégauchelecôtétémoin(fig23).

66

Figure23:Sitespréparéssurlecheval3etreprésentationschématiquedessites

C. Phased’induction:créationdelarupturechroniquedelabarrièrecutanéepartape-stripping

Lebutdecettepremièrephased’obtenirunerupturechroniqueparapplication

de morceaux de ruban adhésif («strips») tous les jours (de J-5 à J0), sur des sitescutanéspréalablementdéfinis,afind’obtenirunevaleurdelaPIEcompriseentre20et40 g.m-2.h-1. Il s’agit ainsi de recréer des lésions similaires à celles d’une dermatoseinflammatoirechronique.

LesstripssontréalisésavecdurubanadhésifScotch®Crystalde19mmdelarge.Unstripcorrespondàl’applicationduscotch10secondessurlesite,enappuyantaveclepouce, avecunepression constante sur toute la surfacedu scotch. Le rubanest retirélentement,endeuxsecondes,defaçonunidirectionnelle(debasenhaut)(fig24).Afindelimiterlesbiais,seulsquatremanipulateurssesontrelayésenutilisantàchaquefois,consciencieusement,lamêmeméthodepourletape-stripping.

Lenombredestripspourchaquesiten’estpasdéterminéaupréalable.Ceux-cisontréalisésjusqu’àl’apparitiond’unepeauluisante.Lenombredestripsappliquéssurchaquesitepeutvarierd’unchevalàl’autre,dépendantdesvariationsindividuelles.Préalablementetencomplémentdesstrips,lerasagedessitesesteffectuétouslesjours.

67

Figure24:Réalisationduprocédédetape-stripping

D. Phasederécupération:applicationdesproduits(Allermyl®lotion,Allerdermspot-on®,Humiderm®,Dermacool®)

Pourchaquecheval,unsiteducôtétraitéreçoitl’undesproduitstestés,unefois

parjour,lesiteducôtéopposé,côtétémoin,évoluantspontanément.Les flacons sont agités avant emploi afin de les homogénéiser et le produit d’unepressiond’Allermyl® lotion,deDermacool®etd’Humiderm®est appliqué sur le sitecorrespondant; une goutte d’Allerderm® spot-on est étalée sur le site correspondantpourassurerunerépartitionhomogène.

68

E. Suividelafonctiondelabarrièrecutanée

LetableauIrécapituleleplanningdecetteétudeetlesmesuresréalisées.

TableauI:Planningdedéroulementdel’étude

Légende:Tauxd’hydratation,pHetPIE:-*mesureunefoisparjouraprèslesstrips-#mesureimmédiatementaprèslesderniersstrips,puisapplicationduproduitetmesure1h30et8haprès-+mesure,unefoisparjour,avantl’application

Pendantlaphased’induction(J-5àJ-1),lesmesuresdetauxd’hydratation,dePIEet de pH sont réalisées avant et après le tape-stripping pour les chevaux 1, 2 et 3;uniquementaprèsletape-strippingpourleschevaux4et5.Eneffet,cesdeuxdernierschevauxétantpeu coopératifs, nousavonsdécidéde limiter lesmesuresaveceux.Unexamen clinique des sites ainsi qu’une biopsie à J0 permettent d’illustrer les lésionsmacroscopiquesetmicroscopiquesinduitesparletape-strippingetdelescorroboreràlamesuredutauxd’hydratation,delaPIEetdupH.

A J0, premier jour d’application des produits, les mesures sont faites

immédiatement après la réalisation des strips, puis 1 heure 30 et 8 heures aprèsl’application des produits. Pendant le reste de la phase de récupération (J1 à J5), lesmesuressontréaliséesavantl’applicationquotidiennedesproduits.

Danstous lescas,chaquemesuren’estpasrépétéeetn’estréaliséequ’une fois,étantdonnélenombreimportantdemesuresetl’impatiencedeschevaux.

Induction RécupérationJour J-5

LuJ-4Ma

J-3Me

J-2Je

J-1Ve

J0Sa

J1Di

J2Lu

J3Ma

J4Me

J5Jeu

Tonte X Rasage X X X X X X Strips X X X X X X Tauxd’hydratation

Peausaine

X* X* X* X* X# X+ X+ X+ X+ X+

PIE Peausaine

X* X* X* X* X# X+ X+ X+ X+ X+

pH Peausaine

X* X* X* X* X# X+ X+ X+ X+ X+

Applicationdesproduits

X X X X X X

Biopsie Peausaine

X

X X

69

Lesmesuresenpeausainesontréaliséesà lapériphéried’unezonedetest,surunepartieuniquementtondue.

1. Examenclinique

Une surveillance clinique quotidienne de chaque site est réalisée. Les chevauxsont manipulés tous les jours pendant 11 jours. Tous changements de couleur,d’inflammation,d’exsudation,deladesquamationouencorel’apparitiondecroûtessontnotés.

2. Histopathologie

Lesbiopsies cutanées sont réalisées à l’aided’un trépande6mmdediamètre,

sousanesthésielocale(injectionsous-cutanéede1mLdexylocaïne,5minutesavantlaréalisation de la biopsie). Elles sont réalisées avant l’application des produits. Lesbiopsiessontensuite fixéesdansdu formolà10%pendant48heuresminimumavantd’être incluses en paraffine. Celles-ci sont alors découpées en section de 4 µmd’épaisseuretcoloréesàl’hémalun-éosine(HE),puisobservéesaumicroscope.LetableauIIregroupelesdifférentesbiopsiesréaliséessurleschevaux.

TableauII:Planningdesbiopsies

CV1

CV2

CV3

CV4

CV5

Ct0 X X Ct48h X X Ct96h X XAmt48h X XAmt96h X X Adt48h X XAdt96h X X Hut48h X X Hut96h X XDet48h X X Det96h X X S X XTotal 5 5 4 5 5

Légende: C: contrôle témoin, Am: Allermyl®, Ad: Allerderm®, Hu: Humiderm®, De:Dermacool®,S:peausaine.

70

Figure25:Sitesbiopsiés

Desmarquagesimmunohistochimiquessontensuiteréalisés.

Le marquage Ki67 est réalisé avec l’anticorps Ki67 qui se fixe sur toutes lescellulesengagéesdanslecyclecellulaire,l’antigèneKi67étantprésentsuruneprotéinenucléairedescellulesprolifératives.L’annexe6reprendleprotocoledumarquageKi67.Le marquage nous permet de calculer l’index de prolifération de l’épiderme (indexKi67), exprimé en pourcentage. Pour réaliser le comptage, on choisit au hasard unepartiedel’épidermesituésurlalame,quel’onobserveaumicroscopeaugrossissementx250: sur 100 kératinocytes comptés, le nombre de cellules dont le noyau est colorécorrespondàl’indexKi67.Onrépètecetteopérationdeuxfoispourchaquelame,dansdeszonesdifférentes.Onobtientalorsunemoyenne,autempst0,t0+48hett0+96h,desvaleursdessitestraitésetdessitestémoins.

Le marquage CD3 nous permet d’étudier la composition et l’évolution del’infiltrat inflammatoireenmettantenévidence les lymphocytesT. Ils sont, engrandemajorité,localisésdansledermesuperficiel,enrégionpérivasculaire.Uneseulecoupeaétéretenuepourlecomptagedechaquebloc,aumicroscopeaugrossissementx250,encomptant la totalité des cellulesmarquéesdans le derme superficiel. Le comptage estréaliséauxtempst0,t0+48hett0+96h.L’annexe4synthétisetouscesrésultats.

3. Perteinsensibleeneau

La perte insensible en eau est mesurée grâce au VapoMeter® (DelfinTechnologiesLTD,Kupio,Finland).LeVapometer®estuninstrumentàchambreferméecylindriqueavecunvolumed’airde2cm3etunezonedecontactouvertede1cm3.Cettechambre possède un capteur d’humiditéHoneywell qui est directement intégré à uneunité électronique portative contrôlée par unmicroprocesseur. Il est doté d’un écrandigital affichant la mesure de la PIE en g.m-2.h-1. L’humidité et la température de lachambre sont égalementmesurées avant le contact sur la peau. La PIE est calculée àpartirdel’augmentationdupourcentaged’humiditérelative.

71

Le VapoMeter® est activé en pressant le seul bouton, puis il est apposé sur lapeauaprèsundécomptedetroissecondes,perpendiculairementàlapeau(fig26et27).Une pression modérée est appliquée sur la sonde afin d’éviter les flux d’air entre lachambreetlemilieuextérieur.L’appareilestappliqué10secondessurlapeauavantdefournirlesmesures,signaliséesparunbipsonore.

Figure26:VapoMeter®(DelfinTechnologiesLTD)(http://www.delfintech.com)

Figure27:MesuredelaPIEsurundeschevauxàl’aideduVapoMeter®

72

4. Tauxd’hydratationcutanée

LeprincipeducornéomètreCM825estceluidelacapacitancediélectrique.Lesvaleursdudiélectriquevarientenfonctiondelaquantitéd’eaucontenuedanslestratumcorneum.

Le cornéomètre CM825 est composé d’une unité d’interconnexionMPA (MultiProbeAdaptater)reliéeparuncâbled’environunmètreàlasondedemesure(fig28).Cetteunitécentraleestelle-mêmereliéeàunordinateurparuncâbleUSB.Un logicielpermetd’afficher les résultats. La sondeest composéededeuxélectrodesmétalliques(or)enformedepeigne.Unefinecouche isolantesépare lesélectrodessur l’extrémitédelasondeencontactaveclapeau.L’alimentationducircuitélectriqueinduitunchampélectrique à travers le stratum corneum et un courant électrique entre les deuxélectrodes.L’appareilmesurealorslacapacitancecorrespondante.

Lors de la mesure, la sonde est appliquée sur la peau verticalement enmaintenant une légère pression, pendant une seconde. L’appareil émet un bip sonorelorsquelamesureestterminée(fig29).

Figure28:Corneometer®CM825(http://www.courage-khazaka.de)

73

Figure29:Mesuredutauxd’hydratationsurundeschevauxàl’aideducornéomètreCM825

5. pH

LepH-mètreHI83141déterminelepHcutanégrâceàuneélectrodedemesure.

Celle-cicontientunesolutiontamponséparéedelasolutionàtester-lapeaudansnotreétude-paruneparoideverre.L’appareilnécessiteuneséancedecalibrageaumoinsunefoisparmois,selonl’intensitéd’utilisation.L’étalonnagesefaità l’aidededeuxsolutionstampons,uneàpH4,01(HI70004) et une à pH 7,01 (HI 70007), fournies par le fabricant. Après avoir enlevé laprotection, la sonde est rincée dans un premier temps avec la solution neutre puisensuiteimmergée(environ4cm)danscettemêmesolution.Unefoislavaleurstabilisée,leboutonOFFSETpermetd’ajusterlamesure.OnfaitensuitedemêmeaveclasolutionacideenajustantlamesureavecleboutonSLOPE.

Pendant les séries demesure, la sonde est placée dans de l’eau distillée entrechaquemesure.OnsélectionnelemodepH.Unefoislapeaupréparée,onplacelasondeperpendiculairementàlapeauselonunaxehorizontal(fig30).Onattendensuitequelavaleuraffichéesestabiliseavantdereleverlamesure.

74

Figure30:MesuredupHàl’aidedupH-mètreHI83141

F. Analysesstatistiques

Lesanalysesstatistiquesontétéréaliséesàl’aidedeslogicielsExceletR.Lebutdenotreétudeestdecomparerl’évolutiondesvaleursdelaperteinsensibleeneau,dutauxd’hydratationcutanéeetdupH,aucoursdelasemained’induction,puisaucoursdelasemainederécupération,dessitestraitésetdessitestémoins,nontraités.

Le modèle de rupture chronique de la barrière cutanée étant un modèleéphémère,dontleslésionssemblenttendreversuneréparationspontanéerapide,nousavons décidé suite à l’analyse de la distribution de données, de comparerstatistiquement les valeursmesurées sur les sites traités et les sites témoinspour lestemps qui nous paraissaient graphiquement décisifs dans les 24 premières heures.L’analysegraphiquedel’évolutiondupHmetenrevancheenévidencedesdifférencesàpluslongterme.Nousétendonsdoncnosanalysesauxjourssuivants.Nousavonsdoncévaluélasignificativitédesdifférencesvisualiséeslorsdel’étudegraphique.

Préalablement, il a été nécessaire de créer desmatrices ergonomiques afin deretranscrirelesrésultatsdanslelangageadaptéaulogicielR.Unematricepourchaqueparamètreetchaquetempsestcréée.Pourchaquetypedemesure,PIE, tauxd’hydratationetpH,nousavonsdeuxsériesdevaleurs (des sites traitésetdes sites témoins)qui sontappariées.Nouspouvonsdonccomparer deux moyennes de séries appariées à une variable quantitative, avec uneffectifdecinqchevaux.Pourcela,deuxtestssontdisponibles:letesttdeStudentsilasériedesdifférencessuituneloinormale,letestnonparamétriquedesrangssignésde

75

Wilcoxonsilasériedesdifférencesnesuitpasuneloinormale.Ledegrédesignificationest fixé à 0,05. Ainsi les différences seront significatives si la p-value est inférieure à0,05. L’annexe5détaillelesscriptsutiliséssurR.III. Résultats

A. Rupturechroniquedelabarrièrecutanée

1. ObservationscliniquesLorsdelaphased’inductiondeJ-5àJ0tousleschevauxprésententlamêmeévolutionmacroscopique.

Figure31:AspectdelapeausaineàJ-5

Deslésionscutanéesapparaissentdèslespremièresséancesdetape-stripping.A

J-5, justeaprès l’applicationdespremiers strips,unaspect luisantde lapeauapparaîtainsiqu’unsuintement(fig32).Pour leschevauxà lapeaupeupigmentée laprésenced’unérythèmecutanéestaussimiseenévidence.

76

Figure32:AspectdelapeauàJ-5,aprèsl’applicationdesstrips

Aufuretàmesuredel’avancéedel’étudeetdel’applicationdesstrips,leslésions

s’intensifient.L’érythèmerestemarquéchez leschevauxàpeaupeupigmentéeetunedépigmentationapparaîtchezleschevauxàlapeaupluspigmentée(fig33).Lenombredestripsnécessairespourobtenirunaspectluisantdelapeauestdeplusenplusfaible.

Figure33:AspectdelapeauàJ-1

77

2. Histopathologie

a. Biopsiepeausaineavanttape-stripping

La figure 34 représente la structure normale de la peau d’un cheval. Lesdifférentes couches sont donc présentes. L’épiderme est composé de deux à troiscouches cellulaires, son épaisseur est doncnormale. Son indexdeprolifération est de4,5%.Lacouchecornée,composéedustratumdisjunctumetdustratumcompactumsontidentifiables, avec un aspect normal. Le derme est lui aussi dans les limites de lanormale.

Figure34:Coupedepeau,coloréeàl'HE,x100,obtenueaucoursdenosobservations

b. Critèresdenotationutiliséspourleslecturesdebiopsies

Une grille denotation est utilisée afin dequantifier des critères d’observations

précis, avec une note allant de 0 pour l’absence de lésion, à +++ pour une lésiond’intensitémaximale. En cequi concerne l’épiderme, nous avonsquantifié l’acanthose(épaisseurennombredecouchecellulaire),l’hyperkératose(épaississementdustratumcorneum), laprésencedecrêtesépithéliales, la spongiose (distensionœdémateusedesespaces intercellulaires). Pour le derme nous avons quantifié l’œdème et l’infiltratcellulaire.Pourcedernier,nousavonsétudiésonintensitéetsonaspect.L’ensembledesdonnéesestregroupédansl’annexe3.

