Étude comparative des traitements de semences sans ...€¦ · dans différentes denrées alimentaires (Freitas-Silva Otniel et Venâncio Armando 2010, Ozone applications to prevent

ÉTUDE COMPARATIVE DES TRAITEMENTS

DE SEMENCES SANS FONGICIDE

CHEZ LES CÉRÉALES À L’AIDE

DE L’OZONE ET DE L’OXYGÈNE PUR

Mémoire

Hassiba Neched

Maîtrise en microbiologie agroalimentaire

Maître ès sciences (M. Sc.)

Québec, Canada

© Hassiba Neched, 2015

iii

Résumé

La fonte des semis et la pourriture des racines font partie des maladies céréalières des grandes

cultures au Québec. Elles sont causées par deux agents pathogènes, le Fusarium graminearum et

le Bipolaris sorokiniana contaminant la semence céréalière, en particulier le blé et l’orge, ce qui

entraîne à la fois une baisse de la levée et un rendement moins élevé. Des agriculteurs

biologiques tentent de trouver un traitement de semences sans fongicide afin de lutter contre ces

champignons, qui sont néfastes pour l’agriculture céréalière.

Notre projet a comme objectif d’utiliser l’action oxydative de l’oxygène ou l’ozone humidifié

pour engendrer un stress oxydatif afin de diminuer l’impact des deux agents pathogènes

responsables de cette maladie, le F. graminearum et le B. sorokiniana, tout en préservant le

pouvoir germinatif de ces semences. La dose en agent oxydant, le débit des gaz oxydants (ozone

et /ou oxygène) ainsi que le temps d’exposition constituent les paramètres clés à optimiser pour

ce traitement oxydatif et la cinétique de germination des graines céréalières traitées. Un tel

traitement semblait prometteur pour la semence de blé. Il l’était toutefois un peu moins pour la

semence d’orge en raison de son enveloppe assez rigide qui a rendu difficile la pénétration de

l’ozone et l’oxygène. Pour remédier à ce problème, nous avons fait des tests préliminaires sur

l’orge en utilisant la sonication par ultrasons comme prétraitement de l’orge avant le traitement

oxydatif.

Les résultats obtenus suggèrent qu’un tel traitement est prometteuret non négligeable afin

d’optimiser notre traitement oxydatif et de permettre par la suite de réduire les agents

responsables de la maladie sans nuire à la qualité des semences de céréales. Ce point a été abordé

dans nos travaux par un test préliminaire sur l’orge, et cette approche s’annonce très prometteuse

pour nos recherches futures.

v

Abstract

Seedling blight and root rot are part of cereal diseases of field crops in Quebec. They are caused

by two pathogens, Fusarium graminearum and Bipolaris sorokiniana, which contaminate the

seed grain, especially wheat and barley, which causes both decreased, lift and lower performance.

Organic farmers are trying to find a seed without fungicide treatment to fight against these fungi,

which are harmful to cereal farming.

Our project has as goal to use the oxidative action of oxygen or ozone moistened to cause

oxidative stress in order to reduce the impact of the two pathogens responsible for this disease, F.

graminearum and B. sorokiniana, while preserving the germinability of the seeds. The dose in

oxidizing agent, the flow of oxidizing gases (ozone and/or oxygen) and the time of exposure are

key parameters to optimize for this oxidative treatment and germination kinetics treated cereal

seed. Such treatment looked promising for the seed of wheat. It was however a little less for the

seed of barley because it’s fairly rigid envelope which made difficult the penetration of ozone and

oxygen. To remedy this problem, we have preliminary tests on barley using sonication ultrasonic

as pre-treatment of barley oxidative pre-treatment.

The results suggest that, such treatment is promising and significant in order to optimize our

oxidative treatment and subsequently, reduce the causative agents of disease without harming the

quality of cereal seed. This point has been addressed in our work by a preliminary test on barley,

and this approach looks very promising for our future research.

vii

Table des matières

Résumé ......................................................................................................................................................... iii

Abstract ......................................................................................................................................................... v

Liste des tableaux ......................................................................................................................................... xi

Listes des figures ......................................................................................................................................... xv

Liste des abréviations ................................................................................................................................ xvii

Dédicace ..................................................................................................................................................... xix

Remerciements........................................................................................................................................... xxi

Avant –propos .......................................................................................................................................... xxiii

Introduction ...................................................................................................................................................1

Chapitre I .......................................................................................................................................................3

Revue de littérature........................................................................................................................................3 1. Importance mondiale de la culture de l’orge et du blé .....................................................................4 1.1 L’orge ..............................................................................................................................................4 1.2 Le blé ...............................................................................................................................................6 2. Importance de la culture d’orge et de blé au Canada (Québec) .........................................................8 3. Fonte des semis et pourriture racinaire ..............................................................................................9 3.1 Fonte des semis ................................................................................................................................9 3.2 Piétin commun .............................................................................................................................. 11 3.3 Piétin fusarien ............................................................................................................................... 14 3.4 Épidémiologie ............................................................................................................................... 17 3.5 Moyens de lutte ............................................................................................................................. 18 3.5.1 Traitements chimiques (fongicides) ........................................................................................... 19 3.5.2 Traitements par des produits naturels ou commerciaux............................................................. 21 3.5.3 Traitements par des moyens physiques ...................................................................................... 22 3.5.4 Traitements biologiques ............................................................................................................. 23 3.6 Traitements oxydatifs (oxygène/ozone) ........................................................................................ 24 3.6.1 Définition (ozone) ...................................................................................................................... 25 3.6.2 Propriétés chimiques .................................................................................................................. 26 3.6.3 Mode d'action ............................................................................................................................. 27 3.6.4 L'utilisation de l’oxygène et de l'ozone...................................................................................... 29 a) Oxygène .......................................................................................................................................... 29 b) Ozone ............................................................................................................................................. 31 3.6.5 Avantages et inconvénients des traitements oxydatifs ............................................................... 32 3.6.6 Effet des traitements oxydatifs sur les micro-organismes ......................................................... 34 a) Effet de l’ozone sur les micro-organismes ..................................................................................... 34 b) Effet de l’oxygène sur les micro-organismes ................................................................................. 37

viii

Chapitre II ................................................................................................................................................... 39

Hypothèses et objectifs ............................................................................................................................... 39

Chapitre III ................................................................................................................................................. 41

Matériel et méthodes .................................................................................................................................. 41 Traitement à l’oxygène et à l'ozone ....................................................................................................... 42 3.1 Matériel ......................................................................................................................................... 42 3.1.1 Équipement ................................................................................................................................ 42 3.1.2 La semence ................................................................................................................................ 43 3.2 Méthode de traitement à l’ozone et à l’oxygène ........................................................................... 44 3.2.1 Recommandation et mise en marche ......................................................................................... 44 3.2.2 Investigation microbiologique ................................................................................................... 45 a) Test de germination (pourcentage de germination) ........................................................................ 45 b) Taux de contamination par le B. sorokiniana................................................................................. 46 c) Taux de contamination par le F.graminearum ............................................................................... 47 3.2.3 Traitement de la semence sélectionnée à l’ozone et à l’oxygène pur ........................................ 49 3.2.3.1 Études préliminaires ............................................................................................................... 49 3.2.3.2 Étude comparative chez le blé ................................................................................................ 50

Chapitre IV ................................................................................................................................................. 51

Résultats et discussion ................................................................................................................................ 51 4.1 Études préliminaires ......................................................................................................................... 52 4.1.1 Tests à l’oxygène pur .................................................................................................................... 52 Blé ................................................................................................................................................... 52 Orge ................................................................................................................................................ 54 4.1.2 Tests à l’ozone............................................................................................................................... 57 Blé ................................................................................................................................................... 57 Orge ................................................................................................................................................ 58 4.2 Étude comparative ........................................................................................................................... 60

Chapitre V .................................................................................................................................................. 63

Traitement de la semence d'orge aux ultrasons (Sonication) ..................................................................... 63 5.1 Introduction ...................................................................................................................................... 64 5.2 Hypothèse et objectifs ..................................................................................................................... 64 5.3 Matériel et méthodes ........................................................................................................................ 65 5.3.1 Matériel ......................................................................................................................................... 65 5.3.2 Méthode ........................................................................................................................................ 66 5.4 Résultats et discussion..................................................................................................................... 67

Conclusion générale ................................................................................................................................... 73 Recommandation ................................................................................................................................... 75

Bibliographie .............................................................................................................................................. 77

Liste des Annexes ....................................................................................................................................... 97 Annexes A .............................................................................................................................................. 97 Annexes B .............................................................................................................................................. 98 Annexes C ............................................................................................................................................ 110 Annexes D ............................................................................................................................................ 124 Annexes E ............................................................................................................................................ 139

ix

Annexe F .............................................................................................................................................. 154 Fichier SAS ............................................................................................................................................ 154

xi

Liste des tableaux

Tableau 1: Bilan mondial de la production d’orge en 2005-2011 (USDA, AAC, Chris Beckman, Analyste

– céréales secondaires)……………………………………………………………………………………..5

Tableau 2: Production mondiale du blé, 2009, Food and Agriculture Organization of the United Nations

(FAO STAT).…………………………………………………………………………………………........ 7

Tableau 3: Fréquence relative des isolatsd'entre-nœudsd'orgeinfectés par différents micro-organismes

dans différentesrégions du Québec en 1977 et 1978 (Eng-Chong Puaa; R. -L. Pelletiera; H. R. Klincka a

Department of Plant Science, Macdonald College of McGill University, Ste-Anne-de-Bellevue, 2009.

