Test biochimique 4 Recherche d'une

désoxyribonucléase (DNase)

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BTS

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• Le test d'hydrolyse de l'ADN ou le test de désoxyribonucléase (DNase) vise à déterminer la capacité d'un micro-organisme à hydrolyser l'ADN et à l'utiliser comme source de carbone et d'énergie.

• La gélose à ADN, est un milieu différentiel:

permettant de mettre en évidence la capacité d'un micro-organisme à produire une désoxyribonucléase ou une DNase.

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• Ce milieu est de couleur vert pâle à cause de la présence du complexe ADN-vert de methyl (indicateur). Il contient également des nutriments pour les bactéries.

• NB: Le vert de méthyl est un cation qui se lie à l'ADN chargé négativement).

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• Si la souche est cultivée sur le milieu, elle va pouvoir produire de la désoxyribonucléase, qui décompose l'ADN en fragments de petite tailles.

• Comme l'ADN est décomposé, il ne se lie plus au vert de méthyle, et la couleur verte s'efface et la colonie est entourée d'un halo incolore (voir fig. 1).

Test d’hydrolyse d’ADN

Halo clair

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Méthode

• Ensemencer les colonies suspectes en strie unique de 1 à 2 cm ou en spot de 5 mm de diamètre à la surface du milieu. 4 ou 5 souches peuvent être étudiées simultanément sur la même boîte.

• Incuber 24 heures à 37°C. 4.

• Verser à la surface de la gélose une solution d'acide chlorhydrique N.

• Après quelques minutes de contact, noter l'éclaircissement de la zone autour de la strie ou du spot, traduisant des colonies possédant une désoxyribonucléase.

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Lecture

• Positif: Comme l'ADN est hydrolysé, le vert de méthyle est libéré rendant le milieu incolore et transparant autour de la colonie.

• Négatif: absence d’hydrolyse de l'ADN, le milieu reste vert.

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intérêt d’utilisation de TEST de DNASE

• Il est utilisé pour différencier S.aureus (DNase + ve) des Staphylocoques non aureus qui ne produisent pas cette enzyme.

• Le test de DNase est utile en cas de difficulté à effectuer un test de coagulase.

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Inconvénients du test

• Certaines souches de Staphylococcus aureus résistant à la méticilline (SARM) ne donnent pas de résultat positif obtenu par le test de DNase .

• Certaines souches des staphylocoques non aureus tels que Staphylococcus capitis peuvent donner des réactions faibles avec le test DNASE.

• Les genres de Serratia et Moraxella produisent également de la désoxyribonucléase.

• Le HCl 1 N est bactéricide pour les staphylocoques. Une fois que le HCl a été appliqué, le test doit être lu dans les 5 minutes et ne peut pas être poursuivi par ré- incubation.

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Résultats

• Exemple de souche DNase (+) :

– Serratia marcescens

– Staphylococcus aureus

– Campylobacter jejuni (quelques espèces)

– M. Catarrhalis

• Exemple de souche DNase (-) :

– Staphylococcus epidermidis

– Neisseria gonorrhoeae