78

c. Biopsiesàt0,aprèsletape-stripping,avantl’applicationdesproduitsétudiés

Desbiopsiesontétéréaliséeschezdeuxchevauxaprèssixjoursdetape-stripping

et avant l’application cutanée des produits. Cela correspond au moment où la perted’intégritédel’épidermeetl’inflammationdudermesontassimilablesàunealtérationchroniquedelabarrièrecutanée.

Les deux biopsies réalisées à t0 sont similaires. L’épiderme présente uneacanthose légère, la couche cornée est parakératosique (fig 35). La présence denombreusescrêtesépithélialestraduitlaproliférationintensedel’épiderme.

Figure35:Présencedeplagesdeparakératoseaprèsladernièreséancedetape-stripping,àt0,x250HE

L’infiltratinflammatoiredudermeestmarqué,composé,enmajorité,decellulesmononucléées (lymphocytes, histiocytes) et de quelques polynucléaires éosinophiles.Une coloration Luna a été réalisée sur les deux lames afin demettre en évidence lespolynucléaires éosinophiles. Ils se reconnaissent par leur couleur fuchsia due auxgranulations cytoplasmiques. On ne dénombre qu’un polynucléaire éosinophile demanièrecertainesurlesdeuxlamesobservées,confirmantainsileurfaiblenombre.

d. MarquagecellulaireKi67:indexdeprolifération

Le comptage cellulaire est détaillé précédemment. Les différentes valeurs sontregroupéesenannexe4. At0,nousavonssupposéquetouslessites,traitésoutémoins,présentaientunealtérationsimilairedelabarrièrecutanée.Eneffet,leprotocoledetape-strippingaétéréalisédemanièrestandardiséepourtouslessites.L’indexdeproliférationmoyenyesttrèsélevépuisqu’ilestégalà37%contre4,5%enpeausaine.

79

3. Perteinsensibleeneau

a. Etudedescriptivegraphique

Bien que les lésions créées se rapprochent des lésions créées lors d’unedermatose inflammatoire chronique, il ne faut pas oublier que ces chevaux sont enréalitédeschevauxsains.Larestaurationdelabarrièrecutanéeestdoncrapide,mêmeen l’absence d’application de réhydratant cutané. Au cours de la semaine d’induction,nousavonsréalisé lesmesuresavantetaprès lesstripschez leschevaux1,2et3afind’évaluerlamiseenplacedumodèled’altérationchronique.Onconstatealorsqu’en24heureslaplupartdeschevauxprésentaientdesvaleursdePIEinférieuresàcellesdelaveille.D’aprèslalittérature,lesvaleursdePIEsonttrèsreprésentativesdel’évolutiondelabarrière.NousnoussommesdoncbaséssurlaPIEpourévaluerlacréationdenotremodèle.

Graphique1:EvolutiondelaPIEchezlecheval3aucoursdelaphased’induction.

*:mesureavantlesstrips.

Cegraphiqueprésente l’évolutionde laPIEde lapeaudeschevauxavant (*)et

après les strips.Tous les chevauxprésentent lamême tendancegénérale.Celametenévidence larécupérationrapidede lapeaudeschevauxet lanécessitéd’appliquerdesstripspendantunesemaineafind’obtenirunmodèled’altérationchronique.

Notreobjectifétaitd’obtenirdesvaleursentre20et40g.m-2.h-1.LesvaleursmesuréesàJ0t0,c’estàdireaprèslesderniersstripsetavantlapremièreapplicationdesproduitssurchaquesitedechaquechevalsontregroupéesdansl’annexe2. On constate que les PIE, des sites traités et des sites témoins, sont bien dansl’intervallefixéprécédemment,voiresupérieurespourquelqueschevaux.

80

b. Etudestatistique

i. EtudedesdifférencesdevaleursdePIEàt0,aprèsletape-stripping,avantl’applicationdesproduits,entrelessitestraités,lessitestémoinsetlapeausaine

Nousavonsdécidédecomparer lesvaleursdePIE,dessites traitésetdessites

témoins, aux valeurs de PIE de la peau saine, à J0 t0, après le tape-stripping et avantl’applicationdesproduits.

Etant en présence de deux séries appariées, nous pouvons réaliser unecomparaisondesmoyennesdesdeuxgroupesdedonnées(PIEdessitestraitésouPIEdessitestémoinsetPIEenpeausaine)encomparant lamoyennedesdifférences(PIEsitestémoins-PIEpeausaineouPIEsitestémoins-PIEpeausaine)à0.

Afindechoisirleteststatistiquelesplusapproprié,nousavonsdansunpremiertempsétudiélatendancedesdonnéesàsuivreounonuneloinormale,àl’aidedutestdeShapiro-Wilk à l’aide du logiciel R. Celui-ci permet de tester l’hypothèse nulle selonlaquelleunéchantillonestissud’unepopulationnormalementdistribuée.Silavaleurdela p-value est supérieure à 0,05 (degré de significativité) alors nous acceptonsl’hypothèsenulleetladistributionsuituneloinormale.Inversement,silavaleurdelap-valueestinférieureà0,05,nousrejetonsl’hypothèsenulleetladistributionnesuitdoncpasuneloinormale. NousdétailleronsseulementlacomparaisondesPIEdusite1parrapportauxPIEenpeausaine.

LetestdeShapiro-Wilkaunep-valuede0,08724.Ladistributionsuitdoncuneloinormale.

Ainsi, nous utilisons le t test de Student. Il met en évidence une différencesignificativeavecunep-valuede0,000667.

Il existedoncunedifférence significativeentre lesPIEmesurées sur les sites1des5chevauxet lesvaleursdesPIEenpeausaine.Nouspouvonsdoncconclureàunealtérationsignificativedelapeaudessites1.

Les études de tous les sites nous permettent de conclure à des différencessignificativesentreslessitestraitésetlapeausaine,ainsiqu’entrelessitestémoinsetlapeausaine.

81

4. Tauxd’hydratation

a. Etudedescriptivegraphique

Nouspouvonsiciémettrelesmêmesobservationsquepourlaperteinsensibleeneau.Onconstate,qu’en24heures,laplupartdeschevauxprésententdesvaleursdeTHinférieuresàcellesdelaveille(graphique2).D’aprèslalittérature,letauxd’hydratationcutanée permet d’évaluer l’état d’altération de l’épiderme.Nous ne nous sommes pasbasés sur le tauxd’hydratationpour la créationdumodèlemais celui-cinousdonnaituneindicationquantàl’étatdustratumcorneum.

Graphique2:Evolutiondutauxd’hydratationcutanéeaucoursdelaphased’inductionchezlecheval2.*:mesureavant

lesstrips.

5. pH

Onconstatequ’en24heureslaplupartdeschevauxprésententdesvaleursdepHsupérieuresàcellesdelaveille(graphique3).L’évolutiondupHauseinde l’épidermeestpeudocumentéecommenousavonspu leconstater dans la partie I. Nous ne l’utiliserons pas ici pour évaluer le caractèred’altérationdelacouchecornée.

82

Graphique3:EvolutiondupHaucoursdelaphased’inductionchezlecheval1.*:mesureavantlesstrips.

B. Effetsdel’Allermyl®lotion

1. Observationscliniques

Aucoursde laphasederécupérationde J0 t0à J5, le site1était traitéavecdel’Allermyl®lotionetlesite5laissésanstraitement.L’étudedel’aspectmacroscopiquedes lésions cutanées nemet pas en évidence de différence d’évolution entre les sitestraitésetlessitestémoins.

2. Histopathologie

a. Biopsiesaprèsapplicationsquotidiennesduproduit

i. t0+48h

Lesdifférentesstructuresconserventunaspectnormal,quecesoitsur lessites

témoinsou lessitestraités.Aprèsdeux joursdetraitement,unedifférenced’évolutionde la restauration cutanée est présente entre les sites. Concernant l’épiderme,l’acanthose est toujoursprésentemaisplusmarquée sur les sites témoinsque sur lessitestraités,desbourgeonsépidermiquespersistant.Lacouchecornéeest,denouveau,présente,avecunaspectorthokératosiquepourlessitestraitésetlessitestémoins(fig36). La spongiose a disparu sur tous les sites traités, quelques foyers d’exocytosepersistentsurlessitestémoins.

83

Figure36:Acanthoseetorthokératose,x250,HE

Le derme suit la même tendance que l’épiderme. L’infiltrat inflammatoire,l’œdèmeetlacongestiondiminuentetrestentplusfaiblespourlessitestraitésquepourles sites témoins. L’infiltrat inflammatoire reste composé de lymphocytes etd’histiocytes.

ii. t0+96h

Après quatre jours de traitement, une différence d’évolution est toujours

présenteentrelessites.Concernantl’épidermel’acanthoserestestableetmarquéepourles sites témoins alors qu’elle est en nette amélioration pour les sites traités où lescouches cellulaires présentent un aspect régulier sur toute la longueur. Des foyersd’exfoliation, à kératine aérée ou compacte, sont observés pour les sites traités,contrairement aux sites témoinsqui présente toujoursunekératine aérée (fig 37). Laspongioseetl’exocytosesontabsentessurtouslessites.

Figure37:Foyersd’exfoliationorthocompacte(gauche)àorthonormale(droite),x100,HE

84

Ledermeprésentetoujoursuninfiltratinflammatoire,d’intensitéfaible,composédelymphocytesetd’histiocytes.

b. MarquagecellulaireKi67:Indexdeprolifération

Graphique4:Histogrammedesindexdeproliférationcalculésparjouretparsitetraitéàl’Allermyl®

A t0+48h, l’index de prolifération est plus faible au niveau des sites traités

(23,5%) par rapport aux sites témoins (30,25%). A t0+96h, l’index de proliférationdiminuenettementetestde11%pourlessitestraités,contre12,25%pourlestémoins.

Cependantquatre joursaprès la findesstrips les indexdeproliférationrestentau-dessus des valeurs en peau normale (4,5% enmoyenne) que ce soit sur les sitestraitésousurlessitestémoins.

c. ImmunomarquageCD3

Graphique5:HistogrammedunombredelymphocytesTcomptésparjouretparsitetraitéàl'AllermylÒ

85

Pour les sites témoins, nous remarquons que le nombre de lymphocytes T estsupérieur en peau altérée (t0) par rapport à la peau saine et continue d’augmenterjusqu’à t0+48h, malgré l’arrêt du tape-stripping. Cette arrivée progressive deslymphocytes T est conforme au schéma de l’inflammation dans lequel les cellulesmononuclééessontlesdernièresàarriversurlesiteinflammatoire.At0+96h,lenombrede lymphocytes T diminue, toujours en accord avec le schéma classique del’inflammation,pendantlaphasederésolution. Pour les sites traités à l’Allermyl® lotion, aucune tendance nette n’estmise enévidence.At0+96h, les lymphocytesTsontprésentsennombreimportant,sansdouteenlienavecl’applicationduproduit.

3. Perteinsensibleeneau

a. PIEcorrigée

LorsdesexpérimentationsdesvaleursdePIEontétémesuréestouslesjoursenpeausaine,enpeautraitée(site1)ettémoin(site5).DesvariationsdelavaleurbasaledePIEenpeausaineontétérelevéesd’unjouràl’autre,variantentre6,3et33,2g.m-2.h-1. Cela peut être expliqué par les variations de température et d’hygrométrie, lesexpériencesétantréaliséesàl’extérieur.Onremarque,eneffet,surlegraphique6,quelorsque l’hygrométrieaugmente, laPIEbasalediminueet inversement.Nousvérifionscelasurlaplupartdeschevaux.

Graphique6:SuividelaPIEenpeausaineetdel’hygrométrieambiantesurlecheval1

86

Pours’affranchirdesbiaisengendréspar lesconditionsclimatiques,unevaleurde«PIEcorrigée»aétécalculée,defaçonsuivante:

"6789:;;<=é>(@)" = 678(@)678C(@)PIE(t)=PIEmesuréesurlesiteconcernéàl’instanttPIEs(t)=PIEmesuréeenpeausaineàl’instantt

b. EtudedescriptivegraphiquePourchaquecheval,ungraphiquereprésentantl’évolutiondelaPIEcorrigéeen

fonctiondu tempssur lesite traité«site1» (courbebleue)et lesite témoin«site5»(courbe rouge) a été tracé grâce au logiciel Excel. Un graphique regroupant lesmoyennesdesPIEdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

Ilnousparaîtplusintéressantdesefocalisersurlacourbemoyenneetd’étudierainsi latendancegénérale,plutôtquelescourbeschevalparcheval.Eneffetdufaitdesensibilités individuelles au produit, les courbes individuelles ne semblent pasreprésentativesdel’effetduproduit.

Onremarquequeà t0+1h30, laPIEmoyennesur lessites traitésestnettement

inférieure à la PIE sur les sites témoins. La courbemoyenne des sites traités décroîtainsiplusrapidementquelacourbemoyennedessitestémoins.Leproduitsembledoncavoirunimpactsurlarécupérationdelabarrièrecutanéedanslespremièresheuressuivantssonapplication.

Apartirdet0+24h,aucunetendancegénéralenesemblesedégagerparlasuite.

87

c. Etudestatistique

Uneétudestatistiqueest réaliséeafind’étudier la significativitédesdifférencesobservéesgrâceàl’étudedescriptive.

Il est à noter que nous nous assurons graphiquement et statistiquementqu’aucunedifférencesignificativen’existeentrelesvaleursdesPIEàJ0t0entrelessitestraitésetlessitestémoins.

i. Etude de l’évolution des valeurs de PIE tout au

longdel’étude

Uneétude longitudinaleest, ici,d’uneutiliténégligeablepuisque lemodèlequenousutilisonspourétudierlabarrièrecutanéeestunmodèleexpérimentalmisenplacesurdes chevaux sains.Ainsi commenous avonspu l’observerprécédemment, la peauretrouvesescaractéristiquesnormalesrapidement.

Graphique7:EvolutiondelaPIEenfonctiondutempschezles5chevaux(Allermyl®).Courbebleue=site1,courberouge=site5

88

Nousavonsvouludémontreruneéventuelledifférencesignificativedanslarestaurationde la barrière cutanée lors de l’application du produit Allermyl® lotion. Une étudestatistique des différences mises en évidence au cours de l’étude graphique à t+24hentre les sites traités et les sites témoins, semble la plus appropriée. Nous avonsremarquéaucoursdel’étudegraphiquequelesvariationslesplusmarquéesdesvaleursdePIEsetrouvaiententret0ett0+1h30. AinsinouseffectueronsdestestsdecomparaisonsdesmoyennesdesvaleursdePIE(sursitestraitésetsitestémoins)calculéesauxtempsquinousparaissentjudicieux,indépendammentdelacinétiquedelacourbequiaétédécrite.

ii. EtudedesdifférencesdevaleursdePIEàt0+1h30

Nousavonsdécidédecomparerlesvaleursde«PIEcorrigée»dessitestraitéset

dessitestémoinsàt0+1h30.Etant en présence de deux séries appariées, nous pouvons réaliser une

comparaisondesmoyennesdesdeuxgroupesdedonnées (PIEdes sites traitésetPIEdes sites témoins) en comparant lamoyennedes différences (PIE sites témoins – PIEsitestraités)à0.

Nous réalisons ici lesmêmes tests vus précédemment: le test de ShapiroWilkpourtesterlanormalitédeladifférencepuisuntestnonparamétriquedesrangssignésdeWilcoxonouuntesttdeStudent.

