UNIVERSITE KASDI MERBAH OUARGLA...Co-promoteur: Mr. DADA MOUSSA K. Biochimiste. Hôpital Mohamed Boudiaf. Examinateur : Melle. MIMOUNI YAMINA Ass. . Université. Ouargla Année Universitaire

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

MINISTERE DE L'ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE

LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

UNIVERSITE KASDI MERBAH OUARGLA

FACULTE DES SCIENCES ET DES SCIENCES DE L’INGENIEUR DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

MEMOIRE DE FIN D’ETUDE

En vue de l'obtention du Diplôme d'étude supérieure en biologie Option Biochimie THEME

Présenté par

KECHIDA Hadjer

MECHARA Nadjiba Devant le jury : Président : Mme. SIBOUKEUR. O. M. A. C. C. Université. Ouargla Promoteur : Mr. OUELD ELHADJ .M.D M.C. Université. Ouargla Co-promoteur: Mr. DADA MOUSSA K. Biochimiste. Hôpital Mohamed Boudiaf. Examinateur : Melle. MIMOUNI YAMINA Ass. . Université. Ouargla

Année Universitaire 2005/2006

Contribution à l’étude de la relation entre les transaminases et l’hépatite

dans la cuvette de Ouargla (cas de l’hépatite B)

Je dédie ce modeste travail a mes parents

Souad et Belgacem Les deux personnes, les plus chers au monde que

je ne remercie jamais assez leurs aides, encouragement Soutien, sacrifies et leurs patience pendant mes années

d’études. Que dieu leurs accorde une longue vie

A ma très chère sœur Sara mes très chères frères

Issam et Hakim A toute ma grande famille

KECHIDA Et surtout a ma très chère Khaltou Ouidad et son mari e ainsi que ses fils et ses belles filles Redah ; Ryad ; Yacin et Imem sans oublier Mey ;

Khaoula et Souhila ُُEt a tous mes amis

Zohar, Dadi, Sabrina, Eva, Khadîdja, Linda,Fatima Jiji, Sidou, Fawaz, Brahim, Aidou

Aux étudiants de la 4ème promotion Spécialité biochimie

Je dédie ce modeste travail

Mes parents

SADOK RACHIDA

Les deux personnes, les plus chers on monde que je ne remercier jamais assez leurs aides, encouragement,

Soutien, sacrifies et leurs patience pendant mes années d’études. Que dieu leurs accorde une longue vie.

A mes très chères sœurs FATIMA ,MALIKA,BASMA,SOUMIA,SAFA.

A mes très chères frères HADJ ALI, SAïD, NOUR EDINE

A toute ma grande famille

" MECHARA "

A tous mes amis HADJER – ZOHRA et DADI-

Fatiha, Nadia, Djahida, Fatima, Fouzia, Amel, Kawthar, Djamila, Fadila, Fatima, Abla, Nadir, Ammar, Brahim,

Walid, Sihem, Hayet, Beya, Badra, Radjah, Karim, Razika, Wassila…..

Aux étudiants de la 5 ème Promotion de biochimie

Résumé

Une hépatite correspond à une inflammation du parenchyme hépatique survenant en

réponse à une agression et pouvant conduire à une nécrose hépatocytaire. Le terme d'hépatite

virale est réservé aux hépatites provoquées par des virus à hépatotropisme dominant.

L’atteinte hépatique est la conséquence de la maladie elle-même et du traitement qu’elle

nécessite; elle peut être modérée et transitoire, ou sévère voire fatale. Les transaminases sont

des enzymes présentes dans le foie, mais également dans le muscle (notamment le myocarde)

et le rein. Elles sont libérées dans le flux sanguin en cas de lyse cellulaire, le dosage de leur

concentration sérique est l’un des examens pratiqués pour l’exploration des lésions de

l’hépatocyte. L’intérêt de doser ces enzymes, pour diagnostiquer une atteinte hépatique et de

suivre son évolution peut aider à limiter les différentes formes d’hépatites dans la localité de

Ouargla. Cette présente étude met en relief l’importance effective de doser les transaminases

sériques qui renseigne le clinicien sur l’état du foie, sur l’évolution de la pathologie et

l’oriente dans la recherche étiologique pour le praticien de l’hôpital MOHAMED BOUDIAF.