Canadian Journal of Plant Pathology.Seedling blight, spot blotch, and common root rot in Quebec and

their effect on grain yield in

barley)..........……………………………………………………………………...……………………......10

Tableau 4: Traitements des semences homologué au Canada ( Profil de la culture de blé d’automne au

Canada, 2010) www.agr.gc.ca/cla-profilsdeculture…..................................................................................20

Tableau 5: Traitements de semences par des produits naturels ou commerciaux (Recueil Bionovation-

volet semences édition 2008 CRAAQ Publication no EVC

022)……………………………………………….………………………………………………………..22

Tableau 6: Exemples de traitements physiquesdes semences ( Recueil Bionovation-volet semences

édition 2008 CRAAQ Publication no EVC 022)……………………………………….….........................23

Tableau 7: Traitements biologiques des semences (Recueil Bionovation -volet semences édition 2008

CRAAQ Publication no EVC 022)……………………………………………………………………........24

Tableau 8: Relation entre la température et la solubilité d'ozone dans l'eau (Rice et al.,

1981)………………………………………………………………………………….…………………...27

Tableau 9: Agents oxydants et potentiel d’oxydation (Manley et Niegowski, 1967)…………………...34

Tableau 10: Potentiel d'action antifongique et inactivation mycotoxinogène par l'utilisation de l'ozone

dans différentes denrées alimentaires (Freitas-Silva Otniel et Venâncio Armando 2010, Ozone applications

to prevent and degrade mycotoxins. Institute for Biotechnology and Bioengineering (IBB), Centre of

Biological Engineering, Universidade do Minho,Braga, Portugal, and EMBRAPA Food Technology. Rio

de Janeiro, Brazil Reviews. Drug Metabolism 42(4): 612- 620

(http://informahealthcare.com)....................................................................................................................36

Tableau 11 : Traitement préliminaire à l’oxygène pur 0,50 l/min pour le blé (cv Orléans).………….…52

Tableau 12: Traitement préliminaire à l’oxygène pur 0,75 l/min pour le blé (cv Orléans)….…………..53

Tableau 13: Traitement prèliminaire à l’oxygène pur 1,00 l/min pour le blé (cv Orléans).…..................53

Tableau 14: Traitement prèliminaire à l’oxygène pur 0,50 l/min pour l’orge (cv Newdale

Cert)............................................................................................................................................................54

Tableau 15: Traitement prèliminaire à l’oxygène pur 0,75 l/min pour l’orge (cv Newdale

Cert)..……………………………………………………………………………………………………..55

Tableau 16: Traitement prèliminaireà l’oxygène pur 1,00 l/min pour l’orge (cv Newdale

Cert)……………………………………………………………………………………………................56

Tableau 17: Traitement prèliminaire à l’ozone pour le blé (cv Orléans).....………………….................57

Tableau 18: Traitement prèliminaire à l’ozone pour l’orge (cv Newdale Cert)...……………………….59

http://www.agr.gc.ca/cla-profilsdeculturehttp://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib55http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib55

xii

Tableau 19: Traitement comparatif avec l’oxygène pur / ozone et son action sur les microorganismes

…………………………………………………………………..……………………………….60

Tableau 20: Information classe et niveauxpour le taux de germination ..…………...………....98

Tableau 21: Analyse de la variance pour le taux de germination……..………………………..99

Tableau 22: Décomposition de l’ANOVA pour le taux de germination………………………..99

Tableau 23: Procédure GLM……...……………………………………………………………100

Tableau 24: Contrastes pour le taux de germination……………...……………………………101

Tableau 25: Moyennes et erreurs types pour le taux de germination…...……………………...102

Tableau 26: Procédure Univariate pour le taux de germination……………………..…………102

Tableau 27: Information classe et niveaux pour B. sorokiniana…………………………...…..110

Tableau 28: Analyse de la variance pour le taux de contamination par B.

Sorokiniana…….………………………………………………………………………….…….111

Tableau 29: Décomposition de l’ANOVA pour le taux de contamination par le B

sorokiniana……………………………………………………………………………………...112

Tableau 30: Procédure GLM B. sorokiniana……..…………….……………………………...113

Tableau 31: Contrastes pour le taux de contamination par le B. sorokiniana………………….114

Tableau 32: Moyennes et Erreur type pour le taux de contamination par le B

sorokiniana……………………………………………………………………………………...114

Tableau 33: Procédure Univariate pourcentage de contamination par le B.

Sorokiniana…..……………………………………………………………………………..…...115

Tableau 34: Information classe et niveaux pour le Fusarium…………………………….........124

Tableau 35: Analyse de la variance pour le taux de contamination par le

Fusarium……………………………………………………………………………………......125

Tableau 36: Décomposition de l’ANOVA sur le taux de contamination par le

Fusarium………………………………………………………………………………………...126

Tableau 37: Procédure GLMpour le Fusarium…………….…………….....………………….127

Tableau 38: Contrastes pour le taux de contamination par le Fusarium……………..…...........128

Tableau 39: Moyennes et Erreur type pour le taux de contamination par le

Fusarium…………………………………………………………………………………….…..129

Tableau 40: Procédure Univariate pour le Fusarium total……………………………………..130

Tableau 41: Information classe et niveauxpour le F. graminearum………………............…...139

Tableau 42: Analyse de la variance pour le taux de contamination par F.

graminearum………………………………………………………………………………….....140

Tableau 43: Décomposition de l’ANOVA sur le taux de contamination par le F.

graminearum………………………………………………………………………………….....141

Tableau 44: Procédure GLM pour le F graminearum.................................………...................142

Tableau 45: Contrastes pour le taux de contamination par le F. graminearum….............….....142

xiii

Tableau 46: Moyennes et Erreur type pour le taux de contamination par le F.

graminearum…………………………………………………………………………………....143

Tableau 47: Procédure Univariate pour le F. graminearum…………….. …………………....144

Tableau 48: Analyse de la variance avec effet rank pour le taux de contamination par le F.

graminearum…………………………………………………………………………………….152

Tableau 49: Procédure GLM (Rank LS Mean).………………………………………………..153

xv

Listes des figures

Figure 1: Répartition de la production céréalière dans le monde, 2008 (http://www.articque.com/guide-

metiers/secteur-agriculture.html).................................................4

Figure 2:Évolution des superficies en blé au Québec depuis 2000 (Statistique Canada :

http://www.grainwiz.com)................................................................................................................8

Figure 3: Évolution de la culture d'avoine et d’orge au Québec depuis 2000

(http://www.grainwiz.com)..............................................................................................................7

Figure 4: Fonte des semis et pourriture racinaire, Planche 144

(http://www.omafra.gov.on.ca/french/contact.html)......................................................................11

Figure 5: Fonte des semis, signes visuels …………………..…………….….……………….....11

Figure 6: Développement de Bipolaris sorokiniana sur l'orge (Hückelhoven et Kogel 1998).Plant-

Microbe Interact. 11, 292-300………………………...…..…….......................……13

Figure 7: Bipolaris sorokiniana (http://www.darcof.dk/enews/mar05/blotch.html).....................14

Figure 8: Fusarium graminearum. Tabuc, 2007. Flores fongique dedifférents substrats et conditions

optimales de production des mycotoxines………….………..…………….……........15

Figure 9: Cycle du Fusarium graminearum (Chandelier.et Kestemont, 2003). Le problème de la

Fusariose de l'épi et des mycotoxines en froment d'hiver : État des connaissances. Livre Blanc "céréales"

F.U.S.A et CRA-W Gembloux………………………………………………………..16

Figure 10: Relation entre la fusariose et la fonte des semis chez les céréales. Parry, Pettitt, Jenkinson,

Lees, 1994. The cereal Fusarium complex. In: Blakeman P, Williamson B, eds. Ecology of Plant

