Entérobactérie - BTS Bioanalyse & Contrôlebts-baco.e-monsite.com/medias/files/enterobacterie.pdf · Milieu sélectif des Gram ... un reflet métallique en dos de scarabée : colonies

Entérobactérie

GELOSE EMB

Milieu sélectif des Gram –

COMPOSITION : (pour 1L)

Peptone 10,0g

Lactose 10,0g

Eosine 0,4g

Bleu de méthylène 0,0625g

Hydrogénophosphate de potassium 2,0g

Agar 15,0g

LECTURE :

La dégradation du lactose se traduit par une coloration rose ou un aspect

métallique des colonies, dans le cas contraire, les colonies sont incolores.

L’aspect des colonies permet donc d’orienter le diagnostic :

- Colonies de 2 à 3 mm de diamètre, plates, violet très foncé, avec très souvent

un reflet métallique en dos de scarabée : colonies d’Escherichia coli probable.

- Colonies de 4 à 6 mm de diamètre, convexes, rosées avec un centre violet

(aspect en œil de poisson), muqueuses : colonies de Klebsiella (parfois

Enterobacter probable)

- Colonies violet pâle avec un centre et un reflet métallique peu marqué :

colonies de Citrobacter probables

- Petites colonies grises : autres bacilles à Gram -

- Très petites colonies transparentes : Bactéries à Gram +

Ces conclusions sont que des présomptions, il faut les confirmer.

Entérobactérie

GELOSE DRIGALSKI

Milieu sélectif des Gram –


Peptone

Lactose

Eosine

BBT

Désoxycholate et cristal violet

LECTURE :

Observation Interprétation Conclusion

Colonies vertes Le BBT n’a pas viré. Il

n’y a pas d’acidification

du milieu. La bactérie ne

dégrade pas le lactose.

Présomption de bactérie

Gram –, ne dégradant

pas le lactose.

Lactose –

Colonies jaunes Le BBT a viré. Le

milieu a été acidifié. Le

lactose a été dégradé.

Présomption de bactérie

Gram –, dégradant le

lactose.

Lactose +

Entérobactérie

GELOSE MAC CONKEY

Milieu d’isolement sélectif et de différentiation destiné à la recherche des

entérobactéries.


Peptones

Chlorure de sodium

Lactose

Cristal violet

Sels biliaires

Rouge neutre

LECTURE :


Colonies roses ou

rouges

Acidification du

milieu

La bactérie fermente

le lactose

Lactose +

Colonies incolores

Il n’y a pas

acidification du milieu

La bactérie ne

fermente pas le

lactose

Lactose –

Entérobactérie

GELOSE SS (SALMONELLA-SHIGELLA)

Milieu inhibiteur des Gram + commensaux


Extrait de viande de bœuf

Bio-polytone

Lactose

Sels biliaires

Citrate de sodium

Thiosulfate de sodium

Citrate ferrique

Vert brillant

Rouge neutre

Agar

LECTURE :


Colonie incolore avec

ou sans centre noir

Pas d’acidification due à

l’absence de dégradation

du lactose

Lactose –

H2S + ou –

Colonie rose/rouge avec

ou sans centre noir

Acidification due à la de

dégradation du lactose

Lactose –

H2S + ou –

REMARQUE :

Les colonies suspectent de Salmonella sont incolore avec ou sans centre

noir.

Les colonies suspectent de Shigella sont incolore sans centre noir.

Entérobactérie

GELOSE HEKTOEN

Milieu d’isolement sélectif des entérobactéries


Extrait de levure

Bio-thione

Lactose

Saccharose

Salicine

Chlorure de sodium

Sels biliaires

Citrate de fer ammoniacal

Hyposulfite de sodium

BBT

Fuschine acide

Agar

LECTURE :


Colonie jaune saumon

Acidification du milieu Dégradation d’au moins

un des trois glucides

Colonie verte ou bleue pH inchangé ou alcalin Dégradation d’aucuns

glucides ou dégradation

des peptones

Centre noir Présence de sulfure de

fer

Production d’H2S

REMARQUE :

Salmonella -> Colonies vertes ou bleues à centre noir.

Shigella -> Colonies vertes ou bleues sans centre noir.

Proteus mirabilis -> Colonies vertes ou bleues à centre noir.