Summary

Hepatitis corresponds to an ignition of the hepatic parenchyma occurring in response to

an aggression and being able to lead to one hépatocytaire necroses. The term of viral hepatitis

is reserved for hepatitises caused by viruses with hepatotropism dominating. The hepatic

attack is the consequence of the disease itself and the treatment which it requires; it can be

moderated and transitory, or severe even fatal. Transaminases are enzymes present in the

liver, but also in the muscle (in particular the myocardium) and the kidney. They are released

in blood flow in the event of cellular lysis, the proportioning of their serum concentration is

one of the examinations practised for the exploration of the lesions of the hépatocyte. The

interest to proportion these enzymes, to diagnose a hepatic attack and to follow its evolution

can help to limit the various forms of hepatitises in the locality of Ouargla. This present study

highlights the effective importance to proportion serum transaminases which informs the

clinician about the state of the liver, about the evolution of pathology and directs it in

etiologic research for the expert of Hospital MOHAMED BOUDIAF.

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SOMMAIRE

Introduction ……………………………………………………….............. 1

Chapitre I- Hépatites virales

1.1. - Historique de l’hépatite.............................................................................................. 3

1.2. - Particularités cliniques et épidiomiologiques (exemple de l’hépatites B)…............. 6

1.2.1.- Pathogénie HBV............................................................................................... 7

1.2.1.1.- Virus et structure virale.......................................................................... 7

1.2.1.2.- Type de virus........................................................................................... 8

1.2.3. –Signe clinique …………………………………………………………......... 9

1.2.4. - Culture et pouvoir………………………………………………………… 10

1.3.- Constitution d’antigène……………………………………………………………. 10

1.4.- Cycle de multiplication ……………………………………………………………. 10

1.5.- Marqueurs …………………………………………………………………………. 11

1.5.1.- Hépatite aiguë …………...………………………………………………… 11

1.5.2.- Porteurs sains ................................................................................................ 11

1.5.3.- Hépatite fulminante ...................................................................................... 12

1.5.4 Hépatite chronique ......................................................................................... 12

1.5.6. - Convalescents, guéris ou vaccinés ........................................................................ 12

1.5.7. – Marqueurs de la réplication virale......................................................................... 12

1.6.- Diagnostic ................................................................................................................. 13

1.6.1. - Hépatite aiguë.............................................................................................. 13

1.6.2. - Hépatite chronique...................................................................................... 13

1.7. – Traitement................................................................................................................ 13

1.7.1– Prévention..................................................................................................... 14

1.7.2. – Vaccination................................................................................................. 14

Chapitre II- Transaminases

2.1. - Classification des enzymes..................................................................................... 17

2.2. –Transamination........................................................................................................ 17

2.2.1. –Découverte..................................................................................................... 17

2.2.2. – Définition...................................................................................................... 18

2.3.- Mécanisme d'action de transaminase....................................................................... 19

2.4. - Intérés semiologique des transaminases (BENHAMON, 1981)............................. 23

2.4.1. - Atteints hépatiques....................................................................................... 23

2.4.2. -Obstructions biliaires..................................................................................... 24

2.5. - Différent cas d'apparition de la transaminase dans le sang..................................... 24

2.6.- Méthode de dosage des transaminases..................................................................... 26

2.6.1.- Mesure de l’activité des enzymes................................................................. 26

2.6.1.1.- Détermination directe .............................................................................. 26

2.6.1.2.- Cas des réactions couplées...................................................................... 27

2.6.2. Technique....................................................................................................... 27

2.6.2.1.- Méthodes de mesure de la vitesse moyenne dite méthode "2 points".... 27

2.6.2.2.- Méthodes de mesure de la vitesse instantanée dite méthode cinétique. 27

2.6.3.- Standardisation des méthodes, les méthodes optimisées................................ 28

