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COBAS, TINA-QUANT et LIFE NEEDS ANSWERS sont des marques de Roche.Toutes les autres marques appartiennent à leurs propriétaires respectifs.

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Roche Diagnostics (Suisse) SAIndustriestrasse 76343 RotkreuzSuissewww.roche-diagnostics.ch

Références1. Bry, L., Chen, P.C., Sacks, D.B. (2001). Effects of hemoglobin variants and chemically modifi ed derivatives on assays for glycohemoglobin.

Clin Chem 47, 153–163.2. Goldstein, D.E., Little, R.R., Lorenz, R.A., Malone, J.I., Nathan, D., Peterson, C.M., Sacks, D.B. (2004). Tests of glycemia in diabetes.

Diabetes Care 27, 1761–1773.3. Sacks, D.B. (2012). Measurement of hemoglobin A1c. A new twist on the path to harmony. Diabetes Care 35, 2674–2680.4. Hanas, R., John, G. (2010). 2010 Consensus Statement on the Worldwide Standardization of the Hemoglobin A1C Measurement.

Diabetes Care 33, 1903–1904.5. Weatherall, D.J., Clegg, J.B. (2001). Inherited haemoglobin disorders: an increasing global health problem. Bull World Health Organ 79, 704–712.6. Weatherall, D., Akinyanju, O., Fucharoen, S., Olivieri, N., Musgrove, P. (2006). Inherited disorders of hemoglobin. In: Jamison, D.T., Breman, J.G.,

Measham, A.R., Alleyne, G., Claeson, M., Evans, D.B., Jha, P., Mills, A., Musgrove, P. (Eds.) Disease control priorities in developing countries

2nd ed. Washington USA: World Bank.7. World Health Organization. (1989). Guidelines for the control of haemoglobin disorders. Disponible à l’adresse: http://www.who.int/genomics/

about/en/Modellguidelines.pdf (consulté en octobre 2013).8. Steinberg, M.H. (2001). Disorders of hemoglobin: genetics, pathophysiology, and clinical management. Cambridge University Press: Cambridge,

New York.9. HbVar. A database of human hemoglobin variants and thalassemias. Disponible à l’adresse: http://globin.cse.psu.edu/globin/hbvar/ (consulté

en octobre 2013).10. Rees, D.C., Styles, L., Vichinsky, E.P., Clegg, J.B., Weatherall, D.J. (1998). The hemoglobin E syndromes. Ann N Y Acad Sci 850, 334–343.11. INSERM US14. Orphanet: hemoglobin E disease. Available from: http://www.orpha.net/consor/cgi-bin/OC_Exp.php?lng=en&Expert=2133

(accessed October 2013).12. Fucharoen, S., Winichagoon, P. (1997). Hemoglobinopathies in Southeast Asia: molecular biology and clinical medicine.

Hemoglobin 21, 299–319.13. Beutler, E. (1998). Disorders of hemoglobin. In: Fauci, A.S., Braunwald, E., Isselbacher, K.J., Wilson, J.D., Martin, J.B., Kasper, D., Hauser, S.L.,

Longo, D.L. Harrison’s Principles of Internal Medicine. 14th ed. New York: McGraw-Hill.14. Little, R.R., Rohlfi ng, C.L., Hanson, S., Connolly, S., Higgins, T., Weykamp, C.W., D’Costa, M., Luzzi, V., Owen, W.E., Roberts, W.L. (2008).

Effects of hemoglobin (Hb) E and HbD traits on measurements of glycated Hb (HbA1c) by 23 methods. Clin Chem 54, 1277–1282.15. Patrinos, G.P., Giardine, B., Riemer, C., Miller, W., Chui, D.H.K., Anagnou, N.P., Wajcman, H., Hardison, R.C. (2004). Improvements in the

HbVar database of human hemoglobin variants and thalassemia mutations for population and sequence variation studies. Nucleic Acids

Res 32, D537–D541.16. Olivieri, N.F. (1999). The β-thalassemias. N Engl J Med 341, 99–109.17. Catlin, A.J. (2003). Thalassemia: the facts and the controversies. Pediatr Nurs 29, 447–451.18. Roche Diagnostics Ltd. (2012). Tina-quant® Hemoglobin A1c. Disponible à l’adresse: https://cssportal.roche.com/eld/gb/en/DocumentResult/

ResultList (consulté en octobre 2013).19. Weykamp, C., John, W.G., Mosca, A. (2009). A review of the challenge in measuring hemoglobin A1c. J Diabetes Sci Technol 3, 439–445.20. Little, R.R., Roberts, W.L. (2009). A review of variant hemoglobins interfering with hemoglobin A1c measurement. J Diabetes Sci Technol 3, 446–451.21. Szuberski, J., Oliveira, J.L., Hoyer, J.D. (2012). A comprehensive analysis of hemoglobin variants by high-performance liquid chromatography

(HPLC). Int J Lab Hematol 34, 594–604.22. Szuberski, J., Hoyer, J. (2009). A detailed study of the retention time of hemoglobin variants by high performance liquid chromatography

(HPLC). Int J Lab Hematol 31(Suppl 1), 28.23. Chakraborty, S., Gupta, D. (2013). A patient with undetectable hemoglobin A1c. Clin Chem 59, 856–857.24. Lin, C.-N., Emery, T.J., Little, R.R., Hanson, S.E., Rohlfi ng, C.L., Jaisson, S., Gillery, P., Roberts, W.L. (2012). Effects of hemoglobin C, D, E,

and S traits on measurements of HbA1c by six methods. Clin Chim Acta 413, 819–821.25. Lorenzo-Medina, M., De-La-Iglesia, S., Ropero, P., Martin-Alfaro, R., Quintana-Hidalgo, L. (2012). Interference of hemoglobin D on

measurements of hemoglobin A1c by the high-performance liquid chromatography HA-8160 in 27 patients. J Diabetes Sci Technol 6, 1235–1237.26. American Diabetes Association. (2012). Standards of medical care in diabetes – 2012. Position statement. Diabetes Care 35(Suppl 1), S11–S63.27. National Glycohemoglobin Standardization Program. HbA1c Assay Interferences. Disponible à l’adresse: http://www.ngsp.org/interf.asp

(consulté en octobre 2013).28. Weykamp, C.W., Penders, T.J., Muskiet, F.A., van der Slik, W. (1993). Infl uence of hemoglobin variants and derivatives on glycohemoglobin

determinations, as investigated by 102 laboratories using 16 methods. Clin Chem 39, 1717–1723.29. Roberts, W.L., Frank, E.L., Moulton, L., Papadea, C., Noffsinger, J.K., Ou, C.N. (2000). Effects of nine hemoglobin variants on fi ve

glycohemoglobin methods. Clin Chem 46, 569–572.30. FDA. (2013). Evaluation of automatic class III designation for COBAS INTEGRA 800 Tina-quant HbA1c Dx. Gen. 2

assay decision summary. Disponible à l’adresse: http://www.fda.gov/MedicalDevices/ProductsandMedicalProcedures/DeviceApprovalsandClearances/510kClearances/ucm335382.htm (consulté en octobre 2013).

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Mesure de l’HbA1c et interférences dues aux troubles de l’hémoglobineDocument de travail scientifique

Table des matièresListe des tableaux 2Liste des fi gures 2Introduction 3Hémoglobine et troubles de l’hémoglobine 4Hémoglobinopathies 4 Variantes de l’hémoglobine 4 Formes glyquées des variantes de l’Hb 6 Thalassémies 6Méthodes 7 Essai Tina-quant® HbA1c de Roche 8 Chromatographie liquide à haute performance d’affi nité (CLHP d’affi nité) 9 Chromatographie liquide à haute performance à échange de cations (CLHP EC) 9 Coélution des variantes de l’hémoglobine avec d’autres pics 10Résumé 14Références 16

Liste des tableauxTableau 1: Mutations de variantes de l’hémoglobine (Hb) et manifestations cliniques 5

Tableau 2: Différentes méthodes de mesure de l’HbA1c 7

Tableau 3: Prévalence de quelques-unes des variantes rares de l’hémoglobine avec mutation des quatre premiers acides aminés 8

Tableau 4: Calcul de l’aire totale (correspondant au chromatogramme hétérozygote sur le côté gauche de la fi g. 11). P00 génère une hausse du dénominateur car il est compris dans le calcul de l’aire totale 13

Tableau 5: Les résultats de l’HbA1c exprimés en pourcentage obtenus en utilisant l’essai Tina-quant® HbA1c ne sont pas affectés par la présence de variantes de l’hémoglobine (Hb) 14

Liste des fi guresFig. 1: L’hémoglobine (Hb) S à l’état hétérozygote (trait drépanocytaire); substitution de l’acide glutamique par la valine dans la sixième position de la chaîne β-globine 4

Fig. 2: Les deux formes d’hémoglobine glyquée (Hb)qui peuvent apparaître chez un individu hétérozygoteporteur de l’HbA et de la variante HbE 6

Fig. 3: L’épitope utilisé dans l’essai Tina-quant® HbA1c permet d’obtenir une identifi cation par l’anticorps indépendamment de la variante de l’hémoglobine (Hb) 8

Fig. 4: Défi nition de l’HbA1c par la Fédération internationalede chimie clinique (FICC) – le véritable critère de référencede mesure de l’HbA1c 8

Fig. 5: Equation de calcul de l’HbA1c lors de l’utilisation de l’essai Tina-quant® HbA1c; les variantes de l’hémoglobine (Hb) n’ont pas besoin d’être identifi ées et exclues du calcul 8

Fig. 6: Equation de calcul de l’HbA1c lors de l’utilisation de la chromatographie liquide à haute performance d’affi nité 9

Fig. 7: Equation de calcul de l’HbA1c lors de l’utilisation de la chromatographie liquide à haute performance à échange de cations 9

Fig. 8: Chromatogramme Tosoh G8 contenant une variante de l’hémoglobine sans le message d’avertissement associé dans le champ de l’indicateur 10

Fig. 9: Chromatogramme de la fi g. 8 généré à l’aide du logiciel PIANO dans le cadre de l’étude des variantes de l’Hb du laboratoire de référence européen. L’HbE1c et l’HbE0 ne sont pas détectables par inspection visuelle car l’HbE1c est comprise dans l’aire totale et l’HbE0 coélue avec l’HbA0 11

Fig. 10: Equation de calcul de l’HbA1c – l’HbE1c et l’HbE ne peuvent pas être exclues de l’équation comme requis par le principe de l’analyse par chromatographie liquide à haute performance à échange de cations 11

Fig. 11: Chromatogramme hétérozygote de l’HbAS sur l’analyseur Tosoh G8 avec pics A0 et S0 séparés (gauche) et chromatogramme homozygote de l’HbSS sur l’analyseur Tosoh G8 qui ne contient pas l’A1c et l’A0. La comparaison des deux chromatogrammes permet d’identifi er l’emplacement normal de S1c dans un chromatogramme 12

Fig. 12: Equation de calcul de l’HbA1c – l’HbS1c ne peut pasêtre exclue du calcul en raison de sa coélution avec l’HbA0 13

2

Introduction

L’hémoglobine A1c (HbA1c) représente un outil performant de suivi du contrôle glycémique à long terme. Une concentration élevée d’HbA1c est associée à une large variété de complications diabétiques, sa mesure est donc essentielle à l’évaluation et la prise en charge des personnes atteintes du diabète sucré.1

Chaque laboratoire dispose de différentes méthodes de mesure de l’HbA1c qui affichent la concentration sous forme de mmol/mol (unités de la Fédération internationale de chimie clinique [FICC]) et/ou de pourcentage (unité du programme National Glycohemoglobin Standardization Program [NGSP]).2,3 Cependant, pour pouvoir correctement interpréter les résultats de l’HbA1c, il est important de savoir exactement ce que chaque méthode mesure effectivement et quel est l’impact que les interférences générées, par exemple par les variantes de l’hémoglobine (Hb), peuvent avoir sur le résultat de l’HbA1c.1 Afin de faciliter cette interprétation, le Laboratoire de Référence Européen (ERL) situé aux Pays-Bas a mené une étude des variantes de l’Hb soutenue par Roche. Cet ERL est un laboratoire de référence de la FICC et un laboratoire de référence primaire (Hôpital Königin Beatrix) et secondaire (Isala Klinieken) du NGSP. Les résultats de cette étude peuvent être consultés dans le document d’étude inséré au dos du présent document de travail.