Ici, le testdeShapiro-Wilkdonneunep-valuede0,001854. Ladistributionnesuitdoncpasuneloinormale.

Ainsi nous réalisons le test non paramétrique des rangs signés de Wilcoxon.Celui-cinepermetpasdeconclurequantàunedifférencesignificativeavecunep-valuede 1. Nous ne pouvons donc pas conclure à une efficacité significative du produitAllermyl® lotion sur la restaurationde labarrière cutanée, à1h30d’utilisation.NousdiscuteronsdecesrésultatsdanslapartieIII-Discussion.

4. Tauxd’hydratation

a. THcorrigé

NousavonsappliquélamêmecorrectionquepourlesvaleursdePIE.Eneffetdesvaleursd’hydratationcutanéeontétéégalementmesuréesenpeausainetouslesjours.Desvariationsdesvaleursbasalesenpeausaineontaussiétémiseenévidence.

89

Ainsi pour éviter ce biais, une valeur de «taux d’hydratation corrigé» estcalculée:

"DE9:;;<=é(@)" = DE(@)DEC(@)TH(t)=THmesurésurlesiteconcernéàl’instanttTHs(t)=THmesuréenpeausaineàl’instantt

b. Etudedescriptivegraphique

Pour chaque cheval, ungraphique regroupant l’évolutiondu tauxd’hydratationcorrigéaucoursdu tempssur le site traité, «site1» (courbebleue)et le site témoin,«site5»(courberouge)estréaliséeaveclelogicielExcel.UngraphiqueregroupantlesmoyennesdesTHdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

LescourbesdesTHmoyenspourlessitestraitésetlessitestémoinsprésententlamêmetendance.Ellessuiventlamêmedécroissanceetseconfondent. Il est intéressant de noter que les courbes suivent une phase de fortedécroissanceentret0ett0+24h,cettedécroissanceralentitetenfinsestabilisepourlesjourssuivants.

90

Graphique8:EvolutionduTHenfonctiondutempschezles5chevaux(Allermyl®).Courbebleue=site1,courberouge=

site5

c. Etudestatistique

Aucuneétudestatistiquen’aétéréaliséedufaitdel’absencededifférencenotable

descourbesentreelles.NousenreparleronsdanslapartieIII-Discussion

5. pH

Contrairementà laPIEetauTH,nousnecalculonspas icide«pHcorrigé».Eneffet, la bibliographie ne nous donne aucun élément nous laissant suspecter uneinfluencedesconditionsd’ambiancesurlavaleurdupH.

a. Etudedescriptivegraphique

Pour chaque cheval, un graphique regroupant l’évolution du pH au cours dutemps sur le site traité, «site 1» (courbe bleue) et le site témoin, «site 5» (courbe

91

rouge)estréaliséeaveclelogicielExcel.UngraphiqueregroupantlesmoyennesdespHdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

Dans le cas de l’Allermyl® lotion, les graphiques ne semblent pasmontrer decohérenceparticulière.Nousavonspréférénepasallerplusloindanslesinterprétationspuisquelescourbessemblentsuivreunetendancedifférente.

b. Etudestatistique

Aucuneétudestatistiquen’aétéréaliséedufaitdel’absencededifférencenotable

descourbesentreelles.NousnousintéresseronsaufacteurpHpourd’autresproduits,quisemblealors

montrerdesdifférencessignificatives.

Graphique9:EvolutiondupHenfonctiondutempschezles5chevaux(Allermyl®).Courbebleue=site1,courberouge=site5

92

C. Effetsdel’Allerderm®spot-on1. Observationscliniques

Aucoursde laphasederécupérationde J0 t0à J5, le site2était traitéavecde

l’Allerderm® spot-on et le site 5 laissé sans traitement. L’étude de l’aspectmacroscopiquedes lésions cutanéesnemetpas enévidencededifférenced’évolutionentrelessitestraitésetlessitestémoins.

2. Histopathologie

a. Biopsiesaprèsapplicationsquotidiennesduproduit

i. t0+48h

Lesdifférentesstructuresconserventunaspectnormal,quecesoitsur lessites

témoinsou lessitestraités.Aprèsdeux joursdetraitement,unedifférenced’évolutionde la restauration cutanée est présente entre les sites. Concernant l’épiderme,l’acanthoseesttoujoursprésente,plusmarquéepourlessitestémoinsquepourlessitestraités, des crêtes épithéliales étant observées en quantité faible. La couche cornéeprésenteuneorthokératose avecquelques foyersdeparakératose.De la spongiose sedistinguesurlessitestraités(fig38).

Figure38:Spongiose,x250,HE

Le derme suit la même tendance que l’épiderme. L’état inflammatoire estidentiquepourlessitestraitésetlessitestémoins,avecdel’œdèmeetdelacongestion,etuninfiltratcellulairecomposédelymphocytesetd’histiocytes.

ii. t0+96h

Après quatre jours de traitement, une différence d’évolution est toujoursprésenteentrelessites.Concernantl’épiderme,l’acanthoseépidermiquerestemarquée.Lacouchecornéeresteorthokératosique.Laspongioseestennetteamélioration.

93

Le derme présente toujours un aspect inflammatoire, d’intensité faible, sansœdème.

b. MarquagecellulaireKi67:Indexdeprolifération

Graphique10:Histogrammedesindexdeproliférationcalculésparjouretparsitetraitéàl’Allerderm®

A t0+48h, l’index de prolifération est plus faible au niveau des sites traités

(25,25%) par rapport aux sites témoins (30,25%). A t0+96h, l’index de proliférationdiminuenettementetestde13%pourlessitestraités,contre12,25%pourlestémoins.Demême,quatrejoursaprèslafindesstrips,lesindexdeproliférationdessitestraitésetdessitestémoinsrestentau-dessusdesvaleursenpeaunormale(4,5%enmoyenne).

c. ImmunomarquageCD3

Graphique11:HistogrammedunombredelymphocytesTcomptésparjouretparsitetraitéàl’Allerderm®

94

Pour les sites témoins, nous pouvons faire les mêmes observations que pourl’Allermyl®lotion.

Pourlessitestraitésàl’Allerderm®spot-on,aucunetendancenetten’estmiseenévidence.At0+96h, les lymphocytesTsontprésentsennombreimportant,sansdouteenlienavecl’applicationduproduit.

3. Perteinsensibleeneau

a. PIEcorrigée

Nous calculons, commedans l’étudede l’effetde l’Allermyl® lotion, les valeursdesPIEcorrigéesselonlamêmeformule.

b. Etudedescriptivegraphique

Pourchaquecheval,ungraphiquereprésentantl’évolutiondelaPIEcorrigéeenfonctiondu tempssur lesite traité«site2» (courbebleue)et lesite témoin«site5»(courbe rouge) a été tracé grâce au logiciel Excel. Un graphique regroupant lesmoyennesdesPIEdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

Les courbes des PIE moyennes pour les sites traités et pour les sites témoinssuiventlesmêmesvariationsetseconfondent.

95

c. Etudestatistique

Aucuneétudestatistiquen’aétéréaliséedufaitdel’absencededifférencenotable

descourbesentreelles.

4. Tauxd’hydratation

a. THcorrigé

Nous calculons, commedans l’étudede l’effetde l’Allermyl® lotion, les valeursdesTHcorrigésselonlamêmeformule.

Graphique12:EvolutiondelaPIEenfonctiondutempschezles5chevaux(Allerderm®).Courbebleue=site2,courberouge=site5

96

b. Etudedescriptivegraphique

Pour chaque cheval, un graphique représentant l’évolution du TH corrigé enfonctiondu tempssur lesite traité«site2» (courbebleue)et lesite témoin«site5»(courbe rouge) a été tracé grâce au logiciel Excel. Un graphique regroupant lesmoyennesdesPIEdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

Entre t0 et t0+1h30,nouspouvonsobserveruneaugmentationde la valeurdutauxd’hydratationmoyendes sites traités. Cependant cela semble lié à une valeurdetauxd’hydratationtrèsélevéepourlecheval1.

A partir de t0+1h30, nous pouvons réaliser les mêmes observations que pourl’Allermyl®lotion.

LescourbesdesTHmoyenspourlessitestraitésetpourlessitestémoinssuiventlamêmedécroissanceetseconfondent.

Graphique13:EvolutionduTHenfonctiondutempschezles5chevaux(Allerderm®).Courbebleue=site2,courberouge=site5

97

c. Etudestatistique

Aucuneétudestatistiquen’aétéréaliséedufaitdel’absencededifférencenotabledescourbesentreelles.

5. pH

a. Etudedescriptivegraphique

Pour chaque cheval, un graphique regroupant l’évolution du pH au cours du

temps sur le site traité, «site 2» (courbe bleue) et le site témoin, «site 5» (courberouge)estréaliséeaveclelogicielExcel.UngraphiqueregroupantlesmoyennesdespHdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

Toutaulongdel’étude,lepHmoyendessitestraitésestinférieuràceluidessites

sains,sanspourautantmontrerdegrandesdifférences.

Graphique14:EvolutiondupHenfonctiondutempschezles5chevaux(Allerderm®).Courbebleue=site2,courberouge=site5

98

b. Etudestatistique

Aucuneétudestatistiquen’aétéréaliséedufaitdel’absencededifférencenotabledescourbesentreelles.

D. Effetsdel’Humiderm®

1. Observationscliniques

Aucoursde laphasederécupérationde J0 t0à J5, le site3était traitéavecdel’Humiderm®etlesite5laissésanstraitement.L’étudedel’aspectmacroscopiquedeslésionscutanéesnemetpasenévidencededifférenced’évolutionentrelessitestraitésetlessitestémoins.

2. Histopathologie

a. Biopsiesaprèsapplicationsquotidiennesdu

produit

i. t0+48hLesdifférentesstructuresconserventunaspectnormal,quecesoitsur lessites

témoinsou lessitestraités.Aprèsdeux joursdetraitement,unedifférenced’évolutionde la restauration cutanée est présente entre les sites. Concernant l’épiderme,l’acanthoseesttoujoursprésente,beaucoupplusmarquéepourlessitestémoinsquelessites traités, des bourgeons épidermiques persistant en quantité modérée. La couchecornéeprésenteunétatd’orthokératose,associéeàquelquesfoyersdeparakératose.Laspongioseestquasimentabsente.

Ledermesuitlamêmetendancequel’épiderme.L’étatinflammatoireestmoins

marquépourlessitestraitésquepourlessitestémoins.

ii. t0+96h Après quatre jours de traitement, une différence d’évolution est toujoursprésente entre les sites. Concernant l’épiderme, l’aspect de l’épiderme est quasimentnormal. L’acanthose épidermique est très faible pour les sites traités et, par endroits,nousnotonsdesfoyersd’exfoliation.

Le derme présente toujours un infiltrat inflammatoire discret, composé delymphocytes,histiocytesetdequelquespolynucléaireséosinophiliques.

99

b. MarquagecellulaireKi67:indexdeprolifération

Graphique15:Histogrammedesindexdeproliférationcalculésparjouretparsitetraitéàl’Humiderm®

A t0+48h, l’index de prolifération est plus faible au niveau des sites traités

(24,8%) par rapport aux sites témoins (30,25%). A t0+96h, l’index de proliférationdiminue nettement et est de 8,25% pour les sites traités, contre 12,25% pour lestémoins.Ilestànoterquel’Humiderm®possèdel’indexdeproliférationleplusfaibleàt0+96hparmilesquatreproduitstestés.Demême,quatrejoursaprèslafindesstrips,lesindexdeproliférationdessitestraitésetdessitestémoinsrestentau-dessusdesvaleursenpeaunormale(4,5%enmoyenne).

c. ImmunomarquageCD3

Graphique16:HistogrammedunombredelymphocytesTcomptésparjouretparsitetraitéàl’Humiderm®

Pour les sites témoins, nous pouvons faire les mêmes observations que pourl’Allermyl®lotion.

100

Pour les sites traités à l’Humiderm®, aucune tendance nette n’est mise enévidence.At0+96h, les lymphocytesTsontprésentsennombreimportant,sansdouteenlienavecl’applicationduproduit.

3. Perteinsensibleeneau

a. PIEcorrigée

Nous calculons, commedans l’étudede l’effetde l’Allermyl® lotion, les valeursdesPIEcorrigéesselonlamêmeformule.

b. Etudedescriptivegraphique

Pourchaquecheval,ungraphiquereprésentantl’évolutiondelaPIEcorrigéeenfonctiondu tempssur lesite traité«site3» (courbebleue)et lesite témoin«site5»(courbe rouge) a été tracé grâce au logiciel Excel. Un graphique regroupant lesmoyennesdesPIEdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

Les courbes des PIE moyennes pour les sites traités et pour les sites témoinssuiventlesmêmesvariationsetseconfondent.

101

c. Etudestatistique

Aucuneétudestatistiquen’aétéréaliséedufaitdel’absencededifférencenotable

descourbesentreelles.

4. Tauxd’hydratation

a. THcorrigé

Nous calculons, commedans l’étudede l’effetde l’Allermyl® lotion, les valeursdesTHcorrigésselonlamêmeformule.

Graphique17:EvolutiondelaPIEenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®).Courbebleue=site3,courberouge=site5

102

b. Etudedescriptivegraphique

Pour chaque cheval, un graphique représentant l’évolution du TH corrigé enfonctiondu tempssur lesite traité«site3» (courbebleue)et lesite témoin«site5»(courbe rouge) a été tracé grâce au logiciel Excel. Un graphique regroupant lesmoyennesdesPIEdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

Nouspouvonsréaliserlesmêmesobservationsquepourl’Allermyl®lotion.LescourbesdesTHmoyenspour lessites traitéset lessites témoinssuivent la

mêmedécroissanceetseconfondent. Il est intéressant de noter que les courbes suivent une phase de fortedécroissanceentret0ett0+24h,cettedécroissanceralentitetenfinsestabilisepourlesjourssuivants.

Graphique18:EvolutionduTHenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®).Courbebleue=site3,courbe

rouge=site5

103

c. Etudestatistique

Aucuneétudestatistiquen’aétéréaliséedufaitdel’absencededifférencenotabledescourbesentreelles.

5. pH

a. Etudedescriptivegraphique

Pour chaque cheval, un graphique regroupant l’évolution du pH au cours du

temps sur le site traité, «site 3» (courbe bleue) et le site témoin, «site 5» (courberouge)estréaliséeaveclelogicielExcel.UngraphiqueregroupantlesmoyennesdespHdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

Entret0ett0+1h30,lepHmoyendiminuerapidementetestinférieurauxvaleursdessites témoins.Cettedifférences’annuleà t0+8h.Enrevanche,plus lesapplicationsd’Humiderm®sepoursuivent,pluslepHdevientacide,etrestenettementinférieuraupHdessitestémoins.

104

Graphique19:EvolutiondupHenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®).Courbebleue=site3,courbe

rouge=site5

b. Etudestatistique

Nous avons décidé de comparer les valeurs de pHdes sites traités et des sites

témoinsàt0+24h.Nousprocédonsaumêmeraisonnementqueprécédemment.

v t0+24h

Le test de Shapiro-Wilk nous permet une nouvelle fois de conclure à unedistributionnormaledesdonnéesavecunep-valuede0,11.

Nous utilisons alors le t test de Student, qui révèle unep-valuede0,004664signifiantalorsunedifférencesignificativeentrelepHsurlessitestraitésetlepHsurlessitestémoins.

Il existe doncun effet acidifiant de l’Humiderm®,24heures après la premièreapplicationduproduit.