2.6.4.- Quelques schémas des méthodes recommandées de détermination de

l’activité transaminasique (AGNERAY et al., 1990�……………………..... 28

Chapitre III – Matériels et méthodes

3.1.- Présentation de la zone d'étude ............................................................................... 31

3.2.- Choix du site et enquête........................................................................................... 31

3.3.- Matériels.................................................................................................................. 31

3.3.1.- Matériel biologique........................................................................................ 31

3.3.2.- Appareillage ................................................................................................. 32

3.2.3.- Réactifs .......................................................................................................... 32

3.4.- Mode opératoire........................................................................................................ 33

3.4.1.-Prélèvement..................................................................................................... 33

3.4.2.- Enregistrement................................................................................................ 33

3.4.3.- Centrifugation................................................................................................. 33

3.4.4.- Dosage ........................................................................................................... 33

Chapitre IV- Résultats et discussion

4.1.- Résultats..................................................................................................................... 39

4.2.- Discussion.................................................................................................................. 45

Conclusion.......................................................................................................................... 48

Références bibliographiques............................................................................................ 50

Annexes.............................................................................................................................. 53

LISTE DES ABREVIATIONS

Abbreviations Signification Abs/min Absorbance/minute. ALAT alanine aminotransférase. ASAT aspartate aminotransférase. C.K créatinine kinase. C.V.O crise vaso-occlusive. D.G.K.C société Allemande de biologie clinique. E-PLP enzyme-pyridoxal-5’-phosphate. E-PMP enzyme-pyridoxamine-5’-phosphate.

G.G.T gamma glutamate aminotransférase. G.L.D glutamate déshydrogénase. HBV virus de l’hépatite B. HCV virus de l’hépatite C. I.F.C.C federation internationale de chimie clinique. kat Unité internationnale LDH lactate déshydrogénase. PAL phosphatase alcaline. S.F.B.C société française de biochimie clinique. TGO transaminase glutamo-oxaloacitique. TGP transaminase glutamo-pyruvique. Tris Tampon Tris. Ul/l Unité internationnale/litre VN : valeur normale

GLOSSAIRE

Anoxie Insuffisance d’apport en oxygène aux organes et aux tissus vivants. Antalgique Un médicament qui calme la douleur. Anti-inflammatoire Médicament utilisé dans le traitement local de l’inflammation. Bile épaisse La densité bile (liquide jaune sécrété par les cellules du foie. Carcinome Tumeur épithéliale maligne. Embolie Obstruction provoque l’arrêt de l’irrigation sanguine. Glomérulonéphrite Toute maladie rénale caractérisé par une atteinte des glomérules

(unité de filtration du rein) Hépatotropisme Est l’affinité que présentent certaines substances et virus pour le foie. Prodromique Il y a des signes annonciateurs d’une maladie. Vaso-occlussive Les vaisseaux sanguines sont bouchés.

LISTE DES TABLEAUX

N° Titer de Tableaux page 1 Découvertes des différentes hépatites virales et mesures prises pour lutter contre (MEILI, 2005) 3 2 Formes d’hépatites et leur évolution (MEILI, 2005) 4 3 Classification internationale des enzymes (HAMES et al., 2000) 17 4 Répartition des patients selon le taux de GOT 39 5 Répartition des patients selon leur taux de GPT 39 6 répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GOT 57 7 Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GPT 57 8 Répartition des patients ayant les valeurs pathologiques de GOT selon l’age 57 9 Répartition des patients ayant les valeurs pathologiques de GPT selon l’age 57 10 Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GPT selon le sexe 41 11 Répartition des patients selon les résultats de la recherche étiologique 44

