Un continuum du lycée à l’université Présentation des projets de recherche

Vendredi 24 mai 2013

2012>2020

Laboratoire ICOA

Doctorants : Laure GUILLOTIN - Geoffrey DUMONTEIL

Lycée : Voltaire

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1er COLLOQUE EDIFICE

24 – 05 – 2013

Anne Canovi ; Clément Deschamps ; Guillaume Pelissier ; Théo Verger; Laure Guillotin

Encadrants : Prof. Richard Daniellou; Dr. Pierre Lafite; Mme Alonso

GLYCOPEPS : SYNTHESE CHIMIO-ENZYMATIQUE DE GLYCOPROTEINES

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LES ENZYMES Catalyseurs de réactions (bio)chimiques, présents chez tous les organismes

vivants

Alimentaire Fromagerie, biscuiterie,

vinification,…

Cosmétique shampoing

Textile Délavage des jeans,…

Détergence Lessive, …

Biologie médicale

Aide au diagnostic

Chimie Oxydases, estérases,

glycosidases, …

Découverte et études d’ outils

biotechnologiques

OBJECTIF EDIFICE ANNEE 1 Etude d’une enzyme polyvalente : le lysozyme

Qu’est-ce que c’est ? Une protéine globulaire comportant 129 acides aminés

Quel est son rôle ? Détruire les parois bactériennes en cassant les liaisons entre les sucres présents à leur surface

Où peut-on en trouver ? Liquides biologiques (blanc d’œuf), mucus nasal, les larmes, …

Utilisations ? Industrie agroalimentaire (E1105), œnologie, industrie pharmaceutique, …

Expérience retenue : Extraire et purifier le lysozyme du blanc d’œuf de poule

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1ERE ETAPE : EXTRACTION DU LYSOZYME

Surnageant

Culot

2EME ETAPE : ANALYSE DU BLANC D’OEUF

Problématique : Quelle est la composition du blanc d’œuf de poule ?

Technique employée : Gel d’électrophorèse SDS-PAGE

PRINCIPE

- +

Sens de migration -

protéine

protéine dénaturée

- - - - - -

Séparation des protéines d’un mélange en fonction de leur taille sous l’action d’un champ électrique

PRÉPARATION

MIGRATION

+

-

REVELATION DU GEL

Observations : Le blanc d’œuf est composé de 3 protéines majoritaires dont le lysozyme

Conclusion : Le lysozyme n’est pas pur après extraction, une étape de purification est nécessaire

Mélange référence contenant des

protéines de tailles connues

Lysozyme ( 14700 Da)

118 kDa

34 kDa

26 kDa

90 kDa

50 kDa

19 kDa

3EME ETAPE : PURIFICATION DU LYSOZYME

Matériel utilisé : Résine échangeuse de cations

Cations échangeables

-

- -

- +

+

+ +

-

- -

-

L+

L+

L+ P-

P-

P-

+ P-

L+

L+ P-

-

- -

-

L+ L+

Cl-

Na+

Na+

Na+

Na+

Cl-

Cl- Cl-

Na+

PRINCIPE

Dans le blanc d’œuf : seul le lysozyme reste chargé à pH basique (pH =10) + L+

L+ L+

L+ P-

P-

P- P- P-

P-

P- Solution de

blanc d’œuf de pH =10

Gel d’électrophorèse SDS-PAGE des fractions recueillies :

Observation : seule la fraction E2 contient du lysozyme pur Dosage de la fraction E2 (5ml) : concentration protéines = 0,50 mg/ml

lysozyme

Conclusion : 2,5 mg de lysozyme pur ont pu être obtenus après purification sur résine échangeuse de cations

CONCLUSION

Découverte et prise en main de diverses techniques de laboratoire

2,5 mg de lysozyme ont été obtenus après extraction et purification

Perspectives : Tests d’activité et cristallisation du lysozyme

Bilan global : 1ère expérience très positive pour le laboratoire et les lycéens

Micrococcus lysodeikticus Cristaux de lysozyme

Merci de votre attention

Théo Anne

Guillaume

Clément

Laboratoire ICOA

Doctorants : Laure GUILLOTIN - Geoffrey DUMONTEIL

Lycée : Voltaire

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Synthèse et modifications de composés naturels

extraits de plantes

Le sujet de thèse

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Sirop d’érable

Molécule d’intérêt

Diabète type II

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Le sujet de thèse

Molécule d’intérêt

Modifications de structure

Tests biologiques

Activité biologique

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Projet EDIFICE

Extraction Modification Vanilline

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Projet EDIFICE

Projet EDIFICE

Extraction de l’eugénol par hydrodistillation.

Broyage du clou de girofle pour augmenter la surface

de contact entre l’eau et celui-ci .

Récupération du mélange contenant l’huile essentielle et l’eau.

Extraction liquide - liquide.

Eugénol.

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Projet EDIFICE

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Isoeugénol Modifications de structure

Vanilline

Projet EDIFICE

Techniques d’analyses utilisées :

Chromatographie Purification de composés.

InfraRouge diffraction des rayons IR par la molécule

RMN informations structurales (~IRM pour molécule).

MS Mesure de la masse de la molécule.

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Projet EDIFICE

Conclusion: Découvrir le milieu de la recherche

Apprentissage de nouvelles bases et de nouvelles techniques d’analyse

Conforter l’orientation des études futures

Envie de poursuivre…

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Merci pour votre attention