Le présent document de travail fournit une synthèse approfondie des différentes méthodes disponibles pour la mesure de l’HbA1c et de l’impact que les troubles de l’hémoglobine comme la présence d’une variante de l’Hb ou la thalassémie peuvent avoir. Il existe en règle générale deux principales catégories de méthodes. La première catégorie comprend les méthodes reposant sur la différence de charge des molécules, comme la chromatographie liquide à haute performance à échange de cations (CLHP EC) et l’électrophorèse capillaire. La seconde catégorie se compose de méthodes reposant sur les différences structurelles, comme la chromatographie liquide à haute performance d’affinité (CLHP d’affinité) et les essais immunologiques.2

L’une des différences fondamentales distinguant les types de méthode est constituée par la nécessité d’exclusion de l’ensemble des formes non physiologiques de l’Hb pour la réalisation d’un calcul correct de l’HbA1c avec les méthodes reposant sur les différences de charge contrairement aux méthodes reposant sur les différences structurelles.1 Pour ce faire, les méthodes comme la CLHP EC doit être en mesure d’identifier l’ensemble des variantes de l’Hb présentes ainsi que leurs formes glyquées ce qui peut s’avérer problématique étant donné que l’ensemble des molécules affichant la même charge électrique seront éluées au même moment pendant la période de rétention, ce qui entraîne une coélution. 1 Cela peut donc affecter la spécificité du test et c’est probablement ce manque potentiel de spécificité qui empêche la CLHP EC d’être adoptée en tant que méthode de référence pour le système de référence FICC et a favorisé le développement de méthodes alternatives.4

Etant donné que les méthodes reposant sur les différences structurelles, comme les essais immunologiques, comprennent toutes les formes de l’Hb dans le calcul de l’HbA1c, une identification spécifique des variantes de l’Hb et de leurs formes glyquées n’est pas nécessaire.2 De plus, l’essai Tina-quant® HbA1c de Roche détecte spécifiquement les quatre premiers acides aminés de l’extrémité N-terminale de la chaîne β-globine et détecte donc l’analyte réel conformément aux dispositions de la FICC qui stipulent qu’il constitue la seule base valide pour la mesure de l’HbA1c.

3

Hémoglobine et troubles de l’hémoglobine

Le rôle de l’Hb consiste à transporter l’oxygène dans le sang à partir des poumons vers le reste du corps et à ainsi préserver les fonctions vitales. La molécule se compose de deux paires de chaînes différentes de globine (ou sous-unités): une chaîne α et une chaîne β, une chaîne γ ou une chaîne δ qui sont réunies dans une structure protéique unique. Le cœur de la chaîne de globine contient un groupe hème comprenant un ion fer (atome chargé) qui constitue le site de fixation de l’oxygène.5,6

Chez les individus sains, l’Hb contient environ 97% d’HbA, < 2,5% d’HbA2 et 0,5% d’HbF.1 L’HbA contient deux chaînes α-globine et deux chaînes β-globine (α2β2). La sous-unité α est codée par quatre gènes, la sous-unité β est quant à elle codée par deux gènes. D’autres variantes physiologiques de l’Hb comme l’HbA2 et l’HbF contiennent deux chaînes α-globine et deux chaînes δ-globine (α2δ2) et respectivement deux chaînes α-globine et deux chaînes γ-globine (α2γ2).3,5,6 Outre les variantes physiologiques de l’Hb, il existe également des formes mutées (non physiologiques) qui confèrent un avantage hétérozygote contre certaines maladies (p. ex. paludisme). Les troubles de l’hémoglobine héréditaires font donc partie des maladies monogéniques les plus courantes. Environ 7% de la population mondiale en est affectée et en raison des migrations internationales, ces mutations ont désormais lieu dans le monde entier.5,7 Les troubles de l’hémoglobine héréditaires peuvent être répartis en deux principaux groupes:8

1) Hémoglobinopathies: dues à des anomalies structurelles des protéines de globine

2) Thalassémies: dues à la sous-production de protéines de globine normale, souvent consécutive à des mutations des gènes régulateurs.

Jusqu’à présent, on décompte 1585 mutations de l’Hb (hémoglobinopathies et thalassémies).9

HémoglobinopathiesLes hémoglobinopathies sont causées par des mutations génétiques qui affectent la structure des chaînes de globine de la molécule Hb. La plupart des hémoglobinopathies sont silencieuses sur le plan clinique. D’autres hémoglobinopathies sont certes asymptomatiques mais entraînent des résultats d’analyse hématologique anormaux, tandis que certaines autres affections génèrent de graves maladies. La plupart des anomalies structurelles sont causées par une seule mutation résultant de la substitution d’un acide aminé par un autre, la suppression d’une portion de la séquence d’acides aminés, une hybridation anormale entre deux chaînes ou une élongation anormale de la chaîne de globine.5,6

Variantes de l’HbOn compte plus de 1100 variantes de l’Hb humaine et de nouvelles variantes continuent d’être découvertes.9 La majorité d’entre elles sont rares en termes de prévalence, mais nombreuses en termes de différences structurelles et certaines variantes atteignent même des fréquences élevées parmi des groupes de population spécifiques.5 L’HbS est un exemple de variante à fréquence élevée qui à l’état homozygote cause une drépanocytose mais est bénigne à l’état hétérozygote (trait drépanocytaire). L’HbS est une variante héréditaire de l’HbA normale adulte et résulte d’une substitution d’un acide glutamique par la valine, un autre acide aminé, dans la sixième position de la chaîne β-globine (figure 1).

HbA

S

Position

Cliniquement silencieuses

6

Val His Leu Thr Pro Glu Glu Lys Ser

Val His Leu Thr Pro Val Glu Lys Ser

Fig. 1: L’hémoglobine (Hb) S à l’état hétérozygote (trait drépanocytaire); substitution d’un acide glutamique par la valine, un autre acide aminé, dans la sixième position de la chaîne β-globine

L’HbS constitue la variante de l’Hb la plus couramment rencontrée dans le monde et appartient aux variantes courantes de l’Hb. La fréquence du gène à l’origine de l’HbS est la plus élevée parmi les individus d’origine africaine (environ 1 individu sur 10) mais est également décelée parmi des individus d'ascendance méditerranéenne (Italiens, Grecs, Turcs).5,7

4

Les autres variantes courantes de l’Hb sont l’HbE, l’HbC et l’HbD qui existent aussi à l’état hétérozygote et homozygote. Le tableau 1 présente les positions des mutations ponctuelles à l’origine de ces variantes et leurs manifestations cliniques.1,5,10,11

Variante Mutation ponctuelle

Manifestation clinique

HbAS β6 Glu Val Non

HbSS β6 Glu Val (Deux gènes)

Anémie falciforme (drépanocytose)

HbAC β6 Glu Lys Non

HbCC β6 Glu Lys (Deux gènes)

Anémie hémolytique (affection HbCC)

HbAE β26 Glu Lys Non

HbEE β26 Glu Lys (Deux gènes)

Anémie hémolytique (affection HbE)

HbAD (p. ex. Los Angeles)

β121 Glu Gln Non

HbDD (p. ex. Los Angeles)

β121 Glu Gln (Deux gènes)

Anémie hémolytique (affection HbD)

Variantes de l’Hb non courantes

Dépend de la variante

Dépend de la variante

Tableau 1: Mutations de variantes de l’hémoglobine (Hb) et manifestations cliniques1,5,10,11

L’hémoglobine E est la deuxième variante la plus fréquente après l’HbS (drépanocytose). L’HbE est courante en Asie du Sud-Est. Sa prévalence est supérieure à 50% dans certaines régions de la Thaïlande, du Cambodge et du Laos et on la retrouve aussi au Sri Lanka, en Inde du Nord-Est, au Bangladesh, au Pakistan, au Népal, au Viêt Nam, en Malaisie et en Chine. L’HbE peut interagir avec la β-thalassémie pour devenir la HbE/β-thalassémie qui constitue un important problème sanitaire en Asie.5,10–12

Le trait HbC présente un comportement similaire au trait HbS en ce qu’il est bénin et ne cause aucune manifestation clinique. La prévalence de l’HbC est égale à 30% en Afrique subsaharienne, aux USA environ 1 individu sur 1800 est porteur de l’HbCC et l’HbSC (drépanocytose) affecte 1 individu sur 1100.13

Pour finir, l’HbD est un terme générique recouvrant plusieurs variantes de l’Hb et constitue la quatrième variante de l’Hb la plus courante. Parmi celles-ci, l’HbD Punjab (alias HbD Los Angeles) est de loin la variante la plus fréquente et les autres variantes de l’HbD comprennent l’HbD Iran, l’HbD Ouled Rabah et l’HbD Granada. L’HbD est décelée le plus souvent auprès d’individus vivant en Inde, au Pakistan, en Angleterre, en Irlande, aux Pays-Bas, en Australie, en Chine, en Iran, en Turquie et auprès de leurs descendants. L’HbAD est un état clinique silencieux, mais la cohérédité de l’HbD et du trait drépanocytaire ou de la thalassémie génère une affection significative d’un point de vue clinique. L’HbDD homozygote est une affection rare et relativement bénigne.14

5

Formes glyquées des variantes de l’HbL’hémoglobine A1c est une Hb glyquée spécifique qui résulte de la fixation d’une molécule de glucose à la valine N-terminale de la chaîne β-globine de l’Hb. Cette réaction peut cependant également survenir avec toutes les autres variantes de l’Hb comme l’HbS, l’HbE, l’HbC et l’HbD. Deux formes d’Hb glyquée peuvent donc être décelées chez des individus hétérozygotes porteurs de l’HbA et d’un gène variant de l’Hb, comme l’HbE. La première forme est l’HbA1c et dans cet exemple la deuxième forme est l’HbE1c, comme le montre la figure 2.1,2

HbA1c

E1c

Position 261

Gluc Val His Leu Thr Gly Glu Ala

Gluc Val His Leu Thr Gly Lys Ala

Fig. 2: Les deux formes d’hémoglobine glyquée (Hb) qui peuvent apparaître chez un individu hétérozygote porteur de l’HbA et de la variante HbE

Les patients homozygotes pour le gène variant (par exemple les patients porteurs de l’HbEE) ne portent pas l’HbA et ne portent donc pas l’HbA1c. Seule la forme glyquée de la variante peut être décelée chez ces patients, comme l’HbE1c.

ThalassémiesLes thalassémies sont causées par un défaut génétique qui entraîne la production d’une quantité anormalement faible d’une chaîne d’hémoglobine.5,15 Le défaut peut affecter les chaînes α-, β-, γ- ou δ-globine ou une combinaison des chaînes β-, γ- et δ-globine chez un même patient, cependant les chaînes α- et β-globine ne peuvent jamais être affectées simultanément.6 Le déséquilibre du nombre de chaînes de globine entraîne la production d’une quantité inappropriée de globules rouges et les globules rouges générés sont de couleur plus pâle (hypochromes) en raison du manque d’Hb et peuvent être plus petits que la normale (microcytaires). Ils contiennent également un surplus des chaînes non affectées ce qui peut entraîner leur destruction dans la moelle osseuse (érythropoïèse inefficace) ou dans la circulation (hémolyse).8

Bien que la thalassémie et l’hémoglobinopathie représentent en règle générale des maladies distinctes dont les causes sont différentes, elles peuvent coïncider dans certains cas. Cela peut par exemple avoir lieu lorsque la cause de l’anomalie de la protéine globine affecte également la production de protéines, certaines hémoglobinopathies sont donc également des thalassémies.

Les thalassémies qui impliquent la chaîne β-globine peuvent être réparties en deux catégories: la β0-thalassémie et la β+-thalassémie. Dans le cas de la β0-thalassémie, un gène anormal n’est pas exprimé ou, de manière moins fréquente, un gène a été supprimé. En revanche, la β+-thalassémie se caractérise par une réduction de l’expression du gène anormal qui permet donc le maintien d’une production d’hémoglobine A, même à l’état homozygote. Il existe par conséquent trois phénotypes de β-thalassémie en fonction de la combinaison d’allèles.