LISTE DES FIGURES

N° Titre de figure Page

1 Phosphate de pyridoxal (BISERT, 1977). 19

2 Deux formes du phosphate de pyridol (PELMONT, 1993) 20

3 - Mécanisme de transamination (BISERT, 1977). 21

4 Mécanisme d'action proposé pour les réactions de transamination (STRYER 1993).

21

5 Schéma d'une demi-réaction de transamination (Action de l'aspartate aminotransférase) (PELMONT, 1993).

22

6 La réaction globale d'une transamination (HAMES et al 2000). 23

7 Evolution des taux sériques de GOT et GPT au cours de l'hépatite aigue (BENHAMON, 1981).

24

8 Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GOT. 40

9 Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GPT. 41

10 Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GOT selon l’age. 42

11 Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GPT selon l’âge. 43

12 Répartition des malades d’hépatite B selon l’age et les zones. 44

13 Répartition des malades d’hépatite B selon le sexe et les zones. 45

LISTE DES ANNEXE

Annexe : 1 Répartition de l’hépatite B dans le monde Annexe : 2 Virus de l’hépatite B

Annexe : 3 La structure du virus de l’hépatite B

Annexe : 4 Recueil des résultats

INTRODUCTION

1

L’homme vit dans des environnements complexes et il est exposé à un ensemble de

maladies dangereuses et mortelles menaçant sa vie. L'hépatite est une maladie inflammatoire

du foie, provoquée par des infections bactériennes ou virales, l'abus d'alcool ou diverses

toxines. C'est une maladie caractérisée par la jaunisse, des douleurs abdominales et l'anorexie.

Le foie qui est l’un de ces organes affecté, est le siège de différentes complications aigues et

chroniques due à l’hépatite elle-même ou en rapport avec le traitement.

La surveillance biologique par une exploration fonctionnelle hépatique est

indispensable. Le dosage des transaminases sériques, doit être systématique pour le diagnostic

et le suivi de ces atteintes hépatiques malgré que ces enzymes ne soient pas spécifiques du

foie et quelles peuvent être augmentées dans d’autres situations pathologiques.

Face à ce constat le présent travail est une évaluation, mais aussi une précision sur

l’intérêt du dosage des transaminases dans l’exploration des atteintes hépatiques chez un

groupe de patients au service d’hématologie de l’hôpital MOHAMED BOUDIAF de Ouargla.

L’objectif recherché est de comparer les résultats obtenus à d’autres examens

biologiques biochimiques et sérologiques. Ceci permet en vu de confirmer, et aussi de

considérer que ce dosage simple et répétitif peut dépister et surveiller l’évolution d’une

atteinte hépatique dans la maladie l’hépatite B.

Dans le premier chapitre, les Hépatites virales sont présentées. Le second chapitre

porte sur les transaminases. La méthodologie de travail est consignée dans le troisième

chapitre. Elle est consacrée d’une part aux méthodes utilisées pour la collecte des

informations sur le terrain et au laboratoire et d’autre part aux techniques de traitement des

données. Les résultats obtenus et la discussion sont placés à part dans le quatrième chapitre.

Une conclusion générale qui est un ensemble de réflexions et de suggestions termine cette

étude.

ChapitreI: Hépatites Virales

3

1.1. - Historique de l’hépatite

Une hépatite est une inflammation du foie qui peut avoir de multiples causes. On parle

d'hépatite virale lorsque cette inflammation est liée à l'infection par un virus. Il existe

différents types d'hépatites virales, chacun lié à un virus différent, dont l’hépatite A, l’hépatite

B, l’hépatite C, l’hépatite D, l’hépatite E et l’hépatite G. Mais il existe d’autres virus

d’hépatites à savoir:

- Les virus à tropisme extra hépatique pouvant être responsable d’une hépatite. Ce sont les

virus de la mononucléose infectieuse qui sont très fréquents.

- Le cytomégalovirus est assez fréquent aussi, mais habituellement peu ou pas ictérique.

- Notons aussi les virus d’hep et de la fièvre jaune (exceptionnels) (Tab. 1).

Les hépatites virales constituent par leur fréquence que par leur gravité potentielle un

véritable problème de la santé publique; et leur fréquence varie en fonction du virus et du

niveau d’hygiène publique. Dans les pays en voie de développement 10% des adultes sont

séropositifs au virus A, 15 à 30 % de séropositifs au virus B (GEUBEL, 1998).

