Catherine Roche-LestienneClaude Preudhomme

Recherche de mutations: pourquoi, comment, pour qui,

quand, par qui?

Pourquoi?Elles peuvent être un des mécanismes de la résistance au traitement par Glivec®

20

15

5WT

10

M24

4V

G25

0EQ

252H

Y25

3F/H

E25

5K/V

F311

L

T31

5I

F317

L

M35

1T

E35

5GF3

59V

V37

9IL

387M

H39

6P/R

BiochimiqueCellulaire

Boucle P Fixation IM Boucle A

Leurs effets varient selon leur nature et leur localisation

Suivi

2 mois

6 mois

11 mois

13 mois

Certaines peuvent être sélectionnées sous traitement

Barthe C et coll., Br J Haematol. 2002

L’émergence des mutations est corrélée avec la phase de la maladie

S Branford et coll (ASH 2005):probabilité de détection de mutations sous IM:

26% si traitement en seconde intention7% si traitement en première intention

M Deininger et coll. (ASH 2004):corrélation entre la détection des mutations et la phase de la maladie p=0,0008

Marqueur de progressionNotion de risque

Soverini S et coll;, J Clin Oncol. 2005

Certaines mutations semblent être associées à un moins bon pronostique

Soverini S et coll., J Clin Oncol. 2005

étude multicentrique Fi-LMC 89 patients résistants et mutés:

T315I n=8

P-loopn=11

Autres n=37

OS, p=0.050

20

40

60

80

100

0 10 20 30 40

T315I n=6

P-loop n=9

Autres n=28

PFS, p=0.0227

0 10 20 30 40

Mois depuis la détection des mutations

Comment?Techniques Sensibilité Spécificité Biais Accessibilité

PCR + Séquence directe

25% ++ non +++

Séquence après clonage

10% +++ non ++

DG-DGGE 5% ++ non ++

D-HPLC 10% ++ non ++

PCR+PNA

« clamping »

0.2% ++ oui +

ASO-PCR 0.01% +++ oui +

Quand, pour qui ?Critères de résistance à l’IM (STIC)

Patients réfractaires

Patients qui échappent au traitement

Peut-on définir des facteurs de risques de développer des mutations?

Brandford S et coll., ASH. 2005:

Etude retrospective sur 222 patients en phase chronique de la LMC

Surveillance de l’émergence de mutations indépendamment de la réponse au Glivec®

• Haut risque (70%): Blastose > 2%; diagnostique > 2 ans avant J1 IM

recherche de mutations tous les 3 mois après J1 IM

• Risque intérmédiaire (22%):Blastose ≤ 2%; diagnostique > 2 ans avant J1 IM

• Faible risque (5,6%): Blastose ≤ 2%; diagnostique < 2 ans avant J1 IM

recherche de mutations tous les 3 mois après J1 IMsi absence de réponse cytogénétique majeure

si augmentation en RQ-PCR

NB: Intensification de la recherche de mutations dans la population à haut risque?

Doit-on détecter de manière précoce les mutations?

Willis S et coll., Blood 2005:

66 patients traités par Glivec®Recherche de mutations par ASO-PCR et séquençage

La détection précoce des mutations est corrélée avec la réponse cytogénétique

T315I Q252H

Q252H+

F359V

La détection précoce des mutation n’est pas corrélée avec:

-la réponse au Glivec®- la survie globale -la survie sans progression

STIC 2005Technique de biologie moléculaire permettant d’évaluer la sensibilitéaux inhibiteurs de tyrosine kinaseCible : - mutations BCR-ABL (LMC+LAL)

- CKit (CBF et mastocytoses)- PDGFRα (HES)- PDGFRβ (aCML)- NUP-ABL (LAL T)

BCR-ABL- Permettre que tout patient nécessitant une recherche de mutation puisse l’avoir- Comparer différentes approches méthodologiques avec Gold-Standart : séquençage direct BCR-ABL- Recueillir l’évolution des patients

* déclaration base registre FI LMC* suivi (fiche) : ARC à 2/3 temps

Qui étudier ?