La β-thalassémie mineure (ou trait β-thalassémique) ne présente en règle générale aucun symptôme clinique et constitue un état hétérozygote caractérisé par la présence d’un gène β-globine supprimé ou muté et d’un gène fonctionnant normalement (β+/β ou β0/β). La β-thalassémie intermédiaire est due à des mutations du gène β-globine homozygotes ou hétérozygotes composites entraînant une diminution de la production de chaînes β-globine (β+/β+ ou β0/β+). Les individus affectés peuvent souvent continuer à mener une vie normale mais nécessitent éventuellement des transfusions occasionnelles, comme par exemple au cours d’une grossesse ou d’une maladie en fonction de l’étendue de l’anémie. Les patients porteurs d’une β-thalassémie majeure ou anémie de Cooley dépendent de transfusions sanguines et sont homozygotes ou hétérozygotes composites pour les mutations du gène β-globine (β0/β0, β+/β+ ou β0/β+). En raison de la présence de transfusions sanguines, la mesure de l’HbA1c auprès de ces individus ne permet pas d’obtenir des données précises à propos du contrôle glycémique.16,17

6

Méthodes

Différentes méthodes de laboratoire sont disponibles pour mesurer l’HbA1c et donc assurer un suivi du contrôle glycémique à long terme (tableau 2):

• Essaisimmunologiques(p.ex.l’essaiTina-quant® HbA1c de Roche)

• CLHPd’affinitéauboronate• CLHPàéchangedecations1–3

Chaque méthode repose sur les propriétés physiques, chimiques ou d’anticorps de la molécule d’Hb normale (HbA), il est donc important de comprendre le principe d’analyse de chaque méthode.

Essais immunologiques (p. ex., Roche Diagnostics)

CLHPEC (p. ex. Tosoh Bioscience)

CLHPd’affinité (p. ex. Trinity Biotech)

Détection de l’HbA1c Détection de fraction de l’HbA1a, l’HbA1b et l’HbA1c

Détection de l’Hb glyquée

Mesure l’analyte réel conformément aux dispositions de la FICC

Pic calculé Pic calculé

Inclusion des variantes de l’Hb et de leurs formes glyquées

Exclusion des variantes de l’Hb et de leurs formes glyquées

Inclusion des variantes de l’Hb et de leurs formes glyquées

Tableau 2: Différentes méthodes de mesure de l’HbA1c CLHP d’affinité, chromatographie liquide à haute performance d’affinité; CLHP EC, chromatographie liquide à haute performance à échange de cations; Hb, hémoglobine; FICC, Fédération internationale de chimie clinique

Il est donc vital de connaître chaque interférence potentielle dont l’impact est significatif d’un point de vue clinique pour chaque méthode ainsi que l’importance de cet impact sur la précision de la mesure de l’HbA1c.1 Comme nous l’avons déjà mentionné plus haut, tout état clinique qui abrège la survie des érythrocytes ou diminue l’âge moyen des globules rouges entraînera une diminution erronée du résultat d’analyse de l’HbA1c, indépendamment de la méthode d’analyse utilisée.2 Les résultats de l’HbA1c provenant de patients porteurs de l’HbSS, l’HbCC et l’HbSC doivent donc être interprétés avec prudence étant donné que des processus pathologiques, dont l’anémie, une hausse du taux de renouvellement des globules rouges et des besoins de transfusion peuvent avoir un impact négatif sur l’HbA1c en tant que marqueur du contrôle glycémique à long terme. Il convient d’envisager l’utilisation de formes alternatives d’analyse comme les protéines sériques glyquées ou l’albumine glyquée pour ce type de patients.

7

Essai Tina-quant® HbA1c de RocheLe principe de cet essai est le suivant: l’HbA1c de l’échantillon et un polyhaptène (ou agglutinateur; polymère synthétique comportant de multiples copies de la portion immunoréactive de l’HbA1c) attirent les anticorps polyclonaux spécifiques anti-HbA1c disponibles. La concentration de l’HbA1c mesurée s’exprime sous la forme d’un pourcentage de l’hémoglobine totale déterminé dans la même aliquote d’échantillon et la même cuve que celles de la mesure de l’HbA1c (technique du «double test»). La technique du «double test» élimine non seulement les sources d’incertitude du résultat de l’HbA1c exprimé en pourcentage mais permet aussi d’obtenir une excellente précision.18

Les anticorps utilisés dans l’essai Tina-quant® sont dirigés contre la séquence peptidique N-terminale de la chaîne β-globine amino-terminale et son fraction de valine glyquée (2-déoxyfructose-valine; figure 3). De cette manière, l’essai Tina-quant® HbA1c de Roche détecte spécifiquement les quatre premiers acides aminés de l’extrémité N-terminale de la chaîne β-globine et détecte donc l’analyte réel conformément aux dispositions de la FICC qui stipulent qu’il constitue la seule base valide pour la mesure de l’HbA1c (figure 4).4 De plus, ce choix d’anticorps explique pourquoi les variantes de l’Hb comme l’HbS, l’HbE, l’HbC et l’HbD n’affecte pas les résultats de l’HbA1c générés par ce test. Les mutations générant les variantes courantes de l’Hb ne sont pas contenues dans la région détectée par l’anticorps (les quatre premiers acides aminés de l’extrémité N-terminale de la chaîne β-globine)1,5,10,11 et la séquence d’acides aminés est donc préservée et identifiée indépendamment de la variante.18

Hb

Site spécifique d’identification de la glycation de la chaîne

β-globine de l’Hb par l’anticorps Tina-quant® HbA1c

A1c

E1c

Position 26

Gluc Val His Leu Thr Glu Ala

Gluc Val His Leu Thr

Pro

Pro

Glu

Glu Lys Ala

Fig. 3: L'épitope utilisé dans l’essai Tina-quant® HbA1c permet une identification par l’anticorps indépendamment de la variante de l’hémoglobine (Hb)

HbA1c Gluc Val His Leu Thr Pro Glu

«L’HbA1c est une hémoglobine glyquée à l’extrémité N-terminale Wde la chaîne ß [ß-N-(1-déoxyfructose-1-yl) hémoglobine]»

Fig. 4: Définition de l’HbA1c par la Fédération internationale de chimie clinique (FICC) – le véritable critère de référence de mesure de l’HbA1c

L’essai Tina-quant® HbA1c comprend les variantes de l’hémoglobine dans le calcul de l’HbA1c (voir figure 5) et repose sur les différences structurelles plutôt que sur les différences de charge, un résultat fiable peut donc être obtenu sans devoir recourir à des processus post-analytiques afin d’identifier les variantes. Cela constitue un certain avantage en termes d’économie de temps et d’argent si on compare cet essai aux méthodes telles que la CLHP EC.19

% HbA1c = HbA1c (incl. HbX1c)

Total hémoglobine (incl. HbX)* 100

Fig. 5: Equation de calcul de l’HbA1c lors de l’utilisation de l’essai Tina-quant® HbA1c; les variantes de l’hémoglobine (Hb) n’ont pas besoin d’être identifiées et exclues du calcul L’HbX et l’HbX1c représentent les variantes de l’Hb et leur forme glyquée

Sur les 1585 mutations de l’Hb identifiées (hémoglobinopathies et thalassémies) qui affectent 7% de la population mondiale (soit environ 500 millions d’individus), seules 17 variantes non courantes de l’Hb présentent une mutation au niveau des quatre premiers acides aminés. Le tableau 3 présente certaines de ces variantes de l’Hb et leur occurrence.9,15

Variante de l’Hb Origine ethnique Mutation Occurrence

Raleigh Caucasien β1 Val Ala 2 familles suédoises et quelques familles caucasiennes

Okayama Japonais β2 His Gln Décelée chez un patient diabétique japonais

Niigata Japonais β1 Val Leu Décelée chez un patient japonais

Deer Lodge Noir, anglais, néerlandais, gallois β2 His Arg Décelée au sein de quelques familles galloises, néerlandaises, anglaises et noires

Graz Autrichien β2 His Leu Décelée au sein de quelques familles autrichiennes

Agrigente Sicilien β2 His Pro Décelée chez un patient diabétique de 48 ans

Tableau 3: Prévalence de certaines des variantes rares de l’hémoglobine avec mutation au niveau des quatre premiers acides aminés9,15

8

Chromatographieliquideàhauteperformanced’affinité(CLHPd’affinité)La différence structurelle entre l’HbA1c et la forme non glyquée résulte de la présence de la fraction glucidique dans l’HbA1c. Les agents réagissant spécifiquement à cette fraction glucidique peuvent donc être utilisés pour servir de base à une méthode analytique telle que la CLHP d’affinité. On utilise dans cette étude une résine d’affinité à laquelle l’ensemble des hémoglobines glyquées se fixent contrairement à l’Hb non glyquée qui ne s’y fixe pas. L’ensemble des hémoglobines glyquées et pas seulement l’HbA1c se fixent à la résine, c’est donc la valeur de l’ensemble des hémoglobines glyquées qui est calculée et le résultat initial est donc plus élevé que celui des tests qui peuvent mesurer uniquement l’HbA1c de manière spécifique. Cependant, étant donné la proportionnalité de la formation des hémoglobines glyquées, il est possible de standardiser les résultats de la CLHP d’affinité aux unités d’HbA1c (figure 6).19

% HbA1c = * 100Hb glyq.

Hb glyq. + Hb non-glyq.

Fig. 6: Equation de calcul de l’HbA1c lors de l’utilisation de la chromatographie liquide à haute performance d’affinité Glyc., glyquée; Hb, hémoglobine

Chromatographie liquide à haute performance à échangedecations(CLHPEC)Les protéines telles que l’Hb présentent différents points isoélectriques. Elles peuvent par conséquent être séparées par la CLHP EC parce que leur élution a lieu à différents moments en fonction de leur charge.1 Toute modification (p. ex. Hb carbamylée) ou variation de la molécule d’Hb qui entraîne un changement de la charge peut altérer le temps normal d’élution de cette molécule et permettre ainsi son identification.

Les méthodes reposant sur la charge électrique les plus courantes permettant de mesurer l’HbA1c ont recours à la CLHP EC. Par conséquent, la séparation est uniquement possible si la molécule cible a une charge électrique différente par rapport aux autres composants de l’échantillon. Etant donné la nécessité d’exclure les formes non physiologiques de l’Hb du calcul de l’HbA1c, il est important de se poser les questions suivantes afin d’obtenir une mesure de l’HbA1c correcte et une interprétation précise des résultats:

1) Le pic de la variante de l’Hb non glyquée est-il bien séparé d’autres pics?

2) Où se trouve les pics de la variante de l’Hb glyquée et ont-ils une influence sur les résultats de l’HbA1c?

3) Quelle est la qualité d’identification de la CLHP EC de tous les pics représentant des formes non physiologiques de l’Hb?

L’équation de calcul de l’HbA1c sur la base de la CLHP EC est présentée dans la figure 7 et se distingue considérablement des équations correspondantes pour la CLHP d’affinité et les essais immunologiques en raison de la différence fondamentale en termes de méthodologie (charge opposé à structure). Comme le montre l’équation, si la variante de l’Hb (HbX) ou sa forme glyquée (HbX1c) coélue avec l’HbA ou l’HbA1c, le numérateur (HbA1c) ou le dénominateur (HbA + HbA1c) augmentera et le résultat de l’HbA1c en sera négativement affecté.1

% HbA1c = * 100Aire (sA1c) – aire (HbX) – aire (HbX1c)

Aire totale – aire (HbX) – aire (HbX1c)

Fig. 7: Equation de calcul de l’HbA1c lors de l’utilisation de la chromatographie liquide à haute performance à échange de cations

9

La capacité d’identification des variantes de l’Hb sur un chromatogramme est souvent considérée comme un avantage et cette caractéristique peut effectivement s’avérer intéressante dans certains contextes. Elle est cependant essentielle à l’obtention d’une mesure précise de l’HbA1c: l’exclusion des formes non physiologiques de l’Hb (HbE, HbE1c, HbS, HbS1c, etc.) faisant partie du calcul, leur identification est obligatoire. Il est donc demandé aux laboratoires de procéder à des post-analyses requises afin de s’assurer que la valeur de l’HbA1c rapportée est bien indépendante de toute interférence.14,20 Cela implique de disposer d’un personnel bien formé et compétent dans l’identification des 1585 modèles différents associés aux troubles de l’Hb afin de contrôler l’ensemble des chromatogrammes. Malheureusement, malgré cette expertise, le repérage visuel risque de ne pas suffire pour identifier l’ensemble des variantes étant donné la coélution de certaines d’entre elles1 et la nécessité de procéder à d’autres analyses comme le séquençage génétique.

