Azoospermies non obstructivesAzoospermies non obstructives

Utilisation de spermatozoïdes congelés après

TESE (Testicular Sperm Extraction)

Cryo - TESE

Atelier TESEC.Giorgetti – FFER 2006

Constitution d’un éjaculat

Volume

20%

60%

20%

T+E

VS

P+CE

Biochimie

Carnitine

Fructose

Citrate + P. Ac

E

VS

P+CE

Classification des azoospermiesClassification des azoospermies

Paramètres Obstructive Non obstructive(excrétoire) (sécrétoire)

Taille des Testicules N ou N

Vol. éjaculat ou N N

FSH N

Biochimie séminale

Fructose ou N N

Carnitine N

Cryo-TESE-ICSICryo-TESE-ICSI

ICSI décrit 1991

ICSI + TESE décrit en 1993: Craft (fécondation), Schoysman

(grossesse)

ICSI + TESE à l’ IMR en janvier 1997

ICSI + Cryo-TESE par Fischer 1996

ICSI + Cryo-TESE à l’ IMR en juin 97

Données de la littératureDonnées de la littérature

Séries peu nombreuses

nombre de patients faible

non randomisées

mixtes : NOA + OA

Spermatozoïdes « frais » + « congelés »

critères d’inclusion variables

pas toujours l’histologie

Données de la littératureDonnées de la littérature

EfficacitéTESE = TEFNA

TESE : 1 seul gros fragment = plusieurs petits

Taux de fécondation TESE = TEFNA

Spermatozoïdes “frais” = “congelés”

Pas de spz retrouvé dans 50% des cas NOA (30% à 70%)

depuis 1997, spz prélevés lors de la biopsie testiculaire

diagnostique sont congelés pour une ICSI différée.

Prélèvement chirurgicalPrélèvement chirurgical

Anesthésie généraleIncision: peau

vaginalealbuginée (1 – 1.5 cm)

Pression douce – pulpe testiculaireEchantillon de grande taille (500 mg)Transport au laboratoire

Transport au laboratoireTransport au laboratoire

Tube Falcon de 10 ml contenant 4 à 5 ml un milieu de culture (BM1)

Traitement au laboratoireTraitement au laboratoire

Rinçage avec un milieu de culture

Traitement au laboratoireTraitement au laboratoire

Dilacération mécanique avec 2 lames de verre dans une boite de Pétri contenant 2 ml de BM1

Traitement au laboratoireTraitement au laboratoire

Suspension la plus fine possibleExamine un aliquot de 20 μl sous microscope inversé

Traitement au laboratoireTraitement au laboratoire

Sédimentation 1- 2 min afin d’isoler les plus gros fragments

Traitement au laboratoireTraitement au laboratoire

Sédimentation 1- 2 min afin d’isoler les plus gros fragments

Sélection des spermatozoïdesSélection des spermatozoïdes

Surnageant traité classiquement / monocouche (1 ml de SpermFilter 80%)

Recherche des spermatozoïdesRecherche des spermatozoïdes

La totalité du culot est dilué dans 0.250 ml de BM1Congélation

+

Examiner un aliquot de 20 μl de la suspension

Recherche - Recherche +

La totalité du culot de centrifugationest resuspendu dans 30 μl de BM1Examine un aliquot de 2 μl

Examiner la totalité du culot

Fragments / collagénase

- +

-

CongélationCongélation

Congélation en paillettes de 0.150 ml

Même protocole que pour congeler les spermatozoïdes éjaculés

Test de décongélation est réalisé le jour même réalisé dans les mêmes conditions que le jour de l’ICSI

Utilisation des spermatozoïdesUtilisation des spermatozoïdesaprès Cryo-TESEaprès Cryo-TESE

Décongélation 10 mn à 37°C et « lavage » avec 2 ml BM1

Centrifugation 15 mn à 300g

Culot resuspendu dans 20 μl de BM1

Totalité des 20 μl est examiné au microscope inversé (sous huile)

Si pas de spermatozoïdes mobiles (1/2 cas) + 20 μl de Pentoxifylline (Torental à 10% dans BM1 soit 7.2 mmol/l)

Après 5 mn de contact recherche le moindre mouvement flagellaire

Cryo-TESE-ICSICryo-TESE-ICSI

Article (C.Giorgetti - IMR) : Crude cumulative delivery rate following ICSI using

intentionally frozen-thawed testicular spermatozoa in 51 men with non-

obstructive azoospermia.

Publié dans RBMOnline – Vol 11. N° 3. 2005

----------------------------

118 patients qui bénéficient d’une biopsie testiculaire pour NOA (1998-2002)

Examen histologique confirme le diagnostic de NOA

Spermatozoïdes sont retrouvés dans 54 cas (46%)

Congélation est réalisée dans 51 cas (43%)

3 patients : < 5 spermatozoïdes tous dysmorphiques (non congelés)

ICSI réalisées 1998 – juin 2004

Cryo-TESE-ICSICryo-TESE-ICSI

Histologie testiculaire

Sertoli

cell-only

Arrêt de maturation

Hypo

Spermatogenèses

Nb. TESE 51 43 24

Nb. cryoTESE 9 (18%) 20 (47%) 22 (92%)

Nb. Paillettespar TESE

4.3 (3-6) 6.5 (4-10) 7.9 (5-12)

Nb.Spermatozoïdes par paillette

8 (3-10) 15 (3-50) 25 (10-80)

Cryo-TESE-ICSICryo-TESE-ICSI : RésultatsRésultats

Histologie testiculaire

Sertoli

cell-only

Arrêt de maturation

Hypo

Spermatogenèses

Nb. ICSI 16 35 48

Nb. de transferts 15 (94%) 35 (100%) 47 (98%)

Nb. Gr cliniques 5 13 17

Nb. Gr évolutives

% par transfert

4

26.7%

10

28.6%

15

31.9%

Cryo-TESE-ICSI : RésultatsCryo-TESE-ICSI : Résultats

N° cycle d’ ICSI 1° 2° 3° 4°

Nb. d’ICSI 51 31 10 7

Age de la femme 30.6 31.3 32.4 33.8

No. d’accouchement 13 12 2 2

Accouchement / cycle 25 % 39 % 20 % 29 %

Taux cumulatif d’Acc. 25 % 49 % 53 % 57 %

Azoospermies non obstructivesAzoospermies non obstructives - Conclusion- Conclusion

En cas d’azoospermie aucun examen ne peut prédire la présence d’une

production de spermatozoïdes dans le testicule.

On peut prédire seulement un % de chance de retrouver des spermatozoïdes

La biopsie diagnostique est la seule à apporter une réponse

Lors d’une biopsie toujours être prêt pour une congélation des spermatozoïdes

Le taux de biopsie positive est fonction des critères cliniques et biologiques d’inclusion

Taux d’accouchement proche de 50% après 2 cycles d’ ICSI

Enfants nés aucune particularité