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Les Entérobactéries (1ère partie) :

Identification bactérienne jusqu’au genre et /ou

à l’espèce à l’aide d’une macrogalerie

Objectifs : * Mettre en évidence les caractères morphologiques, culturaux et biochimiques

pour orienter l’étude vers la famille des entérobactéries.

* Réaliser l’ensemencement d’une galerie traditionnelle d’identification en tubes

(= macrogalerie)

* A l’aide des tableaux dichotomiques, identifier le genre voire l’espèce de la

bactérie donnée.

1er

jour

Manipulation : Par personne, vous disposez d’une souche pure présentée sur GNi :

Souche numérotée

présentée sur gélose nutritive

inclinée

Réaliser une

suspension bactérienne

Etude

microscopique :

Réaliser une coloration de

Gram

Recherche de l’

enzyme respiratoire :

Réaliser le test d’orientationrapide en fonction du

Gram : oxydase ou catalase

Ensemencements

des milieux de la

galerie de famille :

VF

Hugh et Leifsonglucosés

Bouillon nitraté

Gélose Nutritive

Ordinaire

Ensemencements des

milieux de la galerie

de genre et

d’espèce :

Kligler-Hajna

Clarks et Lubs

Urée Indole

Mannitol-Mobilité

Citrate de Simmons

Isoler sur milieu

sélectif des bacilles

Gram - :

Milieu de

Drigalski

Incuber boîtes et tubes 24 h à 37°C

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Compte-rendu :

Coloration de Gram Test respiratoire :

Observations Conclusion Observations Conclusion

Orientation vers une

famille, un ou des

genres bactériens

Souche n°

2ème

jour

Manipulation :

Lecture des différents milieux ensemencés : boîtes et tubes.

Réaliser le test complémentaire nécessaire à la mise en évidence de la nitrate réductase.

Réaliser le test ONPG à partir du milieu Kligler pour les bactéries lactose - uniquement.

Réaliser le test du RM et du VP à partir du milieu Clark et Lubs.

Réaliser les tests complémentaires nécessaires à la mise en évidence de la tryptophane

désaminase et de la tryptophanase à partir du milieu Urée-Indole.

Compte-rendu :

1. Ensemencements

Milieux Observations Interprétations Conclusion

VF

Bouillon nitraté

Hugh et Leifson glucosé

Kligler

Clark et Lubs

Citrate de Simmons

Mannitol- Mobilité

Urée-Indole

Milieu avec le film photographique

2. Isolements

Observations : aspect des colonies Conclusion

Gélose Nutritive Ordinaire

Gélose Drigalski

3. Conclusion

Proposer une identification de cette souche numérotée et justifier votre démarchelogique d’analyse :

Justification de l’appartenance à la famille des Entérobactéries.

Justification de l’appartenance au genre bactérien.

Eventuellement détermination de l’espèce bactérienne.