PLACE DES NOUVEAUX MARQUEURS DU VHB · ALAT Immunotolérance Immuno-réactive Clairance Porteur inactif Mutant précore Hépatite "e-" Infection chronique AgHBe positive Hépatite

V.Thibault | GEMHEP Dec. 2018 100:09:45

PLACE DES NOUVEAUX MARQUEURS DU VHB

Vincent THIBAULT

Laboratoire de VirologieCHU de Rennes2 rue Henri le Guilloux35033 Rennes cedex 9

IRSET - INSERM U1085Université Rennes 1

CENTREHOSPITALIER

UNIVERSITAIREDE RENNES


MAIS QUE NOUS MANQUE-T'IL ?


Marqueurs et histoire naturelle : du classique revisité (I ≠ H)

CV V

HB (

log U

I/m

L)

ALA

T U

I/

mL

AgHBe

Anti-HBe

AgHBs

ADN

ALAT

ImmunotoléranceImmuno-réactive

ClairancePorteur inactif

Mutant précoreHépatite "e-"

Infection chroniqueAgHBe positive

Hépatite chroniqueAgHBe positive

Infection chroniqueAgHBe négative

Hépatite chroniqueAgHBe négative

TRAITEMENTTRAITEMENT


La réplication à l'échelon cellulaire

AAAAAAAA

AAAA

AAAA

NTCP

ARN

ADN

AAAA

ARNpg

HBeHBx

HBs

ADN

HBcrAg ?

ARN ?

L'ADN intégré : source importante d'AgHBs


Des quantités conséquentes et relatives

AAAAAAAA

AAAA

AAAA

NTCP

ARN

ADN

AAAA

ARNpg

HBeHBx

HBs

109/mLHBs/HBc/ADN

106/mLHBs/HBc/ARN

1011/mLHBs/HBc

1014/mLHBs

L'ADN intégré : source importante d'AgHBs

Définir la modulation de ces différentes formes et

leur probable interdépendance


L'impact des traitements

AAAAAAAA

AAAA

AAAA

NTCP

ARN

ADN

AAAA

ARNpg

HBeHBx

HBs

ADN

109/mLHBs/HBc/ADN

106/mLHBs/HBc/ARN

1011/mLHBs/HBc

1014/mLHBs

Enrichissement ?

Impact des nouveaux traitements ?

Place de l'AgHBsq ?

Place de l'HBcrAg ?

Place de (des) ARN ?


Quels sont nos besoins ?

➢ Identification des personnes infectées

✓ Fenêtre sérologique "Ramping"

✓ Infection B occulte

✓ Risque de réactivation

➢ Suivi des traitements ou de l'infection chronique –Règles d'arrêt

✓ Marqueurs circulants

➢ qHBsAg

➢ HBcrAg

➢ ADN

➢ ARN

✓ Marqueurs intrahépatiques

➢ cccDNA - mRNA

➢ Identification de la "guérison"

✓ cccDNA / ADN intégré

➢ Suivi des nouveaux traitements

✓ CAM

✓ siRNA

✓ NAP

AgHBs (US)qAnti-HBc

Idéalement :

▪ Plasma (sérum)

▪ Dosage automatisé

▪ Sensible

▪ Standardisé

Capside ?mRNA circulants?

Une combinaison de marqueursdirects (Ag-Ac. Nuc.)

etindirects (Ac) ?


ARN VIRAUX

▪ Reflet de l'activité transcriptionnelle du cccDNA chez les patients AgHBe positifs

▪ Prédictif de la séroconversion HBe

▪ Prédictif de la rechute virologique à l'arrêt du traitement

Wang (2017), Jansen (2016), Van Bömmel (2015)


Une population complexe

Ajiro et al. Emerging Microbes and Infections (2014) 3, e63

Systèmes de quantification hétérogènes; absence de standard


Approche "Van Bömmel"

(1709)qPCR SHORT

RACE-3' full length

1789TATAAA-An

RACE-3' truncated (X)

1661CATAAA-An

(1837)qPCR LONG

Van Bommel et al. HEPATOLOGY 2015;61:66-76

Pas d'étape de dégradation d'ADN


Un système robuste ?

On-therapy CHB samples (N=16), samples (N=89) from 10 treatment naïve CHB subjects receiving 12-weeks of NA with 8-week follow-up, HBsAg positive blood donor samples (N=102), 3 seroconversion series from plasmapheresis donors (N=79 samples)

▪ 5’ end of X▪ 3’ end of Core▪ Comparaison Van Bömmel

Butler et al. Hepatology 2018;68:2106-2117

SerumPlasmaSensitivity: 1.65 logU/mL


Situation sous traitement et naturelle


Plus d'ARN que d'ADN Plus d'ADN que d'ARN

16 treated patients ETV or TDF

102: 92 ARN +


Situation sous traitement et naturelle


Plus d'ARN que d'ADN Plus d'ADN que d'ARN

16 treated patients ETV or TDF

102: 92 ARN +


ARN et phase aiguë


Evolutions parallèles de l'ADN et de l'ARN


La décroissance de l'ARN du VHB : une nouvelle règle d'arrêt de Tt ?

Butler et al. Hepatology (2018)


Impact des facteurs liés à l'hôte ou au virus sur le niveau d'ARN

Van Campenhout et al. HEPATOLOGY 2018; 68:839-847

Cohorte multiethnique de 488 porteurs chroniques non traités

n=366 n=122


Influence du génotype et des variants "précore"


*

*

*

* *


Corrélation ADN/ARN (ARN<ADN)- Peu de corrélation avec protéines


75

49

110

125

16

97

AgHBe+

AgHBe-


Analyse multivariée


Evaluation de l'ARN en fonction de ces paramètres !