De telles post-analyses sont à la fois laborieuses et coûteuses et font de la CLHP EC une méthode de mesure de l’HbA1c moins rentable que d’autres méthodes d’un point de vue économique.19 De plus, l’impossibilité de séparer les pics (en raison d’une coélution) ou de les identifier (dans le cas des variantes de l’Hb rares) empêche l’obtention d’une valeur d’HbA1c précise et l’échantillon doit faire l’objet d’une seconde analyse à l’aide d’une méthode alternative comme l’essai immunologique. La CLHP EC permet certes d’identifier la variante de l’Hb présente,21,22 ce qui peut permettre de mieux comprendre l’état du patient mais l’objectif primaire de la mesure de l’HbA1c est l’obtention d’un résultat précis.

Coélution des variantes de l’hémoglobine avec d’autres picsLa figure 8 présente un chromatogramme produit par l’analyseur Tosoh G8 généré dans le cadre de l’étude sur les variantes de l’Hb (se reporter au document d’étude pour obtenir de plus amples détails; Etude des variantes de l’hémoglobine, Lenters-Westra et al.). Aucune anomalie n’est visible (p. ex. pics supplémentaires, temps de rétention erroné, etc.) et aucun avertissement n’est affiché dans le champ de l’indicateur. Le fait que ce patient est porteur d’une variante de l’Hb était connu, cela souligne donc le fait que la variante n’a pas été identifiée et que cette méthode est soumise à certaines interférences.14,23–25 Si ce résultat avait été obtenu au cours d’un test de routine, les patients auraient été considérés comme étant à un stade prédiabétique sur la base de la valeur de l’HbA1c de 43 mmol/mol (ou 6,07% [NGSP]).26 Cependant, étant donné que la variante de l’Hb n’a en réalité pas été identifiée, elle n’a pas été exclue du calcul de l’HbA1c ce qui a entraîné une hausse erronée du dénominateur de l’équation (étant

donné que l’HbA et la variante de l’Hb sont comprises toutes deux) et a donc généré une diminution artificielle de la valeur finale de l’HbA1c.1 Ce résultat de l’HbA1c ne devrait donc pas être rapporté et l’échantillon devrait faire l’objet d’une nouvelle analyse à l’aide d’une méthode qui n’est pas affectée par la variante de l’HbE.

Rapport d’hémoglobine glyquée

Nom % Temps Aire

FP 0,00 0,00 0,00

A1A 0,76 0,25 11,21

A1B 0,99 0,32 14,57

F 1,37 0,40 20,25

LA1C+ 1,73 0,49 25,50

SA1C 6,07 0,59 73,69

A0 90,14 0,90 1327,52

Aire totale 1472,74

FICC 43 mmol/mol HbA1c 6,07%

HbA1 7,82% HbF 1,37%

0,0

1,0

0 % 15 %

Dur

ée

Pourcentage

sA1c

A0

La variante HbE est présente mais coélue

(voir le chromatogramme piano à la page suivante)

Fig. 8: Chromatogramme Tosoh G8 contenant une variante de l’hémoglobine sans le message d’avertissement associé dans le champ de l’indicateur. Ce chromatogramme semble normal, mais la variante HbE est présente Reproduction d’un chromatogramme Tosoh généré dans le cadre de l’étude des variantes de l’Hb de l’ERL

10

La figure 9 affiche le même chromatogramme que celui illustré en figure 8 mais celui-ci a été généré à l’aide du logiciel PIANO afin d’afficher la position de la variante de l’Hb de manière plus détaillée. Les pics de l’HbE1c et l’HbE0 ne peuvent pas être distingués l’un de l’autre; l’HbE0 a coélué avec l’HbA0 et l’HbE1c est comprise dans l’aire totale. L’impossibilité de distinction des pics coélués par cette méthode génère l’incapacité du système Tosoh à afficher la variante ou un avertissement dans le champ de l’indicateur. Comme l’a déjà signalé le NGSP, ce manque de spécificité peut avoir pour conséquence que certains patients diabétiques et portant la variante de l’HbE soient considérés comme «sains» après que l’échantillon prélevé sur ces individus ait été analysé sur les systèmes Tosoh G7 et G8 par CLHP EC (en raison de la sous-estimation de la valeur de l’HbA1c exprimée en pourcentage).27

Des résultats complémentaires issus de l’étude sur les variantes de l’Hb présentaient des interférences générées par l’HbE et l’HbJ avec le système Tosoh G8. Il convient cependant de noter que le problème de coélution ne se limite pas aux analyseurs Tosoh G7 et G8 et que les autres systèmes de CLHPECcommelessystèmesBio-RadetMenarini/Arkraysont également sujets à des interférences générées par des variantes de l’Hb.14,20,21,24,25 Les résultats de 298 276 échantillons analysés pendant une période de 16 ans sur les systèmes Bio-Rad Variant Classic et Bio-Rad Variant II ont été présentés dans une étude.

Ces données montrent clairement la coélution de l’HbE avec l’HbA2 et mettent de plus en évidence la coélution de 26 autres variantes de l’Hb (p. ex. Zurich) avec l’HbA2 ainsi que la coélution occasionnelle de 12 variantes de l’Hb (p. ex. HbD Iran) avec l’HbA2.21 La littérature confirme de plus que l’HbE1c présente fréquemment une élution lorsqu’elle forme une épaule graphique de l’HbA1c dans la plupart des systèmes CLHP EC. Comme le souligne la figure 10, si l’HbE1c ne peut pas être identifiée, elle ne peut pas être exclue au cours du calcul comme le principe du test le nécessite, ce qui génère une diminution erronée de la valeur de l’HbA1c.28,29

% HbA1c = (Aire sA1c – aire HbE1c)

(Aire totale – aire HbE)* 100

Il est impossible de calculer l’HbA1c en raison de la coélution de l’HbE avec l’HbA0 et l’absence de détection du pic E1c

Fig. 10: Equation de calcul de l’HbA1c – l’HbE1c et l’HbE ne peuvent pas être exclues de l’équation comme requis par le principe de l’analyse par chromatographie liquide à haute performance à échange de cations

Chaque chromatogramme doit faire l’objet d’un contrôle visuel permettant de vérifier le résultat mais la coélution éventuelle de pics peut empêcher l’identification de l’ensemble des variantes et des analyses supplémentaires peuvent s’avérer nécessaires, ce qui rend cette analyse laborieuse et coûteuse.

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

0,00 0,07 0,17 0,26

A1A 0

,76 %

0,25

min

A1B 0

,99 %

0,32

min

F 1,3

7 % 0,

4 min

LA1C

+ 1,73

% 0,

49 m

inSA

1C 6

,07 %

/43 m

mol/mol

A0 90

,14 %

0,9 m

in

0,35 0,44

Chromatogramme généré à partir de l'échantillon

0,54 0,63 0,72 0,81 0,91 1,00 1,09 1,18 1,28 1,37 1,46 1,55

Pou

rcen

tage

Chromatogramme normal superposé manuellement

L’HbE1c n’est pas détectée sous la forme d’un pic

séparé et est donc comprise dans

l’aire totale

L’HbE0 coélue avec l’A0 et ne peut plus

être distinguée

Fig. 9: Chromatogramme de la fig. 8 généré à l’aide du logiciel PIANO dans le cadre de l’étude des variantes de l’Hb du laboratoire de référence européen. L’HbE1c et l’HbE0 ne sont pas détectables par inspection visuelle étant donné que l’HbE1c est comprise dans l’aire totale et que l’HbE0 coélue avec l’HbA0

11

La plupart des données disponibles relatives aux interférences se rap-portent à l’HbE1c, il pourrait s’agir d’un cas exceptionnel et la CLHP EC pourrait identifier d’autres variantes glyquées de l’Hb sous forme de pics clairs sur le chromatogramme. Cependant, ce phénomène a également fait l’objet d’analyses dans le cadre de l’étude sur les variantes de l’Hb et les chercheurs ont déterminé l’impossibilité de pouvoir identifier d’autres variantes glyquées de l’Hb.

L’HbS est signalisée par un pic supplémentaire après le pic A0 sur un chromatogramme Tosoh comme le montre le côté gauche de la figure 11; l’aire liée à l’HbS peut donc être exclue du calcul de l’HbA1c.

Afin de déterminer la position du pic de l’HbS1c, le chromatogramme d’un individu homozygote (génotype HbSS) (figure 11, côté droit) a été comparé avec celui d’un individu hétérozygote (génotype HbAS) (figure 11, côté gauche). Le chromatogramme de l’HbSS ne présente aucun pic lié à l’HbA1c ou l’HbA0 car les deux gènes globine présentent la mutation «S», cela permet d’afficher le pic de l’HbS1c. Etant donné que la position correspond à celle du pic de l’HbA0, cela suggère que les deux coéluent et que le pic de l’HbA0 masque celui de l’HbS1c chez les individus hétérozygotes. Cela entraîne une hausse artificielle du dénomi-nateur dans l’équation (voir figure 12) car l’aire A0 contient également de l’HbS1c glyquée, ce qui génère une diminution de la valeur de l’HbA1c.

Rapport d’hémoglobine glyquée

Chromatogramme d’HbAS (hétérozygote) Chromatogramme d’HbSS (homozygote)

Nom % Temps Aire Nom % Temps Aire

FP 0,00 0,17 3,33 FP 0,00 0,17 7,17

A1A 0,00 0,00 0,00 A1A 4,02 0,25 10,35

A1B 2,01 0,32 24,97 A1B 0,00 0,00 0,00

F 0,88 0,41 10,92 F 12,59 0,40 32,40

LA1C+ 2,33 0,50 28,91 LA1C+ 3,87 0,50 9,96

SA1C 10,98 0,60 117,91 SA1C 0,00 0,00 0,00

A0 84,88 0,90 1053,97 A0 73,30 0,94 188,65

H-V1 30,85 1,18 553,94 H-V1 79,34 1,20 988,41

Aire totale 1795,68 Aire totale 1245,79

FICC 97 mmol/mol HbA1c 10,98% FICC – – – mmol/mol HbA1c – – –%

HbA1 12,99% HbF 0,88% HbA1 – – –% HbF – – –%

0,0

1,0

0 % 15 %

sA1c

S0

A0

Dur

ée

Pourcentage

0,0

1,0

0 % 15 %

S1c

S0

Dur

ée

Pourcentage

Lorsque l’on compare le chromatogramme d’un individu porteur de l’HbAS à celui d’un individu porteur de l’HbSS, on peut remarquer que S1 coélue avec l’HbA0

P00 0,41 1,40 5,06 P00 6,22 1,06 16,02

P00 indique la présence d’une variante inconnue RET TIJD LAAG

TP TE LAAG

221 A1B NOT DETECT 10:00

221 SA1C NOT DETECT 10:00

Fig. 11: Chromatogramme de l’HbAS (d’un sujet hétérozygote) sur l’analyseur Tosoh G8 avec pics A0 et S0 séparés (gauche) et chromatogramme de l’HbSS (d’un sujet homozygote) sur l’analyseur Tosoh G8 qui ne contient pas l’A1c et l’A0. La comparaison des deux chromatogrammes permet d’identifier l’emplacement normal de S1c. Reproduction d’un chromatogramme Tosoh généré dans le cadre de l’étude des variantes de l’Hb de l’ERL

12

% HbA1c = Aire sA1c

Aire totale – aire (HbS1c) – aire (HbS0)* 100

Il est impossible d’exclure l’HbS1c du calcul de l’HbA1c étant donné qu’elle coélue avec l’HbA0

Fig. 12: Equation de calcul de l’HbA1c – l’HbS1c ne peut pas être exclue du calcul

en raison de sa coélution avec l’HbA0

Un autre problème avec l’interprétation des valeurs de l’HbA1c dérivées de la CLHP EC est souligné par la figure 11. On peut aussi observer un petit pic à la fin du chromatogramme dans le chromatogramme hétérozygote de la figure 11 (côté gauche). «P00» est rapportée comme une variante inconnue qui élue à 1,40 (temps) et dispose d’une aire de 5,06. Le principe général de calcul de l’HbA1c entraînerait l’exclusion de toutes les variantes anormales de l’Hb et l’inclusion de toutes les variantes physiologiques de l’Hb. Cependant, dans ce cas et bien que le système ne sache pas quelle variante P00 représente (le système ne sait donc pas s’il s’agit d’une variante de l’Hb physiologique ou non physiologique), celui-ci a tout de même calculé les différentes aires (tableau 4) et la valeur de l’HbA1c. Si P00 représente une variante anormale de l’Hb, le dénominateur de l’équation s’en trouverait augmenté ce qui diminuerait par erreur la valeur de l’HbA1c. Des analyses supplémentaires sont donc nécessaires pour pouvoir identifier la variante inconnue (P00) avant toute interprétation correcte des résultats.

