S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Cours de BactériologieFaculté de Médecine de Fès

Dr. Sylvestre Tigaud

Laboratoire de Bactériologie

Centre de Biologie Nord

Hôpital de la Croix-Rousse

CHU de LYON

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Méthode d’étude des Antibiotiques

Dr. Sylvestre Tigaud

sylvestre.tigaud@chu-lyon.fr

Tel : +33 4 72 07 18 44

Fax : +33 4 72 07 18 42

Hôpital de la Croix-Rousse

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Etude de la sensibilité aux antibiotiques-1 (rappel)

• Base théorique :– Détermination de la CMI : Concentration Minima Inhibitrice ;

c'est la plus faible concentration capable d'inhiber toute culture visible de la souche.

– La CMI est comparée aux deux « concentrations critiques c et C » qui correspondent aux concentrations obtenues chez l’homme.

– Les limites c et C sont fixées par le Comité Français de l'Antibiogramme ou le NCCLS

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Etude de la sensibilité aux antibiotiques-

• Bactérie résistante CMI > CCMI plus élevée que les concentrations d'antibiotiques obtenues in vivo ; le traitement ne sera pas efficace

• Bactérie sensible CMI < cCMI nettement inférieure aux concentrations obtenues in vivo ; le traitement peut être efficace

• Bactérie intermédiaire c<CMI<Czone d'incertitude ; la bactérie peut être atteinte en augmentant la posologie

– Quotient inhibiteur : rapport entre concentration in vivo et CMI ; plus il est élevé, plus le traitement sera efficace (QI > 8)

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Etude de la sensibilité aux antibiotiques-3

• Antibiogramme (en pratique la mesure des CMI est réservée à des cas particuliers)

• Diffusion en milieu solide : méthode des disques (la mesure du diamètre d'inhibition reflète la valeur de la CMI)lecture automatisée désormais possible

• Dilution en milieu liquide : systèmes automatisés ; la lecture est automatisée et informatisée

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Exemple d’un antibiogramme

sur Acinetobacter

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Diagnostic bactériologique direct6 – Sensibilité aux antibiotiques

Bactériostase et CMI• La bactériostase est l'arrêt de la multiplication du

germe, qui reste vivant, et donc susceptible de re-prendre sa multiplication si les conditions se modifient.

• La CMI, concentration minimale bactériostatique, est la plus faible concentration d'un antibiotique donné qui inhibe toute croissance visible en 24 heures.

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Diagnostic bactériologique direct6 – Sensibilité aux antibiotiques

Bactéricidie et CMB• La bactéricidie est la mort du germe, définitivement

incapable de reprendre sa multiplication.

• La CMB, concentration minimale bactéricide, est la plus faible concentration d'un antibiotique donné qui ne laisse survivre que 1/10000 après 24 heures de contact.

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Diagnostic bactériologique direct6 – Sensibilité aux antibiotiques

Bacteriostase et Bactéricidie

0

2

4

6

8

10

12

14

0' 15' 30' 1h 2h 3h 18h

Témoin1/2 CMICMICMB2 X CMB

Pas d’AB

Bacteriostase

Bactericidie

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Méthode d’étude de l’activitédes antibiotiques

• Détermination de la CMI– Concentration Minimale Inhibitrice en milieu liquide ou solide

• Détermination de la CMB – Concentration Minimale Bactéricide

• Antibiogramme – par diffusion en milieu gélosé

– en milieu liquide (méthode automatisée)

• Avenir : Recherche de gène de résistance (sondes) ?

2µg/ml

0.25µg/ml

0.5µg/ml

1µg/ml

4µg/ml

8µg/ml

Témoin

24 hà 37°C

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Ensemencement des tubes

CMILe premier tube

sans culture visibledonne la CMI

2µg/ml

0.25µg/ml

0.5µg/ml

1µg/ml

4µg/ml

8µg/ml

Témoin

24 hà 37°C

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

CMI

La première boîtesans culture visible

donne la CMBCMB

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

0.25µg/ml

0.5µg/ml

1µg/ml

2µg/ml

4µg/ml

8µg/ml Témoin

La première boîtesans culture visible

donne la CMI

CMI par dilution en gélose

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Zonesd’inhibition Antagonisme

Antibiogramme par diffusion

A

B

C

D

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

0

10

20

30

40

50

60

0,1 1 10 100 1000

Concordance Diamètres-CMI

D

d

Cc mg/l

mm

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

Méthode automatisée à 2 points de mesure

c C

Sensible

c C

Intermédiaire

c C

Résistant

S.J.R.T. H.C.R. 04/20/23

MéthodeATB

Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO.

B

A

B

A

B

A

B

A

Addition Indifférence

Synergie Antagonisme

Etude des associations d’Antibiotiques