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INTROLa chaine HPLC permet de séparer et quantifier
des composés en fonction de leurs caractéristiques physico-chimiques en présence d’une phase mobile et sur une colonne chromatographique spécifique.
Qualification = démontrer que le matériel fonctionne correctement et donne réellement les résultats attendus.
On s’intéressera à l’injecteur et au détecteur.
Effet mémoireOn va ici vérifier qu’il y a une absence de
contamination d’une injection à l’autre.On réalise 2 blancs, un en début et l’autre en
fin, d’une batterie d’injections de méthylparaben.
Le blanc = phase mobile (méthanol/eau)On a interprété les résultats en comparant
l’air du pic de MPB de la dernière injection avec l’air du pic sur le 2e blanc au niveau du tps de rétention
observé pour le MPB.
∆/A6*100 ≤ 0,1%
Effet Mémoire :Résultats et Interprétations
Injecteurs CV % Conformité selon
spécifications avec
CV <0,1 %
Numéro 1 0,1 OUI
Numéro 2 0,3 NON
Numéro 3 2,64 NON
Numéro 4 0,05 OUI
Numéro 5 0,1 OUI
Numéro 6 0,68 NON
Répétabilité de l’injectionOn va vérifier que dans des conditions
opératoires identiques, l’injecteur fournit des volumes d’injections présentant une faible dispersion sur plusieurs essais.
On réalise 6 fois une injection d’une même solution de methylparaben à une concentration donnée.
On va interprété les résultats en étudiant les CV en se basant sur l’aire et la hauteur du pic du MPB.
CV ≤ 1%
Répétabilité :Résultats et Interprétations
Injecteurs CV % ( Aire ) CV % ( Hauteur) Conformité avec spécifications CV < 1%
Numéro 1 9,14 3,17 NON
Numéro 2 7,9 6,3 NON
Numéro 3 11,47 11,31 NON
Numéro 4 3,90 2,11 NON
Numéro 5 6,40 6,69 NON
Numéro 6 10,79 9,99 NON
Qualification du détecteur
1) Bruit de fond et dérive
2) Linéarité des absorbances
3) Exactitude de la longueur d’onde
4) Répétabilité de la longueur d’onde
Pour la qualification du détecteur, on a fixé une longueur d’onde monochromatique. (λ= 257nm)
Lors du passage de l’échantillon sur le détecteur, une partie du rayonnement monochromatique sera absorbée et l’autre transmise.
A = -log T = -log (I/Io)• Les résultats sont donnés sous la forme
A=f(t), avec t, temps de rétention du composé.
Linéarité des absorbances
L’objectif est de montrer que le détecteur est capable de fournir des résultats directement proportionnels à la quantité de substance injectée.
On a injecté 6 solutions de MPB de concentration croissante et cela 2 fois.
On va interpréter les résultats en traçant la courbe Aire = f(conc.) et vérifier les paramètres de régression.
R²≥ 0,998ordonnée à l’origine comparé à 0 :
Linéarité: Résultats et InterprétationsDétecteur Coefficient
d’ajustement linéaire
R²
Ordonnée à l’origine
Test student sur
l’ordonnée à
l’origine (OO)
Conformité
avec spécification
R²> 0,998
Student pour OO ,
Tthé à ddl = 10 <
2,23.
Numéro 1 0,978 - 63,00 -1,46 NON
Numéro 2 0,995 - 32,3 ? NON
Numéro 3 0,9908 - 5,6751 - 0,31 NON
Numéro 4 0,9998 -0,71723 -0,16 OUI
Numéro 5 0,9951 -6,6245 -0,32 NON
Numéro 6 0,9871 -26,39 -1,30 NON
Bruit de fond et dériveL’objectif est de mesurer le bruit de fond et la dérive
de la ligne de base, nécessaire à l’analyse de nos composés.
Le bruit de fond sert aux calculs de limites de détection et de quantification.
La dérive sert à l’exploitation des pics.On a enregistré le signal sur 30 min en passant la
phase mobile sans injecter de composé.
Court terme: 1 à 2 min BF ≤ 5*spécifications fournisseur
Long terme: 5 à 10 minDérive: sur 15 min D ≤ 5*spécifications
fournisseur
Bruit de fond:Résultats et Interprétations
Détecteurs Bruit de fond à court
terme (uUA)
Bruit de fond à long terme(uUA)
5*spécifications (uUA)
Conforme si
<5*spécifications
Numéro 1 50 30 50 OUI
Numéro 2 41 59 50 NON
Numéro 3 6,10 30,2 50 OUI
Numéro 4 15 27 50 OUI
Numéro 5 24,1 49,0 100 OUI
Numéro 6 26 39 100 OUI
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