Nom Aire

A1A 0

P00génèremathématiquementunehaussedudénominateur car elle est comprise dans le calcul de l’aire totale.

UneévaluationcomplémentaireestnécessaireafindeclarifiersiP00représenteunevariantedel’Hbphysiologique ou non physiologique avant qu’une valeur de l’HbA1c précise ne puisse être rapportée. La CLHPnepermetpasunetelleclarification.

A1B 24,97

F 10,92

LA1c 28,91

SA1c 117,91

A0 1053,97

H-VI 553,94

= Aire totale (sans P00) 1790,52

+ P00 (variante inconnue) 5,06

= Aire totale sur le chromatogramme

1795,68

Tableau 4: Calcul de l’aire totale (correspondant au chromatogramme hétérozygote sur le côté gauche de la fig. 11). P00 génère une hausse du dénominateur car elle est comprise dans le calcul de l’aire totale

13

Résumé

Une interprétation correcte des résultats de l’HbA1c nécessite de connaître la méthode utilisée pour générer le résultat. Les méthodes basées sur une différence de charge (comme la CLHP EC et l’électro-phorèse capillaire) doivent être en mesure de détecter l’ensemble des variantes de l’Hb afin de pouvoir afficher précisément le résultat de l’HbA1c.1 En effet, toutes les formes non physiologiques de l’Hb doivent être exclues pour pouvoir effectuer un calcul correct de l’HbA1c. Si les variantes de l’Hb ne sont pas toutes correctement identifiées par la CLHP EC (comme lorsque deux molécules ont la même charge et coé-luent au même moment pendant la période de rétention), le chromato-gramme peut sembler normal mais la valeur rapportée de l’HbA1c aura été artificiellement augmentée ou diminuée.1 En raison de ce manque de spécificité, chaque chromatogramme doit faire l’objet d’un contrôle visuel14 qui peut s’avérer laborieux et coûteux. De plus, si le chroma-togramme semble anormal (p. ex. les pics ne sont pas correctement séparés), un résultat incorrect peut être généré et l’instrument de CLHP peut fournir un indicateur dans le champ d’alerte et/ou ne pas générer de résultat de l’HbA1c.1 Des recherches supplémentaires comme le séquençage génétique peuvent aider à caractériser la variante de l’Hb, mais si la valeur de l’HbA1c est nécessaire, l’échantillon doit faire l’objet d’un nouveau test de confirmation à l’aide d’une méthode alternative qui n’est pas affectée par la variante de l’Hb.28 Ces analyses supplé-mentaires génèrent cependant aussi des coûts supplémentaires pour le laboratoire.

Compte tenu de ces problèmes potentiels, une méthode alternative basée sur les différences structurelles plutôt que sur la charge peut mieux convenir à une mesure de l’HbA1c. L’essai Tina-quant® HbA1c fournit une mesure de l’HbA1c précise et rapide et, par opposition à la CLHP EC, il inclut les variantes de l’Hb au calcul de la valeur de l’HbA1c

Variante de l’hémoglobine Tina-quant® HbA1c CLHPEC(p.ex.Tosoh) CLHPd’affinité(p.ex.Primus)

HbAS (trait drépanocytaire) Pas d’incidence Peut être affectée* Pas d’incidence

HbAE Pas d’incidence Peut être affectée* Pas d’incidence

HbAD Pas d’incidence Peut être affectée* Pas d’incidence

HbAC Pas d’incidence Peut être affectée* Pas d’incidence

Variantes rares Pas d’incidence en règle générale (seules 17 variantes sont localisées au sein de l’objectif de l’essai)

Peut être affectée* (plus de 1100 variantes de l’Hb existent)

Pas d’incidence en règle générale (sauf p. ex. Hb Himeji)

Thalassémie Tina-quant® HbA1c CLHPEC(p.ex.Tosoh) CLHPd’affinité(p.ex.Primus)

β-thalassémie mineure (β+/β ou β0/β)

Pas d’incidence Pas d’incidence Pas d’incidence

β-thalassémie majeure (β+/β+, β0/β0 ou β+/β0)

Aucune information médicale** Aucune information médicale** Aucune information médicale**

β-thalassémie (mineure) et variante de l’Hb (double hétérozygosité, p. ex., HbS/β+)

Non affecté à condition que la variante de l’Hb ne soit pas locali-sée au niveau des quatre premiers acides aminés de l’extrémité N-ter-minale de la chaîne β-globine

Non affectée à condition que la variante de l’Hb ne génère aucune coélution avec d’autres pics

Non affectée à condition que la variante de l’Hb ne génère aucune coélution avec d’autres pics

Tableau 5: Les résultats de l’HbA1c exprimés en pourcentage obtenus en utilisant l’essai Tina-quant® HbA1c ne sont pas affectés par la présence de variantes de l’hémoglobine (Hb)*Dépend de la variante de l’Hb, de la méthode et de la qualité de séparation (coélution et comigration); **L’anémie entraîne une réduction de la durée de vie des globules rouges et diminue donc le temps de glycation; L’HbA1c ne devrait pas être utilisée CLHP EC, chromatographie liquide à haute performance à échange de cations; CLHP d’affinité, chromatographie liquide à haute performance d’affinité

14

et ne nécessite aucune évaluation post-analytique.18 Le 23 mai 2013, l’es-sai Tina-quant® HbA1c de Roche a reçu l’agrément de la FDA pour une utilisation de soutien dans le diagnostic du diabète et dans l’identifica-tion de patients qui risquent de développer le diabète. Il s’agit du premier test au monde à recevoir un tel agrément et ces indications s’ajoutent à son utilisation établie dans le suivi du contrôle glycémique. L’agrément a été accordé suite à des tests approfondis de l’essai. Les données géné-rées comprenaient des résultats issus d’une étude de précision (coef-ficient de variance < 1,4%) ainsi que d’une étude sur les interférences générées par les variantes de l’Hb qui n’a permis de déterminer aucune interférence significative avec cet essai générée par l’HbS, l’HbC, l’HbE, l’HbD et l’HbA2. L’essai Tina-quant® HbA1c est donc conforme aux exi-gences de la FDA qui stipulent que le test de performance doit démon-trer la faible présence ou l’absence d’interférences générées par des variantes courantes de l’Hb, dont l’HbS, l’HbC, l’HbE, l’HbD et l’HbA2.30

L’essai Tina-quant® HbA1c utilise des anticorps dirigés contre les quatre premiers acides aminés de la séquence peptidique N-terminale de la chaîne β-globine amino-terminale ainsi que contre le glucose fixé à la valine N-terminale. Cette aire est en règle générale conservée et n’est donc pas affectée par les mutations générant les variantes courantes de l’Hb.1,5,10,11 En effet, seuls 17 des 1585 mutations de l’Hb identifiées à ce jour sont localisées dans cette région.9 Cela explique la raison pour laquelle les variantes de l’Hb telles que l’HbS, l’HbE, l’HbC et l’HbD n’affectent pas les performances de l’essai Tina-quant® HbA1c tandis qu’elles peuvent générer des interférences avec les tests de CLHP EC (tableau 5).18 L’essai Tina-quant® peut donc mesurer efficacement l’HbA1c indépendamment de la majorité des mutations de l’Hb connues (hémoglobinopathies et thalassémies)9 portées par environ 7% de la population mondiale, soit quelque 500 millions d’individus.5,7

COBAS, TINA-QUANT et LIFE NEEDS ANSWERS sont des marques de Roche.Toutes les autres marques appartiennent à leurs propriétaires respectifs.

©2014 Roche


Références1. Bry, L., Chen, P.C., Sacks, D.B. (2001). Effects of hemoglobin variants and chemically modifi ed derivatives on assays for glycohemoglobin.

Clin Chem 47, 153–163.2. Goldstein, D.E., Little, R.R., Lorenz, R.A., Malone, J.I., Nathan, D., Peterson, C.M., Sacks, D.B. (2004). Tests of glycemia in diabetes.

Diabetes Care 27, 1761–1773.3. Sacks, D.B. (2012). Measurement of hemoglobin A1c. A new twist on the path to harmony. Diabetes Care 35, 2674–2680.4. Hanas, R., John, G. (2010). 2010 Consensus Statement on the Worldwide Standardization of the Hemoglobin A1C Measurement.

Diabetes Care 33, 1903–1904.5. Weatherall, D.J., Clegg, J.B. (2001). Inherited haemoglobin disorders: an increasing global health problem. Bull World Health Organ 79, 704–712.6. Weatherall, D., Akinyanju, O., Fucharoen, S., Olivieri, N., Musgrove, P. (2006). Inherited disorders of hemoglobin. In: Jamison, D.T., Breman, J.G.,

Measham, A.R., Alleyne, G., Claeson, M., Evans, D.B., Jha, P., Mills, A., Musgrove, P. (Eds.) Disease control priorities in developing countries

2nd ed. Washington USA: World Bank.7. World Health Organization. (1989). Guidelines for the control of haemoglobin disorders. Disponible à l’adresse: http://www.who.int/genomics/

about/en/Modellguidelines.pdf (consulté en octobre 2013).8. Steinberg, M.H. (2001). Disorders of hemoglobin: genetics, pathophysiology, and clinical management. Cambridge University Press: Cambridge,

New York.9. HbVar. A database of human hemoglobin variants and thalassemias. Disponible à l’adresse: http://globin.cse.psu.edu/globin/hbvar/ (consulté

en octobre 2013).10. Rees, D.C., Styles, L., Vichinsky, E.P., Clegg, J.B., Weatherall, D.J. (1998). The hemoglobin E syndromes. Ann N Y Acad Sci 850, 334–343.11. INSERM US14. Orphanet: hemoglobin E disease. Available from: http://www.orpha.net/consor/cgi-bin/OC_Exp.php?lng=en&Expert=2133

(accessed October 2013).12. Fucharoen, S., Winichagoon, P. (1997). Hemoglobinopathies in Southeast Asia: molecular biology and clinical medicine.

Hemoglobin 21, 299–319.13. Beutler, E. (1998). Disorders of hemoglobin. In: Fauci, A.S., Braunwald, E., Isselbacher, K.J., Wilson, J.D., Martin, J.B., Kasper, D., Hauser, S.L.,

Longo, D.L. Harrison’s Principles of Internal Medicine. 14th ed. New York: McGraw-Hill.14. Little, R.R., Rohlfi ng, C.L., Hanson, S., Connolly, S., Higgins, T., Weykamp, C.W., D’Costa, M., Luzzi, V., Owen, W.E., Roberts, W.L. (2008).