Entérobactérie

MILIEU UREE TRYPTOPHANE

REACTIFS :

TDA : Perchlorure de fer

Indole : Kovacs (James)


Urée

Tryptophane

Ethanol

Rouge de phénol

Chlorure de sodium

LECTURE :

PENSEZ A SEPARER LE MILIEU DANS DEUX TUBES

Uréase


Milieu orange Pas d’alcalinisation du

milieu -> absence de

carbonate d’ammonium

dans le milieu

La bactérie ne possède

pas d’uréase -> Uréase –

Milieu rose fushia Alcalinisation du milieu

due à la présence de

carbonate d’ammonium

dans le milieu

La bactérie possède une

uréase -> Uréase +

Entérobactérie

TDA


Coloration marron

foncé

Présence d’acide indole

pyruvique dans le milieu.

La bactérie a désaminé le

tryptophane


tryptophane désaminase.

TDA+

Absence de coloration

marron foncé

Absence d’acide indole

pyruvique dans le milieu.

La bactérie n’a pas

désaminé le tryptophane.


pas de tryptophane

désaminase.

TDA –

Indole


Anneau rouge après

addition de réactif de

Kovacs

Présence d’indole dans le

milieu. La bactérie a

hydrolysé le tryptophane.


tryptophanase.

Indole +

Anneau jaune après

addition de réactif de

Kovacs

Absence d’indole dans le

milieu. La bactérie n’a

pas hydrolysé le

tryptophane.


pas de tryptophanase.

Indole –

Entérobactérie

KLIGLER-HAJNA


Gélose nutritive

Rouge de phénol

Glucose

Lactose

Peptones


Citrate ferrique

LECTURE :


Culot jaune

Pente rouge

Décollement de la

gélose

Absence de précipité

noir

Fermentation du glucose

Absence de dégradation

du lactose

Production de gaz

Absence de sulfure de

fer

Glucose+

Lactose –

Gaz+

H2S –

Culot jaune

Pente jaune

Absence de décollement

de la gélose

Précipité noir


Dégradation du lactose

Absence de production

de gaz

Présence de sulfure de

fer

Glucose+

Lactose+

Gaz –

H2S+

Entérobactérie

TEST ONPG

PROTOCOLE :

-Réaliser une suspension bactérienne dense dans 0,5mL d’eau stérile. Les

bactéries doivent provenir d’une culture sur un milieu lactose (KH).

-Introduire aseptiquement un disque de papier imprégné du substrat ONPG.

-Mettre à 37°C, observer toutes les 15 min pendant 1h.

LECTURE :


Coloration jaune stable Présence d’ONP dans le

milieu résultant de

l’hydrolyse de l’ONPG

La bactérie possède

l’ONPG hydrolase

β-galactosidase +

Pas de coloration jaune Pas d’ONP dans le

milieu ; l’ONPG n’a pas

été hydrolysé


pas l’ONPG hydrolase

β-galactosidase –

PRECAUTION :

Suspension assez dense

En absence de coloration jaune, la lecture est à poursuivre 24h

Entérobactérie

MANNITOL MOBILITE NITRATE (MMN)


Hydrolysat trypsique de caséine

Nitrate de potassium

Mannitol

Rouge de phénol

Agar

LECTURE :


Milieu rouge Pas d’acidification du

milieu

La bactérie ne dégrade

pas le mannitol

Mannitol –

Milieu jaune Acidification du milieu La bactérie dégrade le

mannitol

Mannitol+

Milieu trouble Trouble du à la diffusion

des bactéries mobiles à

partir de la piqûre

d’ensemencement

La bactérie est mobile

Mobilité +

TEST :

Recherche de la Nitrate Reductase avec le réactif de Griess (+ éventuellement

du zinc)

Entérobactérie

MILIEU CITRATE DE SIMMONS


Phosphate

Chlorure de sodium

Citrate de sodium

Sulfate de magnésium

BBT

Agar

ATTENTION :

Ne JAMAIS se servir d’une culture en bouillon nutritif ou en EPO qui

apporterait des éléments nutritifs (faussant les résultats …)

LECTURE :


Milieu vert

Sans culture

Le pH du milieu n’a pas

changé. La bactérie n’est

pas capable d’utiliser le

citrate comme seule

source de carbone

Citrate –

Milieu bleu

Culture

Alcalinisation du milieu

suite à l’utilisation du

citrate comme seule

source de carbone

Citrate +

Entérobactérie

MILIEU CLARK ET LUBS

REACTIFS :

RM : Rouge de méthyle

VP : Solution d’alpha-naphtol + KOH


Peptone trypsique

Glucose

Phosphate bipotassique

LECTURE :