Tableau 1 - Découvertes des différentes hépatites virales et mesures prises pour lutter contre

(MEILI, 2005)

1945 Fait établi selon lequel les transfusions sanguines et plasmatiques peuvent transmettre une hépatite.

1965 Découverte du virus de l’hépatite A • 1992 Vaccin contre l’hépatite A

1975 Découverte de l’hépatite B • 1975: Test de l’hépatite B sur les donneurs de sang • 1981: Vaccin contre l’hépatite B

1982 Les premières préparations coagulantes désactivées viralement sont disponibles en Suisse

1986 Définition de la transaminase (ALAT) dans le plasma des donneurs 1986 (Août) Passage en Suisse à une utilisation exclusive de préparations coagulantes

désactivées viralement 1989 Découverte du virus de l’hépatite C

• 1990 Test de l’hépatite C sur les dons de sangs

* Hépatite A: Anciennement appelée hépatite "infectieuse", elle est transmise lors de la

consommation d'aliments ou d'eau de boisson contaminés par des matières fécales: aliments

souillés, fruits de mer crus, ... Elle est beaucoup plus fréquente dans les pays en voie de

développement et le risque de la contracter est particulièrement élevé pour les voyageurs.


4

Pour les Belges, ce risque est en augmentation puisque le nombre de personnes qui ont été en

contact avec le virus (on parle de sujets "immunisés") diminue avec l'amélioration des

conditions d'hygiène (Tab. 2).

La maladie s'accompagne souvent d'une "jaunisse" (on parle "d'ictère"). Elle est

généralement bénigne chez l'enfant. Sa gravité est plus grande chez l'adulte et la personne

âgée. L'hépatite A guérit habituellement en quelques semaines ou quelques mois. Elle

n'évolue jamais en hépatite chronique (GEUBEL, 1998).

Tableau 2 - Formes d’hépatites et leur évolution (MEILI, 2005)

Hépatite

Mise en

évidence

du virus

Vaccination Evolution Remarques spécifiques

Hép

atite

A

1965 Depuis 1992

Formation d’anticorps

avec élimination du

virus; pas d’évolution

chronique.

Il ne s’agit pas d’une hépatite

de transfusion typique.

Contamination habituelle: eau

et denrées alimentaires

polluées de germes, évolution

difficile chez des patients

atteints d’hépatite C

chronique; vaccination donc

recommandée.

Hép

atite

B

1975 Depuis 1981

Production

d’anticorps/souvent une

élimination du virus.

Evolution chronique

chez <5% (porteurs)

> 80 % des hémophiles

adultes avec substitution avant

1981 (vaccination) ont produit

une hépatite B.

Hép

atite

C

1989

Aucune

Production d’anticorps,

souvent sans élimination

virale hépatite C

chronique, porteur de

virus.

Avant 1989, nommée hépatite

NonA-NonB

* Hépatite B: Anciennement appelée "hépatite sérique", c'est la forme d'hépatite la plus


5

répandue dans le monde. Le virus de l'hépatite B est en effet beaucoup plus répandu que celui

du Sida. L'infection par voie "parentérale" (transfusions, piqûres, tatouages,...) et sexuelle.

Elle est plus sévère que l'hépatite A. Elle se transforme en hépatite chronique chez un petit

nombre de patients infectés (environ 5%). En l'absence de traitement efficace, l'évolution

prolongée de la maladie entraîne un risque de "cirrhose" (cicatrices et dysfonctionnement du

foie) et, à long terme, un risque accru de tumeur du foie.

L'antigène " Australia " a été découvert en 1964 par Blumberg et la relation directe

entre sa présence dans le sérum et celle de l'agent responsable de l'hépatite B fut admise 3 ans

plus tard. L'antigène " Australia " est maintenant appelé antigène HBs et le virus est dénommé

VHB. Il est apparenté au HIV et aux rétrovirus car il possède une transcriptase (GEUBEL,

1998).