Effects of hemoglobin (Hb) E and HbD traits on measurements of glycated Hb (HbA1c) by 23 methods. Clin Chem 54, 1277–1282.15. Patrinos, G.P., Giardine, B., Riemer, C., Miller, W., Chui, D.H.K., Anagnou, N.P., Wajcman, H., Hardison, R.C. (2004). Improvements in the

HbVar database of human hemoglobin variants and thalassemia mutations for population and sequence variation studies. Nucleic Acids

Res 32, D537–D541.16. Olivieri, N.F. (1999). The β-thalassemias. N Engl J Med 341, 99–109.17. Catlin, A.J. (2003). Thalassemia: the facts and the controversies. Pediatr Nurs 29, 447–451.18. Roche Diagnostics Ltd. (2012). Tina-quant® Hemoglobin A1c. Disponible à l’adresse: https://cssportal.roche.com/eld/gb/en/DocumentResult/

ResultList (consulté en octobre 2013).19. Weykamp, C., John, W.G., Mosca, A. (2009). A review of the challenge in measuring hemoglobin A1c. J Diabetes Sci Technol 3, 439–445.20. Little, R.R., Roberts, W.L. (2009). A review of variant hemoglobins interfering with hemoglobin A1c measurement. J Diabetes Sci Technol 3, 446–451.21. Szuberski, J., Oliveira, J.L., Hoyer, J.D. (2012). A comprehensive analysis of hemoglobin variants by high-performance liquid chromatography

(HPLC). Int J Lab Hematol 34, 594–604.22. Szuberski, J., Hoyer, J. (2009). A detailed study of the retention time of hemoglobin variants by high performance liquid chromatography

(HPLC). Int J Lab Hematol 31(Suppl 1), 28.23. Chakraborty, S., Gupta, D. (2013). A patient with undetectable hemoglobin A1c. Clin Chem 59, 856–857.24. Lin, C.-N., Emery, T.J., Little, R.R., Hanson, S.E., Rohlfi ng, C.L., Jaisson, S., Gillery, P., Roberts, W.L. (2012). Effects of hemoglobin C, D, E,

and S traits on measurements of HbA1c by six methods. Clin Chim Acta 413, 819–821.25. Lorenzo-Medina, M., De-La-Iglesia, S., Ropero, P., Martin-Alfaro, R., Quintana-Hidalgo, L. (2012). Interference of hemoglobin D on

measurements of hemoglobin A1c by the high-performance liquid chromatography HA-8160 in 27 patients. J Diabetes Sci Technol 6, 1235–1237.26. American Diabetes Association. (2012). Standards of medical care in diabetes – 2012. Position statement. Diabetes Care 35(Suppl 1), S11–S63.27. National Glycohemoglobin Standardization Program. HbA1c Assay Interferences. Disponible à l’adresse: http://www.ngsp.org/interf.asp

(consulté en octobre 2013).28. Weykamp, C.W., Penders, T.J., Muskiet, F.A., van der Slik, W. (1993). Infl uence of hemoglobin variants and derivatives on glycohemoglobin

determinations, as investigated by 102 laboratories using 16 methods. Clin Chem 39, 1717–1723.29. Roberts, W.L., Frank, E.L., Moulton, L., Papadea, C., Noffsinger, J.K., Ou, C.N. (2000). Effects of nine hemoglobin variants on fi ve

glycohemoglobin methods. Clin Chem 46, 569–572.30. FDA. (2013). Evaluation of automatic class III designation for COBAS INTEGRA 800 Tina-quant HbA1c Dx. Gen. 2

assay decision summary. Disponible à l’adresse: http://www.fda.gov/MedicalDevices/ProductsandMedicalProcedures/DeviceApprovalsandClearances/510kClearances/ucm335382.htm (consulté en octobre 2013).

072

871

35

00

1�

0414

- 0

.25

AD

Mesure de l’HbA1c et interférences dues aux troubles de l’hémoglobineDocument de travail scientifique

Etude des variantes de l’hémoglobineComparaison de la turbidimétrie par rapport à la CLHP

IntroductionUn patient chez qui le diabète a été diagnostiqué est soumis dans l’idéal à un dépistage des hémoglobino-pathies et de la thalassémie. Les informations recueil-lies peuvent ensuite servir à sélectionner la méthode appropriée permettant de mesurer de manière fiable l’hémoglobine A1c (HbA1c) et également à prévoir un conseil génétique afin d’éviter toute Hb majeure chez les nouveau-nés. Malheureusement, cette procédure ne fait toujours pas partie des pratiques cliniques courantes.

Le plus fréquent besoin exprimé par les techniciens utilisant la chromatographie liquide à haute performance (CLHP) à échange de cations pour mesurer l’HbA1c concerne, par opposition aux essais immunologiques, la possibilité de déterminer la présence ou non d’une variante. Dans la plupart des cas, une variante générera un chromatogramme anormal, tandis qu’elle ne pourra pas être identifiée par les essais immunologiques. Cela signifie cependant que la présence d’anomalies doit faire l’objet d’une recherche manuelle sur chaque chromato-gramme avant toute indication du résultat de l’HbA1c. Ce processus peut permettre d’identifier les interfé-rences potentielles générées par certaines variantes de l’Hb dont le nombre s’élève à plus de 1175 variantes différentes. Certaines variantes de l’Hb coéluent de plus avec l’HbA, ce qui génère un chromatogramme normal. Dans ces cas présents, la valeur de l’HbA1c connaît une hausse ou une diminution artificielle en fonction de la variante de l’Hb présente. La figure 1 présente la complexité des mesures de l’HbA1c constituée par l’uti-lisation d’une CLHP à échange de cations. Si l’on suit ce diagramme, la CLHP à échange de cations constitue une méthode de détermination de l’HbA1c en présence de variantes de l’Hb.

*Un chromatogramme normal ne garantit pas l’absence d’une variante de l’Hb. La présence d’une variante entraîne une hausse ou une dimi-nution erronée de la valeur de l’HbA1c en fonction de la variante

Fig. 1: Complexité de la mesure de l’HbA1c constituée par l’utilisation d’une CLHP à échange de cations en présence de variantes de l’Hb

Lorsqu’ils utilisent l’essai immunologique, les techni-ciens sont souvent préoccupés par le fait que ce test ne donne aucune indication quant à la présence ou non d’une variante. Cependant, l’essai immunologique ne nécessite pas d’identifier les variantes individuelles de l’Hb car toutes les formes de l’Hb sont comprises dans le calcul de l’HbA1c. La mesure de l’HbA1c n’est pas affectée tant qu’il n’existe aucune mutation de l’épitope pour l’anticorps utilisé dans l’essai.

Lenters-Westra, E., Siebelder, C., Slingerland, R.J., Weykamp, C.W.Laboratoire de Référence FICC/NGSP (Laboratoire de Référence Européen, Pays-Bas)

Vérifier chaque chromatogramme

Chromatogramme anormalChromatogramme normal*

Le résultat d’HbA1c peut être rapporté

NonOui

Oui

Non Oui ou ?

Non

Ne pas rapporter le résultat d’HbA1c

La variante est-elle hétérozygote (présence d’HbA)?

Interférences générées par la variante courante de l’Hb avec votre méthode de mesure de l’HbA1c?Pour obtenir plus d’informations, voir: www.ngsp.org/interf.asp1

Chromatogramme identique au chromato-gramme de la variante courante de l’Hb?(HbAS, HbAC, HbAD, HbAE)

Déterminer l’HbA1c à l’aide d’une autre méthode, de préférence la chromatographie d’affinité

Conseil: adresser le patient au laboratoire de référence afin de confirmer la variante de l’Hb au niveau de l’ADN et pour fournir un conseil génétique

Ce résultat d’HbA1c peut-il être rapporté?

Oui Oui

Si la concentration d’hémoglobine est trop faible, l’absence de rapport du résultat d’HbA1c constitue le résultat correct

Les mesures de l’HbA1c ne peuvent pas être rapportées pour les patients souffrant d’anémie et dont les concentrations d’hémoglobine sont faibles (hommes < 13 g/dl; femmes < 12 g/dl)

Dans ces cas présents, l’HbA1c ne constitue pas le marqueur approprié. D’autres protéines sériques glyquées (p. ex. l’albumine glyquée) peuvent s’avérer plus utiles

Pour les taux d’HbA1c qui se trouvent dans la plage de mesure de l’essai, le rapport du résultat d’HbA1c constitue le résultat correct

Aucune procédure post-analyse nécessaire (p. ex. contrôle manuel des chromatogrammes)

L’essai Tina-quant® HbA1c utilise un anticorps très spécifique capable de détecter les formes importantes d’hémoglobine et ne subissant pas les interférences générées par l’HbS, l’HbC, l’HbD, l’HbE ou les variantes rares de l’hémoglobine

Parmi les 1175 variantes de l’hémoglobine connues, seules 17 d’entre elles génèrent des interférences avec l’essai Tina-quant® HbA1c. Cependant, ces variantes sont extrêmement rares et on ne les retrouve souvent qu’au sein d’une même famille. Il est donc très improbable qu’elles puissent influencer les résultats

Fig. 2: Complexité de la mesure de l’HbA1c constituée par l’utilisation d’un essai immunologique en présence de variantes de l’hémoglobine

Tableau 1: Variantes de l’hémoglobine capables de générer des interférences avec les essais Tina-quant® HbA1c Gen. 2 et Gen. 3 et capables de générer des interférences potentielles avec la CLHP à échange de cations2

Concept de l’étudeL’objectif de l’étude consistait à analyser les interférences potentielles générées par différentes variantes de l’Hb avec différentes méthodes d’analyse de mesure de l’HbA1c.

Les échantillons ont été analysés sur deux sites à l’aide des méthodes suivantes:

Site 1: Laboratoire de Référence FICC/NGSP (Laboratoire de Référence Européen, Isala Klinieken, Zwolle, Pays-Bas)• Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur l’analyseur COBAS

INTEGRA® 800; essai immunologique certifié FICC et NGSP (Roche)

• Trinity Ultra2, chromatographie CLHP d’affinité certifiée FICC et NGSP (Trinity Biotech)

• Tosoh G8; CLHP à échange de cations certifiée FICC (Tosoh Bioscience).

Variante de l’Hb Substitution de l’acide aminé

Hb Raleigh β1 Val Ala

Hb Niigata β1 Val Leu

Hb Deer Lodge β2 His Arg

Hb Okayama β2 His Gln

Hb Graz β2 His Leu

Hb Agrigente β2 His Pro

Hb Fukuota β2 His Tyr

Pour la grande majorité des plus de 1175 variantes de l’Hb identifiées à ce jour2, la mutation ne concerne pas les quatre premiers acides aminés de la protéine d’Hb et ne génère donc aucune interférence avec les essais Tina-quant® HbA1c Gen. 2 (2ème génération) et Gen. 3 (3ème génération) de Roche. La mutation de cette région ne concerne qu’un nombre très réduit de variantes (17/1175).2

Il est de plus important de remarquer que la prévalence de ces 17 variantes de l’Hb est très faible et que ces mêmes variantes apparaissent souvent uniquement chez certains individus (p. ex. variante Hb Okaya-ma présente chez des sujets japonais masculins) ou auprès de quelques familles (p. ex. variante Hb Graz en Autriche) dans le monde entier. La figure 2 pré-sente la complexité de la mesure de l’HbA1c consti-tuée par l’utilisation d’un essai immunologique et le tableau 1 affiche certaines des variantes rares de l’Hb qui peuvent générer des interférences avec les essais Tina-quant® HbA1c Gen. 2 et Gen. 3.

Site 2: Laboratoire de Référence FICC/NGSP (Laboratoire de Référence Européen, hôpital Koningin Beatrix, Winterswijk, Pays-Bas)• Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur le module

cobas c 501; essai immunologique (Roche)• Tina-quant® HbA1c Gen. 3 sur le module

cobas c 501; essai immunologique (Roche)• Menarini HA-8180V; CLHP à échange de cations certi-

fiée FICC et NGSP (A. Menarini Diagnostics).