Pathogens. Wallingford, UK: CAB Intemational, 301-

20………..……………………………..........................................................................................17

Figure 11: Répartition géographique et utilisation des fongicides aux États-Unis (Gianessi et Reigner,

2002).……..…………………………………………………………………………….19

Figure 12: Formation de l’ozone (www.topchem.de/images/Effet de l’ozone.gif).......................28

Figure 13: Action oxydative de l’ozone (processalimentaire.com et Umes.over

blog.com)........................................................................................................................................29

Figure 14 : Schéma simplifié du procédé d’ozonolyse (OzoneLab™ Instruments,

http://www.ozoneservices.com) ………………………………………………………………....43

Figure 15: Procédé expérimental du traitement à l’ozone / oxygène ……………………….......45

Figure 16: Germination du blé et de l'orge sur papier Whatman………………..…...………......46

Figure 17: Développement duB. sorokinianas sur milieu Benlate pour le blé et

l'orge...……………………………………………………………………………………………46

Figure 18: Développement du Bipolaris sur le grain d’orge et de blé (Microscopie

binoculaire).....................................................................................................................................47

Figure 19: Bipolaris examiné au grossissement x 20 (Bourget, 2011)……………….................47

Figure 20: Bipolaris examiné au grossissement x40 (Bourget, 2011)………..............................47

Figure 21: Développement de colonies de Fusariumsur milieu PDA

…………………………................................................................................................................48

http://www.grainwiz.com/

xvi

Figure 22: Repiquages des Fusarium sur milieu FG (Bourget, 2011)……..…............................48

Figure 23: Préparation sur lame………………….……………….……………….......................49

Figure 24: Macroconidies de F.graminearum x 100...…………………………………..............49

Figure 25: Dispositif de traitement de l’orge aux ultrasons (figs. a-b-c-d)...................................68

Figure 26: Traitement de l’orge aux ultrasons ……………...…………………………………...71

Figure 27: La colonne du traitement oxydative (Belkacemi., 2011)……………..……………..99

Figure 28: Graphique Tige feuille et Box Plot (Germination)…………………………………107

Figure 29: Graphique de probabilité normale (Germination)…………………………………..108

Figure 30: Histogramme des résidus (Gérmination)………...………………………………....110

Figure 31: Graphique des résidus versus les valeurs prédites pour le taux de

germination……………………………………………………………………………………...111

Figure 32: Graphique Tige feuille et box plot (B.sorokiniana)………………………………..121

Figure 33: Graphique de probabilité normale (Bipolaris.sorokiniana)………………………..121

Figure 34: Histogramme des résidus (B. sorokiniana)….………………………………..……124

Figure 35: Graphique des résidus versus valeurs prédites pour le taux de contamination par le B.

sorokiniana……………………………………………..………………………………………125

Figure 36: Graphique Tige feuille etBox Plot (Fusarium totale)…....................................…...136

Figure 37: Graphique de probabilité normale (Fusarium totale)……………………………...137

Figure 38: Histogramme des résidus (Fusarium totale)…………..…………………………...139

Figure 39: Graphique des résidus versus valeurs prédites pour le taux de contamination par le total des

Fusariums....…………………………………………………………………………...140

Figure 40: Graphique Tige Feuille et Box Plot (F. graminearum).…………………………....149

Figure 41: Graphique de probabilité normale (F.graminearum).…………………………........150

Figure 42: Histogramme des résidus (F. graminearum).………………….……..…………….152

Figure 43: Graphique des résidus vs valeurs prédites pour le taux de contamination par le F.

graminearum……………………………………………………………………………………153

xvii

Liste des abréviations

Aw : Activité de l'eau, la pression de vapeur d'eaup d'un produit humide divisée

par la pression de vapeur saturantep0 à la même température.

F : Fusarium

FG : Fusarium graminearum

B : Bipolaris sorokiniana

Milieu Benlate : Milieu sélectif pour Bipolaris Stéphan Pouleur (11-02-2010) : fongicide qui

élimine les autres champignons.

Milieu PDA+2 (Potatos dextrose agar+Antibiotique) : Milieu de multiplication des Fusarium

Milieu Cerom Fg (No.1718) : Milieu pour identification du Fusarium graminearum : milieu

utilisé pour le repiquage après mise en culture sur PDA (12-06-2007)

CÉROM : Centre de recherche sur les grains inc.

USDA : United States Department of Agriculture

AAC : Agriculture et Agroalimentaire Canada

FAO STAT : Food and Agriculture Organization of the United Nations

AFB1 : Aflatoxine B1

AFG1 : Aflatoxine G1

CRAAQ : Centre de référence en agriculture et agroalimentaire du Québec

http://fr.wikipedia.org/wiki/Pressionhttp://fr.wikipedia.org/wiki/Vapeur_d%27eauhttp://fr.wikipedia.org/wiki/Pression_de_vapeur_saturantehttp://www.agr.gc.ca/

xix

Dédicace

À mes chers parents, mon époux

et toute ma famille qui m'ont accompagnée et

soutenuetout au long de ma vie afin de réaliser ce

merveilleux projet

xxi

Remerciements

Ce travail n'aurait pas puvoir le jour sans l'apport et le soutien majeur de mon directeur de

recherche, le Professeur Khaled Belkacemi, professeur titulaire, directeur du programme de

maîtrise en génie agroalimentaire du Département des sols et génie agroalimentaire, FSAA, qui

m'a initiée et dirigée dans ce projet, ce qui m’a permis d'élargir mes connaissances et de

développer mon sens critique. Mes sincères remerciements s’adressent également à ma

codirectrice Sylvie Rioux, agronome, Ph.D., phytopathologiste au Centre de recherche sur les

grains (CÉROM) pour sa collaboration et son soutienà ce projet. Je remercie aussi tous les

professionnels qui m'ont aidée tout au long de ma maîtrise, particulièrement Mme Nicole Bourget,

technicienne au laboratoire du CÉROM, Mme Madeleine Roy, technicienne en administration,

Département des sols et de génie agroalimentaire ainsi que Mme Jocelyne Giasson, technicienne

experte au même département, sans oublier mon amie et collègue Nasima Chorfa, Ph.D en sol et

génie agroalimentaire. Toutes ces personnes m'ont été d'une grande aide et d'un grand soutien.

Finalement, je remercie ma famille pour son appui et ses encouragements.

xxiii

Avant –propos

Ce projet vise principalement la mise au point d’un traitement oxydatif à l’oxygène pur et/ou à

l’ozone sans fongicide et la vérificationde son potentiel d’action en ce qui concerne le traitement

des semences de céréales (blé et orge), afin de maîtriser les deux agents pathogènes, le F.

graminearum etle B. sorokiniana, responsables de la fonte des semis et de la pourriture des

racines, tout en préservant le pouvoir germinatif de la semence.

Afin de maîtriser le F. graminearum et le B. sorokiniana, il faut donc effectuer une évaluation

comparative dela capacité des deux traitements ozone/oxygène, tout en optimisant les différents

paramètres du procédé de décontamination des graines céréalières eten évitant d’altérer le

pouvoir germinatif de ces dernières.

Le deuxième volet de ce projet comportaitdes tests préliminaires aux ultrasons ne concernant que

l’orge puisque sarésistance aux traitements oxydatifs avait déjà été noté.

1

Introduction

En production céréalière, les pertes de rendement qu’entraînent la fonte des semis et les

pourritures de racines sont causées par plusieurs agents pathogènes présents dans les semences,

plus particulièrement le Fusarium graminearum (Schwabe) et le Bipolaris sorokiniana (Sacc)

Shoemaker (Pouleur et al., 2006; Christensen et Stakman, 1935; De Tempe, 1964). La plupart des

traitements de semences utilisés par les agriculteurs pour maîtriser ces maladies sont des

fongicides appliqués sur les semences avant les semis (Mc Mullenet Lamey, 2000). Les

producteurs biologiques ne peuvent pas utiliser de pesticides pour traiter les semences afin

d’atténuer les pertes économiques importantes occasionnées par la fonte des semis. Des travaux

réalisés par plusieurs chercheurs dans le domaine des traitements oxydatifs par oxygène pur ou

ozone ont permis d’améliorer grandement la germination et de détruire des bactéries et les virus,

ainsi que certains champignons.

Le présent projet vise àvérifier le potentiel des traitements oxydatifs pour réduire le

F. graminearum et le B. sorokiniana, les deux agents pathogènes responsables de la fonte des

semi et de pourritures de racines, tout en préservant le pouvoir germinatif de la semence.