105

Même s’il n’est pas recommandé lors d’études statistiques de décomposer lesséries et de multiplier les tests, nous avons réalisé cette comparaison statistique autempst0+1h30etJ3.

v t0+1h30Dansunpremiertemps,letestdeShapiroWilk,avecunep-valuede0,3811nous

permetdeconclurequeladistributionsuituneloinormale.Ainsi, nous utilisons le t test de Student. Il met en évidence une différence

significativeavecunep-valuede0,01125.Il existe donc un effet acidifiant de l’Humiderm®, 1h30 après l’application

cutanée.

v J3Dansunpremiertemps,letestdeShapiroWilk,avecunep-valuede0,4305nous

permetdeconclurequeladistributionsuituneloinormale.Ainsi, nous utilisons le t test de Student. Il met en évidence une différence

significativeavecunep-valuede0,006664.Ilexistedoncuneffetacidifiantde l’Humiderm®,trois joursaprès l’application

cutanée.

Enconclusion,ladifférencedepHestsignificativedansles24premièresheures,avecuneactionplusmarquéedanslespremièresheures.Ellenel’estplusàJ2.Ensuite,àpartirdu3èmejourd’application,ladifférencedepHredevientsignificative.

106

E. EffetsduDermacool®1. Observationscliniques

Aucoursde laphasederécupérationde J0 t0à J5, lesite4était traitéavecdu

Dermacool®et le site5 laissé sans traitement.L’étudede l’aspectmacroscopiquedeslésionscutanéesnemetpasenévidencededifférenced’évolutionentrelessitestraitésetlessitestémoins.

2. Histopathologie

a. Biopsiesaprèsapplicationsquotidiennesduproduit

i. t0+48h

Lesdifférentesstructuresconserventunaspectnormal,quecesoitsur lessites

témoinsou lessitestraités.Aprèsdeux joursdetraitement,unedifférenced’évolutionde la restauration cutanée est présente entre les sites. Concernant l’épiderme,l’acanthose est toujours présente, beaucoupmoinsmarquée pour les sites traités quepourlessitestémoins.Lesbourgeonsépidermiquessontabsentssurlessitestraités.Lacouche cornée est présente, avec quelques foyers de parakératose et un débutd’exfoliation, pour les sites traités. La spongiose a disparu sur tous les sites traités,quelquesfoyersd’exocytosepersistentsurlessitestémoins.

Ledermesuitlamêmetendancequel’épiderme.L’étatinflammatoireestmoinsmarqué pour les sites traités que pour les sites témoins, avec un infiltrat cellulairediscret,composédelymphocytesetd’histiocytes.L’œdèmeetlacongestiondiminuentetsontplusmarquéssurlessitestémoins.

ii. t0+96h

Après quatre jours de traitement, une différence d’évolution est toujoursprésente entre les sites. Concernant l’épiderme, l’acanthose a disparu pour les sitestraités mais persiste pour les sites témoins. La couche cornée est complète, avec unstratumcompactumet un stratumdisjunctumd’aspect normal,malgré quelques foyersdeparakératose(fig39),contrairementauxsites témoinsquiprésentent toujoursuneorthokératose. Il est à noter qu’un cheval présente plusieurs pustules asséchées ensurfacedel’épiderme.

107

Figure39:Foyerdeparakératoseetœdèmeduderme,x250,HE

Le derme présente toujours un aspect inflammatoire ainsi qu’un œdème, plus

marquéspourlessitestraités,avecuninfiltratcomposédelymphocytes,d’histiocytesetdepolynucléaireséosinophiles.

b. MarquagecellulaireKi67:Indexdeprolifération

Graphique20:HistogrammedesindexdeproliférationcalculésparjouretparsitetraitéauDermacool®

A t0+48h, l’index de prolifération est plus faible au niveau des sites traités

(23,5%) par rapport aux sites témoins (30,25%). En revanche, à t0+96h, l’index deprolifération est supérieur pour les sites traités (15,75%), contre 12,25% pour lestémoins.

De même que pour l’Allermyl® lotion, quatre jours après la fin des strips lesindex de prolifération restent au-dessus des valeurs en peau normale (4,5% enmoyenne)quecesoitsurlessitestraitésousurlessitestémoins.

108

c. ImmunomarquageCD3

Graphique21:HistogrammedunombredelymphocytesTcomptésparjouretparsitetraitéauDermacoolÒ

Pour les sites témoins, nous pouvons faire les mêmes observations que pourl’Allermyl®lotion. Pour les sites traités au Dermacool®, les valeurs obtenues à t0+48h sont trèssupérieures aux valeurs des sites témoins. Ceci pourrait être lié à l’inflammationobservéecliniquementetàl’examenhistopathologique,bienqu’àdestempsdifférents,etsuggèreuneactionirritantetemporaireduDermacool®,surpeaualtérée.

3. Perteinsensibleeneau

a. PIEcorrigée

Nous calculons, commedans l’étudede l’effetde l’Allermyl® lotion, les valeursdesPIEcorrigéesselonlamêmeformule.

b. Etudedescriptivegraphique

Pourchaquecheval,ungraphiquereprésentantl’évolutiondelaPIEcorrigéeenfonctiondu tempssur lesite traité«site4» (courbebleue)et lesite témoin«site5»(courbe rouge) a été tracé grâce au logiciel Excel. Un graphique regroupant lesmoyennesdesPIEdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

OnremarquequelacourbemoyennedesPIEdécroitlégèrementplusrapidemententret0ett0+1h30.

Demême, après t0+24h, cettemême courbene semblepas suivrede tendanceparticulière.

109

c. Etudestatistique

Aucuneétudestatistiquen’aétéréaliséedufaitdel’absencededifférencenotable

descourbesentreelles.

4. Tauxd’hydratation

a. THcorrigé

Nous calculons, commedans l’étudede l’effetde l’Allermyl® lotion, les valeursdesTHcorrigésselonlamêmeformule.

Graphique22:EvolutiondelaPIEenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®).Courbebleue=site4,courberouge=site5

110

b. Etudedescriptivegraphique

Pour chaque cheval, un graphique représentant l’évolution du TH corrigé enfonctiondu tempssur lesite traité«site4» (courbebleue)et lesite témoin«site5»(courbe rouge) a été tracé grâce au logiciel Excel. Un graphique regroupant lesmoyennesdesPIEdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé.

Nouspouvonsréaliserlesmêmesobservationsquepourl’Allermyl®lotion;LescourbesdesTHmoyenspourlessitestraitésetpourlessitestémoinssuivent

lamêmedécroissanceetseconfondent. Il est intéressant de noter que les courbes suivent une phase de fortedécroissanceentret0ett0+24h,cettedécroissanceralentitetenfinsestabilisepourlesjourssuivants.

Graphique23:EvolutionduTHenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®).Courbebleue=site4,courberouge=site5

111

c. Etudestatistique

Aucuneétudestatistiquen’aétéréaliséedufaitdel’absencededifférencenotabledescourbesentreelles.

5. pH

a. Etudedescriptivegraphique

Pour chaque cheval, un graphique regroupant l’évolution du pH au cours dutemps sur le site traité, «site 4» (courbe bleue) et le site témoin, «site 5» (courberouge)estréaliséeaveclelogicielExcel.UngraphiqueregroupantlesmoyennesdespHdessitestraitésetdessitestémoins,enfonctiondutempsestaussiréalisé. Globalement,lepHdessitestraitésresteinférieuraupHdessitestémoinspourtousleschevaux.CelaseconfirmeaussiaveclacourbemoyennedupH Entret0ett0+1h30,lepHmoyendiminuerapidementetestinférieurauxvaleursdes sites témoins. Cette différence s’annule à t0+8h. Par la suite, plus les joursd’applicationdeDermacool®sepoursuivent,pluslepHretrouvedesvaleursacides,etrestenettementinférieuraupHdessitestémoins.

112

b. Etudestatistique

Nous avons décidé de comparer les valeurs de pHdes sites traités et des sites

témoinsàt0+24h.Nousprocédonsaumêmeraisonnementqueprécédemment.

v t0+24h

Le test de Shapiro-Wilk nous permet une nouvelle fois de conclure à unedistributionnormaledesdonnéesavecunep-valuede0,1748.

Nousutilisons alors le t testde Student, qui révèleunep-valuede0,0009638signifiantalorsunedifférencesignificativeentrelepHdessitestraitésetlepHdessitestémoins.

LeDermacool®auneffetsurlepH,acidifiant,dès24heuresaprèsapplication.

Graphique24:EvolutiondupHenfonctiondutempschezles5chevaux(Dermacool®).Courbebleue=site4,courberouge=site5

113

Même s’il n’est pas recommandé lors d’études statistiques de décomposer les

séries et de multiplier les tests, nous avons réalisé cette comparaison statistique autempst0+1h30etJ3.

v t0+1h30Dansunpremier temps, le test de ShapiroWilk, avecunep-value de0,06805

nouspermetdeconclurequeladistributionsuituneloinormale.Ainsi, nous utilisons le t test de Student. Il met en évidence une différence

significativeavecunep-valuede0,002969.IlexistedoncunedifférencesignificativedupHentrelessitestraitésetlessites

témoinsdès1h30aprèsl’applicationcutanée.

v J3Dansunpremiertemps,letestdeShapiroWilk,avecunep-valuede0,6006nous

permetdeconclurequeladistributionsuituneloinormale.Ainsi, nous utilisons le t test de Student. Il met en évidence une différence

significativeavecunep-valuede0,009825.IlexistedoncunedifférencesignificativedupHentrelessitestraitésetlessites

témoinstroisjoursaprèsl’applicationcutanée.

Enconclusion,ladifférencedepHestsignificativedansles24premièresheures,avecuneactionplusmarquéedanslespremièresheures.Ellenel’estplusàJ2.Ensuite,àpartirdu3èmejourd’application,ladifférencedepHredevientsignificative.

114

115

PARTIEIII:DISCUSSION

I. Lesmanipulationssurleschevaux

A. Echantillonnage

Notre étude ne comporte que cinq chevaux et cinq sites par cheval.Malgré cefaible nombre, des résultats significatifs (p<0,05) sont mis en évidence. Il estdifficilement envisageable d’effectuer les mêmes manipulations sur un nombre plusimportantsdechevaux.Eneffet,afindes’affranchirdesfacteursdevariationsexternes(température et hygrométrie), l’idéal est de réaliser toutes les expériences dans untempsleplusréduitpossible.Or,dansnotrecas,déjàlesmanipulationsontnécessité,enmoyenne,quatreheuresparjour.

Nousavonssélectionnéunlothomogènedechevaux:chevauxdeselle,deformatéquivalent,hongresetâgésde4à25ans.Celanousapermisdelimiterlesfacteursdevariationsintrinsèques.Pourallerplusloin,ilpourraitêtreenvisageabled’étendrecetteétudeàdeschevauxderacesdifférentes,desexesdifférents…

B. Choixdessites

Cinqsitesontétéchoisisparcheval.Laplupartétantbiopsiésaucoursdel’étude,les sitesdevaientêtre suffisammentgrandspourcontinueret finirnosmesuresaprèslesbiopsies.

L’optiondeplacer lessitessur l’encolureaétéécartéecardeuxdeschevauxdel’étudeprésentaientdes lésionscutanéesdecetterégion.Deplus, lesmanipulations,àsavoir laréalisationdesstripsetdesmesures,nécessitaientuneimmobilitédessujets,point critique au niveau de l’encolure.Notre choix de localisation des sites s’est doncportéauniveaudel’épaule.Celanousaoffertunegrandesurfaceplanesurlaquellenosappareils demesures pouvaient s’adapter facilement. Seule la scapula pouvait parfoisnousgênerlorsdenosmesureslorsdesmouvementsdeschevaux.D’unpointdevuesécuritédesmanipulateurs,lechoixdel’épaulenouspermetd’éviterlescoupsdepieds.

C. Problèmesdusauxsujets

Ils’agitd’animauxdegrandetaille,plusoumoinséduquésetdontlacontentionn’est pas toujours aisée. Or, pour le VapoMeter® ainsi que le pH-mètre, lesmesuresdoivent se faire sur un animal immobile. Certaines prises de mesures ont dû êtrerecommencées plusieurs fois. Les chevaux étant au box pendant les deux semainesd’expérience,seuledel’acépromazine(Vetranquil®Granulés1%)estadministréeper

116

os, dans la ration, le matin. L’acépromazine a été utilisée, à dose faible, car aucunedonnée n’indique un effet sur l’inflammation et les mécanismes de réparation de labarrièrecutanée.Deplus,chaquechevalétantsonpropretémoin,unéventueleffetdel’acépromazines’exerceraitàlafoissurlessitestraitésetlessitestémoins.Pourévitertoutstresssupplémentaire,leschevauxonttoujoursétémanipulésdanslemêmeordre,au même moment de la journée. Afin de limiter les mouvements intempestifs desanimaux, il est donc conseillé de choisir des chevaux peu stressés, patients, et ayantl’habituded’êtremanipulés.

D. Paramètresd’ambiance:hygrométrieettempérature

Noscinqchevauxviventhabituellementaupré,maisonttousétérentrésauboxle temps des expériences. Ceci nous a permis principalement de nous affranchir desmodificationsclimatiques,enparticulier lapluieet les fortes températures.Eneffet lapluieprésenteprincipalementlerisqued’enlevernosproduitsappliquéssurlapeaudeschevaux. Une forte chaleur implique quant à elle les risques de transpiration deschevaux, facteurspouvantmodifier lapénétrationdesproduitsmais surtout ayantunfortimpactsurnosmesures.

Les boxes, situés à l’ombre dans un grand hangar, nous ont donc permis delimiter ces risques. Cependant, les manipulations ont quand même été réalisées enextérieur semi-couvert. Nous étions dépendant de la météo, en particulier de latempérature et de l’humidité. Nous confirmons l’influence de ces valeurs sur la perteinsensible en eau. Quand l’hygrométrie augmente, la PIE diminue, par faute dedifférenced’humiditédanslachambredel’appareildemesure.

Nous avons eu la chance, cependant, de bénéficier de conditions climatiquesassezconstantespendantnotrepérioded’expériences.Lesmanipulationsayanteulieuenété,où les journéesontdoncde fortesamplitudesdevariationde température, lesexpériences ont toujours été réalisées le matin. Cela nous a permis de bénéficier detempératuresquin’étaientpastropchaudesetlimitait,parlamêmeoccasion,lefacteurtranspiration.

E. Etablissementdumodèlederupturechroniquedelabarrièrecutanée

Nousavonsdécidéd’altérerlabarrièrecutanéeparlaméthodedetape-stripping

uniquement,ennousaidantdesprotocolesmisaupointparChristelFeydydanslecadredesathèsesurl’étudedelabarrièrecutanéechezleschevaux(Feydy,2012).

Pourestimerl’altérationdelabarrière,nousavonschoisiunintervalledevaleurs

à atteindre au cours de la phase d’induction. Nous aurions pu aussi arbitrairement

117

effectuerlemêmenombredestripssurtouslessites,maiscelaimpliquaitdeprendrelerisqued’avoirdesvariationsindividuellesouliéesaumanipulateur.Lenombredestripsnécessairespouraltérer la couche cornéeaétédéterminéà l’aided’un critèrevisuel:aspect luisantde lapeau,dépendantainsidechaquecheval.L’objectifétaitd’atteindredes valeurs comprises entre 20 et 40 g. m-2. h-1. Nous pouvons remarquer que cesvaleursontétéatteintespourtous leschevaux,voiredépassées.Notrechoixauraitpuaussiseportersurletauxd’hydratation,quenousavonsaussimesuréaucoursdecetteétude, celui-ci reflétant aussi l’intégrité cutanée (Hester et al., 2004). Cependant, peud’étudesl’utilisentpourunsuivisurplusieursjoursetpeudedonnéesdocumententlesvaleursseuilsàatteindredanslecasd’unealtérationchronique.