Le système de référence FICC constitue actuellement l’unique méthode valide de standardisation des mesures de l’HbA1c.3 L’ensemble des instruments et méthodes ont été étalonnés à l’aide du matériel de référence secondaire FICC (lot Berlin). Les calibreurs FICC ont été analysés en tant qu’échantillons et les valeurs FICC de l’étalonnage hors ligne ont été calculées de manière rétrospective. L’évaluation finale des données permettant de déterminer la présence d’interférences potentielles générées par la variante reposait sur les résultats FICC de l’étalonnage hors ligne pour toutes les méthodes.

Il est considéré que la majorité des variantes de l’Hb ne génèrent aucune interférence avec la chromatographie d’affinité Trinity Ultra2, cette méthode a donc servi de référence et l’ensemble des échantillons ont été analysés en double à l’aide de cette méthode.

Pour les autres méthodes analysées, l’existence d’au moins 10 échantillons ou plus d’un type défini de variante se traduisait par une analyse individuelle des échantil-lons, dans le cas contraire les échantillons étaient ana-lysés en double. L’ensemble des échantillons ont suivi 5 cycles d’analyse pendant 5 jours différents d’une durée approximativement égale.

Les échantillons étaient constitués de sang total de don-neurs individuels. Les échantillons d’HbF comprenaient un mélange de sang d’adultes et de nouveau-nés.

Aucun résultat n’a pu être communiqué pour les variantes Hb Volga et HbSS. En ce qui concerne l’HbF, la valeur moyenne de l’analyseur Menarini HA-8180V et de l’analyseur Tosoh G8 a été définie comme méthode de référence.

Des différences significatives entre chaque méthode et le comparateur et des récupérations entre les échan-tillons d’HbAA normale et les échantillons contenant une variante de l’Hb ont été calculées à l’aide de la méthode de régression de Deming à une valeur cible de 42 mmol/mol et, respectivement, 75 mmol/mol. L’écart maximum anticipé était d’environ 5% et tout écart > 10% était considéré comme significatif.

Les résultats ont également été reportés sur un gra-phique et une variante de l’Hb était considérée comme ne générant aucune interférence si les résultats d’échantillons contenant cette même variante étaient affichés dans l’espace de dispersion des échantillons d’HbAA normale.

Résultats et discussionRésultats obtenus par l’utilisation de l’essai Tina-Quant® HbA1c de Roche L’étude montre que les variantes de l’Hb HbAS, HbAC, HbAD, HbAE, HbA2, HbAJ, HbAG et ses variantes rares ne génèrent aucune interférence avec les essais Tina-quant® HbA1c Gen. 2 et Gen. 3 réalisés sur le module cobas c 501 ou avec l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 réalisé sur l’analyseur COBAS INTEGRA® 800 (tableau 2, graphiques 3–5, 8–11, 13–15, 17–19 et 21–23). Il a été constaté que seul un niveau d’HbF > 8% et la variante Hb Okayama généraient des interférences avec l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 (figures 26–28).

L’effet de l’Hb Okayama peut s’expliquer par le fait que les anticorps utilisés dans ces essais ciblent les quatre acides aminés et le glucose situés à l’extrémité N-terminale de la chaîne β-globine de l’hémoglobine. Dans le cas de l’Hb Okayama, on constate une substitution du deuxième acide aminé (β-2 His Gln) et cette variante ne sera donc pas identifiée par les anticorps dans l’essai. La glycation de l’HbF n’est pas aussi rapide que celle de l’HbAA mais est comprise dans la mesure de l’Hb totale, ce qui explique la raison pour laquelle le résultat de l’HbA1c est faussement faible. Il est très difficile d’obtenir des échantillons de patients qui contiennent différentes valeurs de l’HbF et de l’HbA1c, c’est la raison pour laquelle les échantillons d’HbF analysés comprenaient des mélanges de sang d’adultes et de nouveau-nés. La littérature confirme que la présence d’un niveau d’HbF > 15% affecte la plupart des méthodes courantes de mesure de l’HbA1c.4,5 Dans ces études, des échantillons prélevés auprès d’adultes ont été utilisés à la place de mélanges de sang d’adultes et de nouveau-nés. Cela pourrait expliquer le fait que l’étude actuelle a observé des interférences à un niveau d’HbF > 8% plutôt qu’un niveau d’HbF > 15%.

Résultats obtenus à l’aide de l’analyseur Menarini HA-8180V L’analyseur Menarini HA-8180V n’a pas été en mesure de générer un résultat de l’HbA1c pour les échantillons contenant de l’HbAD, HbAE, HbAJ, HbAG et la plupart des variantes rares. Cependant, l’affichage d’aucun résultat en cas de chromatogramme anormal lorsque la variante de l’Hb n’est pas complètement séparé du pic A0 constitue

Module cobas c 501 avec essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2

Régressionlinéaire

Régression de Deming

R2 42 mmol/mol Différencesignificative

75 mmol/mol

Différencesignificative

AA y = 1,07x - 3,67 y = 1,09x - 4,42 0,978 41 77

AS y = 1,04x - 2,91 y = 1,05x - 3,26 0,987 41 Non 75 Non

AC y = 1,02x - 1,29 y = 1,03x - 1,64 0,985 42 Non 76 Non

AD y = 0,96x + 0,37 y = 0,97x - 0,05 0,983 41 Non 72 Non

AE y = 0,99x - 0,04 y = 1,00x - 0,44 0,958 42 Non 74 Non

HbF > HbF 8%

A2 Non

Variantes rares Hb Okayama

Module cobas c 501 avec essai Tina-quant® HbA1c Gen. 3




75 mmol/mol


AA y = 1,08x - 3,01 y = 1,09x - 3,70 0,980 42 78

AS y = 1,10x - 4,38 y = 1,10x - 4,68 0,990 42 Non 78 Non

AC y = 1,01x - 0,77 y = 1,03x - 1,59 0,965 42 Non 76 Non

AD y = 0,97x + 1,99 y = 0,98x + 1,41 0,976 43 Non 75 Non

AE y = 1,08x - 2,89 y = 1,10x - 3,78 0,971 42 Non 78 Non

HbF > HbF 8%

A2 Non


Analyseur COBAS INTEGRA® 800 avec Tina-quant® HbA1c Gen. 2




75 mmol/mol


AA y = 1,08x - 4,28 y = 1,08x - 4,56 0,992 41 77

AS y = 1,07x - 4,40 y = 1,08x - 4,72 0,989 41 Non 76 Non

AC y = 1,00x - 0,72 y = 1,01x - 1,07 0,980 41 Non 75 Non

AD y = 0,98x - 0,52 y = 0,99x - 0,82 0,988 41 Non 73 Non

AE y = 0,99x - 0,47 y = 1,00x - 0,89 0,984 41 Non 74 Non

HbF > HbF 8%

A2 Non


un résultat correct. L’analyseur Menarini HA-8180V a été en mesure de générer un résultat pour les échantillons contenant de l’HbAS et de l’HbAC avec un niveau élevé de l’A2. Les pics de l’HbS et de l’HbC sont complètement séparés du pic de l’A0 dans le chromatogramme et de manière similaire, les pics de l’HbS1c et de l’HbC1c sont complètement séparés du pic de l’HbA1c. Le logiciel peut donc soustraire précisément l’aire du pic de la variante de l’aire totale et calculer correctement la valeur de l’HbA1c, ces variantes ne générant aucune interférence (figures 6 et 11). L’ensemble des variantes analysées, à l’exception de l’Hb Indonesia et l’Hb Hopkins-2, ont généré un chromatogramme anormal sur l’analyseur Menarini HA-8180V et, dans la plupart des cas, n’ont généré aucun résultat de l’HbA1c (tableau 2).

L’utilisation de cette technique de CLHP permet de séparer le pic de l’HbF de l’aire totale et donc d’obtenir le résultat de l’HbA1c réel.

Résultats obtenus à l’aide de l’analyseur Tosoh G8 Le tableau 2 et les figures 7, 12, 16, 20 et 25 montrent que l’analyseur Tosoh G8 a généré un résultat pour les échantillons contenant de l’HbAS, de l’HbAC, de l’HbAD et de l’HbAE, un niveau élevé d’A2, de l’HbAG et de l’HbAJ. Cependant, des interférences ont été constatées et sont dues à l’HbAE et l’HbAJ. De faibles valeurs erronées ont été obtenues dans les échantillons contenant ces deux variantes (figures 20 et 25). La figure 7 présente des résultats inférieurs obtenus avec l’analyseur Tosoh G8 lorsque les échantillons analysés contenaient la variante HbAS et l’écart par rapport aux

Menarini HA-8180V




75 mmol/mol


AA y = 1,03x - 1,54 y = 1,03x - 1,90 0,989 41 76

AS y = 1,06x - 5,91 y = 1,07x - 6,31 0,989 39 Non 74 Non

AC y = 1,02x - 0,46 y = 1,03x - 1,08 0,973 42 Non 76 Non

AD Aucun résultat

AE Aucun résultat

HbF

A2 Non

Variantes rares

Toutes les variantes rares analysées à l’excep-tion de l’Hb Indonesia et l’Hb Hopkins-2

Tosoh G8




75 mmol/mol


AA y = 1,02x - 0,37 y = 1,02x - 0,67 0,990 42 76

AS y = 0,95x - 1,60 y = 0,96x - 1,97 0,984 38 Non 70 Non

AC y = 1,02x - 1,95 y = 1,04x - 2,91 0,960 41 Non 75 Non

AD y = 0,83x + 8,41 y = 0,85x + 7,19 0,935 43 Non 71 Non

AE y = 0,69x + 0,80 y = 0,70x + 0,29 0,957 30 Oui 53 Oui

HbF

A2 Non

Variantes rares

Toutes les variantes rares analysées à l’excep-tion de l’Hb Indonesia et l’Hb Hopkins-2

Tableau 2: Points de prise de décision médicale calculés à l’aide de lignes de régression de Deming. Un écart > 10% comparé aux échantillons d’HbAA était considéré comme significatif

échantillons d’HbAA était proche des valeurs limites (9,5% d’écart à 42 mmol/mol et 8,5% à 75 mmol/mol).

Il convient cependant de noter que les lignes de régression de Deming calculées pour les variantes courantes reposaient sur 20 échantillons comparés aux 50 échantillons pour l’HbAA normale. Il faut également remarquer que la répartition de l’HbA1c sur la plage pertinente d’un point de vue clinique pour les échantillons d’HbA1c contenant des variantes courantes (HbAS, HbAC, HbAD et HbAE) n’était pas toujours optimale. Il y a donc lieu de se demander si la méthode de calcul de l’écart par rapport aux échantillons normaux est correcte car la figure 7 montre clairement une différence par rapport aux échantillons d’HbAA normale. Ce phénomène de génération de résultats inférieurs avec les variantes de l’HbAS après l’utilisation de l’analyseur Tosoh G7/G8 a déjà été observé dans de précédentes études (non publiées). Il n’existe jusqu’à présent aucune explication étant donné que les chromatogrammes affichent une séparation complète du pic S0 par rapport au pic A0, on pourrait donc s’attendre à l’affichage d’un résultat correct. L’ensemble des variantes analysées, à l’exception de l’Hb Indonesia

et l’Hb Hopkins-2, ont généré un chromatogramme anormal sur l’analyseur Tosoh G8 et, dans la plupart des cas, n’ont généré aucun résultat de l’HbA1c (tableau 2). L’utilisation de cette technique de CLHP permet de séparer le pic de l’HbF de l’aire totale et donc d’obtenir le résultat de l’HbA1c réel.

ConclusionLa méthode parfaite de mesure de l’HbA1c n’a pas encore été élaborée et le choix entre les différentes méthodes existantes se fera en fonction des priorités du laboratoire. Certains laboratoires pourront opter pour l’utilisation d’un essai immunologique afin d’obtenir un résultat rapide et fiable de l’HbA1c sans tenir compte de la présence ou de l’absence d’une variante de l’Hb. D’autres laboratoires en revanche chercheront à identifier la présence d’une variante et opteront pour une CLHP à échange de cations accompagnée (dans le meilleur des cas) d’un algorithme de vérification associé afin d’éviter tout résultat erroné. Chaque laboratoire pourra donc avoir donc une approche différente quant aux avantages/inconvénients des différentes méthodes de mesure de l’HbA1c.