PENSEZ A SEPARER LE MILIEU DANS DEUX TUBES

RM


Milieu rouge Fermentation du glucose

par la voie des acides

mixtes

RM +

Milieu jaune Absence de fermentation

du glucose

RM –

Entérobactérie

VP


Coloration rouge cerise

ou rose vif

Présence d’acétoïne


par la voie du butane diol

VP+

Coloration jaune ou

verdâtre ou rose très

pâle

Absence d’acétoïne

Absence de fermentation

du glucose par la voie du

butane diol

VP –

Entérobactérie

GELOSE A LA GELATINE

REACTIFS :

Solution de chlorure de mercure II : réactif précipitant les protéines

LECTURE :


Absence de précipité

autour de la strie

centrale

Absence de gélatine qui a

été hydrolysée

La bactérie possède la

gélatinase

Gélatinase +

Présence d’un précipité

autour de la strie

centrale

Présence de gélatine qui

n’a pas été hydrolysée


pas la gélatinase

Gélatinase –

Entérobactérie

GELOSE AU VERT BRILLANT

= GELOSE DE KRISTENSEN-KAUFFMAN

Milieu sélectif de Salmonella


Extrait de levure

Extrait de viande

Peptones

Lactose

Saccharose

Rouge de phénol

Vert brillant

LECTURE :


Colonie jaune Dégradation Dégradation d’au moins

au des deux glucides

Colonie rouge Dégradation d’aucun

des glucides

Entérobactérie

MILIEU LYSINE-FER


Extrait de levure


Peptones de gélatine

Lysine

Glucose

Bromocrésol pourpre

Citrate de fer

Agar

LECTURE :

LDA


Pente rouge Présence d’acide

cétonique provenant de la

désamination de la lysine


lysine désaminase.

LDA+

Pente non rouge Absence d’acide

cétonique


pas de lysine

désaminase.

LDA –

Entérobactérie

LDA


Culot violet Si la bactérie fermente le

glucose, le milieu a été

réalcalinisation suite à la

décarboxylation de la

lysine


lysine décarboxylase.

LDC+

Culot jaune Acidification du milieu

par fermentation du

glucose


pas de lysine

décarboxylase.

LDC –

Entérobactérie

MILIEU DE FALKOW


Extrait de levure

L-acide aminé

Ethanol

Chlorure de sodium

Glucose

Bromocrésol pourpre

LECTURE :


Tube témoin jaune

Tube essai jaune

Acidification du milieu

dans les deux tubes sans

réalcalinisation

Glucose fermenté, acide

aminé non décarboxylé

LDC ou ODC ou

ADH –

Tube témoin jaune

Tube essai violet

Acidification des milieux

et réalcalinisation de

l’essai

Glucose fermenté, acide

aminé décarboxylé

LDC ou ODC ou

ADH+

Entérobactérie

GELOSE CIN

Milieu d’isolement riche sélectif de Yersinia


Extrait de levure

Peptones

Mannitol

Pyruvate de sodium

Rouge neutre

Sels biliaires

Irgasan

Cefsulodine

Agar

LECTURE :


Colonie rouge Acidification du milieu Le mannitol est dégradé

Mannitol+

Colonie incolore Absence d’acidification

du milieu

Le mannitol n’est pas

dégradé

Mannitol –

Entérobactérie

GELOSE A L’ESCULINE


Esculine

Peptones

Citrate de fer ammoniacal

Agar

LECTURE :


Absence de coloration

noire

Absence d’esculétine,

donc l’esculine n’a pas

été dégradée


pas d’esculinase, donc

elle ne dégrade pas

l’esculine

Esculine –

Coloration noire Présence d’esculétine,

donc l’esculine a été

dégradée


esculinase, donc elle

dégrade l’esculine

Esculine –

Entérobactérie

GELOSE RAMBACH AGAR


Propylène glycol

Peptone

Extrait de levure

Désoxycholate de sodium

Rouge neutre

X-Gal

Agar

LECTURE :

Souche Couleur des

colonies

Propylène glycol β-

Galactosidase

Salmonella

Enteritidis

Rouge + –

Escherichia coli Bleues violacées – +

Proteus Incolores – –

Entérobactérie

Bacilles, Gram –, Mobile,

AAF, Oxydase –,

Fermentatif du glucose

Salmonella

Citrobacter

Escherichia

Shigella

Yersinia

Proteus

Morganella

Providencia

Klebsiella

Enterobacter

Serratia

TDA –

VP –

Lact –

Uré –

Man +

H2S +

Cit +

TDA –

VP –

Uré –

Cit –

H2S –

ONPG +

Ind +

TDA –

VP +

Man +

H2S –

Cit +

ONPG +

Ind +

TDA +

VP –

Lact –

ONPG –

LDC –

Uré –

Man +

Ind +

TDA –

VP –

Lact –

ONPG +

Ind –

H2S –

Man +

Entérobactérie

Documents

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