Le tape-stripping est influencé par de nombreux facteurs que nous avonsdéveloppés dans la première partie. Il est donc nécessaire de standardiser cetteopération. Le manipulateur représente le plus grand facteur de variations. Ici, lesmanipulations étant très longues, quatre opérateurs se sont relayés pour réaliser lesstrips.L’idéalauraitétéqu’uneseulepersonneeffectuelesstripsenréalisant lamêmeméthode d’application et de retrait du scotch, ainsi que les mêmes critères cliniquesd’arrêtdesstripsafindenepasdépasserleseuild’altération.

Un autre facteur a influencénos résultats. Les chevaux étant densémentpoilusnous avons dû, en plus de la tonte, raser délicatement les zones demanipulation. Latonteaétéeffectuéelepremierjourdesmanipulationsetlerasageselonlarepoussedupoilpendantlasemained’induction.Lerasagedevaitêtredélicatafindenepasobserverses effets inflammatoires et ne pas altérer avec excès la couche cornée (saignement,croûtes).Celanousadoncpermisde réalisermoinsdestrips, etdegagnerunpeudetemps. L’effet du rasage est donc à prendre en compte dans l’interprétation de nosrésultats. Lebutdelaphased’inductionétaitd’établirunmodèlechroniqued’altérationdelacouchecornée.Cependant,aprèsunesemainedetape-stripping,lesvaleursdePIE,THetpHsemblentretrouverleursvaleursinitialeschaquematin.Celaestdûaufaitqueleschevauxutiliséspournosexpériencessontdeschevauxsainsetneprésententaucuneatteintedermatologique.Nouspouvons,quandmême,noterquedemoinsenmoinsdestripssontnécessairespouratteindreunétatdebrillancedelapeau,nouslaissantainsisupposerlaprésenced’unealtérationdeplusenplusmarquée.Cependant la répétitiondesstripspendantunesemainenouspermetquandmêmedesupposerl’étatd’altérationchroniquedelacouchecornéepourtousleschevaux.

118

II. Histopathologie

Pourdesraisonséthiques,nousnepouvionspasbiopsiertouslesanimauxàtousles temps. Aux temps t0, t0+48h, t0+96h nous avons choisi, au hasard, deux chevauxpourunsitetraité.Pourunchevaldonné,chaquesiten’estbiopsiéqu’unefois.Nossitesd’études étant suffisamment grands, nouspouvions cependant continuernosmesuressur cesmêmes sitesaprèsbiopsie.Desbiopsiesenpeau saine sontaussi réalisées, auhasard,surdeuxchevaux.Nousconsidéronsquel’échantillondechevauxprélevéschaquejourestreprésentatifdelapopulationdechevaux. Laréalisationdebiopsiesà24heuresaprèslapremièreapplicationdesproduitsaurait été justifiée. En effet, nous avonsmis en évidence que l’altérationde la couchecornéeprésenteunturnoverrapidedans lecasdenoschevauxsains.Desdifférencesmarquéesauraientcertainementpuêtremisesenévidence.Cependant,cejourd’étudetombaitundimanche,etpeud’opérateursétaientdisponibles.

En ce qui concerne les lames colorées à l’hémalun-éosine, trois opérateurs ontobservéleslames,maisseull’und’entreeuxanotéetquantifiélesdifférentsparamètresobservés. Les lames ont été lues individuellement mais ont pu être comparées entreellesafind’affinerlanotationleplusjustementpossible.

Demême,seulunopérateuraluleslamesmarquéesauKi67,utilisantlamêmetechniquedecomptageàchaquefois.Lescellulesàcompterétaientlescellulesaunoyaucoloré.Cependant ilétaitdifficile,parfois,dedistinguerdesnoyauxcolorésdenoyauxnoirs(mélanocytes),incluantalorsuncritèredesélectionsubjectif.

L’interprétation du comptage des lymphocytes T (identifiés par CD3) est délicateparce que la qualité des lames n’était pas toujours homogène et que le nombre delymphocytesTvariecertainementen fonctiondessections.Or, iln’estpaspossibledeliredemultiplessectionspourchaquebloc.Unseulopérateuraluleslames.Uneseulecoupe,doncunseulcomptage,aétéeffectuéparbloc.

III. Paramètresmesurés

A. Perteinsensibleeneau

Denombreusesétudesvalidentlacorrélationentrelaperteinsensibleeneauetle statut de la barrière cutanée chez l’homme, le chien, la souris et encore le cheval(Darlenskietal.,2009;Feydy,2012;Fluhretal.,2006).

Laperte insensibleeneauaétémesurée, tous les jours,aucoursde lasemained’induction,avant lesstripspour leschevaux1,2et3etaprès lesstripspourtous leschevaux; et avant l’application des produits au cours de la semaine de restaurationcutanée.

119

Dansunpremier temps lamesurede la perte insensible en eaunous indiquaitquandarrêterlesstrips.LavaleurdelaPIEaprèsledernierstripsaparfoisdépassé40g.m-2.h-1, due àun fortpouvoir collantdu scotch, ouundéfautd’appréciation cliniquedes opérateurs. L’aspect macroscopique de la zone d’étude était notre critère poursavoir quand s’arrêter: une peau luisante signifiait un retrait d’environ 90% de lacouchecornée(Darlenskietal.,2009).

Commemisenévidenceprécédemment,desfacteursintrinsèquesinfluencentla

valeur de la perte insensible en eau comme l’âge, la race, le site anatomique, latempérature corporelle… Pour cela nous avons décidé d’utiliser un lot homogène dechevauxetderestreindrenotrezoned’étudeàl’épaule. La mesure de la PIE nécessite des paramètres d’ambiance standardisés(Yoshiharaetal.,2007).Nosexpériencesseréalisantàl’extérieur,dansunespacesemi-couvert,ilaétédifficiledecontrôlercesparamètres.Afindelimitercesbiais,nousavonsréalisénos expériences tous les jours, entre8heures et 12heures, enmanipulant leschevaux dans le même ordre. Etre en été nous a permis de bénéficier de conditionsclémentes. L’utilisationduVapoMeter®,appareilàchambrefermée,apermisaussidelimiter l’influence des paramètres d’ambiance, des mouvements d’air mais aussi desmouvementsdel’animal.Untempsd’adaptationdeschevauxaéténécessairemaisgrâceau renforcement positif, tous ont vite été coopératifs. Pour la plupart de nosmanipulations, le VapoMeter® est utilisé dans les conditions recommandées par lefabriquant: températureentre20et25°C, ethygrométrieentre10et60%.Seules lesmesures réalisées l’après-midi de la première application des produits sortent de cecadre. En effet, cette journée a été assez chaude et la température relevée par leVapoMeter® a été comprise entre 27 et 30°C. Afin de s’affranchir de ces facteurs devariations, nous avons donc décidé de calculer des valeurs corrigées, en divisant lavaleurobtenueparlavaleurenpeausaine.

B. Tauxd’hydratationcutanée

La mesure du taux d’hydratation permet, aussi, d’évaluer la fonction barrière.Hester et al ont mis en évidence que l’hydratation cutanée reste un paramètre plusfiable,carplusreproductibleetplusfacileàmesurerquelaperteinsensibleeneauafind’évaluerl’étatdelafonctionbarrièrecutanée(Hesteretal.,2004).Nousavionsprévud’utiliser la mesure de la perte insensible en eau et du taux d’hydratation pourl’évaluationdelabarrièreetdel’effethydratantdesproduits.

Letauxd’hydratationestsoumisauxmêmesfacteursdevariationsque laperteinsensible en eau et une standardisation du protocole de mesure est donc aussinécessaire.

Malgrélesdonnéesbibliographiquesassurantlareproductibilitédesmesuresdutauxd’hydratationcutanée, la réalitéexpérimentalenenous l’apasconfirmé.Eneffet,desvaleursprisesaumêmeendroit,àquelquessecondesd’écart,pouvaientvariersans

120

explication.Parfautedetemps,nousn’avonspasrépétélesmesurespourcalculerunemoyenne. Si unemesure nous paraissait aberrante nous la répétions, jusqu'à obtenirunevaleurcohérente,cequiajouteuncritèresubjectifànosmesures.Cependant,ilestintéressantdenoterquecettevariabilitén’apasétéretrouvéelorsquenouseffectuionsdesmesuressurunepeauhumainesaine.

Les données, obtenues pendant la phase d’altération chronique de la couche

cornée,semblentpertinentespuisqu’onobservebienuneaugmentationsignificativedutauxd’hydratationaprèsl’applicationdesstrips,enaccordavecunedélaminationdelacouchecornée.

Lesvaleursobtenuesaucoursdelasemainederestaurationcutanée,surlessitestraités et les sites témoins, sont à chaque temps quasiment identiques. De plus,l’applicationdesproduitsvaaugmenterl’humiditéàlasurfacedelapeauetaugmenterletauxd’hydratation.Legraphique25illustrel’exempledel’Humiderm®.

Pour les sites témoins, la baisse importante du taux d’hydratation dans lespremièresheures est vraisemblablementdueàundébutde réparationde labarrière,suffisantpourdiminuerdemanièredrastiqueletauxd’hydratation(Graphique2).Pourlessitestraités,ladécroissanceétantparallèleàcelledessitestémoins,l’explicationestcertainementlamêmeetdoncprouvequel’effetdesproduitsestminime.Lestempsdemesure ne permettent pas, cependant, de juger de l’efficacité des produits dans lespremièresheuresd’application.

Graphique25:Evolutiondutauxd’hydratationmoyenenfonctiondutemps(Humiderm®).Courbebleue=site3;courbe

rouge=site5=témoin

C. pHcutané

Chez l’Homme, Öhman et al ont démontré le rôle important du pH dans ledéveloppement et le maintien de la barrière cutanée. La peau, une fois délaminée,présente un caractère alcalin. Le pH cutané décroit, ensuite, rapidement pendant les

121

premiersjoursetsenormaliseaucoursdeladeuxièmesemaine(OhmanandVahlquist,1994).

Le pH est un marqueur sensible du statut de la barrière cutanée. Chez lesanimaux, lepHcutanéest acideàneutremais, chez le cheval, lepHpeutdevenir trèsrapidement alcalin par la sécrétion des glandes sudoripares. Sage et al ont posél’hypothèsequelepHdiminuedanslescouchessuperficiellesdustratumcorneumpuisaugmentedansl’épidermeviable.

Initialement le pH cutané des chevaux est neutre, entre 6,35 et 7,30. Le pH,immédiatementàlasuitedutape-stripping,estplusacide.Onpeutainsipenserquelespremiers strips décollent diverses substances, comme la poussière et la sueur,responsabled’unealcalinisationdupHcutané.Ladélaminationserépétant,lepHdevientdeplusenplusalcalin.Onpeutdoncconclurequ’au fur et à mesure de l’avancée de la semaine d’induction, soit nous nousrapprochonsdel’épidermeviable,soitl’altérations’aggraveetquelepHalcalinenestletémoin.

LamesuredupHestdifficile.Eneffet, le tempsde stabilisationest assez long.

Quatre opérateurs s’étant relayés pour prendre ces mesures, on peut penser que lecritèred’arrêtetdeprisedelamesureétaitpropreàchacun.Demême,unmouvementdelapartduchevalentrainantunepertedecontactentrelasondeetlapeauimpliquaitderecommencerlamesureàzéro.LamesuredupHadoncétéuneopérationdélicateetlongue.IV. Testsstatistiquesutilisés

Dansunpremiertemps,nousavonsétudiéladistributiondenosdonnéesafindesavoirquelteststatistiqueutiliser.Cetteétudeaétédélicatedufaitdufaibleeffectifdenotreétude:cinqchevaux.Nousavonsapprécié latendancedesdonnéesàsuivreuneloinormale,grâceàuntestquantitatif,letestdeShapiro-Wilk.Celui-cinousapermisderejeterounonl’hypothèsenulle,c’est-à-direl’hypothèsed’unepopulationnormalementdistribuée.Ce test est, cependantpeupuissant, pourdepetits effectifs, et il aurait étépréférabled’avoiruneffectifplusimportant.

Nousaurionspuaussi réaliserdesgraphiquesde typeQ-Qplotpourétudier latendancedesdonnéesàsuivreuneloinormale.Lalectureétaitalorssubjective.

Ensuite,nousréalisionsletesttdeStudentsi la loiétaitnormaleouletestnonparamétriquedesrangssignésdeWilcoxonsiellenel’étaitpas. Afin de s’affranchir des facteurs de variation, nous avions décidé de créer desvaleurs corrigées, grâce aux valeurs obtenues en peau saine. Il aurait été intéressantd’inclure l’hygrométrie et la température mesurées grâce au VapoMeter®. Mais celaauraitbeaucoupcompliquélemodèle.

122

V. Interprétationdesrésultatsobtenus

A. Préambule

IlestdansunpremiertempsessentieldenoterquelesproduitsAllermyl®lotion,Allerderm®spot-on,Dermacool®etHumiderm®sont formuléspour leschienset leschats. Or, la peau des carnivores domestiques et la peau des équidés n’ont pas lesmêmescaractéristiques.

B. Effetsdel’Allermyllotion®A l’histologie, nous avons pu observer que les sites traités avec de l’Allermyl

lotion®présentaientdèst0+48hunépidermed’épaisseurmoins importante,avecuneexfoliation dès t0+96h, par rapport au témoin. Les index de prolifération sont aussiinférieurs,signed’unerégénérationplusrapidedelacouchecornée.L’inflammationestmoinsmarquée, avec la présence d’unœdème léger, voire absent,à t0+96h. On peutdonc conclure que l’application de l’Allermyl® lotion permet une restaurationhistologiqueplusrapidedelabarrièrecutanée.

Les études de la perte insensible en eau ne nous permettent pas de confirmer

statistiquement l’effet de l’application de l’Allermyl® lotion. Cependant, dans les 24heures après la première application de l’Allermyl®, la PIE des sites traités estinférieureàcellesdessitestémoins,suggérantuneaméliorationplusrapidelafonctionbarrière. Sachantque labarrièrecutanéeprésenteun renouvellement rapide, ilparaîtplus ou moins logique de ne pas trouver des différences marquées après les 24premièresheures.

Concernantl’évolutiondupH,aucuneinterprétationn’aétépossiblecomptetenudu peu de cohérence des courbes. Le pH de l’Allermyl® lotion étant neutre, celui-cin’influence donc pas celui de la peau qui est alors, d’avantage, soumis aux conditionsenvironnementales:sueur,poussières…

C. Effetsdel’Allerderm®spot-on

Al’étudehistologique,l’épidermeestd’épaisseurdiminuéparrapportautémoin,surtoutàt0+48h.L’indexdeproliférationindiqueaussiunerestaurationplusrapidedel’homéostasie. Cependant, l’inflammation reste un peu plus marquée pour les sitestraitésavecl’Allerderm®spot-on.

Les analyses ne nous ont pas permis de mettre en évidence des résultatscohérents.Unenouvelle formulationde l’Allerderm®spot-onaétéutiliséedansnotre

123

protocole.Nouspouvonsdoncpenserque leseffetsdescomposantsnesontpeut-êtrepas adaptés aux caractéristiquesde lapeaudu cheval ouquenotreprotocoled’étuden’estpasadaptéàl’étudedeseffetsdel’Allerderm®spot-on.

