STAGE DE RECHERCHE “tous chercheurs” campus de Luminy – Avril 2010

Recherche de protocoles expérimentaux – groupe 1

Problème - quels sont les causes du diabète : comment vérifier nos hypothèses sur les causes du diabète en utilisant des modèles animaux ?

Hypothèses :le pancréas produit l'insuline qui régule la glycémie. chez les personnes diabétiques le pancréas ne produit pas ou mal cette hormone.

AntoineSébastien SkanderPaulineFayssalChloé

introduction

Diabète type 1Caractérisé par :-Une apparition brutale, une glycémie supérieure a 126mg/ dl à jeun. (chez l’homme)

-La destruction des cellules ß des ilots de Langerhans par le système immunitaire.

Pancréas

-ablation du pancréas d’un chien augmentation de la glycémie

Hypothèses - Souris diabétique si plus de cellules ß dans le pancréas.

-Injection d’un produit capable de détruire ces cellules : l’alloxan

Problèmes

-Comment caractériser cette souris pour étudier le diabète?

Rôle de l’alloxan sur les cellules pancréatiques β-mise en culture de cellules β pancréatique-mise en culture de lymphocytes B .

2µL

5µL

10µL

20µL

H2O H2O2 Alloxan H2O H2O2 Alloxan

- injection MTT qui cristallise quand les cellules sont vivantes. (jaune/ violet via enzyme)

Lymphocytes B cellules β pancréatiques

évidence sachant qu'on ne peut pas la voir au microscope ?

Cellules β pancréatiques lymphocytes B

Histogramme de l’absorbance à 620 nanomètres

absorbance

Tests sur modèles animaux

Création de souris diabétique par injection de solution d’Alloxan 100 µL à25 mg/L

4h après : Observation du comportement des souris

Calmes, sereines Vives, très éveillées

Mesure poids à jeun

Saines : 27g, 26g

Diabétiques : 26g, 26g

Les souris ont toutes le même poids

Mesure glycosurie à jeun

Test négatif pour les 4 souris : pas de glucose dans les urines

Mesure glycémie des sourisA jeun souris diabétiques : 304 mg/dl

A jeun souris saines : 155 mg/dl

Evolution de la glycémie après injection de glucose:

mg/dl

Observation au microscope de cellule de pancréas de souris saine et diabétique sur lame industrielle.

Pancréas diabétique Pas ilot Langerhans

Pancréas non diabétiquePrésence ilots Langerhans

Observation de pancréas de souris diabétique et non diabétique sur lame réalisée lors du stage

Pancréas non diabétiques avec ilot Langerhans

Pancréas diabétique avec ilots Langerhans pas totalement détruits par endroits

ConclusionModèle animal valable car

- disparition des cellules β dans le pancréas grâce à l’alloxan

-souris diabétique avec forte glycémie

- souris saine avec régulation normale de la glycémie

Interprétation- après une glycémie forcée la régulation de la glycémie est

gérée par les ilots de Langerhans situés dans le pancréas chez les souris saines. Perspectives

- savoir comment en cas d’hypoglycémie le glucose est libéré