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Pureté et concentration optimiséesCônes pour purification de Protéines

Cônes pour protéine PureSpeed™

Pureté et concentration optimales

Rapide – moins de 15 minutes

Traitement simultané de plusieurs échantillons

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• Concentration et pureté supérieures par rapport aux méthodes conventionnelles • Purification d'anticorps et de protéines recombinantes, en microlitres ou en millilitres • Traitement parallèle de 1 à 12 échantillons de protéine avec la pipette électronique

E4 XLS de Rainin•Plusrapidequelesméthodesclassiques :deséchantillonspursen15 minutes• Protéines préservées - activité supérieure des protéines• Aucune étape de concentration supplémentaire requise

Flux de travail amélioré et pratiqueProtéine fonctionnelle pure et concentrée

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Grâce au protocole de purification disponible sur les pipettes électroniques E4 XLS Rainin, les cônes PureSpeed constituent une méthode pratique, peu onéreuse et rapide (15 minutes) de purification de protéines en micro-volumes. Les cônes PureSpeed sont fournis en double coques contenant 12 cônes chacune et peuvent contenir trois types de résine : ProA et ProG pour la purification des anticorps ; IMAC pour les protéines recombinantes.

unique des cônes pour protéine PureSpeed fait passer l'échantillon de façon répétée à travers une couche de résine compacte sur un faible volume mort. Ainsi, le temps de contact avec la résine est contrôlé et la cinétique de fixation est améliorée. L'étape de lavage permet de supprimer tous les contaminants pouvant générer des faux positifs et l'étape finale d'élution à faible volume produit une protéine fonctionnelle hautement concentrée.

Les cônes pour protéines PureSpeed™ de Rainin simplifient grandement la purification des anticorps et des protéines recombinantes. Cette approche innovante permet d'obtenir des concentrations optimales de protéine purifiée, et offre de nombreuses possibilités pour les essais fonctionnels en aval.

À l'inverse des méthodes utilisant des colonnes par gravité ou par centrifugation, le processus

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Développez vos applications grâce aux cônes PureSpeed

Grâce à leur mise en pratique rapide, au flux de travail amélioré et aux faibles exigences de réactif, les cônes pour protéine PureSpeed de Rainin sont avantageux dans de nombreuses applications protéomiques :

Essais fonctionnels Détermination structurelle Analyse d'expression cible Interactions protéine-protéine Développement d'essais Développement de processus

Essais d'immunoprécipitation Tests de purification Reconnaissance des biomarqueurs Validation des biomarqueurs Analyse et sélection de banques d'échantillons

Caractérisation du plomb Optimisation du plomb Analyse structurelle Analyses de protéine Essais précliniques Immunogénicité

Préparer simultanément plusieurs échantillonsGrâce aux pipettes électroniques Rainin E4 XLS 8 ou 12 canaux, il est possible de purifier plusieurs échantillons simultanément. La figure ci-contre montre comment les échantillons 1 à 6 (contrôles positif et négatif) peuvent être hautement purifiés puis enrichis simplement et rapidement.

Chaque ligne de microplaque correspond à une phase du processus de purification. La pipette électronique E4 XLS aspire et distribue les solutions automatiquement. De plus, elle guide l'utilisateur au cours du processus.

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d Capturer, purifier et enrichirPureSpeed simplifie votre flux de travail

Elution de la protéine enrichieEn aspirant de façon répétée le tampon d'élution à travers le cône PureSpeed, vous déplacez la protéine cible concentrée de la résine vers un puits vide. Pour cette phase, un volume minimum de tampon d'élution est requis pour libérer la protéine cible pure. Vous obtenez ainsi la plus forte concentration possible.

Capturer la protéine cible La conception unique brevetée de la couche de résine compacte retient la résine dans le cône pour protéine PureSpeed. L'échantillon est aspiré dans le cône, la protéine cible se fixe à la résine et les protéines sans affinité et les contaminants sont extraits. L'échantillon est aspiré dans la résine de façon répétée, pour atteindre l'équilibre de fixation.

Purifier l'échantillon de protéine Semblables à l'étape de capture, les étapes de lavage répétées permettent d'extraire les protéines non fixées et non spécifiques ainsi que les contaminants du cône PureSpeed. La protéine cible concentrée reste fixée à la couche de résine.

LescônespourprotéinesPureSpeedassurentunprocessusdepurificationplusrapide,plussimpleetplusfiable,etpermettentd'obtenirdesprotéinesfonctionnellespuresethautementconcentrées.Résultat :meilleureproductivité,réductiondugaspillageetdesrisques.

• La conception unique brevetée de la couche de résine compacte retient la résine dans le cône PureSpeed.• Avec le mode PureSpeed, la pipette Rainin E4 XLS guide les utilisateurs tout au long du protocole, à chaque

étape de purification.• L'élution de la protéine nécessite des volumes de tampon réduits. La protéine présente ainsi une

concentration maximale.