D. EffetsduDermacool®

A l’histologie,nousobservonsunépidermed’épaisseurdiminuépar rapportautémoin dès 48 heures. L’index de prolifération, inférieur à t0+48h, indique uneréparationplusrapidedelacouchecornée.Maiscelle-cis’étenddansletempspuisqu’àt0+96hcemêmeindiceestsupérieurauxvaleurstémoins.Lestémoinsd’inflammationrestentplusmarquéspourlessitestraitésavecleDermacool®:œdèmeassezmarquédans le derme, présence d’un infiltrat inflammatoire. De plus un cheval a, peut-être,réagi à ce produit puisqu’on a pu observer des croûtes en surface. L’application duDermacool®améliore,dans lespremiers jours, larécupérationde labarrièrecutanée,mais semblemaintenirunétat inflammatoire.LacompositionduDermacool®permetd’apporter une explication. Ce topique est composé, principalement, de menthol. Orl’utilisationd’huilesessentiellespeutengendreruneirritation(Jouët,2016).LePCMXetlechloruredebenzalconiumpeuvent,aussi,engendreruneirritationcutanée.Lessitesd’applicationsétant,déjà, irritéspar le tape-stripping, leDermacool®pourrait,du faitdesacomposition,aggraverl’inflammation.

Les valeurs du pH sont significativement inférieures, dès les premières heuresaprès l’applicationduproduit,ainsiaprèsplusieurs jours.At0+8h, ladifférencedepHn’était plus significative alors qu’elle le redevenait à t0+24h. Plusieurs hypothèsespermettent de l’expliquer. Une sudation importante au moment des mesures auraitrendu le pH cutané alcalin au niveau des sites d’études. En effet, lesmesures ont étéeffectuéesenfind’unaprès-midichaud,etleVapoMeter®nousaindiquédesvaleursdetempératureélevées.Onnepeutpasnonplusécarterunéventuelbiaisdesmesuresliésàl’opérateur.Demême,pourlesmesuresàt0+48h.Onpeutaussienvisagerl’hypothèsed’unfacteurtemps,nécessaireàlamiseenplacesurlelongtermed’unpHcutanéacide,liéàlarégénérationdelacouchecornée.

L’applicationrépétéedeDermacool®tendàmaintenirunpHacidesurlessitestraités. Or un pH acide est défavorable à la croissance bactérienne (Matousek andCampbell,2002).Cecisuggèrel’indicationduDermacool®,danslescasdedermatosesbactériennes, en particulier des pyodermites. Cependant son caractère irritant est àprendre en compte et son utilisation contre-indiquée en cas de lésions cutanéesimportantes. Il faudraitaussidéterminersa fréquenced’application. Dans le cadredenotreprotocole,nousavonsappliquéleDermacool®unefoisparjourpendantsixjours.Intensifier la fréquence, à deux à trois applications par jour, permettraitvraisemblablementdediminuerlepHplusrapidement.

124

E. Effetsdel’Humiderm®

A l’histologie,nouspouvonsfaire lesmêmesobservationsquepour l’Allermyl®lotion. L’épiderme est d’épaisseur diminué par rapport aux témoins et les index deproliférationsinférieurs.L’inflammationestaussimoinsmarquée,aveclaprésenced’unœdème léger. On peut donc conclure que l’application de Humiderm® permet unerestaurationhistologiqueplusrapidedelabarrièrecutanée. L’étudedupHnousapporte lesmêmesconclusionsquepour leDermacool®etl’applicationrépétéed’Humiderm®tendàmaintenirunpHacidesurdessites traités.Une indication dans les cas de dermatoses bactériennes est aussi envisageable,renforcée,etc’estunegrandedifférence,parl’absencedesigned’inflammationcutanéelocale.Uneapplication,bioutriquotidienned’Humiderm®,seraitjustifiéecomptetenududélaidemiseenplaceducaractèreacidedelacouchecornée.

125

126

127

BIBLIOGRAPHIEBarkerBB,StannardAAandMaibachHI(1988)Epidermalcellrenewalinthehorse.Am.

J.Vet.Res.49(4):520–521.Bashir SJ, Chew AL, Anigbogu A, Dreher F and Maibach HI (2001) Physical and

physiological effectsof stratumcorneum tape stripping.SkinRes.Technol. 7(1):40–48.

Bensignor E, Groux D and Lebis C (2012) Lesmaladies de peau chez le cheval. Paris:Maloine.

Brandner JM (2007) Pores in the epidermis: aquaporins and tight junctions. Int. J.Cosmet.Sci.29(6):413–422.

BreternitzM,FlachM,PräßlerJ,ElsnerPandFluhrJW(2007)Acutebarrierdisruptionby adhesive tapes is influenced by pressure, time and anatomical location:integrity and cohesion assessed by sequential tape stripping; a randomized,controlledstudy.Br.J.Dermatol.156(2):231–240.

Chhabra P, Tyagi P, Bhatnagar A, Mittal G and Kumar A (2016) Optimization,characterization, and efficacy evaluation of 2% chitosan scaffold for tissueengineeringandwoundhealing.J.Pharm.BioalliedSci.8(4):300.

ClarysP, ClijsenR andBarelAO (2011) Influenceof probe applicationpressureon invitroandinvivocapacitance(CorneometerCM825®)andconductance(Skicon200EX®)measurements:Probepressureduringhydrationmeasurements.SkinRes.Technol.17(4):445–450.

Craighead DH and Alexander LM (2016) Topical menthol increases cutaneous bloodflow.Microvasc.Res.107:39–45.

DarlenskiR,KazandjievaJandTsankovN(2011)SkinBarrierfunction :morphologicalbasisansregulatorymechanisms.J.Clin.Med.4(1):36–45.

DarlenskiR,SassningS,TsankovNandFluhrJW(2009)Non-invasiveinvivomethodsforinvestigationoftheskinbarrierphysicalproperties.Eur.J.Pharm.Biopharm.72(2):295–303.

DePaepeK,HoubenE,AdamR,WiesemannFandRogiersV (2005)Validationof theVapoMeter, a closed unventilated chamber system to assess transepidermalwaterlossvs.theopenchamberTewameter.SkinRes.Technol.11(1):61–69.

DemerjianM,HachemJP,TschachlerE,DeneckerG,DeclercqW,VandenabeeleP,MauroT,HupeM,CrumrineD,RoelandtT,HoubenE,EliasPMandFeingoldKR(2008)Acute modulations in permeability barrier function regulate epidermalcornification.Am.J.Pathol.172(1):86–97.

Denda M, Fuziwara S and Inoue K (2004) Association of Cyclic AdenosineMonophosphatewithpermeabilitybarrierhomeostasisofmurineskin. J.Invest.Dermatol.122(1):140–146.

Elias PM (1983) Epidermal lipids, barrier function, and desquamation. J. Invest.Dermatol.80Suppl:443–493.

Elias PM, Brown BE, Crumrine D, Feingold KR and Ahn SK (2002) Origin of theepidermal calcium gradient: Regulation by barrier status and role of active vspassivemechanisms.J.Invest.Dermatol.119(6):1269–1274.

FardouetL(2011)Etudedel’efficacitédusprayhydratantErmidrasurlaréparationdelafonctionbarrièredelapeaudansunmodèleexpérimentalderupturechroniquedelabarrièrecutanée.Lyon:UniversitéClaudeBernard.

FeingoldKR(2008)Theouterfrontier:theimportanceoflipidmetabolismintheskin.J.LipidRes.50(Supplement):S417–S422.

128

FeingoldKRandEliasPM(2014)Roleoflipidsintheformationandmaintenanceofthecutaneouspermeabilitybarrier.Biochim.Biophys.Acta1841(3):280–294.

Feingold KR, SchmuthM and Elias PM (2007) The regulation of permeability barrierhomeostasis.J.Invest.Dermatol.127(7):1574–1576.

Feydy C (2012) Etude de la barrière cutanée chez les chevaux parmesure de la perteinsensibleeneauetdupH,etexamenshistopathologiques.Lyon:UniversitéClaudeBernard.

FluhrJW,DarlenskiRandSurberC(2008)Glycerolandtheskin:holisticapproachtoitsoriginandfunctions.Br.J.Dermatol.159(1):23–34.

Fluhr JW, Feingold KR and Elias PM (2006) Transepidermal water loss reflectspermeabilitybarrierstatus:validationinhumanandrodent invivoandexvivomodels.Exp.Dermatol.15(7):483–492.

GabardB (2000)Mesurede laperte insensibleeneau. InTraitéEMC :CosmétologieetDermatologieEsthétique.Paris:ElsevierMasson

Galeotti N, Di Cesare Mannelli L, Mazzanti G, Bartolini A and Ghelardini C (2002)Menthol:anaturalanalgesiccompound.Neurosci.Lett.322(3):145–148.

GhadiallyR,Halkier-SorensenLandEliasPM(1992)Effectsofpetrolatumonstratumcorneumstructureandfunction.J.Am.Acad.Dermatol.26(3Pt2):387–396.

HachemJP,HoubenE,CrumrineD,ManM-Q,SchurerN,RoelandtT,ChoiEH,UchidaY,Brown BE, Feingold KR and Elias PM (2006) Serine Protease Signaling ofEpidermal Permeability BarrierHomeostasis. J.Invest.Dermatol. 126(9): 2074–2086.

HesterSL,ReesCA,KennisRA,ZoranDL,BigleyKE,WrightAS,KirbyNAandBauerJE(2004) Evaluation of corneometry (skin hydration) and transepidermalwater-lossmeasurementsintwocaninebreeds.J.Nutr.134(8Suppl):2110s–2113s.

HumbertP (2003)Conséquences fonctionnellesdesperturbationsdes lipidescutanés.Pathol.Biol.51(5):271–274.

Imhof RE, De Jesus MEP, Xiao P, Ciortea LI and Berg EP (2009) Closed-chambertransepidermal water loss measurement: microclimate, calibration andperformance.Int.J.Cosmet.Sci.31(2):97–118.

JenkinsonDM,ElderHYandBovellDL(2006)EquinesweatingandanhidrosisPart1–equinesweating.Vet.Dermatol.17(6):361–392.

Jouët L (2016) Aromathérapie: principes, méthodes et applications pratiques enproductionsanimales.Bull.Group.tech.vét.(numérospécial):71–80.

KalininAE,KajavaAVandSteinertPM(2002)Epithelialbarrierfunction:assemblyandstructural features of the cornified cell envelope.BioEssaysNewsRev.Mol.Cell.Dev.Biol.24(9):789–800.

KeenMandHassanI(2016)VitaminE indermatology.IndianDermatol.OnlineJ.7(4):311.

Knottenbelt DC and Pascoe RR (2009) Pascoe’s principles and practice of equinedermatology.2ndedEdinburgh:ElsevierSaunders.

LademannJ,JacobiU,SurberC,WeigmannH-JandFluhrJW(2009)Thetapestrippingprocedure – evaluation of some critical parameters. Eur. J. Pharm. Biopharm.72(2):317–323.

Lau-GillardPJ,HillPB,ChesneyCJ,BudleighCand ImmonenA (2010)Evaluationof ahand-heldevaporimeter (VapoMeter®) for themeasurementof transepidermalwaterlossinhealthydogs.Vet.Dermatol.21(2):136–145.

Lodén M (2005) The clinical benefit of moisturizers. J. Eur.Acad.Dermatol.Venereol.19(6):672–688.

129

Lodén M (2012) Effect of moisturizers on epidermal barrier function. Clin.Dermatol.30(3):286–296.

LofflerH,DreherF andMaibachHI (2004) Stratumcorneumadhesive tape stripping:influence of anatomical site, application pressure, duration and removal. Br. J.Dermatol.151(4):746–752.

Madison KC (2003) Barrier function of the skin: ‘la raison d’être’ of the epidermis. J.Invest.Dermatol.121(2):231–241.

Maillard JY, Dettmar PW, Goddard PA and Messager S (2001) Determination of theantibacterial efficacyof several antiseptics testedon skinbyan ‘ex-vivo’ test. J.Med.Microbiol.50(3):284–292.

MarksR (2004)Thestratumcorneumbarrier: the final frontier. J.Nutr.134(8Suppl):2017S–2021S.

Matousek JL and Campbell KL (2002) A comparative review of cutaneous pH. Vet.Dermatol.13(6):293–300.

NuutinenJ,AlanenE,AutioP,LahtinenM-R,HarvimaIandLahtinenT(2003)Aclosedunventilated chamber for themeasurement of transepidermal water loss. SkinRes.Technol.9(2):85–89.

OhW-SandOhT-H(2009)Measurementoftransepidermalwaterlossfromclippedandunclippedanatomicalsitesonthedog.Aust.Vet.J.87(10):409–412.

OhmanH andVahlquist A (1994) In vivo studies concerning a pH gradient in humanstratumcorneumandupperepidermis.ActaDerm.Venereol.74(5):375–379.

Pin D (2014) Structureet fonctionde lapeaunormale,Coursmagistral. Marcy l’Etoile:Ecolenationalevétérinaire.

PinD(2015)Lespyodermitesducheval,Coursmagistral.Marcy l’Etoile:Ecolenationalevétérinaire.

ProkschE,BrandnerJMandJensenJ-M(2008)Theskin:anindispensablebarrier.Exp.Dermatol.17(12):1063–1072.

Scott DW and Miller WH (2011) Structure and Function of the Skin. In EquineDermatology.Elsevier,1–34.

SethiA,KaurT,MalhotraSKandGambhirML(2016)Moisturizers:Theslipperyroad.IndianJ.Dermatol.61(3):279.

Shimada K, Yoshihara T, YamamotoM, Konno K,Momoi Y, Nishifuji K and Iwasaki T(2008)Transepidermalwaterloss(TEWL)reflectsskinbarrierfunctionofdog.J.Vet.Med.Sci.70(8):841–843.

TokumuraF,UmekageK,SadoM,OtsukaS,SudaS,TaniguchiM,YamoriA,NakamuraA,KawaiJandOkaK(2005)Skinirritationduetorepetitiveapplicationofadhesivetape: the influence of adhesive strength and seasonal variability. Skin Res.Technol.11(2):102–106.

TurnerNG,CullanderCandGuyRH(1998)DeterminationofthepHgradientacrosstheStratumCorneum.J.Investig.Dermatol.Symp.Proc.3(2):110–113.

WickettRRandVisscherMO(2006)Structureandfunctionoftheepidermalbarrier.Am.J.Infect.Control34(10):S98–S110.

Yoshihara T, Shimada K, Momoi Y, Konno K and Iwasaki T (2007) A newmethod ofmeasuringthetransepidermalwaterloss(TEWL)ofdogskin.J.Vet.Med.Sci.Jpn.Soc.Vet.Sci.69(3):289–292.

130

131

ANNEXESANNEXE1:Agrémentducomitééthique

Revue Ethique d’un Projet d’utilisation d’animaux à des fins scientifiques

Comité d’Ethique de VetAgro Sup n°18

Numéro Comité d’Ethique : 1163 Titre du Projet : Evaluation de l’effet de l’Allermyl®lotion, du Dermacool®,de l’Allerderm®spot on et de l’Humiderm®de Virbac, sur la réparation de la barrière cutanée dans un modèle de rupture chronique de la barrière cutanée chez le cheval. Responsable de la mise en œuvre en conformité avec l’autorisation : Cyrielle Touin Etablissement Utilisateur : Date de l’avis : 20/06/2017

Avis Favorable Avis Favorable sous réserve de modification de la version proposée (version 2) Avis Favorable sous condition d’apporter des réponses aux questions posées Avis Non Favorable en l’état

Commentaires : Signature du Président : p.o.