3

Chapitre I

Revue de littérature

4

1. Importance mondiale de la culturede l’orge et du blé

1.1 L’orge

L'orge (Hordeum vulgare L) est une céréaleannuelle utilisée principalement dans l'alimentation

animale, la fabrication d'aliments santé ainsi que dans la fabrication de bière et de whisky. C'est

une culture qui peut s'adapter à plusieurs régions dans le monde et plusparticulièrement aux

régions tempérées. Sa culture est favorisée par un climat frais, mais elle est particulièrement

sensible en hiver. Bien que l'orge soit cultivée dans une centaine de pays, sa production est

particulièrement centralisée en Europe (Allemagne, France, Angleterre, Suède et Norvège) mais

aussi en Amérique du Nord, en Australie et en Europe orientale. La répartition mondiale des

céréales est représentée dans la Figure 1.

Figure 1: Répartition de la production céréalière dans le monde en 2008(http://www.articque.com/guide-

metiers/secteur-agriculture.html)

Le Tableau 1 qui suit présente un bilan complet par année de la production d'orge dans différents

pays du monde selon AAC (Agriculture et Agroalimentaire Canada, 2012) et l’USDA (United

States Department of Agriculture,1997).

http://www.agr.gc.ca/

5

Tableau 1: Bilan mondial de la production millions de tonnes d’orge en 2005-2011 (USDA, AAC, Chris

Beckman, analyste céréale secondaire).

2005-2006

2006-2007

2007-

2008 2008-2009

2009-2010p

2010-2011p

Stocksde report 32,6 28,0 21,3 19,7 30,4 30,4

Production

Australie

9,5 4,3 7,2 7,0 7,8 7,5

Canada

11,7 9,6 11,0 11,8 9,2 8,8

UE-27

54,8 56,2 57,5 65,6 61,5 58,0

Russie

15,8 18,1 15,7 23,1 18,0 15,0

Turquie

7,6 7,5 6,0 5,6 6,0 5,5

Ukraine

9,0 11,4 6,0 12,6 12,0 11,0

Autres

27,8 29,4 29,6 28,2 32,8 30,0

Production totale 136,2 136,5 133,0 153,9 147,3 135,8

Offre totale 168,8 164,5 154,3 173,6 177,7 166,2

Commerce 17,5 14,6 18,5 19,0 17,6 16,0

Utilisation totale 140,8 143,2 134,5 143,1 147,3 141,2

Stocks en fin decompagne 28,0 21,3 19,7 30,4 30,4 25,0

Ratio stocks-utilisation(%) 19,9% 14,9% 14,6% 21,2% 20,6% 17,7%

6

1.2 Le blé

La production de blé est répartie sur l'ensemble du globe puisque le blé pousse même si la

température n’est guère favorable ou que l'eauest rare. C’est ce qui explique une production

élevée en Chine, en Inde et même en Russie (Tableau 2).En 2009-2010, la production mondiale

de blé était de 660 millions de tonnes, l'équivalent de 100 kg par habitant considérant la

population mondiale. Elle se classe au quatrième rang mondial en matière de culture, derrière le

riz, le maïs et la canne à sucre. Grâce àde multiples techniques culturales et de sélection

génétique ayant permis une augmentation et une amélioration du rendement et de la production,

la culture est passée de 1000 kg/ha en 1900 à 2900 kg/ha en 2010 les statistiques de la production

mondiale de blé sont données par la Food and Agriculture Organization of the United Nations :

FAO.

7

Tableau 2Production mondiale de blé en 2009 (FAO STAT)

Pays Surface (hectares)

Rendement (kg/ha)

Production (tonnes) %Total

Chine 24 210 075 4 748 114 950 296 16,9 %

Inde 28 400 000 2841 80 680 000 11,8 %

Russie 26 632 900 2 318 61 739 750 9,1 %

États-Unis 20 181 081 2 989 60 314 290 8,8 %

France 5 146 600 7 447 38 324 700 5,6 %

Canada 9 539 000 2 780 26 514 600 3,9 %

Allemagne 3 226 036 7 808 25 190 336 3,7 %

Pakistan 9 046 000 2 657 24 033 000 3,5 %

Australie 13 507 000 1 603 21 656 000 3,2 %

Ukraine 6 752 900 3 093 20 886 400 3,1 %

Turquie 8 026 898 2 566 20 600 000 3,0 %

Kazakhstan 14 329 400 1 190 17 052 000 2,5 %

Royaume -Uni 1 814 000 7 927 14 379 000 2,1 %

Iran 6 647 367 2 029 13 484 457 2,0 %

Pologne 2 346 200 4 173 9 789 586 1,4 %

Égypte 1 321 751 6 448 8 522 995 1,2 %

Argentine 4 334 780 1 747 7 573 254 1,1 %

Ouzbékistan 1 400 000 4 741 6 637 700 1,0 %

Italie 1 795 500 3 532 6 341 000 0,9 %

Afghanistan 2 500 000 2 026 5 064 000 0,7 %

Espagne 1 767 800 2 713 4 796 800 0,7 %

Algérie 1 848 575 1 598 2 953 117 0,4 %

Monde 225 437 694 3 025 681 915 838 100,00 %

8

2. Importance de la culture d’orge et de blé au Canada (Québec)

Au Canada, les céréales les plus cultivées sont le blé, l’orge, le maïs, l'avoine et le seigle. Elles

sont réparties en deux groupes : céréales de printemps et céréales d’automne. Le blé reste la plus

importante culture au Canada, soit environ 11 millions d'hectares (Campbell, 2010). La

production de blé (y compris le blé dur) est passée de 23 167 Mt en 2010-2011 a 24 500 Mt en

2011-2012 (http://www.agr.gc.ca/fra/industrie-marches-et-commerce/statistiques)

En ce qui concerne la culture du blé d’hiver au Québec (Figure 2), on note une légère

augmentation du semis qui est passée à 9 %, soit 17200 acres pour 2012. Pour sa production, il y

a eu une légère augmentation d’environ 485 ha (~1191 acres) pour un total de 4694 ha (115 94

acres). Pour ce qui est de la culture du blé de printemps, une baisse d’environ 37959 ha (~ 93759

acres) depuis 2001.

Figure 2 : Évolution des superficies en blé au Québec depuis 2000 (Statistique Canada :

http://www.grainwiz.com)

Pour la production de l’orge au Québec (Figure 3), on note une baisse continuelle des superficies

depuis 4 ans. Elle est de l’ordre de 3,7 %, pour une superficie finale de48217ha(119 095 acres) en

2012.


9

Figure 3Évolution de la culture d’avoine et d’orge au Québec depuis 2000

(http://www.grainwiz.com)

3. Fonte des semis et pourriture racinaire

La fonte des semis et la pourriture racinairefont partie des plus importantes maladies du blé, et de

nombreuses espèces de Fusarium sont associées à ces maladies chez la plupart des céréales

cultivées actuellement (Devaux, 1995). La fonte des semis (seedling blight) et les pourritures

racinaires sont des maladies qui touchent plusieurs cultures dont celles des céréales

(http://www.omafra.gov.on.ca). Les pourritures de racines des céréales portent le nom de piétins.

3.1 Fonte des semis

La fonte des semis est causée par plusieurs agents pathogènes (champignons et bactéries) dont

deux champignons le Fusarium graminearum (Schwabe) forme sexuée : Gibberella zeae

(Schwein.) Petch et le Bipolaris sorokiniana (Sacc, Shoemaker) forme sexuée : Cochliobolus

sativus (Ito and Kurib) Drechsl. Ex Dastur) (Pouleur et al., 2006; Christensen et Stakman, 1935;


10

De Tempe, 1964). Cette maladie est souvent favorisée par un sol froid et humide. En l’absence de

traitements fongicides sur les semences, elle est très redoutable car elle entraîne d’énormes pertes

dans les champs. Le Tableau 3 regroupe les différents micro-organismes qui affectent l’orge.