Critères de résistance à imatinib (STIC)

Résistance Primaire:Absence de rémission hématologique à 3 mois de TT

Absence de réponse cytogénétique à 6 mois de TTAbsence de réponse cytogénétique complète à 12 mois de TT

Ratio normalisé BCR-ABL/ABL≥1% au moins 12 mois après traitement par ITK

Résistance secondaire:

Perte de la rémission hématologiqueProgression de la LMC (phase accélérée, crise blastique)

Perte de la réponse cytogénétique complèteAugmentation du % de mitoses Ph+Apparition d’anomalie(s) clonales additionnelles dans des mitoses Ph+

Augmentation du taux de transcrit BCR-ABL≥0.5 log confirmée sur 2 examens successifs à moins d’1 mois d’intervalle

Par qui ?• LILLE (NO)

• ST LOUIS/CRETEIL (AP-HP)

• POITIERS (GO)

• BORDEAUX (SO)

• LYON (SE)

• NIMES (PACA)

0,000001

0,00001

0,0001

0,001

0,01

0,1

1

10

Sept.98 Sept.99 Sept.00 Sept.01 Sept.02 Sept.03 Sept.04 Sept.05

quan

tité

trans

critm

bcr/

Tom

Patiente F.B.

Lala

94

allo

gref

fe

DLI

DLI

DLI

+G

livec

G

LIVE

C 6

00 M

G

AU 0

3/05

/04

DLI

+Gliv

ec

Das

atin

ib

05/07/04 : Y253H

25/11/04 : mutation non retrouvée

Patient C.A.

0,000001

0,00001

0,0001

0,001

0,01

0,1

1

10

100

Août 04 Mai 05 Nov. 05

quan

tité

de tr

ansc

rit M

bcr/K

562

Nov. 04 Fév. 05 Août 05

Hyd

rea

Das

atin

ib

Indu

ctio

n ha

m Allo

gref

fe

09/08/04 : pas de mutation détectée

18/04/05 : pas de mutation détectée

06/09/05 : F317L

25/11/05 : pas de mutation détectée

Gliv

ec

Dex

+gliv

ec60

0 +z

omet

a

Gliv

ec+A

rac

Hom

oHT

Gliv

ec+I

NF

Gliv

ec+I

NF

0,000001

0,00001

0,0001

0,001

0,01

0,1

1

10

100

Mai 02 Mai 03 Mai 04 Mai 05

quan

tité

de tr

ansc

rit M

bcr/

K56

2

Gliv

ec

INF

23/08/02 : T315I1/12/04 : T315I + Y253H

12/10/05 :

Y253H

uniquement

Gliv

ec+I

NF

M7M0 Control315IWT

B: RT-PCR and RFLPC C C CT T T T

ControlM0 M7Mi

A: ASO PCR

Patient C.J.L.

0,000001

0,00001

0,0001

0,001

0,01

0,1

1

10

100

Juil.03

Oct. 03

Janv.04

Avril04

Juil.04

Sept.04

Janv.05

Avril05

Juil.05

Oct.05

Janv.06

quan

tité

de tr

ansc

rits

Mbc

r/K56

2Patient Q.J.

Das

atin

ib

Allo

gref

fe

Das

atin

ib

Gliv

ec

Gliv

ec60

0 m

g

20/01/05 : L324Q

14 et 15/10/03: pas de mutation détectée

Gliv

ec

CONCLUSIONRecherche mutation : étape importante dans bilan résistant

MAISAutres causes : - cytogénétique

- pharmaco-cinétique- efflux…

• Nécessité langage commun : critère de résistance et techniques

• Ce qui est clair : T315I ne répond pas aux nouveaux inhibiteurs

Tous les autres patients mutés ne répondent pas obligatoirement en particulier sur le plan cytogénétique et moléculaire

• Nécessité d’une prise en charge multidisciplinaire

Remerciements

♦ Laboratoire d’hématologie et moléculaireCHRU

♦ Service clinique NPC♦ Service cytogénétique NPC♦ Groupe Phi LMC♦ Participants protocole SPIRIT