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Tout est plus facile avec la pipette Rainin E4 XLSMaîtrisez votre application de purification de protéine avec la pipette électronique Rainin E4 XLS. Que vous purifiiez un ou plusieurs échantillons, la pipette E4 XLS vous guide lors du protocole de purification. De plus, elle exécute automatiquement les étapes de capture, de purification et d'élution.

Sélectionner le modeUne fois installé, PureSpeed devient le mode standard sur le carrousel d'options de la pipette E4 XLS.

Personnaliser le protocoleQu'il s'agisse du volume d'échantillon, du débit ou du nombre de cycles, chaque paramètre du protocole de purification de protéine est facile à identifier et à optimiser en fonction des applications.

Suivre le protocoleLes protocoles PureSpeed sont grandement facilités par la boule de commande intuitive et simple d'utilisation, et par la structure de menus carrousel de la pipette E4. Les touches de la pipette E4 permettent à l'utilisateur de naviguer entre les différentes étapes du protocole.

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Les cônes pour protéine PureSpeed garantissent des concentrations maximales de protéines pures par rapport aux techniques standard de colonne par gravité ou par centrifugation.

Lors de deux expériences parallèles, un pré-mélange d'échantillon a été préparé et purifié grâce aux technologies standard de colonne de centrifugation et de gravité en suivant les instructions du fabricant, et à l'aide des cônes pour protéine PureSpeed. Après comparaison des données finales de concentration et de pureté, les cônes PureSpeed affichaient des résultats bien supérieurs.

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d Purification IgG à l'aide de PureSpeed Hautes performances grâce à la pipette E4 XLS

Expérience Un lysat d'E.coli est enrichi avec hIgG (Sigma-Aldrich®) pour obtenir une concentration finale de 0,5 mg/mL. 100 μL ou 500 μL de lysat sont purifiés à l'aide des protocoles PureSpeed recommandés et d'une pipette Rainin E4 XLS. À titre de comparaison, des expériences de purification similaires ont été effectuées avec la même substance de départ et des colonnes de centrifugation standard, en suivant les protocoles recommandés par le fabricant pour une concentration et une pureté maximales. Une expérience similaire a été menée avec un lysat d'E.coli (concentration hlgG : 0,01 mg/mL) à l'aide de cônes PureSpeed et des colonnes par

gravité standard. RésultatsLes gels représentés dans les figures 1 et 2 sont des gels NuPAGE® 4–12 % Bis-Tris pour électrophorèse avec tampon MES en cours. Après élution totale, un échantillon de 4 ou 10 µL a été chargé dans chaque gel. Le taux de récupération et le rendement ont été déterminés à l'aide de la méthode HPLC. 75 % de la masse lgG d'origine ont été récupérés à l'aide des cônes pour protéine PureSpeed. Les échantillons affichaient une pureté de 95 %, comme l'indiquent les gels. De plus, la concentration finale de la protéine après élution via les cônes PureSpeed était 2 à 3 fois plus élevée que celle de l'échantillon initial.

Point de discussionLes colonnes par gravité et de centrifugation nécessitent des volumes de résine bien plus importants que le protocole PureSpeed. Les concentrations sont donc plus faibles et le produit est moins pur. Grâce aux cônes pour protéine PureSpeed, les échantillons normalement réservés aux colonnes par gravité peuvent être traités plus rapidement et de façon groupée, jusqu'à 12 en parallèle. De plus, les chercheurs obtiennent des rendements et des concentrations élevés, avec des quantités de résine moindres par rapport aux colonnes par gravité. Ils réalisent ainsi des économies significatives.

La quantification de protéines a été effectuée sur 10 µL d'éluant à l'aide de la méthode HPLC. La masse totale et la concentration finale de la protéine purifiée ont été évaluées (voir tableaux).

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L 2 3 4 5 6 7

Figure 1

GelNuPAGEcontenantunlysatd'E.coliavecuneconcentrationdehlgGde0,5mg/mLpurifiéàl'aidedescônesPureSpeedetd'unecolonnedecentrifugation.

Voie 1 : Protein Ladder

Voie 2 : Lysat d'E.coli avec faible concentration de hlgG

Voie 3 : Gravité

Voie 4 : 100 µL de lysat purifié dans la colonne de centrifugation avec 200 µL de résine ProA

Voie 5 : 100 µL de lysat purifié dans des cônes PureSpeed avec 5 µL de résine ProA

Voie 6 : 500 µL de lysat purifié dans la colonne de centrifugation avec 200 µL de résine ProA

Voie 7 : 500 µL de lysat purifié dans des cônes PureSpeed avec 20 µL de résine ProA

Figure 2

Gel NuPAGE contenant un lysat d'E. coli avec une concentration de hlgG de 0,01mg/mLpurifiéàl'aidedescônesPureSpeedetd'unecolonnepargravité.