Histoire naturelle et ARN-VHB

Wang et al. J Viral Hepat. 2018;25:1038–1047.

102 patients jamais traités (66 PBH)

Détection d'ARN chez porteurs inactifs ? Niveaux identiques (e+/-)


ARN, ADN, qHBsAg : lequel choisir ?

Wang et al. J Viral Hepat. 2018;25:1038–1047.

Dispersion de l'AgHBsIntérêt du rapport entre quantité de protéines produite et source (ARN ou ADN) ?


DOSAGE DE L'AGHBS :

AMÉLIORATION DE LA SENSIBILITÉ DES TESTS

MAIS VISION TROP SIMPLISTE ?


Vers une sensibilité exquise…

NameFujirebio

Lumipulse® G HBsAg-Quant

Abbott HBsAg Quant

DiaSorin Murex HBsAg Quant

Roche HBsAg II Quant

Technology CLIA CMIA CLIA ECLIA

Format Quantitative Sandwich

Intended Use

Qualitative and quantitative

determination of HBsAg in serum or plasma

Quantitative determination of HBsAg

in human serum or plasma

Quantitative determination of HBsAg

in human serum or plasma

Quantitative determination in confirmed HBsAg human

serum or plasma

Reference WHO Second International Standard, 00/588, subtype adw2, genotype A

Calibration Range(IU/mL)

0.005 – 150 0.05 - 250 0.05 - 1500.05 - 130

(13 000/52 000)

Automation Lumipulse® G Architect Liaison® XL Elecsys, Cobas e411 (1/100)

Modular, cobas e601-602 (1/400)

Antibodies2 Mabs on solid phase

2 Mabs – AMPPD labelled

2 Mabs on solid phase1 Pab - acridinium

labelled

3 Mabs on solid phase 4 Mabs - isoluminol

labelled

2 Mabs 1 Mab and 1 Pab -ruthenium

labelled


Abbott prototype version

Lou et al. J Clin Vir 105 (2018) 18–25

0.02-0.05 IU/mL


La perte de l'AgHBs après arrêt du traitement dépend du titre

Jeng et al. HEPATOLOGY 2018; 68:425-434


Kuhnhenn et al. Aliment Pharmacol Ther. 2018;1–13

Impact des mutations sur la production des constituants viraux

ARN 3.5kb ADN

AgHBsSurnageants

AgHBsLysats

Modulation des transcrits (S, M, L)

Modulation de l'excrétion

Forme intégrée

Enveloppement des capsides


LA QUANTIFICATION DES ANTI-HBC :UNE UTILITÉ ?

▪ Des taux plus élevés durant les phases "hépatites" comparées aux "infections".

▪ Le titre anti-HBc corrèle avec le niveau des transaminases, l'histoire naturelle et la

réponse aux traitements.

▪ Plus le titre est élevé plus la probabilité de faire une séroconversion sous traitement (AN

ou IFN) est importante.

Yuan Q et al. Gut 2013;62:182-184; Fan R et al. Gut 2016;65:313-320.


La quantification des anti-HBc aide à la prédiction de la réactivation chez des patients ayant un profil d'infection ancienne et traités pour lymphome

Yang et al. Journal of Hepatology 2018 vol. 69: 286–292

Double-antigen sandwich immunoassay (Wantai, Beijing, China)calibrated using World Health Organization standards.


Anti-HBc et réactivation du VHB

Yang et al. Journal of Hepatology 2018 vol. 69: 286–292

51/4R

72/2R

36/14R

33/1R

HR 17.29


Le titre anti-HBc est associé au risque de rechute à l'arrêt du traitement par analogue

Shi et al. Clinical Gastroenterology and Hepatology (2018),doi: 10.1016/j.cgh.2018.05.047


ET L'HBCRAG ?


L'HBcrAg : HBc related antigens

Attention à l'impact de l'AgHBe !

ATG ATG UAGGène CGène pré-C

1814 1901 2450

Protéine capside

NH2 Capside (21,5kDa 1-183) COOH

Peptide signal p22cr (22kDa -28 - >149) COOH

AgHBe (17kDa -10 - 149) COOH

Peptide signal

Protéine précore

COOH

AgHBe

p22cr

Capside

Traduction

Maturation

Dénaturationet dosage


Brunetto et al. P. 2077 AASLD, SF 2018

HBcrAg : encore un exemple à ne pas suivre !

"Along with HBV DNA and ALT, serum HBcrAglevel may be a useful biomarker for theidentification of HBeAg negative HBV-infectionfrom chronic hepatitis B, independently of HBVgenotype, with a single observation point"

Utilité pour dissocier le statut infection vs. hépatite

- chronic hepatitis B (CHB, N=550),- chronic infection B (CI-1, N=710),- chronic infection with fluctuating low viremiaHBV DNA <20,000 IU/mL, (CI-2, N=322).

☺☺


Quelques points clés

➢ Les marqueurs "classiques" restent de mise

➢ Pas d'information spécifique sur les évènements intra-hépatiques

✓ Difficultés de standardisation du cccDNA

✓ Appréciation de la transcription

➢ Définition de la "guérison" : quels marqueurs ? Définition de seuils

➢ Trois marqueurs sont attractifs

➢ AgHBs : différentes formes, sensibilité accrue, perturbation par l'ADN intégré

➢ HBcrAg : question de sensibilité, mésusage, pertinence clinique ?

➢ ARN : cohérence des résultats, vers une standardisation, automatisation, des données à venir

➢ Nécessité de combiner plusieurs marqueurs pour une vision plus précise

✓ Règles d'arrêt des traitements actuels

➢ Suivi des nouveaux traitements ?

➢ Quid de marqueurs immunologiques pertinents

✓ Place des anti-HBc ?


MERCI DE VOTRE ATTENTION !

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