132

ANNEXE2:Tableauxdesmesures*:mesureréaliséeavanttape-stripping

v Allermyl®lotion:

Cheval JourJ-5 J-4* J-4 J-3* J-3 J-2* J-2 J-1* J-1 J0* J0t0 J0t1h30 J0t8h J1 J2 J3 J4 J5

Lu Ma Ma Mer Mer Jeu Jeu Ven Ven Samt0 Samt0 Samt1h30 Samt8h Dim Lun Mar Mer Jeu

1 TWEL(g.m-2.h-1) 31,0 14,5 29,6 15,6 25,8 18,0 30,7 29,8 39,3 19,5 26,0 37,3 51,5 12,1 20,1 14,2 16,0 17,01 Tauxd'hydratation(UI) 53,1 25,8 69,2 12,3 46,7 8,3 68,9 11,6 47,6 4,6 45,1 11,6 10,2 5,6 1,7 3,4 1,5 3,31 pH 7,04 7,80 6,51 7,66 6,98 7,67 7,32 7,63 7,19 7,61 7,14 6,75 7,76 8,01 7,62 7,88 8,00 7,70

2 TWEL(g.m-2.h-1) 34,8 19,3 30,0 15,7 31,5 24,8 35,3 32,6 59,1 26,6 32,1 44,0 54,8 23,1 15,2 17,6 19,8 18,52 Tauxd'hydratation(UI) 67,8 36,2 55,3 19,4 49,4 10,5 31,0 12,9 65,6 6,6 67,7 34,7 12,1 6,6 3,4 6,2 4,5 2,92 pH 6,59 7,03 6,86 7,38 6,99 7,31 7,30 7,95 7,40 7,40 7,37 7,60 7,25 7,68 7,48 6,95 7,10 6,93

3 TWEL(g.m-2.h-1) 33,3 14,9 28,2 13,3 31,5 19,4 39,3 30,2 40,7 24,4 42,4 48,5 43,5 13,9 20,3 14,5 17,4 14,13 Tauxd'hydratation(UI) 47,6 21,6 34,5 11,4 105,2 14,5 68,7 6,1 44,9 6,1 69,4 41,2 14,9 5,5 3,5 6,6 6,9 6,13 pH 6,65 7,02 6,88 7,20 7,33 7,40 7,20 7,15 6,93 7,24 7,80 7,23 7,29 7,40 7,01 6,92 6,83 6,78

4 TWEL(g.m-2.h-1) 33,3 37,7 26,2 45,4 34,0 45,0 41,7 34,6 18,5 17,8 16,5 14,9 15,24 Tauxd'hydratation(UI) 43,0 64,3 72,1 42,8 44,2 39,9 19,5 11,7 6,3 3,6 3,5 2,2 2,24 pH 6,88 6,67 7,23 7,32 7,15 6,98 7,23 7,82 7,21 7,30 7,22 7,34 7,51

5 TWEL(g.m-2.h-1) 27,4 30,1 27,3 52,5 44,2 50,7 53,1 39,5 27,0 20,1 18,9 18,9 14,65 Tauxd'hydratation(UI) 53,7 31,8 48,8 50,0 99,0 85,2 77,6 22,9 11,0 2,2 2,1 4,9 4,65 pH 7,40 6,52 6,89 6,98 6,88 7,34 7,54 7,47 7,16 7,15 6,65 6,36 7,04

133

v Dermacool®:

Cheval JourJ-5 J-4* J-4 J-3* J-3 J-2* J-2 J-1* J-1 J0* J0t0 J0t1h30 J0t8h J1 J2 J3 J4 J5

Lu Ma Ma Mer Mer Jeu Jeu Ven Ven Samt0 Samt0 Samt1h30 Samt8h Dim Lun Mar Mer Jeu

1 TWEL(g.m-2.h-1) 32,5 16,9 30,2 16,0 25,1 19,9 32,5 26,5 28,6 13,4 29,4 26,9 49,9 9,8 22,0 21,2 17,0 20,31 Tauxd'hydratation(UI) 63,0 30,9 67,5 19,8 80,5 11,9 73,3 9,0 20,0 3,3 54,6 6,6 24,2 13,6 4,7 4,3 3,1 2,81 pH 7,05 7,20 6,66 7,61 7,08 7,46 6,83 7,56 7,02 7,82 6,73 6,25 7,46 6,85 7,85 7,46 7,53 6,92

2 TWEL(g.m-2.h-1) 32,2 16,9 32,2 15,5 32,4 24,3 38,0 29,6 37,7 22,9 27,2 39,2 43,3 18,6 22,2 21,8 22,0 24,22 Tauxd'hydratation(UI) 50,6 35,4 77,4 25,4 100,8 21,0 86,1 7,6 42,1 10,0 67,4 30,1 19,1 12,8 6,3 4,0 2,8 1,72 pH 6,65 6,93 6,75 7,50 7,23 7,19 7,20 7,55 7,02 7,21 7,09 6,62 7,42 6,95 6,64 6,44 5,94 7,15

3 TWEL(g.m-2.h-1) 33,9 29,8 28,7 18,0 26,4 27,4 37,6 25,9 44,0 20,4 43,7 43,8 40,2 15,8 15,5 18,3 16,7 17,03 Tauxd'hydratation(UI) 72,0 17,9 45,8 7,6 96,1 8,7 38,0 4,8 82,2 9,7 64,8 47,6 23,5 15,4 3,9 3,6 4,7 5,03 pH 7,32 7,24 7,25 7,44 7,18 7,38 7,17 7,64 6,97 7,12 7,20 6,89 6,91 6,78 6,80 6,06 5,84 6,61

4 TWEL(g.m-2.h-1) 31,6 34,7 30,7 33,8 43,0 39,7 42,8 31,0 19,0 18,7 20,8 26,4 20,34 Tauxd'hydratation(UI) 44,7 80,4 31,1 38,3 34,3 50,4 34,5 12,5 7,2 3,2 3,5 2,8 2,24 pH 6,81 6,92 7,21 7,15 7,04 6,90 6,78 7,64 6,85 7,36 6,98 7,62 7,35

5 TWEL(g.m-2.h-1) 36,2 36,0 33,5 45,9 44,1 43,2 43,0 26,8 22,4 22,4 21,5 24,0 23,05 Tauxd'hydratation(UI) 58,7 36,1 80,8 31,7 47,0 48,0 54,9 18,3 8,1 3,5 3,5 4,2 4,45 pH 7,05 6,85 7,14 6,68 6,85 6,76 6,45 6,65 6,37 6,23 6,09 6,28 6,40

134

v Humiderm®:

Cheval JourJ-5 J-4* J-4 J-3* J-3 J-2* J-2 J-1* J-1 J0* J0t0 J0t1h30 J0t8h J1 J2 J3 J4 J5

Lu Ma Ma Mer Mer Jeu Jeu Ven Ven Samt0 Samt0 Samt1h30 Samt8h Dim Lun Mar Mer Jeu

1 TWEL(g.m-2.h-1) 33,6 14,4 28,1 16,0 23,6 20,8 31,3 24,0 36,5 15,5 31,6 39,0 50,2 10,6 22,1 16,8 13,5 11,21 Tauxd'hydratation(UI) 58,0 31,9 68,3 19,1 85,7 11,2 93,2 10,7 23,0 1,9 82,4 29,0 18,9 3,9 2,2 2,7 2,1 2,81 pH 7,30 7,53 6,66 7,52 6,86 7,53 6,95 7,54 7,16 8,00 6,90 5,94 7,30 6,83 7,60 7,12 7,30 6,25

2 TWEL(g.m-2.h-1) 33,1 23,8 26,9 15,7 30,6 24,1 39,7 26,5 42,3 24,2 29,2 48,6 54,6 22,2 20,7 16,6 14,2 12,82 Tauxd'hydratation(UI) 42,1 24,8 66,9 15,6 59,9 5,4 27,6 8,4 53,7 5,5 94,2 64,8 22,4 6,4 4,3 7,0 5,6 4,22 pH 6,43 6,85 6,88 7,40 7,01 7,32 7,33 7,65 7,18 7,37 7,20 6,56 7,21 6,62 6,32 5,86 5,39 5,53

3 TWEL(g.m-2.h-1) 38,2 26,5 25,7 16,8 25,8 24,3 38,4 30,2 41,9 18,8 43,1 41,0 44,3 14,8 11,0 14,2 13,6 12,33 Tauxd'hydratation(UI) 73,8 20,5 52,1 7,3 109,8 16,2 57,0 5,5 62,8 7,9 101,5 45,6 17,5 6,0 5,8 8,4 6,5 6,23 pH 6,80 7,21 7,22 7,80 7,28 7,37 7,22 7,57 7,05 7,65 7,13 6,50 7,05 5,82 5,54 5,80 5,83 5,40

4 TWEL(g.m-2.h-1) 40,6 37,0 30,6 32,0 37,2 30,7 34,9 34,8 15,7 18,6 14,1 13,8 12,64 Tauxd'hydratation(UI) 50,6 69,5 79,3 29,9 48,5 43,4 32,6 19,1 5,6 3,9 4,3 4,4 3,94 pH 6,93 6,90 7,10 7,12 7,02 7,27 6,32 6,63 6,53 6,49 6,76 5,66 5,10

5 TWEL(g.m-2.h-1) 40,0 37,3 27,8 48,5 40,6 42,8 38,3 28,5 18,4 17,1 17,8 20,4 14,15 Tauxd'hydratation(UI) 73,0 54,3 84,6 36,4 82,3 39,3 59,6 23,5 16,1 8,9 5,9 6,1 4,45 pH 6,73 6,94 7,14 7,01 6,88 6,86 4,80 6,37 5,60 7,58 5,58 5,22 6,43

135

v Allerderm®spot-on:

Cheval Jour J-5 J-4* J-4 J-3* J-3 J-2* J-2 J-1* J-1 J0* J0t0 J0t1h30 J0t8h J1 J2 J3 J4 J5Lu Ma Ma Mer Mer Jeu Jeu Ven Ven Samt0 Samt0 Sam

t1h30Samt8h Dim Lun Mar Mer Jeu

1 TWEL(g.m-2.h-1) 33,5 14,2 31,0 19,1 23,5 24,2 31,9 25,5 29,8 13,3 27,2 30,3 41,7 10,7 22,6 18,3 14,8 14,51 Tauxd'hydratation(UI) 59,3 26,8 100,1 12,9 64,4 9,7 86,7 9,9 21,9 4,4 48,9 25,7 17,4 14,6 2,5 5,2 2,4 2,31 pH 7,15 7,20 6,84 7,53 7,19 7,45 7,25 7,49 7,12 8,20 6,50 6,84 7,69 7,33 8,02 7,90 7,52 8,08

2 TWEL(g.m-2.h-1) 31,5 14,8 26,2 15,5 30,5 27,3 37,2 29,2 33,1 18,4 27,1 40,6 52,3 20,0 26,7 21,8 23,3 21,42 Tauxd'hydratation(UI) 31,9 20,9 62,1 13,3 57,9 7,5 66,1 8,4 23,5 5,9 42,2 23,2 10,7 7,1 4,6 4,4 3,1 2,52 pH 6,45 6,83 6,70 7,72 7,07 7,36 7,26 7,69 7,10 7,37 7,09 7,48 7,46 7,23 7,35 6,55 6,94 7,09

3 TWEL(g.m-2.h-1) 34,6 23,9 30,0 13,2 26,9 25,0 41,0 31,0 40,4 20,6 40,3 39,8 31,1 15,5 17,6 15,9 16,7 13,83 Tauxd'hydratation(UI) 44,6 28,4 33,4 5,2 101,6 11,3 56,0 7,1 48,7 13,0 53,0 57,1 14,1 12,2 5,0 3,9 3,2 3,43 pH 7,10 7,12 7,12 7,52 7,09 7,28 7,10 7,20 6,91 7,28 6,80 7,30 7,12 7,04 6,96 6,03 7,33 7,00

4 TWEL(g.m-2.h-1) 34,5 36,5 30,7 40,1 41,4 42,6 37,5 30,3 20,8 22,5 25,1 22,9 19,74 Tauxd'hydratation(UI) 30,2 73,0 33,7 37,6 30,0 50,8 28,5 21,8 6,3 4,6 3,0 2,1 2,54 pH 6,74 6,72 6,81 6,92 6,83 6,96 7,30 7,37 6,75 7,22 6,94 6,97 7,47

5 TWEL(g.m-2.h-1) 34,3 27,8 28,8 41,4 49,8 48,3 45,6 26,2 24,5 25,5 22,8 18,6 16,35 Tauxd'hydratation(UI) 46,9 46,2 67,5 43,2 53,7 35,7 52,7 33,3 19,9 6,9 3,1 5,1 4,05 pH 6,69 6,49 6,98 6,75 7,04 7,15 6,71 6,98 6,71 6,22 6,50 6,50 6,90

136

v Témoin:

Cheval JourJ-5 J-4* J-4 J-3* J-3 J-2* J-2 J-1* J-1 J0* J0t0 J0t1h30 J0t8h J1 J2 J3 J4 J5

Lu Ma Ma Mer Mer Jeu Jeu Ven Ven Samt0 Samt0 Samt1h30 Samt8h Dim Lun Mar Mer Jeu

1 TWEL(g.m-2.h-1) 39,7 13,4 30,2 13,6 26,5 26,7 36,7 22,7 48,9 15,0 26,1 36,8 57,6 14,2 14,2 10,6 12,4 10,31 Tauxd'hydratation(UI) 81,9 27,4 60,5 23,4 113,5 7,0 105,5 15,4 99,6 6,6 92,0 26,8 28,2 4,1 2,9 4,6 3,0 2,61 pH 7,17 7,45 7,05 7,60 7,38 7,31 7,55 7,80 7,18 7,81 7,36 7,46 7,43 7,44 7,89 7,90 8,00 8,43

2 TWEL(g.m-2.h-1) 36,4 16,5 31,6 20,0 28,9 24,7 36,4 31,7 43,3 20,8 31,1 41,7 46,3 18,7 14,3 12,2 11,0 15,02 Tauxd'hydratation(UI) 54,9 13,9 63,1 16,8 98,4 9,6 88,7 9,4 66,0 6,1 79,4 69,3 14,2 3,8 3,6 2,4 2,1 4,42 pH 6,73 7,17 7,37 7,53 7,36 7,26 7,23 7,57 7,35 7,40 7,14 7,48 7,43 7,37 8,36 8,08 8,17 8,20

3 TWEL(g.m-2.h-1) 34,6 14,5 34,5 26,7 31,9 27,3 42,1 19,9 44,0 27,6 42,4 38,5 30,6 16,3 18,2 11,9 13,0 10,93 Tauxd'hydratation(UI) 47,5 24,2 95,0 15,9 117,8 5,4 70,0 7,1 71,6 6,5 53,3 20,1 16,3 5,6 2,7 2,9 2,2 1,93 pH 6,89 7,14 7,20 7,24 7,14 7,45 7,01 7,24 7,21 7,44 6,98 7,20 7,10 7,15 7,08 7,03 6,81 6,39

4 TWEL(g.m-2.h-1) 34,3 33,8 30,1 37,8 36,3 48,8 45,2 37,9 23,6 19,2 15,9 14,3 13,34 Tauxd'hydratation(UI) 66,3 64,4 79,1 69,3 25,0 54,7 26,8 15,6 7,0 7,0 2,3 1,9 2,94 pH 6,52 6,96 7,16 7,50 6,94 7,70 7,36 7,18 7,24 7,98 7,67 7,00 8,07

