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Questions examens Travaux pratiques biochimie janvier 2008 BA2

1. Description Examen de travaux pratiques de biochimie janvier 2008

2. Remerciements Remerciements à [Modérateurs et étudiants MEDE2]

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Questions examens travaux pratiques de biochimie janvier 2008 MEDE2

Questions et ébauche de réponses

1. Vous avez, en TP de Biochimie, une solution qui sent la pomme, à pH 6,0. Parmis les composés suivants, acide acétoacétique, acide urique, acétone, créatinine, urée, lesquels pourrez vous trouver?Justifiez. --> Il faut simplement expliquer l'arbre décisionnel sans expliquer les réactions. 2. On digère un morceau d'ADN avec 2 enzymes de restrictions A et B. On fait migrer les fragments de digestions de l'enzyme A sur une piste d'électrophorèse, ceux de l'enzyme B sur une autre. a. Donner la taille totale de l'échantillon (ici : 5200 pb). b. Déterminer graphiquement la taille des fragments A1, A2, A3, B1 et B2 (ici respectivement : 3300, 1200, 700, 3300 et 1900). c. Identifier la position de ces fragments sur le morceau d'ADN ainsi que les loci de restriction des 2 enzymes. --> On nous donne la photo de l'électrophorèse de migration des fragments après digestion avec des marqueurs de taille sur une autre piste. On trouve, joint, un papier semi-log afin de faire la courbe étalon des poids moléculaires en fonction de la migration. -------------|--------|---- 3300 pb | 1200 pb | 700 pb (avec 1200 + 700 = 1900 --> fragment B2) 3. On sépare le lysozyme d'un blanc d'oeuf sur une chromatographie liquide. On calcule les concentrations en protéines et les activités enzymatiques des différentes fractions. Connaissant la concentration en protéines (= 1.5 mg/mL) et l'activité enzymatique (= 3.0 Unités/mL) de la solution de départ, existe-t-il des fractions plus pures que celle-ci ? Si oui, justifiez. --> On calcule les activités spécifiques (AS) de toutes les fractions et de la solution initiale. Puis on calule le facteur de purification (FP = AS(fraction)/AS(initiale)) pour toutes les fractions. Celles avec le FP>1 sont plus pures. 4. On fait une HPLC octadécylsilice en présence de TFA. Expliquez l'ordre de migration des 3 peptides suivants. --> On nous donne un graphique donnant l'ordre d'élution de différents peptides. HPLC octadécylsilice est une HPLC inverse, dont la phase fixe est apolaire. Le TFA cache les charges intrinsèques des acides aminés, on ne se préoccupe que de l'hydrophobicité. Les 3 peptides sont composés de 5, 6 et 8 acides aminés. Le plus petit migre plus vite (moins hydrophobe) et le plus grand est élué en dernier.