Nouveaux Développements du couplage CCM- SM … · Mr François Bretin, Chimie Médicinale Oncologie, Sanofi-aventis R & D Vitryaventis R & D Vitry-sur-Seine Mr Francis Maquin, Analytical

Nouveaux Développements du couplage CCM-SM-ELSD : retour d’expérience; commentaires.

Mr François Bretin, Chimie Médicinale Oncologie, Sanofi-aventis R & D Vitry-sur-SeineSanofi aventis R & D Vitry sur Seine

Mr Francis Maquin, Analytical Sciences Paris, S fi ti R & D Vit S iSanofi-aventis R & D Vitry-sur-Seine

Nouveaux Développements du couplage CCM-SM-ELSD : retour d’expérience; commentairesp ;

La configuration que nous retenons est CCM-CAMAG-split-ELSD/SM :

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Nouveaux Développements du couplage CCM-SM-ELSD : retour d’expériencep

Optimisation solvant et débit pMeOH/H2O/HCOOH (95/5/0.5%) à 0.4 ml/mn

Choix du piston (piston ovale)Plus adapté aux produits prochesRétention de la silice M i t l f é tMaintenance plus fréquente

3


Piston rondLa silice reste sur la plaque (désorption)Maintenance moins fréquenteMais moins adapté aux produits très proches

4


Problèmes majeurs (utilisateurs)j ( )Passage de 4 LC/MS à 3 LC/MS + CCM/MS

O il lé i d l C/MS ( )Outil complémentaire de la LC/MS (avantages)Rapidité: durée d’analyse de 1.5 mn

Visualisation instantanée de la masse pendant l’acquisition

Récupération de l’analyse sur l’intranet

5


6


OTf

X

BOH

OH

+catalyseur au Pd

X+

Cs2CO3/Dioxane/H2OA B C

Suivi de réaction par CCM et LC/MS

7


2.5e+0083: DAD: TIC

100(16)82%

421.00421.00

2.43

100

%

(8)8%1.69

(18)6%2.81

(17)4%2.54

%

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00Time0

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00Time0

100

1:MS ES+ 1.8e+007

Combine (694:724-(640:655+773:788))366.20 42226100

%

254.22

322.19

422.26

100.00 150.00 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 450.00 500.00 550.00 600.00m/z0

210.27101.03 196.15110.14 154.24

253.19

211.37310.34255.34 323.35

367.35

369.29421.60

423.44

619.64425.32

8


2.5e+0083: DAD: TIC (16)100

%

(16)82%

421.00421.00

2.43

100

%

Time0

%

(8)8%1.69

(18)6%2.81

(17)4%2.54

Time0

%

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00Time0

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00Time0

9


100

5.0e+005ELSD-Sedex-65 (1);100%;0.30

100100

%

100

%

Time0

%

Time0

%

-0.10 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50Time0

-0.10 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50Time0

1:MS ES+ 69e+007

Combine (15:21)44420

100

%

6.9e+007444.20

44 21

100.00 150.00 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 450.00m/z0

91.01 332.30294.32127.23

445.21

446.19

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Technique complémentaire à la LC/MS

Transposition plus rapide pour la purification

Pas de problème d’inversion de pics

S ibilité t è i té t i d dil tiSensibilité très intéressante car moins de dilution

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Couplage CCMCouplage CCM--SM ou CCMSM ou CCM--SMSM--ELSD (DAD)ELSD (DAD)

Francis MAQUINFrancis MAQUIN

O t b 2010O t b 2010Octobre 2010Octobre 2010


l’absence de signal SM-électrospray d’un spot donne plusieurshypothèses :hypothèses :

☺ la pression LC est élevée (sup à 40bars ) bouchage du piston :nettoyage ultrasons/inversion éluant pour éliminer le dépôt de silice surnettoyage ultrasons/inversion éluant pour éliminer le dépôt de silice surpiston (voir manuel instruction Camag).

Après cette intervention la pression LC doit revenir dans une plage duAprès cette intervention, la pression LC doit revenir dans une plage dutype 4-15 bars.

la pression LC est normale : la configuration CCM-SM ne permet pasla pression LC est normale : la configuration CCM SM ne permet pasd’estimer le rendement d’extraction du spot CCM ; la concentration duspot CCM est insuffisante ; le spectromètre de masse est la cause duproblème ; mauvais paramétrage des paramètres d’acquisition (domainep ; p g p q (de masse ; polarité positif/négatif) ; structures associées au spot nes’ionisant pas sous SM-électrospray (hydrocarbures ; aliphatiques ;structures volatiles..).

