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Test biochimique 3 Test de décarboxylation

Mme Hedia BEN ABDALLAH

BTS

• La décarboxylase est une enzyme spécifique à un substrat qui libére le groupement carboxyl (COOH) des acides aminés, en formant des produits alcalins amines et le dioxyde de carbone.

• Le pH alcalin du milieu est détecté par changement de couleur des indicateurs colorés pourpre de bromocrésol .

• A pH alcalin la couleur du milieu devient violet et jaune à pH acide.

• Chaque enzyme décarboxylase est spécifique d'un acide aminé.

• La lysine, l'ornithine et l'arginine sont les trois acides aminés régulièrement testés dans l'identification des Enterobacteriaceae.

• Les produits de décarboxylation des 3 acides aminés sont: – Lysine-Cadaverine

– Ornithine-Putrescine

– Arginine-Citrulline

• Ces produits alcalinisent le bouillon qui devient pourpre.

• L'arginine est hydrolysée en ornithine (l'arginine est d'abord transformée en citrulline par la dihydrolase, en enlevant le groupement NH2.

• La citrulline est ensuite transformée en ornithine, qui subit ensuite une décarboxylation conduisant à la formation de la putrescine.

Méthode

• Ensemencer le milieu

• Couvrir le milieu d’une couche de paraffine

• Incuber

• lire tous les jours pendant quatre jours

Lecture

• Positif: acidification due à la fermentation du glucose puis réalcalinisation due à la production d’amine par décarboxylation de l’acide aminé ( la couleur du milieu vire au violet)

souche DC + (LDC+ ou ODC+ ou ADH+)

• Négatif: acidification due à la fermentation du glucosemais pas de réalcalinisation due à la production d’amine par décarboxylation de l’acide aminé ( la couleur du milieu vire au jaune)

souche DC - (LDC- ou ODC- ou ADH-)

Lecture

A : décarboxylase (-) B: Décarboxylase (+)

L’intérêt du Test de décarboxylase

• Lysine Décarboxylase Test (LDC): permet d’ identifier les Salmonella(+ ve) et Shigellae (-ve). • Les Bactéries Lysine Decarboxylase (LDC) Positive

sont: – Escherichia coli – Salmonella typhi et les espèces salmonellae ( à

l’exception de Salmonella paratyphi A). – Klebsiella pneumoniae – Serratia marcescens – Vibrio cholerae – Vibrio Parahemolyticus