Tableau 3 : Fréquence relative des isolats d’entre-nœuds d'orge infectés par différents micro-organismes

dans différentes régionsdu Québec entre 1977 et 1978

(Eng-Chong Puaa et al., 2009)

Micro-organisme

Région Année Cochliobolus

sativus Fusarium

spp

Cochliobolus sativus et

Fusarium spp

Autres champignons et bactéries

Bagot 1977-1978 35,1-37,5 5,2-29,9 56,7-26,2 3,0-6,4

Beauharnois 1977-1978 46,4-22,1 7,9-12,1 40,3-55,5 5,4-10,3

Chateauguay 1977-1978 41,7-33,8 4,4-23,0 51,3-39,0 2,6-4,2

Huntingdon 1977-1978 30,8-28,7 1,7-40,5 60,4-27,8 7,1-3,0

Richelieu 1977-1978 36,6-32,3 2,1-21,8 59,1-36,6 2,2-9,2

Rouville 1977-1978 57,3-28,8 2,7-36,0 36,0-30,2 6,0-5,0

St-Hyacinthe 1977-1978 33,5-20,4 5,6-25,3 54,8-43,9 6,1-10,4

Vaudreuil 1977-1978 48,0 6,1 39,4 6,5

Verchères 1977-1978 44,2-37,1 3,4-18,7 49,5-34,2 2,9-10,0

Moyenne 1977-1978 41,5-30,1 4,3-25,9 49,7-35,4 4,6-7,3

*Chaque valeur représente la moyenne de 1 - 5 champs pour chacun des 50 segments prélevés sur

des lésions touchant des entre-nœuds

11

La maladie se manifeste par une pourriture de la racine de la plantule qui devient brunâtre ou

rougeâtre à labase. Ce symptôme est suivi d'un flétrissement et d’un amincissement de la tige

puis de la mort de la plantule (Figure 4). Au Québec cette maladie est souvent causée par des

champignons du genre Pythium ou même des bactéries (Rhizoctonia Solani ou Rhizoctone

commun) (Duval, 1991).

Figure 4 : Fonte des semis et pourriture racinaire, Planche 144

(http://www.omafra.gov.on.ca/french/contact.html).

Un retard ou même l'arrêt de croissance des plantules sont aussi observés. Cette pourriture peut

aussi faire suite à une momification de couleur brune ou brun-rouge. La semence paraît vidée de

son contenu; elle est alors visqueuse et de couleur jaune ocre (Figure 5)

Figure 5 : Fonte des semis, signes visuels

3.2 Piétin commun

Le piétin commun, connu aussi sous le nom de « pourriture sèche », est une maladie

spécifique du blé et de l'orge de printemps. Cette maladie est causée par le B. sorokiniana.

Plantule saine

Fonte des semis

http://www.omafra.gov.on.ca/french/contact.html

12

AuCanada,on estime que lespertes de rendement chez l'orge de printemps causée par le piétin

commun sont d'environ 10,3 % par année (Pieninget al., 1976) et de 6,1 % pour ce qui est du blé

de printemps (Ledinghamet al., 1973).Dans le sud et au centre du pays, on trouve le plus souvent

le C. sativus, alors que leF.culmorumest très rare, voire absent (Broadfoot,1934; Harding, 1973;

Sallans et Tinline, 1965; Tinline et Ledingham, 1979; Tyner, 1956). Par contre, aunord-ouest de

l'Alberta (Peace River), on trouve souvent le F. culmorum (Tinline et al., 1979; Tyner, 1956).En

1984, Duczek a étudié dans différentes régions du Canada (Beaverlodge, Fort Vermillion,

Saskatoon et Scott)des lignées de cultivars d'orge susceptiblesd’entraînerle piétin commun.

Unebaisse de rendements en grainsvariable d'une région à l'autre ainsi qu’uneaugmentation de la

maladie se manifestent par une diminution du nombre d’épis. À Beaverlodge, le F. culmorum

etleC. sativus ont étéisolésà partir d'entre-nœuds présents sous le collet etcontrairement aux autres

régions, le C. sativusyétait plus présent. Dans les prairies, le C. sativusestprédominant pour la

semence de blé (Bailey et al 2004).

B. sorokiniana encore appelé Helminthosporium sativum est l'agent le plus probable et le

plus redoutable pour les graminacées, en particulier l'orge. Cette espèce est la cause d’autres

maladies qui touchent l’épi et les feuilles, se traduit par des brûlures de l'épi et des taches

helminthosporiennes, ce qui entraîne une baisse du rendement et occasionne une baisse de qualité

des semences. La production de blé est également menacée étant donné que ce champignon se

développe lors de températures chaudes et humides, habituelles dans plusieurs pays comme la

Chine (Chang et Wu, 1998), le Brésil (Mehta et al., 1992), l'Inde, le Pakistan, le sud-est

Australien et certaines parties de l'Europe (Kwasna, 1995). Sa capacité à s'acclimater au froid a

permis à ce dernier de survivre dans les régions froides du monde et de l'Amérique du Nord

(Kumar et al., 2002). Les spores produite par le piétin se propage sur les terres agricole et survive

longtemps surtouts grâce aux conditions optimale d’humidité et de température. Ces spores vont

être transportées par la pluie et le vent pour induire d’autres infections culturales de l’épi et de la

semence par la suite (Bailey et al 2004). Dans la province de Québec, on le trouve souvent dans

les grains d'orge (Greaney et Machacek 1942, Machacek et al., 1951). Les taches

helminthosporiennes, sont observées fréquemment dans l’Est Canadien et l’infection est

séminicol. Contrairement aux prairies, l’infection terricole est prédominante (Bailey et al., 2004).

La couleur brune est signe d’infection, qui s’étend parfois des racines, aux coléoptiles et aux

feuilles suivie d’une dégénérescence et une mort inévitable de la plantule. Bien au contraire, dans

http://dictionnaire.sensagent.com/d%C3%A9g%C3%A9n%C3%A9rescence/fr-fr/#anchorSynonyms

13

les prairies, les symptômes sur les feuilles ne sont pas visible, le seul moyen de les identifier,

reste l’observation du rhizome et du talle de la plante une fois retirer du sol (Bailey et al 2004).

Lors d’études effectuées en Ontario (Clark., 1978), on a observé une diminution de 26 % du

rendement en grains chez l’orge en raison de la présence de taches helminthosporiennes, des

pertes de 10,3 % causées par le piétin commun, et dans les Prairies (Piening et al., 1976; Clough

et Johnston, 1978; Johnston, 1976), des pertes d’environ 40-60 % en raison de la pourriture

commune des racines dans des parcelles expérimentales. Le B. sorokiniana se caractérise par des

conidiophores a paroi épaisse, des conidies elliptiques de 60-120 µm x 12-20 µmet sectionnés de

cinq à neuf cellules (Kumar et al., 2002) (Figure 6 et Figure 7).

Figure 6: Développement de Bipolaris sorokiniana sur l'orge (Hückelhoven et Kogel 1998)

http://en.wikipedia.org/wiki/Conidiophore

14

Figure 7: Bipolaris sorokiniana (http://www.darcof.dk/enews/mar05/blotch.html)

3.3 Piétin fusarien

Le piétin fusarien est l'une des maladies céréalières des grandes cultures. Il est causé par

plusieurs espèces du genre Fusarium dont le F. culmorum, le F. graminearum et le F.

avenaceum. Cette maladie est responsable de la fonte des semis suite à l'inoculum de Fusarium

retrouvé dans la semence, les résidus culturaux ou le sol. Ses agents responsables contaminent

plusieurs céréales, graminées, est la contamination est plus élevée si le blé suit le blé, l'orge ou le

maïs. La maladie diffère selon la saison. Chez une culture d’automne, les sols humides favorisent

l'infection des racines.Au printemps, un sol sec et riche en engrais azoté risque d'accentuer la

maladie par des lésions aux collets, aux tiges et aux racines qui finissent par pourrir. On observe

alors dessignes complémentaires, comme des trous dans le champ, des plants (jaunes et rabougris,

moins vigoureux) qui meurent avant leur levée, un pourrissement des semences (collet, racines,

base de tige), une décolorationqui passe du brun au brun-rouge (http://www.omafra.gov.on.ca).

Le genre Fusarium tire son nomdu latin «fusus» car ses spores sont fusiformes (Figure 8).

Plusieurs espèces du genre d’une maladie de l’épi appelée « fusariose de l’épi » et c’est de cette

façon que les Fusarium se retrouvent sur les graines (semences). Bon nombre de ces espèces de

Fusarium ont le potentiel aussi de produire des «mycotoxines» dans les grains qu’elles infectent

pendant la saison de croissance, dont le désoxynivalénol (DON) et la zéaralénone (ZEA),

synthétisées par F.gramineaum (Bai et Shaner, 1994). Ces champignons se caractérisent par la

production d’un grand nombre de spores, ce qui leur assure un grand pouvoir de contamination.

http://www.darcof.dk/enews/mar05/blotch.html

15

Ces dernières sont issues de deux types de reproduction sexuée ou asexuée, qui est le principal

critère de leur classification (Tabuc, 2007).