* Hépatite C: Le virus de l'hépatite C est responsable de la majorité des hépatites que l'on

appelait "non-A, non-B" avant la découverte du virus responsable, en 1989. Tout comme le

virus de l'hépatite B, il se transmet surtout par voie "parentérale" (transfusions, piqûres

d'aiguille,...). On admet actuellement qu'un tiers des cas d'hépatite C observés sont d'origine

transfusionnelle, un second tiers restant à une transmission d'origine mal connue (on dit

"nosocomiale "). Le risque lié aux transfusions de sang a été considérablement réduit à partir

de janvier 1990, date depuis laquelle existe d'examens sanguins spécifiques réalisés

systématiquement chez les donneurs de sang. Chez beaucoup de personnes, la contamination

est donc survenue avant que l'on dispose de ces tests.

L'hépatite C évolue très fréquemment en hépatite chronique (environ 70% des cas).

Cette hépatite chronique est de gravité et d'évolution très variables. Les formes "actives"

entraînent à long terme (15-20 ans), un risque de cirrhose et un risque accru de tumeur du foie

(GEUBEL, 1998).

* Hépatite D: L'hépatite D est une hépatite rare dans les pays développés. Elle atteint le plus

souvent des personnes qui ont fait usage de drogues intraveineuses et sont aussi porteuses du

virus de l'hépatite B.

* Hépatite E: Aussi appelée hépatite non-A, non-B "épidémique" ou "entérique", elle se

transmet comme l'hépatite A et évolue généralement de la même manière. Le virus est

commun dans les régions de l'Océan Indien, de l'Afrique et les pays en voie de


6

développement.

* Hépatite G: Le virus de l'hépatite G a été récemment identifié. Il reste très mal connu, de

même que l'hépatite qu'il peut occasionner.

1.2. - Particularités cliniques et épidiomiologiques (Exemple de l’hépatites B)

Les hépatites B sont moins fréquentes que les hépatites A, mais elles sont plus sévères.

Elles évoluent souvent vers la chronicité (une fois sur dix chez les sujets immunocompétents,

plus encore chez les sujets âgés et presque constamment chez les nouveau-nés, les

immunodéprimés et les homosexuels même séronégatifs pour le VIH). La forme gravissime

(hépatite fulminante) survient une fois sur mille cas et une fois sur vingt environ une cirrhose

ou un cancer du foie apparaissent plusieurs années après une hépatite B. La maladie est

endémique et mondiale, sans prédominance saisonnière. La prévalence varie selon les régions

du globe:

- L'Europe de l'ouest, l'Amérique du Nord et l'Australie sont des zones de faible endémicité;

- L'Amérique latine, l'Amérique centrale, l'Europe de l'Est, l'Inde, le Moyen-Orient, l'Asie

centrale, les pays méditerranéens et l'Afrique du Nord sont des zones de moyenne endémicité;

- La Chine, le Japon, l'Asie du Sud-Est et l'Afrique tropicale sont des zones de forte

endémicité.

Les principaux modes de transmission sont les suivants :

- Transmission parentérale par le sang et ses dérivés au cours de transfusions, traitements par

des produits sanguins (chez les hémophiles ou les hémodialysés), à la suite d'injections avec

des seringues ou des aiguilles souillées (toxicomanes) ou après contaminations accidentelles

ou professionnelles (personnels soignants ou de laboratoire).

- Transmission sexuelle par le sperme ou les sécrétions vaginales: l'hépatite B est la "MST"

(maladie sexuellement transmissible" la plus fréquente, 50 fois plus fréquente que l'infection

par le VIH).

- Transmission entre mère et enfant au moment de l'accouchement ou en période néonatale (le

passage transplacentaire du virus est exceptionnel).

- Transmission directe (par contact, par le baiser..) n'est pas exclue.

Toute la population est soumise au risque de contamination mais certaines catégories


7

de personnes sont plus exposées:

- Polytransfusés, hémophiles, hémodialysés (le risque est maintenant réduit depuis l'éviction

par les centres de transfusion des donneurs HBs positifs).

- Personnels des banques de sang, des laboratoires, les soignants qui doivent prendre de

grandes précautions et être vaccinés.

- Homosexuels et prostituées et surtout toxicomanes chez qui les mesures préventives

d'hygiène sont peu appliquées (LEURT, 1998).