Fig. 4: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 3 sur le module cobas c 501 en présence d’HbASHbA1c: 30 – 100 mmol/mol

Echantillons HbAA y = 1,08x - 3,01

R2 = 0,980 n = 50

Echantillons HbAS y = 1,10x - 4,38 R2 = 0,990

n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

coba

s® c

501

Gen

.3

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.3 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Fig. 5: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur l’analyseur COBAS INTEGRA® 800 en présence d’HbAS HbA1c: 30 – 100 mmol/mol


R2 = 0,992 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

CO

BA

S IN

TEG

RA

® 8

00 a

naly

zer

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Fig. 6: Résultats de l’analyseur Menarini HA-8180V en présence d’HbAS HbA1c: 30 – 100 mmol/mol


R2 = 0,989 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

HA

-818

0V

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Fig. 7: Résultats de l’analyseur Tosoh G8 en présence d’HbASHbA1c: 30 – 100 mmol/mol


R2 = 0,990 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

Toso

h G

8

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Fig. 3: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur le module cobas c 501 en présence d’HbAS HbA1c: 30 – 100 mmol/mol

40

60

80

100

120

140

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.00

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

AA

GP

2Im

mun

otur

bidi

met

ry g

/Lco

bas

c 5

01 m

odul

e

P/B Regression

Y = 1.0 *

X - 0.07

md(95) = 0.085

N = 126 r = 0.9974

t = 0.9641

Excellent slope and correlation is demonstrated (r = 0.9974, Y = 1.0).

AAG Immunonephelometry g/L BN II

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2


R2 = 0,978 n = 50


n = 20– x = y

Résultats inférieurs obtenus avec l’analyseur Tosoh G8 lorsque les échantillons comprennent la variante HbAS Hémoglobine S (% variante: 31 – 42% S)

Fig. 8: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur le module cobas c 501 en présence d’HbACHbA1c: 26 – 104 mmol/mol


R2 = 0,978 n = 50

Echantillons HbAC y = 1,02x - 1,29 R2 = 0,985

n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

20

40

60

80

100

120

140

20 40 60 80 100 120 140

coba

s® c

501

Gen

.2

Ultra2

HbAA

HbAC

X = Y

Fig. 9: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 3 sur le module cobas c 501 en présence d’HbACHbA1c: 26 – 104 mmol/mol


R2 = 0,980 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.3 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

Fig. 11: Résultats de l’analyseur Menarini HA-8180V en présence d’HbACHbA1c: 26 – 104 mmol/mol


R2 = 0,989 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

HA

-818

0V

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Fig. 10: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur l’analyseur COBAS INTEGRA® 800 en présence d’HbACHbA1c: 26 – 104 mmol/mol


R2 = 0,992 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

CO

BA

S IN

TEG

RA

® 8

00 a

naly

zer

Fig. 12: Résultats de l’analyseur Tosoh G8 en présence d’HbACHbA1c: 26 – 104 mmol/mol


R2 = 0,990 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

Toso

h G

8

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Toutes les méthodes sans interférence provenant de l’HbACHémoglobine C (% variante: 36 – 42% C)

Fig. 15: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur l’analyseur COBAS INTEGRA® 800 en présence d’HbADHbA1c: 30 – 96 mmol/mol


R2 = 0,992 n = 50

Echantillons HbAD y = 0,98x - 0,52 R2 = 0,988

n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

CO

BA

S IN

TEG

RA

® 8

00 a

naly

zer

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Fig. 16: Résultats de l’analyseur Tosoh G8 en présence d’HbADHbA1c: 30 – 96 mmol/mol


R2 = 0,990 n = 50

Echantillons HbAD y = 0,83x + 8,41 R2 = 0,935

n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

Toso

h G

8

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Fig. 13: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur le module cobas c 501 en présence d’HbADHbA1c: 30 – 96 mmol/mol


R2 = 0,978 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

Fig. 14: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 3 sur le module cobas c 501 en présence d’HbADHbA1c: 30 – 96 mmol/mol


R2 = 0,980 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.3 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

La présence de l’HbAD entraîne l’absence de résultats sur l’analyseur Menarini HA-8180V Hémoglobine D (% variante: 37 – 42% D)

40

60

80

100

120

140

HA

-818

0V

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Menarini HA-8180VAucun résultat d’HbA1c pour les échantillons contenant de l’HbAD

Fig. 17: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur le module cobas c 501 en présence d’HbAEHbA1c: 38 – 81 mmol/mol


R2 = 0,978 n = 50

Echantillons HbAE y = 0,99x - 0,04 R2 = 0,958

n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

Fig. 18: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 3 sur le module cobas c 501 en présence d’HbAEHbA1c: 38 – 81 mmol/mol


R2 = 0,980 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.3 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

Fig. 19: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur l’analyseur COBAS INTEGRA® 800 en présence d’HbAEHbA1c: 38 – 81 mmol/mol


R2 = 0,992 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

CO

BA

S IN

TEG

RA

® 8

00 a

naly

zer

Fig. 20: Résultats de l’analyseur Tosoh G8 en présence d’HbAEHbA1c: 38 – 81 mmol/mol


R2 = 0,990 n = 50


n = 20– x = y

40

60

80

100

120

140

Toso

h G

8

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Aucun résultat sur l’analyseur Menarini HA-8180V et valeurs faibles erronées sur l’analyseur Tosoh G8 pour les échantillons contenant de l’HbAEHémoglobine E (% variante: 27 – 33% E)

40

60

80

100

120

140

HA

-818

0V

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Menarini HA-8180VAucun résultat d’HbA1c pour les échantillons contenant de l’HbAE

Fig. 25: Résultats de l’analyseur Tosoh G8 en présence d’HbA2, HbAJ et HbAGHbA1c: 30 – 70 mmol/mol A2, 36 – 54 mmol/mol AJ, 34 – 43 mmol/mol AG

40

60

80

100

120

140

Toso

h G

8

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Fig. 21: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur le module cobas c 501 en présence d’HbA2, HbAJ et HbAGHbA1c: 30 – 70 mmol/mol A2, 36 – 54 mmol/mol AJ, 34 – 43 mmol/mol AG

Echantillons HbAA n = 50

Echantillons HbA2 n = 10

Echantilons HbAJ n = 5

Echantillons HbAG n = 2

– x = y

40

60

80

100

120

140

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

Fig. 22: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 3 sur le module cobas c 501 en présence d’HbA2, HbAJ et HbAGHbA1c: 30 – 70 mmol/mol A2, 36 – 54 mmol/mol AJ, 34 – 43 mmol/mol AG





– x = y

40

60

80

100

120

140

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.3 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

Fig. 24: Résultats de l’analyseur Menarini HA-8180V en présence d’HbA2HbA1c: 30 – 70 mmol/mol

40

60

80

100

120

140

HA

-818

0V

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2



– x = y

Fig. 23: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur l’analyseur COBAS INTEGRA® 800 en présence d’HbA2, HbAJ et HbAGHbA1c: 30 – 70 mmol/mol A2, 36 – 54 mmol/mol AJ, 34 – 43 mmol/mol AG





– x = y

40

60

80

100

120

140

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

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CO

BA

S IN

TEG

RA

® 8

00 a

naly

zer

Des interférences générées par l’HbAJ et l’HbAG sont observées avec l’analyseur Menarini HA-8180V et les échantillons contenant de l’HbAJ ont généré des résultats faibles erronés sur l’analyseur Tosoh G8 Hémoglobine A2, AJ et AG (% variante: 4 – 7% A2, 49 – 51% AJ, environ 18% AG)



Echantillons HbAJ n = 5


– x = y

Fig. 26: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur le module cobas c 501 en présence de variantes rares de l’hémoglobine

Echantillons HbAA Hb Setif Hb Setif (sélectionnée) Hb Okayama Hb Philadelphia (HbH) Hb Zurich HbEE HbSE HbO Indonesia HbSD Hb Coushatta (C4 + C9)

Hb Queens (Q1) Hb Hopkins-2 HbCC HbSC

– x = y

110

100

90

80

70

60

50

40

30

20

10

Ultra210 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

Fig. 27: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 3 sur le module cobas c 501 en présence de variantes rares de l’hémoglobine

Echantillons HbAA Hb Setif Hb Setif (sélectionnée)

Hb Okayama Hb Philadelphia (HbH)

Hb Zurich HbEE HbSE HbO Indonesia HbSD Hb Coushatta (C4 + C9)


– x = y

110

100

90

80

70

60

50

40

30

20

10

Ultra210 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.3 a

ssay

coba

s c

501

mod

ule

Fig. 28: Résultats de l’essai Tina-quant® HbA1c Gen. 2 sur l’analyseur COBAS INTEGRA® 800 en présence de variantes rares de l’hémoglobine

Echantillons HbAA Hb Setif Hb Setif (sélectionnée) Hb Okayama Hb Philadelphia (HbH) Hb Zurich HbEE HbSE HbO Indonesia HbSD Hb Coushatta (C4 + C9)


– x = y

110

100

90

80

70

60

50

40

30

20

10

Ultra210 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

Tina

-qua

nt® H

bA1c

Gen

.2 a

ssay

CO

BA

S IN

TEG

RA

® 8

00 a

naly

zer

Type de variante HbA1c (mmol/mol) n

HbAA 0–100 50

Hb Setif 38–58 2

Hb Okayama 74 1

Hb Philadelphia (HbH) 41 1

Hb Zurich 20 1

HbEE 60 1

HbSE 36 1

HbO Indonesia 39 1

HbSD 21 1

Hb Coushatta (C4 + C9) * 2

Hb Queens * 1

Hb Hopkins-2 43 1

HbCC 51 1

HbSC 21 1

*Aucune indication possible

Tableau 3: Variantes rares de l’hémoglobine utilisées sur tous les systèmes

L’ensemble des variantes rares analysées, à l’exception de l’Hb Indonesia et l’Hb Hopkins-2, ont généré un chromato-gramme anormal et n’ont généré aucun résultat d’HbA1c sur les analyseurs Menarini HA-8180V et Tosoh G8 Variantes rares

40

60

80

100

120

140

HA

-818

0V

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

40

60

80

100

120

140

Toso

h G

8

20 20 40 60 80 100 120 140

Ultra2

Menarini HA-8180VL’ensemble des variantes rares analysées, à l’exception de l’Hb Indonesia et l’Hb Hopkins-2, ont généré un chromatogramme anormal et n’ont généré aucun résultat d’HbA1c

Tosoh G8L’ensemble des variantes rares analysées, à l’exception de l’Hb Indonesia et l’Hb Hopkins-2, ont généré un chromatogramme anormal et n’ont généré aucun résultat d’HbA1c

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Références1. NGSP. HbA1c methods: Effects of hemoglobin variants (HbC, HbS, HbE

and HbD traits) and elevated fetal hemoglobin (HbF). Updated July 2013. Disponible à l’adresse: http://www.ngsp.org/interf.asp (consulté en octobre 2013).

2. HbVar. A database of human hemoglobin variants and thalassemias. Disponible à l’adresse: http://globin.cse.psu.edu/globin/hbvar/ (consulté en octobre 2013).

3. Consensus Committee. (2007). Consensus statement on the worldwide standardization of the hemoglobin A1C measurement: the American Diabetes Association, European Association for the Study of Diabetes, International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, and the International Diabetes Federation. Diabetes Care 30, 2399–2400.

4. Rohlfing, C.L., Connolly, S.M., England, J.D., Hanson, S.E., Moellering, C.M., Bachelder, J.R., Little, R.R. (2008). The effect of elevated fetal hemoglobin on hemoglobin A1c results: five common hemoglobin A1c methods compared with the IFCC reference method. Am J Clin Pathol 129, 811–814.

5. Little, R.R., Rohlfing, C.L., Hanson, S.E., Schmidt, R.L., Lin, C.N., Madsen, R.W., Roberts, W.L. (2012). The effect of increased fetal hemoglobin on 7 common Hb A1c assay methods. Clin Chem 58, 945–947.

RemerciementsLa présente étude a été menée par le Laboratoire de Référence Européen (Laboratoire de Référence FICC/NGSP) à Zwolle et Winterswijk (Pays-Bas) avec le soutien de Roche.

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