Figure 8Fusarium graminearum (Tabuc, 2007)

La Figure 9 résume le cycle vital du F. graminearum.

a : macrophialides et macroconidies

b: macroconidies;

c: asque octosporé

16

Figure 9 Cycle du Fusarium graminearum (Chandelier et Kestemont, 2003)

Il existe une étroite relation entre la fusariose de l’épi et la fonte des semis, non seulement en

raison de la présence du même agent causal qu’estle F. graminearum, mais aussi en raison de la

transmission de celui-ci par des facteurs de transmission naturelle comme le vent ou les

éclaboussures de pluie. Ce cycle permet la présence continuelle de l'inoculum de Fusarium au

sol, sa transmission aux racines via le sol ou la semence, sa libération sous forme de spores par

voie aérienne et enfin sa localisation sur l’épi. La figure 10 montre parfaitement ce lien. Selon

Parry et al, (1994), toutes les espèces de Fusarium pathogènes des céréales peuvent survivre sur

les résidus de culture dont le F.graminearum.

17

Figure 10 Relation entre la fusariose et fonte des semis chez les céréales

(Parry etal., 1994)

3.4 Épidémiologie

Les sources les plus probables de la transmission de l'inoculum de Fusarium sont le vent et les

éclaboussures de pluie, vecteurs essentiels de transmission de la maladie (Jenkunson et Parry

1994). Les insectes, les oiseaux et les rongeurs sont des vecteurs de transmission secondaires,

mais non négligeables, de certaines spores fongiques qui fragilisent les graines en digérant leur

paroi, ce qui facilite la pénétration des spores fongiques (Pfohl-Leszkowicz, 2001, Mahanna,

2002, Jouany, 2007).

Le cultivar et l’espèce font partie des nombreux facteurs qui conditionnent le développement des

moisissures et favorisent l’infection des épis et par conséquent la contamination des grains. La

fusariose de l’épi a un impact énorme sur la qualité des semences, et cela entraîne une

détérioration du grain d'amidon, de la paroi cellulaire et des protéines (Parry et al., 1995).

S’ensuit alors une baisse de la germination, et une fragilité de la plantule la rendant plus sensible

aux infections (Bechteletal., 1985) entraînant ainsi l’apparition de la fonte des semis et le piétin

18

fusarien (Wong etal., 1992). Les Fusarium ont une croissance optimale à une température

comprise entre 22 et 37°C. La majorité des moisissures se développent bien dans un milieu

humide (Aw = 0,85), les Fusarium se développent dans un milieu très humide (Aw> 0,9), ce qui

explique leur présence dans les champs et sur les plantes vivantes (Castegnaro et Pfohl-

Leszkowicz, 2002). Les moisissures sont des organismes aérobies ; l’oxygène leur permet

d’effectuer une croissance normale (Tabuc, 2007; Mahanna, 2002). Cependant, la plupart peuvent

se développer même si l’oxygène est limité. Les moisissures se développent normalement à un

pH compris entre 3 et 8. Généralement, une croissance fongique est optimale à un pH compris

entre 5 et 6 (Tabuc, 2007).

3.5 Moyens de lutte

Les moisissures sont par définition des micro-organismes ubiquistes pouvant se développer sur

les aliments. Celles qu’on rencontre le plus souvent font partie de la famille des genres

Aspergillus, Penicillium et Fusarium. Lors du stockage, après ou avant la récolte, lors du

transport ou lors des transformations alimentaires, les céréales sont souvent susceptibles d’être

contaminées par les moisissures. Cela peut se produire au champ, avant la récolte, au cours du

séchage, lors du stockage et après la transformation des graines (Tabuc, 2007).

Selon des études effectuées en Russie durant 4 ans, la contamination des échantillons de blé par

les espèces de Fusarium a été constatée dans 5 à 100 % des échantillons de blé analysés

(Tutelyan, 2004). La même chose s’est produite au Brésil en 1998 : de 98,7 à 100 % des

échantillons de blé analysés contenaient des Fusarium (Ono et al., 1999). L’espèce

F.graminearum arrive en tête de file pour les céréalesd’orge (Vrabcheva et al., 1996) et le maïs

(Parket al., 1996; Molto et al., 1997).

Les seuils de contaminations retenus pour le projet, sont ceux utilisés au Danemark en production

biologique pour déterminer si un lot de grains peut être utilisé comme semence (Nielsen, 2000),

ces seuils sont inferieur à 30% pour le Bipolaris et sont inferieur à 15% pour le Fusarium.

19

3.5.1 Traitements chimiques (fongicides)

Longtempsutilisés, les fongicides sont utiles pour protéger les plantes et les semences contre des

phyto ravageurs entraînant de graves maladies telluriques, comme la fonte des semis et la

pourriture racinaire. La Figure 11représente l’utilisationdes fongicides et leur répartition aux

États-Unis.

Figure 11 Répartition géographique et utilisation des fongicides aux États-Unis

(Gianessi et Reigner, 2002)

Au Canada la superficie d’épandagede fongicide en hectares représente 1 818 436 en 1996, elle

augmente a 2 572 388 en 2001 et de 2 859 798 en 2006 (Statistique Canada, Recensement de

l'agriculture, 2008).

Le traitement des semences avec des fongicides reste l’une des méthodes les plus utilisées en

agriculture pour traiter les semences. Les fongicides permettent d’augmenter le rendement de 11

à 15 % pour les semences de blé et d’orge. Plusieurs d’entre eux sont utilisés par enrobage des

grains pour détruire les spores infectieuses situées sur la semence, mais des fongicides

systémiques sont nécessaires pour atteindre les agents pathogènes qui se logent plus en

profondeur dans le grain (Phyto-info Meknès-Tafilalet, 2011). Le Tableau 4 regroupe quelques

traitements fongicides des semences.

20

Tableau 4Traitement des semences homologué au Canada (profil de la culture de blé d’automne

au Canada 2010 www.agr.gc.ca/cla-profilsdeculture)

Ingrédient actif Classification Mode d'action

Groupe

de

résistanc

e

Statut de

l'ingrédi

ent actif

Ravageurciblés

Azoxystrobine Methoxyacrylates C3:respiration 11 H Tache septorienne, rouille jaune,taches bronzées

,rouille des feuilles

Carbathiine+thirame

(traitement de semence)

Oxathiin-

carboxamide

s+dithiocarbamate et composes

annexes

C2:respiration+mult

i-site contacte

activité

7+M3 RE+RE

Pourriture des semences et fonte des

semis(F.spp et Cochliobolus sativus),Maladie réprimées: piétin commun(Cochliobolus

sativus)et piétin fusarien

Chlorthanolin Chloronitrile

(phtalonitrile)

Activité de contacte

sur plusieurs sites M5 RE

Fusariose de l’épi (répression), tache

septorienne des glumes,tache septorienne,taches

bronzées

Tébuconazole+

prothioconazole+

methalaxyl(traitement

de semences

)traitement de

semenceL1397

Triazole+trazole

+acylalanine

G1 : biosynthèse de

stérol dans des

membranes+G1 : biosynthèse de

stérol dans des

membranes+G1+A1 : synthèse d'acides

nucléiques

3+3+4 H

Pourriture des semences et fonte des semis

(F.spp et Cochliobolus sativus), Pythium spp et

Aspergillus spp, charbon nu, carie commune

Maladie reprimées:piétin commun(Cochliobolus sativus) et

piétin fusarien, fonte des semis (penicillium spp)

Tébuconazole+thirame

(traitement de

semence)

Triazole G1:biosynthese de stérol dans des

membranes

3+M3 H

Pourriture des semences et fonte des semis

(F.spp et Cochliobolus sativus) fonte des semis

(F.spp et Cochliobolus sativus),

Pourriture des semences par champignon saprophyte (penicillium,Aspergilluset

alternaria),

Tache septorienne transmise par les semences,carie commune,charbon nu,pourriture

pythienne

des semences

Tébuconazole+trifloxi

strobine Triazole


stérol dans des membranes

3+11 H

Rouille des feuilles, rouille des tiges, rouille

jaune,

taches bronzées, Oïdium(Blanc), Stagonosporose

(moucheture)

Difenoconazole+méta

laxyl M (traitement de semence)

Triazole+acylalanin

e


stérol dans des

membranes+A1 : synthèse d'acides

nucléiques

3+4 H

Pourriture des semences générale (Fusarium,pythium,

penicillium et aspergillus), charbon nu, carie

commune

, tache septorienne transmise par les semences,

stagonosporose (moucheture)

Maladie réprimées : piétin commun (Cochliobolus spp)

et piétin fusarien, piétin-échaudage

Fludioxonil(traitement de semences par

applicateurs

commerciaux)

Phénylpyrrole E2:signal

transduction 12 H Pourriture des semences et fonte des semis

Ipconazole(traitement

de semences Triazole G1 : biosynthèse de

stérol dans des 3 H

Pourriture des semences (, penicillium et

aspergillus),

http://www.agr.gc.ca/cla-profilsdeculture

21

membranes Pourriture des semences et fonte des semis

(F.spp et

Cochliobolus sativus), charbon nu, carie

commune

Maladie reprimees : pietin commun(Cochliobolus

sativus) et piétin fusarien

Mancozébe

Dithiocarbamate

et composes

annexes


sur plusieurs sites M3 H

Rouille des feuilles, taches bronzées, Stagonosporose (moucheture), carie

commune

Manébe

Dithiocarbamate

et composes

annexes


sur plusieurs sites M3 RH

Pourriture des racines et fonte des semis

(y compris le Fusarium), carie commune

L’efficacité de ces traitements fongicides reste néanmoins limitée du fait des débris, de la

précédente céréale (l’inoculum qui reste longtemps sur le sol) et de la résistance de certains

agents pathogènes aux traitements fongicides. Ces traitements laissent des résidus et sont un sujet

de préoccupation pour la santé publique, d’où la nécessité de trouver d’autres méthodes afin

d’éviter l’usage accru de ces traitements chimiques (Harman,1992; Maoet al., 1997). Les

microbes antagonistes comme agents de lutte biologique sont désormais une véritable option des

plus importantes ces dernières années (Daamen et al.,1989).De nombreuses méthodes ont été

développées pour atteindre des niveaux de désinfection efficaces.