Voie 1 : Protein Ladder

Voie 2 : Lysat d'E.coli avec faible concentration de hlgG

Voie 3 : Gravité

Voie 4 : 5 ml de lysat purifié dans la colonne par gravité avec 1 mL de résine ProA

Voie 5 : 5 mL de lysat purifié dans des cônes PureSpeed avec 80 µL de résine ProA

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Typedecolonne/Volumederésine/Volumed'échantilloninitial

Volume d'élution (µL)

Concentration(mg/mL)

Rendement total (µg)

Colonne de centrifugation 200 µL – 100 µL 434,1 0,08 35

Colonne de centrifugation 200 µL – 100 µL 440,4 0,07 30

Colonne de centrifugation 200 µL – 100 µL 441,1 0,06 26

PureSpeed 200 µL Cône pour protéine 5 µL – 100 µL 15,4 1,45 22

PureSpeed 200 µL Cône pour protéine 5 µL – 100 µL 16,6 1,35 22

PureSpeed 200 µL Cône pour protéine 5 µL – 100 µL 17,3 1,45 25

Colonne de centrifugation 200 µL – 500 µL 414,3 0,44 182

Colonne de centrifugation 200 µL – 500 µL 423,0 0,49 207

Colonne de centrifugation 200 µL – 500 µL 425,1 0,43 183

PureSpeed 1 000 µL Cône pour protéine 20 µL – 500 µL 70,1 1,92 134

PureSpeed 1 000 µL Cône pour protéine 20 µL – 500 µL 70,6 1,98 140

PureSpeed 1 000 µL Cône pour protéine 20 µL – 500 µL 79,4 1,73 137

DonnéesHPLCindiquantlaconcentrationfinaledeprotéineetlerendementtotaldescônes PureSpeed et des technologies concurrentes.

Typedecolonne/Volumederésine/Volumed'échantilloninitial

Volume d'élution (µL)

Concentration(mg/mL)

Rendement total (µg)

Colonne par gravité 1 mL – 5 mL 1 000 0,002 2,1

Colonne par gravité 1 mL – 5 mL 1 000 0,002 2,2

Cône 1 000 µL pour protéine PureSpeed 80 µL – 5 mL 294 0,11 32,3

Pour plus d’informationwww.mt.com/rainin

Mettler-Toledo Rainin, LLC Sujet à modifications techniques© 04/2016 Mettler-Toledo Rainin, LLCImprimé en Suisse 17700604 Rev E

MARQUES COMMERCIALES DE RAININ: Rainin, Pipetting 360° et LTS sont des marques déposées et E4, XLS et PureSpeed sont des marques de Mettler-Toledo Rainin, LLC. NuPAGE est une marque déposée d‘Invitrogen, Inc. Sigma-Aldrich est une marque déposée de Sigma-Aldrich Company, LLC.

Quality Certificate ISO 9001Environment Certificate ISO 14001

Le kit de démarrage Rainin inclut tous les éléments nécessaires pour commencer. Il inclut une pipette électronique E4 XLS configurée avec le protocole de purification automatisé, un manuel d'instructions et tous les accessoires requis pour effectuer des purifications de protéine.

Des millilitres aux microlitres...Purification de protéine radicalement simplifiée

Référence MT Description

Cônes et accessoires PureSpeed

17012561 PT-2-A5 Résine ProA 5 µL, cônes 200 µL, lot de 12

17012562 PT-2-A20 Résine ProA 20 µL, cônes 200 µL, lot de 12

17012563 PT-2-G5 Résine ProG 5 µL, cônes 200 µL, lot de 12

17012564 PT-2-G20 Résine ProG 20 µL, cônes 200 µL, lot de 12

17012566 PT-2-N5 Résine IMAC 5 µL, cônes 200 µL, lot de 12

17012567 PT-2-N20 Résine IMAC 20 µL, cônes 200 µL, lot de 12

17012568 PT-10-A20 Résine ProA 20 µL, cônes 1 000 µL, lot de 12

17012569 PT-10-A80 Résine ProA 80 µL, cônes 1 000 µL, lot de 12

17012570 PT-10-G20 Résine ProG 20 µL, cônes 1 000 µL, lot de 12

17012571 PT-10-G80 Résine ProG 80 µL, cônes 1 000 µL, lot de 12

17012572 PT-10-N20 Résine IMAC 20 µL, cônes 1 000 µL, lot de 12

17012573 PT-10-N80 Résine IMAC 80 µL, cônes 1 000 µL, lot de 12

17012588 PT-ACC Accessoires PureSpeed

17012623 LR-P2-96P-5 Bloc de 96 puits 2,2 µL

Kits de démarrage PureSpeed

17012577 PT-S2-A20 Kit de démarrage PureSpeed avec E4-200XLS + ProA

17012578 PT-S2-G20 Kit de démarrage PureSpeed avec E4-200XLS + ProG

17012576 PT-S2-N20 Kit de démarrage PureSpeed avec E4-200XLS + IMAC

17012579 PT-S10-A20 Kit de démarrage PureSpeed avec E4-1000XLS + ProA

17012580 PT-S10-G20 Kit de démarrage PureSpeed avec E4-1000XLS + ProG

17012581 PT-S10-N20 Kit de démarrage PureSpeed avec E4-1000XLS + IMAC

Cônes Rainin PureSpeed compatibles avec les pipettes E4 XLS LTS uniquement.