TP Licence Biochimie
IBFA LICENCE 3 Physiologie Intgre (Bi514) 2006-2007
Travaux pratiquesMANIPULATION A DETERMINATION DES ACTIVITES ENDO
ET EXO - GLUCANASES ETUDE DE LACTIVITE PECTINE METHYLESTERASE
DOSAGE DES PROTEINES MANIPULATION B DOSAGE DU GLUCOSE ETUDE DES
INVERTASES SOLUBLES DOSAGE DE L'ASCORBATE ET DU
DEHYDROASCORBATE
Hordeum vulgare L. Enseignante: Annette BERTRAND,
[email protected] Unit Mixte de Recherche INRA-UCBN EVA
Ecophysiologie Vgtale, Agronomie et nutrition N, C, S (Btiment
IRBA, Campus 1)
TP Licence 3 (Bi514)
Prambule Lobjectif de ces deux sances de TP est de comparer deux
types de tissus foliaires : des tissus jeunes en croissance, non
(ou peu) photosynthtiquement actifs et des tissus adultes matures,
photosynthtiquement trs actifs. Ces deux types de tissus sont
respectivement des puits (importateurs nets de carbone) et des
sources (exportateurs nets de carbone) pour le carbone. Cette
comparaison se fera sur une poace, lorge (Hordeum vulgare). Chez
les poaces, les feuilles sallongent presque exclusivement
longitudinalement, le mristme foliaire est situ la base de la
feuille. Les nouvelles feuilles apparaissent successivement
entoures par les feuilles adultes. Lorsquune feuille atteint sa
maturit, elle se dissocie en gaine foliaire (partie infrieure) et
en limbe foliaire (partie suprieure) spares par la ligule (Figure
1). Lors de ces manipulations, le limbe des feuilles adultes (tissu
mature, source de carbone) sera compar la base des feuilles en
croissance (puits pour le carbone). Chez ces deux types de tissus
seront compars : - Les activits endo- et exo--glucanases. Manip A -
Lactivit pectine methylestrase - Les teneurs en protines - Les
teneurs en glucose Manip B - Les activits invertasiques solubles
acides et alcalines. - Les teneurs en ascorbate et dehydroascorbate
Un compte-rendu par binme sera demand lissu des deux sances de TP (
rendre pour le 3 novembre, dernier dlai) qui comprendra : - une
introduction incluant les objectifs des manipulations effectues
(quelques lignes) - Les principes succincts des mthodes utilises
pour rpondre ces objectifs (2 pages maximum) - Les rsultats brut
obtenus (2 pages maximum)
-
Les calculs dtaills (4 pages maximum) Un tableau rcapitulatif de
lensemble des rsultats obtenus (voir modle page suivante) Une
discussion des diffrents rsultats obtenus (2 pages maximum) Une
conclusion (quelques lignes)
feuille en croissance limbe foliaire ligule feuille adulte
zone de croissance foliaire de la feuille en croissance
gaine foliaire
racines
Figure 1 : reprsentation schmatique dune talle de Poace.
2
TP Licence 3 (Bi514)
Limbes matures activits endo- et exo-glucanases. (mol.h-1.g
MF-1) Endo Exo
Base des feuilles en croissance
Activit pectine methylestrase (mol.h-1.g MF-1) Teneur en
protines (mg.g MF-1) Teneur en glucose (mg.g MF-1) Activits
invertasiques Neutre solubles Acide (mol.h-1.g MF-1) Teneur en
ascorbate (mg.g MF-1) Teneur en dehydroascorbate (mg.g MF-1)
Rapport Ascorbate/Dehydroascorbate Ce tableau est un modle pour la
rdaction du compte-rendu mais il peut galement vous servir cocher
progressivement les diffrentes analyses au fur et mesure que vous
les effectuez.
Manipulation A
Manipulation B
3
TP Licence 3 (Bi514)
MANIPULATION A
Figure 1 : Vue perspective d'une paroi dissque montrant les
diffrents niveaux
Etude des enzymes impliques dans la dgradation des hmicelluloses
paritales.A.I. DETERMINATION DES ACTIVITES ENDO ET EXO GLUCANASES.
A.II. DOSAGE DES PROTEINES A.III. ETUDE DE LA PECTINE
METHYLESTERASE
INTRODUCTIONLa microscopie photonique a permis de distinguer
plusieurs rgions dans la paroi. Vue perspective d'une paroi dissque
montrant les diffrents niveaux - La lamelle moyenne est la
formation la plus priphrique de la paroi, elle forme un ciment
constitu de polysaccharides acides, les pectines. Cette enveloppe
hydrophile polyanionique conditionne la cohsion intercellulaire. -
Les niveaux plus internes de parois sont renforcs par une charpente
cellulosique. Ces territoires paritaux apparaissent comme autant de
coques concentriques et individuelles pour chaque cellule, dans
lesquelles on distingue deux phases de composs polysaccharidiques :
une phase cristalline discontinue : la cellulose. Celleci apparat
chez les vgtaux suprieurs sous forme de microfibrilles lmentaires
de diamtre compris entre 30 et 40 et agences en faisceaux. On
distingue la paroi primaire; il s'agit d'un rseau hydrat (jusqu'
80% d'eau dont la matire sche renferme en majeure partie des
polysaccharides (80-90%) associe des protines (10-15%) et des ions
minraux notamment du calcium. Les hmicelluloses reprsentent un fort
pourcentage des polysaccharides et la charpente fibrillaire est
relativement lche. La paroi primaire est la seule enveloppe
fibrillaire des cellules jeunes et en croissance. La proprit
caractristique est donc la plasticit. Lorsque la croissance cesse,
des assises nouvelles (appeles S1, S2, S3 dans le cas des cellules
du bois du tilleul) sont labores: elles constituent la paroi
secondaire inextensible. Cette paroi est peu hydrate (20 % ou moins
d'eau). La charpente fibrillaire y est toujours compacte, la
cellulose y est hautement cristalline. Signalons cependant que
certaines parois secondaires ont une architecture fibrillaire non
constitue de cellulose, mais d'hmicellulose. Le cas est frquent
chez les algues et les champignons. Il se rencontre aussi chez les
plantes suprieures, en particulier dans les cellules de l'albumen
de graines qui stockent dans la paroi des polysaccharides de rserve
(hmicelluloses).
4
TP Licence 3 (Bi514) - LA CELLULOSE ( - 1, 4 glucane) :b-
La cellulose est un homoglucane homogne et linaire, elle est
constitue de -
- glucanes : homopolysaccharide sucres : glucose liaison : - 1,
3 et - 1, 4 degrs de polymrisation
