• Techniques usuelles
• Techniques particulières
Techniques anatomo-pathologiques
Mode de prélèvement :
Punch biopsie
• Lésion récente non modifiée par la
thérapeutique
• Profonde avec un fragment d’hypoderme
Biopsie cutanée
Exérèse cutanée
Technique standard
• Fixation
• Examen
macroscopique
Prélèvements en croix
• Bloc de
paraffine
• Bloc
• Lame blanche
• Lame colorée
Lame colorée (HES)
Techniques complémentaires
• Colorations spéciales
• Immunofluorescence Directe
• Cytodiagnostic de Tzanck
• Immunohistochimie
Colorations spéciales
• PAS : membrane basale, mycoses
• Bleu alcian : dépôt de mucines
• Colorations argentiques
• Orcéine : fibres élastiques
• Perls : dépôts hémosidériniques
PAS (Periodic-Acid-Schiff)
Bleu Alcian
Coloration par l’orcéine (fibres élastiques)
Perls
HES
Immunofluorescence Directe
• Indication : dermatoses vésiculo-bulleuse/lupus
• Biopsie en peau saine périlésionelle en zone exposée et non-exposée
• Coupes à congélation
• Panel 4 Ac : IgG, IgM, IgA, C3
• Liquide de Baker
Immunofluorescence indirecte
(IFI)
• Méthode: mise en
évidence des
antigènes contenus
par réaction Ag-Ac
avec révélation par
un substrat
fluorescent
IF: conditions techniques
• Prélèvement frais
• Horaires (prévenir le labo d’anapath)
• Les lames ne se conservent pas
• Examen sur microscope particulier
(avec lampe à UV)
Lésion bulleuse
Grande bulle flasque sujet âgé
Cytodiagnostic de Tzanck
• Indication : dermatoses vésiculeuses et
bulleuses
• Ouverture toit de la bulle au vaccinostyle et
grattage du fond, étalement et coloration de
Giemsa
• Recherche d’effet cytopathogène viral ou de
cellule acantholytique
Techniques complémentaires:
immunomarquage
• À partir d’une lame
blanche
• Mise en évidence
d’une protéine par
réaction Ag-AC
• Révélé par un
chromogène
Immunohistochimie (IHC)
• Mise en évidence des Ag contenus
dans un tissu par réaction Ag-Ac,
révélation par substrat coloré
• Prélèvement fixé
• Lecture sur microscope standard
• Possibilité d’études a posteriori
• Les lames se conservent
Immunohistochimie (suite)
• Exemples: mise en évidence…
– de Cytokératine dans les cellules d’un
carcinome
– d’Actine dans les cellules d’un sarcome
musculaire
– Ag viral dans les cellules d’un lymphome
induit par l’EBV
CD3
CD20
Tumeur peu différenciée?...
Marqueur neuro-endocrine
(chromogranine)
Conclusion:
Carcinome neuro-endocrine
Techniques complémentaires :
hybridation in situ
• Mise en évidence d’un
fragment de chromosome
qui code pour une
protéine particulière
• Sur lame blanche
• Matériel fixé
• Révélation par
fluorescence (FISH) ou
par un chromogène
(CISH)
A B
C D
Hybridation in situ (sonde EBER)
Infiltrat lymphoïde induit par le virus EBV
Biologie moléculaire
et cytométrie de flux
• Examens pratiqués au laboratoire d’hématologie
• +/- passage par le labo d’Anatomie Pathologique pour sélectionner le prélèvement adéquat
• Mise en évidence du caractère clonal du tissu prélevé (recherche de lymphome)
• Sur matériel frais
Techniques cytogénétique
FISH : recherche d’amplification du gène
(prélèvement frais)
Microscopie électronique
• Technique lourde, coûteuse
• Résultat tardif
• Indications très précises, de plus en
plus rares
• Prévenir à l’avance
• Immersion immédiate dans un tube de
gutaraldéhyde
Frais? Fixé?
Matériel fixé Matériel frais
Immunohistochimie Immunofluorescence
Hybridation in situ Biologie moléculaire
Cytométrie de flux
Microscopie
électronique