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)


Afin d’éviter de longues heures à tenter d’identifier l’absence de résultatsSM, il faut envisager une configuration du type CCM-SM-ELSD.(d’après nos essais le signal UV est trop peu sensible/représentatif des(d après nos essais, le signal UV est trop peu sensible/représentatif desstructures isolées par CCM).

S ( ff / SL’ELSD (détecteur à diffusion de lumière, www.sedere.com / SedereSedex 85 LT) est idéal pour le couplage CCM-SM : sensibilité optimalepour débit 0,1 à 0,6 ml/minutes ; compatible tous solvents ; réponsep 0, 0,6 / ; p ; passurée pour aliphatiques ; phtalates ; lipides ; terpenes ; volatils….

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Comme démontré par Mr F. Bretin, nous suivons en simultanéeles profils d’évaporation SM, ELSD :

l’absence de profil ELSD signifie la non désorption du spot CCM via l’interface CCM.

La présence de profil ELSD en l’absence de signal SM s’explique par :la non ionisation de la structure, un défaut de fonctionnement dula non ionisation de la structure, un défaut de fonctionnement du spectromètre de masse… (L’intensité du profil ELSD nous donne une indication sur la concentration associée au spot CCM).

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Evolution & Développement possibles pour l’interface Evolution & Développement possibles pour l’interface CCMCCM SM CSM CCCMCCM--SM CamagSM Camag

Francis MAQUINFrancis MAQUIN

Octobre 2011Octobre 2011

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Evolution & Développement possibles pour l’interface CCMEvolution & Développement possibles pour l’interface CCM--SM SM CamagCamag

✔Piston rond/ovale : mise en place de tests après fabrication pour limiter des problèmes du type “décollement de la silice” autour du spot selectionné : à discuter avec Chromacin (P.B Savary) et Camag (Support & Service Mr U Bloesch)(Support & Service, Mr. U. Bloesch).

✔Remplacement optionel de la vanne rheodyne manuelle de l’interface Camag par une vanne rheodyne automatique OEM (Original Equipment Manufacturer) (= rheodyne MXP 7900-000 sans son boîtier) les contacts closures servant à l’automatisation de l’ensembleboîtier) les contacts closures servant à l automatisation de l ensemble CCM-SM. Avec cette vanne rheodyne OEM, il serait toujours possible de travailler en mode manuel via un montage électrique basic associant un interupteur par exemple.

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Evolution & Développement possibles pour l’interface CCMEvolution & Développement possibles pour l’interface CCM--SM SM CamagCamagCamagCamag

✔ Etude détaillée de l’éluant entrant dans l’interface CCM-SM Camag :methanol/eau/acetonitrile/isopropanol ; pourcentage du melange ; debit de l’éluant ; ajout ou non d’acide formique,TFA ; influence du pourcentage d’eau sur la découpe du spot via le piston Camagpourcentage d eau sur la découpe du spot via le piston Camag (= Camag plunger).A notre connaissance, aucune publication/note d’application n’estdisponible sur ce sujet : dommage …

✔Pompe LC optionnelle (pompe binaire,tertiaire ou quaternaire)✔Pompe LC optionnelle (pompe binaire,tertiaire ou quaternaire) spécifiquement adaptée aux conditions expérimentales de l’interface CCM-SM Camag(débit inferieur à 0,6 ml/minute)

✔ Optimisation de visualisation spot CCM : micro lampe, camera

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Evolution & Développement possibles pour l’interface CCMEvolution & Développement possibles pour l’interface CCM--SM SM CamagCamag

✔ Automatisation du déplacement de la plaque CCM (avec visualisation des spots intéressante via micro-camera et autres..)

lé t i d l Rh d OEM l ité dcomplémentaire de la vanne Rheodyne OEM : complexité de ce système, prix, faisabilité, fiabilité …

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Remerciements :

Club de chromatographie CCM : Mme Louise Vicard ; Mr Pierre Bernard-Savary; y(chromacim-Camag France).

MMs Claude Kugel & Bertrand Monégier Sciences Analytiques ParisMMs Claude Kugel & Bertrand Monégier, Sciences Analytiques Paris,Sanofi-aventis R & D, Vitry-sur-Seine.

MMs Vincent Leroy, Laurent Schio, Chimie Médicinale Oncologie, Sanofi-aventis R & D, Vitry-sur-Seine.

2020

Documents

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