1.2.1. – Pathogénie HBV

La maladie est due à la réaction immunitaire du sujet plus qu'à l'action du virus lui-

même. La pénétration virale provoque, dans un premier temps, une réaction immunitaire avec

formation de complexes immuns responsables de la phase prodromique. La fixation hépatique

du virus est suivie de sa multiplication. Les hépatocytes infectés, se comportant comme des

néo-antigènes suscitent une réaction immunitaire à médiation cellulaire et humorale et les

anticorps et lymphocytes T cytotoxiques ainsi formés sont la cause de la lyse des cellules

hépatiques (GEUBEL, 1998).

1.2.1.1. – Virus et structure virale

Le virus VHB appartient à la famille des Hepadnavirus qui comprend en outre des

virus animaux provoquant une maladie analogue chez leur hôte respectif. Bayer, Dane

trouvaient à l'examen au microscope électronique des sérums infectés:

- Des particules sphériques très nombreuses de 22 nanomètres,

- Des tubules de même diamètre mais allongés mesurant jusqu'à 230 nm,

- Des particules sphériques plus rares mais plus grandes (42 nm) qui représentent le virus lui-

même. Elles comportent une partie centrale ou "côre" de 27 nm correspondant à la

nucléocapside et une partie périphérique correspondant à l'enveloppe. Ces particules,

dénommées particules de Dane, sont infectieuses.

Le VHB est constitué d'un ADN contenu dans une nucléocapside de 27 nm entourée

d'une enveloppe. Les particules de 22 nm sont des enveloppes vides. Le génome est court et

fait de 3200 nucléotides. C'est un ADN circulaire bicaténaire sur deux tiers de sa longueur

seulement. Il possède donc un brin long L (-) et un brin court S (+). L'enveloppe porte

l'antigène de surface AgHBs. La nucléocapside contient l'antigène du côre appelé AgHBc

associé à un autre antigène dénommé AgHBe. On a également mis en évidence dans la


8

nucléocapside une activité enzymatique ADN polymérase et une thymidine kinase. Sur

l'enveloppe est également localisé un récepteur pour la sérumalbumine humaine qui intervient

dans la phase de pénétration des virus dans l'hépatocyte. Malgré son enveloppe, le virus

résiste assez bien à l'éther, à la dessiccation et à la chaleur. Les sérums contagieux restent

infectieux de longues années à -20°C, plusieurs mois à +30 °C et plusieurs heures à +60 °C.

Le virus est détruit par ébullition et par l'action de l'hypochlorite de sodium (GEUBEL, 1998).

1.2.1.2. – Type de virus

- HBV (virus de l'hépatite B)

- Famille des hepadnavirus

- Virus à ADN

- Avec enveloppe

La protéine d'enveloppe porte l'appellation AgHBs. La protéine de capside est appelée

AgHbc: sa forme soluble (celle circulant dans le sang) est AgHbe. Certains virus dits

"mutants de côre" ne synthétisent plus AgHbe. Le virus est détectable dans le sang entre 10 et

20 jours après la contamination. Cette phase virémique ne dure que 2 à 3 mois chez 90% des

sujets infectés, mais persiste chez les porteurs chroniques. Pendant la phase de virémie, le

virus est présent dans les larmes, la sueur, la salive, le sperme et les sécrétions vaginales.

La durée d'incubation va de 50 à 100 jours. 10% des sujets contaminés deviennent porteurs

chroniques (15% chez les hommes, 5% chez les femmes). Les nouveaux-nés de mère infectée

tolèrent le virus B et vont développer une infection chronique B dans 80% des cas. Les

immunodéprimés (patients soumis à une chimiothérapie anticancéreuse, hémodialysés,

malades du SIDA,...) infectés par HBV le gardent dans 40 % des cas (LEURT, 1998).

1.2.2. - Mode de contamination

La transmission du virus peut avoir lieu de différentes voies:

- Voie parenterale,

- Transfusions de sang ou de ses dérivés (ce mode de contamination est devenu plus rare

depuis le dépistage systématique du virus B chez les donneurs de sang).