3.5.2 Traitements par des produits naturels ou commerciaux

Selon Sholberg et al., (2006), la vapeur d’acide acétique a été testée comme traitement de

semences. En 2006, des travaux préliminaires effectués par Pouleur et son équipe ont révélé que

la vapeur de vinaigre a le potentiel de réduire les populations de Fusarium, plus particulièrement

le F. graminearum présents dans les semences d’orge et de blé. Cette méthode a aussi permis une

régression de l’infection chez l’orge due au charbon vêtu (Ustilago hordei) sans altérer la

germination. Le traitement avec la vapeur de vinaigre à forte concentration pourrait donner une

meilleure répression du B. sorokiniana.D’autres exemples de traitements naturels ou

commerciaux sont présentés au Tableau 5.

22

Tableau 5 Traitements de semences par des produits naturels ou commerciaux

(Recueil Bionovation -volet semences édition 2008 CRAAQ Publication no EVC 022)

Traitement Culture Maladie(pathogène) Auteurs

Plusieurs extraits de plantes Générale Fusarium.sp,

Moisissure rose (Microdochium nivale)

Kuhn

et al.,2004

Vinaigre Blé Carie (tilletia triticl),Rayure réticulée(pyrenophora

sp)

Borgen et

Neilsen,

2001

Chaux et poudre de

basalte,chitosan, extrait de

graine de pamplemousse

Blé, orge Tache Helminthosporienne et fonte des semis

Bipolaris sorokiniana) Fusarium.spp

Batura et al.,

2004

Poudre de moutarde, acide

acétique

Blé, orge,

seigle

Charbon du seigle (urocystis occulta),Charbon

nu(Ustillago spp),Carie(Tilletia spp)Rayure

réticulée(pyrenophora sp)

Borgen et

Kristensen,

2000

Vitamines Millet

perlé

Mycoses (Mildiou), Pushpalatha et

al.,2007

Acide acétique Orge Charbon nu (Ustillago nuda)Rayure

réticulée(pyrenophora sp)

Nielsen

etal.,2000

3.5.3 Traitements par des moyens physiques

Les traitements physiques sont recours au traitement par la chaleur sèche ou humide (Tableau 6).

L'assainissement thermique est très efficace, ilest utilisé comme anti infectieux. Néanmoins, la

vapeur d’eau chaude est très coûteuse à produire et une forte chaleur peut être préjudiciable au

matériel (Troller, 1993). D’autres études ont démontré que l’utilisation de la chaleur sèche était

efficace pourcontrer le F. graminearum,mais peu efficace pour réduire le B. sorokiniana (Clear

etal.,2002.,Pouleur et al.,2006).

http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib64

23

Tableau 6 Exemples de traitements physiques des semences (Recueil Bionovation -

volet semences édition 2008 CRAAQ Publication no EVC 022)

Traitement Culture Maladieciblée (agent pathogène) Auteurs

Thermothérapie (air chaud ou humide) Blé, autre Carie(Tilletia tritici) Forsberg,2004

Vapeur et ultrasons Blé, épeautre Carie(Tilletia tritici) Borgenetal.,2005

Eau chaude+utilisation de substance

organiques et contrôle biologique Blé,orge

Tache Helminthosporienne et fonte

des semis (Bipolaris sorokiniana)

Fusarium spp Batura etal.,2004

Air chaud (50° - 70° C x14jour) Blé, orge

Tache (Cochliobolus sativus)Rayure

réticulées(pyrenophora spp) Clear etal,2002

Eau chaude(45° - 55° C)+Utilisation de

l'acide acétique Orge

Charbon nu(Ustiligo nuda),Rayure

réticulée(pyrenophora spp) Nielsen etal.,2000

L’utilisation des méthodes de rayonnement est à bannir en industrie agro-alimentaire en raison

des risques inhérents associés à des matières radioactives(Bellar et al.,1974;Trussell et Umphres,

1978).

3.5.4 Traitements biologiques

Les traitements biologiques ont recours à des micro-organismes pour lutter contre les

maladies.Des exemples sont présentés au Tableau 7

http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib5

24

Tableau 7Traitements biologiques des semences (Recueil Bionovation-volet semences édition

2008 CRAAQ Publication no EVC 022)

Traitement Culture Maladieciblée (agent pathogène) Auteurs

Trichoderma Viride Blé, orge

Tache Helminthosporienne et fonte des semis (Bipolaris

sorokiniana) Fusarium spp Batura et al., 2004

Pseudomonas

chlororaphis

Blé, orge,

avoine, seigle

Carie (Tilletia spp) Moisissure rose (Microdochium

nivale) Rayure réticulée (pyrenophora spp) Tache

Helminthosporienne et fonte des semis(Bipolaris

sorokiniana) Widen et Annas, 2004

Streptomyces spp Maïs

Aspergillus spp.Curvularia lunata,

DrechsleramaydisFusarium spp. Bressan, 2003

3.6 Traitements oxydatifs (oxygène/ozone)

Le phénomène oxydatif, est une réaction chimique impliquant l’oxygène ou l’ozone. Il se définie

par une oxydation graduelle des membranes cellulaires, dont le résultat final est une perte

d’électrons. Le stress produit est dit « stress oxydatif », ce dernier entraine une perturbation au

niveau des constituants cellulaires et une fuite de leurs contenus, puis une mort cellulaire. Les

formes réactives de l’oxygène«FRO » ou reactive oxygen species « ROS » sont :

L'anion superoxyde (O2-.), le radical hydroxyle (OH

.), le radical peroxyle (ROO

.), et le radical

alkoxyle (RO.).Le radical hydroxyle (OH

.), reste le plus réactif des trois. D’autre forme ne

produisant pas de radicaux libre, ce sont:l'oxygène singulet (1O2) et le peroxyde d'hydrogène

(H2O2), qui sont aussi oxydant et réactif que le radical hydroxyle (Pasquier, 1995). Le stress

oxydatif induit des dommages tissulaire par l'oxydation des constituants membranaires tel que les

protéines, (Franzini, et al 1993, Sellak, et al 1992) et les lipides. Les protéines se segmentent et

se ligues, par contre pour les lipides, une peroxydation avec formation desliaisons protéines-

lipides, engendre des désordres membranaire au niveau cellulaire.

25

Le ROS est formé à partir de la dégradation de l'O3 dans l'apoplaste, qui est l’espace entourant les

cellules. Selon Lamb et Dixon en 1997, lors d’une attaque des cellules par des agents pathogènes,

une exposition à l'ozone fait augmenter la concentration du ROS dans l’espace apoplastique.

L’accumulation du ROS semble parfois néfasteet mêmedangereuse au niveau cellulaire,

néanmoins son role est aussi bénéfique, exemple : un médiateur des signaux et un messagers

secondaire au niveau de la cellule (Vranová et al., 2002 ; Overmyer et al., 2003).

Trussell et Umphres (1978) indiquent qu’en agroalimentaire des recherches sont entreprises afin

de trouver des agents de désinfection efficaces contre la détérioration des aliments par des agents

de dégradation. Sans danger pour les humains et l'environnement, ces produits doivent être non-

corrosifs pour l’équipement de transformation alimentaire et d’un coût moindre. Pour l’industrie

alimentaire, l’ozone serait préférable au chlore. Toutefois, il est important de connaître les

modalités de son utilisation en industrie, puisque sa manipulation peut être dangereuse. Chez

l’homme, l’intoxication à l'ozone touche principalement la fonction respiratoire. À la phase

aiguë,les symptômes se traduisent par des céphalées, de la toux, des étourdissements, une

sensation de larmoiement et des picotements dans la gorge, un goût et une odeur forte; àl'état

chronique, on a constatédes maux de tête, de la faiblesse, des troubles de la mémoire (Hoof,

1982).

