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ATELIER « IMMUNOHISTOCHIMIE DES PROTEINES MMR »
Les protéines du système MMR, anticorps,
techniques et interprétation
Dr Frédéric Bibeau
Service d’Anatomie Pathologique,
Unité de Biopathologie
ICM, Montpellier
Système MMR
4 protéines de réparation
Système MMR
Atteinte gènes apoptose, cycle cellulaire carcinogenèse colorectale
4 protéines de réparation
Place de l’immunohistochimie
Immunohistochimie
4 Protéines de réparation
Coupes tissulaires Protéines à détecter
Protéine Site Clone Dilution / Incubation
Fournisseur Démasquage Révélation
hMLH1
Toulouse G168-15 1/25 1 heure
BD Pharmingen CC1, 64 min (CC2, 64 min si AFA)
Opti View + Ampli (si AFA)
Montpellier G168-15 1/30 40 min.
BD Pharmingen Tris High pH, 15 min EnVision Flex +
Bordeaux G168-728 1/60 52 min.
BD Pharmingen CC1, 56 min Ampli Opti View
hMSH2
Toulouse G219-1129 1/200 (1/400 si AFA) 1 heure
BD Pharmingen CC1, 64 min (CC2, 64 min si AFA)
Opti View + Ampli (si AFA)
Montpellier G219-1129 1/200 40 min.
Invitrogen Tris High pH 15 min
EnVision Flex +
Bordeaux G219-1129 Prédilué 40 min.
Ventana CC1, 40 min
Opti View
hMSH6
Toulouse 44 1/300 (1/600 si AFA) 1 heure
BD Pharmingen CC1, 64 min Opti View + Ampli (si AFA)
Montpellier 44 1/300 20 min.
BD Pharmingen Tris High pH 15 min
EnVision Flex +
Bordeaux 44 1/200 40 min
BD Pharmingen CC1, 48 min
Optiview
PMS2
Toulouse A16-4 1/50 (1/100 si AFA) 32 min (1h si AFA)
BD Pharmingen CC1, 64 min (40 min si AFA)
Opti View + Ampli (si AFA)
Montpellier A16-4 1/200 20 min
BD Pharmingen Tris High pH 15 min
EnVision Flex +
Bordeaux EPR3947 Prédilué 40 min
Ventana CC1, 48 min Ampli Opti View
Immunohistochimie Tumeur stable (MSS): 4 protéines MMR exprimées
Immunohistochimie Tumeur instable (MSI): extinction de protéines MMR
Quelle méthode utiliser ?
Correspondance dans 96% des cas
Méthode de référence
Biologie moléculaire Immunohistochimie
PCR
Extinction
Mutation du gène correspondant
Intérêt de l’immunohistochimie
MLH1 MSH2 MSH6 PMS2
MLH1 MSH2 MSH6 PMS2
Quelle méthode utiliser ?
Extinction
Mutation du gène correspondant
Intérêt de l’immunohistochimie
MLH1 MSH2 MSH6 PMS2
MLH1 MSH2 MSH6 PMS2
Quelle méthode utiliser ?
Lynch
Extinction
Mutation du gène correspondant
Intérêt de l’immunohistochimie
MLH1 MSH2 MSH6 PMS2
MLH1 MSH2 MSH6 PMS2
Quelle méthode utiliser ?
?
MSI et Perte HMLH1
Syndrome de Lynch Cancer sporadique
Hyperméthylation Promoteur MLH1
Mutation de BRAF
Contexte de l’instabilité microsatellitaire
Absente
Absente
Sujet âgé Sujet jeune
Place de l’immunohistochimie Règles d’interprétation
Règles d’interprétation
Témoins
Overbeek et al Am J Surg Pathol 2008
Règles d’interprétation
Absence de témoins
Overbeek et al Am J Surg Pathol 2008
Assurance qualité
Assurance qualité
Assurance qualité
Place de l’immunohistochimie Stratégie diagnostique
Shia et al Am J Surg Pathol 2009
Shia et al Am J Surg Pathol 2009
HMLH1 -/PMS2-
MSH2-/ MSH6-
Perte couplée
Shia et al Am J Surg Pathol 2009
HMLH1 -/PMS2-
MSH2-/ MSH6-
HMLH1 +/PMS2-
MSH2+/ MSH6-
Perte couplée Perte isolée
Shia et al Am J Surg Pathol 2009
HMLH1 -/PMS2-
MSH2-/ MSH6-
HMLH1 +/PMS2-
MSH2+/ MSH6-
Perte couplée Perte isolée
Shia et al Am J Surg Pathol 2009
HMLH1 -/PMS2-
MSH2-/ MSH6-
HMLH1 +/PMS2-
MSH2+/ MSH6-
Perte couplée Perte isolée
Quel panel d’anticorps choisir ?
Shia et al Am J Surg Pathol 2009
Petre isolée MSH6
IHC parfois difficile
Shia et al Am J Surg Pathol 2009
Quel panel d’anticorps choisir ?
Perte isolée PMS2
IHC parfois difficile
Quel panel d’anticorps choisir ?
Bordeaux
Montpellier
Toulouse
Les 4 !
Shia et al Am J Surg Pathol 2010
Pas d’impact sur le diagnostic final
Pièges en immunohistochimie
Immunohistochimie hMSH2
Votre interprétation de cet immunomarquage ?
Immunohistochimie hMSH2
Immunohistochimie hMSH2
Votre interprétation de cet immunomarquage ?
Immunohistochimie hMSH2
hMSH2 -
Immunohistochimie protéines MMR L’évaluation de l’expression doit être…
L’évaluation de l’expression doit être…
nucléaire
Immunohistochimie protéines MMR
Pièges en immunohistochimie Impact MSI sur le phénotype CCR
Fadhil W et al. Histopathology 2012
négatif
négatif négatif négatif
négatif
Perte d’expression marqueurs colorectaux en cas de tumeur peu différenciée (MSI)
Conclusion
- Haut volume d’activité (expérience rentabilité)
- Connexion avec plateforme d’oncogénétique
- Assurance et contrôle qualité (AFAQAP)
Anticorps Isotype Clone Fournisseur
MLH1 Mouse IgG1, kappa G168-15 BD Pharmingen
MSH2 Mouse IgG1, kappa FE11 Zymed
MSH6 Mouse IgG1, kappa 44 BD Pharmingen
PMS2 Mouse IgG1, kappa A16-4 BD Pharmingen
CK7 Mouse IgG1, kappa OV-TL 12/30 Dako
CK20 Mouse IgG2a, kappa KS20.8 Dako
CDX2 Mouse IgG1, kappa CDX2-88 Biogenex
Villine Mouse IgG1, kappa ID2C3 Immunotech
Références des anticorps