5 TWEL(g.m-2.h-1) 44,8 48,8 31,7 53,2 49,5 50,4 46,0 28,7 15,6 15,7 16,3 11,8 8,65 Tauxd'hydratation(UI) 74,8 53,7 108,4 40,9 109,0 76,0 36,1 12,0 4,2 6,4 3,6 4,8 2,95 pH 6,98 6,96 7,20 7,10 6,95 6,95 7,15 7,22 7,01 6,28 6,99 6,85 7,28

137

v Peausaine:

Cheval JourJ-5 J-4 J-3 J-2 J-1 J0t0 J0t1h30 J0t8h J1 J2 J3 J4 J5

Lu Ma Mer Jeu Ven Samt0 Samt1H30

Samt8h Dim Lun Mar Mer Jeu

1 TWEL(g.m-2.h-1) 21,3 69,0 6,5 8,9 7,7 6,3 17,1 27,9 6,5 18,4 12,2 7,4 7,71 Tauxd'hydratation(UI) 9,4 7,3 6,1 5,1 4,1 3,0 4,9 9,0 4,8 4,1 3,1 4,4 3,91 pH 8,51 8,30 9,10 8,41 7,40 8,50 8,49 8,10 8,37 7,84 7,73 8,33 8,50

2 TWEL(g.m-2.h-1) 11,5 8,6 9,4 11,4 9,6 10,2 22,2 34,1 9,7 7,7 7,9 9,0 7,52 Tauxd'hydratation(UI) 5,9 5,2 4,7 3,2 5,2 5,5 4,8 3,2 3,6 4,0 5,6 4,5 4,42 pH 8,63 6,81 8,25 8,52 7,60 7,75 8,25 7,93 7,96 8,64 7,90 7,57 8,71

3 TWEL(g.m-2.h-1) 19,4 10,6 11,5 8,8 18,8 11,4 27,9 15,2 7,9 8,7 10,1 9,0 6,33 Tauxd'hydratation(UI) 5,9 4,0 4,9 2,4 3,1 2,9 7,3 5,1 5,4 2,5 3,7 5,4 2,63 pH 8,58 8,37 8,81 8,86 7,99 7,74 8,80 7,62 7,78 8,14 7,55 7,40 8,22

4 TWEL(g.m-2.h-1) 13,5 17,9 14,7 14,5 28,3 14,8 16,8 13,7 7,0 8,3 8,1 15,6 8,14 Tauxd'hydratation(UI) 5,6 5,0 8,9 6,0 9,9 3,7 4,9 7,5 3,9 4,2 3,2 3,7 4,04 pH 9,00 8,17 9,08 8,42 7,68 8,80 8,49 8,68 8,62 7,84 7,39 8,37 8,10

5 TWEL(g.m-2.h-1) 23,8 21,2 19,0 19,4 26,8 31,3 33,2 25,5 11,3 14,6 17,8 21,1 8,95 Tauxd'hydratation(UI) 6,8 15,6 13,8 3,2 6,3 9,1 7,1 6,5 5,3 6,5 5,7 4,9 7,65 pH 7,35 7,11 7,40 7,40 7,55 7,21 7,68 7,41 7,29 7,22 7,14 7,62 7,26

138

v Conditions:

Cheval JourJ-5 J-4 J-3 J-2 J-1 J0t0 J0t1h30 J0t8h J1 J2 J3 J4 J5Lu Ma Mer Jeu Ven Samt0 Samt1h30 Samt8h Dim Lun Mar Mer Jeu

1 Humidité(%) 55 64 72 65 57 65 45 40 77 66 75 71 601 Température(°C) 24 21 22 22 21 21 27 28 18 21 21 19 20

2 Humidité(%) 59 64 73 56 52 61 45 35 71 69 73 70 552 Température(°C) 24 21 22 24 23 24 26 29 22 22 23 19 21

3 Humidité(%) 57 61 65 50 54 39 40 36 64 59 64 64 543 Température(°C) 24 22 24 25 23 27 28 29 22 24 23 21 22

4 Humidité(%) 52 60 65 41 45 48 35 43 69 57 65 56 524 Température(°C) 25 24 24 27 25 27 30 29 22 24 23 22 23

5 Humidité(%) 51 57 60 43 40 41 33 47 64 57 59 53 545 Température(°C) 25 24 26 28 28 28 30 27 21 24 24 23 23

139

ANNEXE3:Tableaud’observationdeslamesd’histologie

Scoreentre0et+++,où0correspondàabsentoutrèspeu,et+++trèsimportant.

140

ANNEXE4:ComptagedesindexdeproliférationKi67etdeslymphocytesT(marquageCD3)

141

ANNEXE5:ScriptR

1) Casd’unevariablenormale:étudedupHdessitestraitésauDermacool®à

t0+1h30

a. Importdesdonnées D1 <- readXL("/Users/cyrielletouin/Documents/Thèse 3.0/Statisques/Données R/D1.xlsx", rownames=FALSE, header=TRUE, na="", sheet="Feuil1", stringsAsFactors=TRUE)

b. CréationdelavariableF:

LavariableFestladifférenceentrelesvaleursobtenuespourlessitestémoinsetles

sitestraitéspourchaquecheval

D1$F <- with(D1, C- D)

c. Testdelanormalitédeladifférencewith(D1, shapiro.test(F))

d. TestdeStudentwith(D1, (t.test(C, D, alternative='two.sided', conf.level=.95, paired=TRUE)))

Matricededonnéesutiliséepourcescript:

D C F1 6,6 7,46 0,862 6,62 7,48 0,863 6,89 7,2 0,314 6,78 7,36 0,585 6,45 7,15 0,7

{1-5}:numéroducheval

D:valeurdupHpourlesitetraitéauDermacool®àt0+1h30

C:valeurdupHpourlesitetémoinàt0+1h30

F:DifférenceC–D

142

2) Casd’unevariablenonnormale:étudedelaPIEdessitestraitésàl’Allermyl®lotionàt0+1h30

a. Importdesdonnées A0 <- readXL("/Users/cyrielletouin/Documents/Thèse 3.0/Statisques/Données R/A0.xlsx", rownames=FALSE, header=TRUE, na="", sheet="Feuil1", stringsAsFactors=TRUE)

b. CréationdelavariableF:

A0$F <- with(A0, C- A)

c. Testdelanormalitédeladifférence with(A0, shapiro.test(F))

d. TestdeWilcoxonwith(A0, median(A - C, na.rm=TRUE)) # median difference with(A0, wilcox.test(A, C, alternative='two.sided', paired=TRUE))

Matricededonnéesutiliséepourcescript:

A C F1 0,894 5,84 4,9462 1,98 1,88 -0,13 1,74 1,38 -0,364 2,48 2,69 0,215 1,6 1,39 -0,21

{1-5}:numéroducheval

D:valeurdelaPIEpourlesitetraitéàl’Allermyl®àt0+1h30

C:valeurdelaPIEpourlesitetémoinàt0+1h30

F:DifférenceC–A

143

ANNEXE 6: Les différentes techniques de coloration enhistopathologie

LACOLORATIONHEMALUN-EOSINE

PRINCIPE:

Le protocole consiste à réaliser différentes étapes de bains pour les lames afin d’obtenir une

colorationfinaleexploitable.LacolorationHémalun-Eosineestunecolorationdebaseenhistologie,

ellepermetd’observerl’aspectmorphologiquegénérald’untissu.

MODEOPERATOIRE:

Mettredesgantsetmettreenroutelahottependanttouteladuréedelacoloration.

Préparerlessolutionsd’Acidechlorhydrique,d’eaulithinéeetdePhloxine.

Réalisertroisbainsd’OTTIXpendant10minutes.

Réaliserunbaind’OTTIXShapperpendant2minutes.

Réaliserunbaind’Alcoolpendant1minute.

Réaliserdeuxbainssuccessifsd’eaudurobinetpendant30secondes.

Réaliserunbaind’Hémalunpendantexactement5minutes.

Réaliserplusieursbainsd’eaudurobinetjusqu’àcequel’eauresteincolore.

Réaliserunaller-retourdansunbaind’Acidechlorhydrique.

Réaliserunbaind’eaudurobinetpendantuneminute.

Réaliserunaller-retourdansunbaind’eaulithinée.

Réaliserunbaind’eaudurobinetpendantuneminute.

RéaliserunbaindePhloxinependantexactement5minutes.

Réaliserplusieursbainsd’eaudurobinetjusqu’àcequel’eauresteincolore.

Réaliserunaller-retourdansunbaind’AlcoolAbsolu.

Réaliserunbaind’OTTIXShapperpendant30secondes.

Réalisertroisbainsd’OTTIXpendant5minutes.

Procéderaumontagedeslames.

Mettreleslamesàsécherdansuneétuve.

RESULTATS:

On obtient un tissu dont les noyaux sont colorés en bleu, le cytoplasme en rose et les fibres de

collagèneenrosetrèspâle.

144

LACOLORATIONLUNA

PRINCIPE:

Le protocole consiste à réaliser différentes étapes de bains pour les lames afin d’obtenir une

colorationfinaleexploitable.Cetteméthodedecolorationpermetlamiseenévidencedesgranules

dansleséosinophiles.

MODEOPERATOIRESIMPLIFIE:

Préparerunesolutiond’éthanolà95°,d’éthanolà70°,d’hématoxyline,dechloruredefermère,de

chloruredeferfinale,descarletbiebrichà1%,d’hématoxylinedeWeigerts-scarletbiebrich,d’acide

alcooletdecarbonatedelithium.

Mettreenroutelahottependanttouteladuréedelacoloration.

Mettredesgantsetmettrelahotteenroutependanttouteladuréedelacoloration.

Préparerunesolutiond’Acidepériodique.

Réalisertroisbainsd’OTTIXpendant10minutes.

Réaliserunbaind’OTTIXShapperpendant2minutes.

Réaliserunbaind’AlcoolAbsolupendant1minute.

Réaliserdeuxbainssuccessifsd’eaudurobinetpendant30secondes.

A l’aide d’une pipette Pasteur mettre la solution d’hématoxyline/scarlet biebrich sur les lames

pendant5minutes.

Différencierleslamesaveclasolutiond’acidealcoolpendant1à2minutes,toujoursàl’aided’une

pipettePasteur.

Rincerleslamesàl’eaudurobinetpendant1minute.

Plongerleslamesdanslasolutiondecarbonatedelithiumjusqu’àcequelasectiondeviennebleue

etlesérythrocytesrouges.

Rinceràl’eaudurobinetpendant2minutes.

Réaliserunaller-retourdansunbaind’AlcoolAbsolu.

Réaliserunbaind’OTTIXShapperpendant30secondes.

Réalisertroisbainsd’OTTIXpendant5minutes.

Procéderaumontagedeslames.

RESULTATS:

On obtient un tissu dont le fond est coloré en bleu, les granules éosinophiles en rouge et les

érythrocytesenrouge.

145

LESIMMUNOMARQUAGES

PRINCIPE:

Leprotocoleconsisteàfairedifférentesétapesdebainspourleslamespourobtenirunecoloration

finaleexploitable.

MODEOPERATOIRESIMPLIFIE:

Préparerunesolutiond’eauoxygénée,detamponcitrate,dePBS,etlesdifférentsanticorpsàdiluer

à l’aide du diluent d’anticorps selon la concentration requise (Dilution 1/100 pour Ki67 et pour

CD3).

Réalisertroisbainsd’OTTIXpendant10minutes.

Réaliserunbaind’OTTIXShapperpendant2minutes.

Réaliserunbaind’AlcoolAbsolupendant1minute.

Réaliserdeuxbainssuccessifsd’eaudurobinetpendant30secondes.

RéaliserunbaindePBSpendant10minutes.

Mettreleslamesdansletamponcitrateaubain-mariependant40minutesà90°C.

PréparerlesdilutionsdesanticorpsprimairesdanslasolutionAntibodydiluant.

Sortirleslamesdubain-marieetleslaisserrefroidir.

RéaliserunbaindanslePBSpendant10minutes.

Mettre500mLd’H2O2surchaquelamependant10minutes.

RéaliserunbaindanslePBSpendant10minutes.

Mettre200mLdesérumdeblocagesurchaquelamependant30minutes.

Mettre200mLdel’anticorpsprimairependant1heure.Pourlestémoinsnégatifs,mettreleslames

témoinsdanslePBSenattendantlesautrespendant1heure.

Oterl’anticorpsprimaire.

Mettre200mLdel’anticorpssecondairependant30minutes.

Oterl’anticorpssecondaireetréaliserunbaindePBSpendant10minutes.

Mettre200mLdecomplexepéroxydasesurchaquelamependant30minutes.

OterlecomplexeetréaliserunlavagedanslePBSpendant10minutes.

Mettre200mLdeNovaredsurchaquelamependant5minutespuisfairedelavagessuccessifsdans

l’eaudurobinetpendant2minutes.

Réaliserunbaindansl’Hémalunpendant1minute.

Réaliserplusieursbainsd’eaudurobinetjusqu’àcequel’eauresteincolore.

Faireunedéshydratation(Alcool,Shapper,Ottix)commepourlescolorationsclassiques.

146

TOUIN Cyrielle Evaluation de l’effet de l’Allermyl® lotion, du Dermacool®, de l’Allerderm® spot on et de l’Humiderm® de Virbac, sur la réparation de la barrière cutanée dans un modèle de rupture chronique de la barrière cutanée chez le cheval Thèse d’Etat de Doctorat Vétérinaire : Lyon, 06 Octobre 2017 RESUME : La peau est l’organe le plus vaste des mammifères. Elle a un rôle principal de barrière, en agissant comme interface entre l’organisme et le milieu extérieur. La peau est un système dynamique assurant le maintien de l’homéostasie cutanée et de l’intégrité de cette barrière. Lors de dermatose, la fonction barrière cutanée peut être altérée. La peau n’étant pas un organe complètement imperméable, l’application de réhydratants cutanés peut être envisagée dans le cas du traitement des dermatoses. L’objectif de ce travail est d’étudier les effets de topiques hydratants sur la réparation de la barrière cutanée dans un modèle d’altération chronique de la barrière cutanée chez le cheval. Les quatre produits testés sont indiqués dans la cas de dermatoses canines et félines et commercialisés par le laboratoire Virbac : Allerderm® spot-on, Allermyl® lotion, Humiderm® et Dermacool®. Les paramètres utilisés pour le suivi de la fonction barrière sont l’aspect clinique, la mesure de la perte insensible en eau (PIE), du taux d’hydratation et du pH de la couche cornée ainsi que l’examen histopathologique de biopsies cutanées itératives. Dans un premier temps, le modèle d’altération cutanée chronique sera mis en en œuvre grâce à la méthode du « tape-stripping ». Dans un deuxième temps, nous étudierons les effets de l’application des topiques sur la restauration de la barrière cutanée. Ce travail a démontré que l’Allermyl® lotion, l’Allerderm® spot-on, l’Humiderm® et le Dermacool® accélèrent la restauration de la barrière cutanée et représentent une option complémentaire au traitement des dermatoses inflammatoires chroniques. Le Dermacool® et l’Humiderm® de par leurs propriétés d’acidification pourraient, aussi, être indiqués dans le cas des pyodermites bactériennes des équidés, dermatoses très courantes dans cette espèce. MOTS CLES : - Cheval - Peau - Rupture - Médicaments dermatologiques JURY : Président : Monsieur le Professeur Jean-François Nicolas 1er Assesseur : Monsieur le Professeur Didier Pin 2ème Assesseur : Monsieur le Docteur Antonin Tortereau DATE DE SOUTENANCE : 06 Octobre 2017 ADRESSE DE L’AUTEUR : 11 rue de Volleron, 58660 Coulanges Lès Nevers