Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et

HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza

humains et animaux.

GRAND ORAL E2M2 – 29-30 JUIN 2009UCBL

VIRPATHCNRS FRE 3011

DR MANUEL ROSA-CALATRAVAPR BRUNO LINA

JEAN-CHRISTOPHE LE BAYON

ED 341 – E2M2

2

LES PARAINFLUENZA hPIV2 ET NDV

Famille : Paramyxoviridae Genre : Rubulavirus

Avulavirus

Terr

ier e

t al.

(200

8)

•Maladies respiratoires•Pas de vaccins/antiviraux•Virus enveloppé Ø 200nm •ARN négatif, simple brin

L’entrée dans la cellule est possible grâce aux GP F et HN

LA FUSION MEMBRANAIRE

F HN

Viral envelope

Cellular membrane

F1

HN

S

S

F2

C N

NC

Fusion peptide

Cytoplasmic tail

Extracellular domain

Transmembrane region

HR1

HR2

F

Taki

mot

o et

al.

(200

2)

3

4

OBJECTIFS

•Caractérisation de mutants de F de hPIV2•Mutation observée sur des souches variantes de hPIV-2 (T96A) ou transposées d’un variant de PIV-5•Rôle de ces mutations dans la fusion et dans l’interaction entre F et HN ?

Méthodes• Analyse bioinformatique de F hPIV2• Clonage des gènes F et HN et mutagénèse• Expression transitoire (cellules A549)• Cytométrie en flux et test de fusion intercellulaire

5

T96A: favorise l’activation par HN

I24P: F “indépendante” de HN

K133E: interaction entre F et HN et augmentation de la fusion

I294A: favorise l’activation par HN

TRAVAIL ABORDÉ EN MASTERT

ête

Tig

e

I24PI294A

T96A

K133E

2 parties distinctes de la tête de F semblent être impliquées dans l’interaction F-HN

PROJET DOCTORAL

6

mécanisme d’entrée

→ Design d’antiviraux

Caractérisation fonctionnelle des

GP mutantes

Études des interactions

F-HN

Observations structurelles

sur les GP

Encadrants :Pr Bruno Lina (accueil)Dr Manuel Rosa-Calatrava (tuteur)Gaëlle Cartet (technicienne)

7

CARACTÉRISATION DE LA FUSIONMéthodes• Expression de glycoprotéines mutantes (WB, FACS)• Capacité fusogène des GP (Test de fusion

intercellulaire luciférase)• Comportement des mutants dans un contexte

pseudo-viral ou viral (VLP et génétique inverse, coopération avec Dr Dimitri Lavillette – INSERM U758-ENSL)• Meilleure mesure de la fusion membranaire (RT lipid-

mix assay)

Objectif• Détermination des résidus impliqués dans le rôle

fusogène de F

8

ÉTUDE DES INTERACTIONS F/HN

Méthodes• Délétions des GP• Interactions entre F et HN (Cross-Linking, CoIP, avec

Dr JC Cortay)

Objectif• Détermination les régions, sur F et sur HN,

impliquées dans l’interaction F et HN• Régions permettant l’activation de F• Région permettant l’inhibition de F

9

OBSERVATIONS STRUCTURELLESMéthodes• Observation des VLP et virus (MET, cryoMET,

coopération avec Dr Daniel Thomas – Université Rennes I)• Observation in silico des mutations sur la structure

(coopération avec Pr Gary Taylor et/ou Dr Ruppert Russel – Université de St Andrews, UK)

Objectif• Détermination les régions, sur F et sur HN,

impliquées dans l’interaction F et HN• Régions permettant l’activation de F• Région permettant l’inhibition de F

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MON PROFIL ET MON AVENIR

Atouts• Compétences scientifiques adaptées• Bonne connaissance du sujet• Envie de communiquer sur mes résultats• Envie de transmettre mon expérience

Pendant la thèse• Exercer une activité de monitorat• Doctorant conseil• Me constituer un réseau professionnel

Après la thèse• Post-doctorat ??• Activité de consulting ??