Des recherches ont été menées afin d’améliorer l’efficacité du traitement à l’ozone sur la solution

nutritivede la tomate de serre (Le Quillec, 2002), par l’addition de plusieurs doses de peroxyde

d’hydrogène à l’ozone.Ils ont constatés que l’addition de 4 à 5 ppm de peroxyded’hydrogène à

l'ozone a permis de réduire le nombre de bactéries présentes dans la solution nutritive. La dose

recommandée est d’environ 1,5 ppm de peroxyded’hydrogène pour 9 ppm d'ozone. En effet,

environ 99,4 % de la flore bactérienne totale était détruite avec 10 ppm d'O3 et 1,5 ppm de H2O2.

3.6.1 Définition (ozone)

L'ozone a été découvert pour la première fois en 1781 par Martin von Marum et la molécule a

ensuite été isolée par un chercheur suisse, Schönbein(1839), qui donna le nom en se référant à la

racine grecque « ozein » sentir. L’ozone a d'abord été utilisé en 1907 dans le traitement de l’eau

municipale dela ville de Niceet en 1910 à Saint-Pétersbourg (Kogelschatz, 1988). L'ozone est un

agent oxydant très puissant pour la plupart des formes de matière organique (Runia, 1994). Selon

http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib31http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib31http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib38

26

Le Quillec (2002), le pouvoir répresseur de l’ozone sur les micro-organismes dépend de sa

concentration et de la durée d'exposition. Plus sa concentration est élevée, plus le temps

nécessaire pour désinfecter la solution nutritive de la tomate de serre, est court. L’ozone est un

composé chimique composé de trois atomes d’oxygène (O3). L'ozone est produit de façon

artificielle par l'action de décharges électriques à haute tension, qui fractionnent la molécule

d'oxygène en deux, ce qui donne deux atomes d'oxygène. Une collision se produit ensuite entre

l'atome d'oxygène O, et une molécule d'oxygène diatomique O2 crée une molécule d'ozone O3

(Carruthers, 1997). La réaction de la synthèse de l'ozone est la suivante : 3 O2 + énergie 2

O3.

3.6.2 Propriétés chimiques

Selon Zeynep et al., (2003), l'ozone est un gaz de couleur bleu pâle lorsque la

températureambiante est de 25ºC. Il devient à l'état liquide et de couleur bleu foncé à une

température de-111,9ºC, solide et de couleur pourpre à-192,5 ºC. SelonTakeuchi (2005), à la

température et à une pression ambiante, c'est un gaz incolore. Il est constitué de trois atomes

d'oxygène qui sont disposés selon un angle fermé d'environ 116,49 0et d’une longueur de liaison

de 1,278 Å. Un atome central d'oxygène est attaché à distance égale avec les deux autresatomes

oxygène (Oehlschlaeger, 1978).

Contrairement à l’O2 qui est inodore, l’O3 se distingue par son odeur caractéristique (Takeuchi,

2005), semblable à l'eau de Javel. Cette odeur s’accentue dans les endroits confinés où on

trouveun important champ électrique par exemple un transformateur a haute tension.

La température modifie la solubilité de l’ozone, puisqu'une augmentation de la température

diminue sa solubilité dans l’eau mais augmente sa vitesse de réaction et de propagation dans l'eau

(Carruthers, 1997). Par contre, une hyperthermie augmenterait la vitesse de décomposition de

l'ozone. Dans l’eau et à0-30 ºC,l’ozone est 13 fois plus soluble que l'oxygèneetcela augmente si

l’eau est froide(Rice,1986).L’ozonesedécomposeplus rapidement lorsque l’eau est chaude(Rice et

al., 1981).

Le Tableau 8 indique la relation entre la température et la solubilité de l’ozone dans l'eau.

L'ozone dans l'eau pure se dégrade plus rapidement en oxygène et même plus rapidement dans les

http://fr.wikipedia.org/wiki/Oxygènehttp://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib50http://fr.wikipedia.org/wiki/Eau_de_Javelhttp://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib54http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib55http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib55

27

solutions impures, selon Hill et Rice (1982).L’ozonea une plus longue demi-vie à l'état gazeux

que dans une solution aqueuse (Rice,1986).

Tableau 8 Relation entre la température et la solubilité d'ozonedans l'eau

(Rice et al., 1981)

Température (C0) Solubilité (litre ozone/litre d'eau)

0 0, 640

15 0, 456

27 0, 270

40 0, 112

60 0, 000

3.6.3 Mode d'action

Selon Victorin, (1992), l'ozone détruit les micro-organismes par l'oxydation progressive des

composants cellulaires vitaux. La surface cellulaire des bactéries est la principale cible de

l'ozonation. Deux mécanismes principaux ont été identifiés. Le premier indique que l'ozone

oxyde les groupes d’enzymes sulfhydriles et des acides aminés, des peptides et des protéines en

peptides de courte chaîne. Le deuxième indique que l'ozone oxyde les acides gras polyinsaturés

en peroxydes. L’ozone entraîne la dégradation des lipides insaturés des enveloppes cellulaires,

altérant l’intégrité de la membrane cellulaire et la fuite ultérieure du contenu cellulaire. Les

doubles liaisons des lipides insaturés sont particulièrement sensibles à l’action de l'ozone. Des

études menées par Karaca et Velioglu (2007) afin d’examiner l'efficacité de l'ozone dans la lutte

contre de multiples micro-organismes (bactéries, virus, algues et champignons) ont démontré que

l'ozone pouvait détruire ces organismes par oxydation progressive des composants cellulaires. De

plus l'ozone provoquerait une oxydation généralisée des protéines cellulaires internes, causant la

mort cellulaire fugace. D'autres chercheurs ont permis d’étudier l'effet de l'ozone sur la

Salmonella typhimurium. Ils ont conclu, après plusieurs essais, que l'ozone pouvait avoir des

http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib54http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib55http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib68http://informahealthcare.com/action/showPopup?citid=citart1&id=CIT0035&doi=10.3109/03602532.2010.484461

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effets mutagènes, entraînant ainsi des lésions cellulaires et l’inactivation (Dillon et al., 1992). Son

action sur les bactéries Gram négatives, en particulier sur les couches de lipoprotéines et de

lipopolysaccharides qui sont les premiers sites de destruction, entraîne une hyperperméabilité

cellulaire et la lyse cellulaire immédiate (Kimet al.,1999). L’ozone provoque l’oxydation interne

des protéines cellulaires induisant ainsi une mort cellulaire immédiate et rapide. La lyse cellulaire

se fait aussi à la suite d’une destruction accrue par dénaturation des acides nucléiques. Ainsi, la

thymine est plus sensible à l'ozone que la cytosine ou l'uracile (Muddet al.,1969;Hinze et

al.,1987;Takamotoet al.,1992; Kim etal.,1999). Selon Kim et al., 1999, l’ozone détruit également

l'ARN viral et modifie les chaînes polypeptidiques de la protéine virale. Le type de micro-

organismes, l’âge de la culture, la densité de la population à traiter, les méthodes de

quantification sont autant de paramètres qu'on doit étudier afin d'évaluer la sensibilité des micro-

organismes et l'efficacité antimicrobienne de l'ozone (Guzel-Seydimet al., 2004). Cette action

oxydative de l’ozone ainsi que sa formation sont bien expliquées dans la figure 12. Khadre et

Yousef (2001), qui ont comparé les effets de l'ozone et du peroxyde d'hydrogène sur les spores de

Bacillus spp, ont conclu que l'ozone est plus efficace que le peroxyde d'hydrogène. Pour de

nombreux micro-organismes pathogènes, un temps minimum et une concentration adéquate en

ozone seraient utiles afin d’obtenir l'inactivation désirée (Gujer et Von Gunten; 2003,Karaca et

Velioglu, 2007;Cullen et al, 2009).

Figure 12. Formation de l’ozone (www.topchem.de/images/Effet de l’ozone.gif)

http://informahealthcare.com/action/showPopup?citid=citart1&id=CIT0017&doi=10.3109/03602532.2010.484461http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib37http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2004&_rdoc=1&_fmt=full&_orig=search&_origin=search&_cdi=6944&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1521182093&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=5f963e2ca5da1edbef3f80e19452049a&searchtype=a#bib47http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WMV-4BFXR47-1&_user=10&_coverDate=0

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Étude comparative des traitements de semences sans ...€¦ · dans différentes denrées alimentaires (Freitas-Silva Otniel et Venâncio Armando 2010, Ozone applications to prevent