- Inoculation accidentelle (acupuncture, tatouage, piqûre par du matériel souillé, comme chez

les toxicomanes utilisant des drogues illicites par voie intraveineuse ou chez les


9

professionnels de la santé).

- Accouchement: passage du virus de la mère infectée à l'enfant,

- Contact interindividuel,

- Contamination par les sécrétions; contact hétéro- ou homo- sexuel, contact familial.

1.2.3. – Signe clinique

a/- Phase aiguë

Pas de symptômes dans 90% des cas. Si des symptômes apparaissent, ils sont peu

spécifiques: asthénie, anoréxie, température, puis ictère. Les transaminases sont élevées (1000

à 4000 µI). Une glomérulonéphrite, une arthrite peuvent survenir, liées à des dépôts de

complexes immuns. Une fois sur cent, l'hépatite aiguë B peut prendre une forme fulminante et

conduire presque invariablement au décès en l'absence de transplantation hépatique (LEURT,

1998).

b/- Phase chronique

C’est une atteinte hépatique nécrotique et inflammatoire évoluant depuis 6 mois au

moins. Cette période de portage se divise en trois étapes successives:

- Phase réplicative: Elle correspond à la multiplication de HBV dans le foie. Elle dure

plusieurs années; la contagiosité est importante. Les transaminanses sont normales ou peu

élevées.

- Phase dite "de séroconversion" : elle est brève et correspond à la destruction d'hépatocytes

infectés. Sa fréquence spontanée est d'une dizaine de pourcents par an. Les transaminases sont

élevées, parfois de manière importante (> 1000 µl/l). Elle peut être symptomatique si elle

vient aggraver une cirrhose préexistante.

- Phase non réplicative: Le virus ne se multiplie plus. Son code génétique s'est intégré à celui

de son hôte. Les transaminases sont normales ou peu élevées. Une réactivation (c'est-à-dire

une nouvelle période de réplication virale) est possible au cours des 2 dernières phases; elle

est spontanée ou induite par une immunosupression. 30% des sujets atteints d'hépatite

chronique B vont évoluer vers la cirrhose en 10 ans; 20% d'entre eux souffriront d'un

carcinome hépatocellulaire. Le risque d'hépatocarcinome est multiplié par 100 par rapport au


10

sujet non porteur du virus B (LEURT, 1998).

1.2.4. - Culture et pouvoir pathogénique

Il n'y a pas de système de culture cellulaire capable de propager le virus. Toutefois des

cultures en lignée continues d'hépatocarcinome humain produisent de l'HBs (particules de 22

nm) mais pas d'HBc ni donc de virus. On a pu également transfecter des fragments d'ADN

viral dans des cellules bactériennes ou eucaryotes et obtenir ainsi d'utiles informations sur

l'expression des gènes du virus.

Le singe chimpanzé est sensible au VHB et fait une maladie cliniquement et

biologiquement semblable à la maladie humaine.

1.3.- Constitution d’antigène

L'antigène HBs se subdivise en sous types qui possèdent un déterminant commun "a"

et des motifs secondaires constituants des systèmes alléliques. La spécificité "w" est divisée

en quatre sous-classes numérotées de 1 à 4. Ces variétés antigéniques ont un intérêt

épidémiologique. L'antigène nucléocapsidique HBc n'est pas détectable dans le sérum même

si celui-ci contient des particules de Dane. On peut le mettre en évidence dans le noyau des

cellules hépatiques. L'antigène HBe, décrit par HAGNIUS en 1972, est lié à la nucléocapside

mais s'exprime, contrairement à l'HBc, quand celle-ci est en voie de lyse. Sa présence dans le

sérum est un témoin de multiplication virale et un critère d'infectiosité. Elle aurait en outre

une signification pronostique défavorable. L'antigène de surface HBs, constitué par

l'enveloppe, n'est pas infectieux. C'est l'antigène viral le plus important, quantitativement mais

également fonctionnellement car c'est sur sa détection dans le sérum que repose le diagnostic

et les anticorps qu'il suscite confèrent une protection contre une infection ultérieure. Ces

antigènes induisent la formation d'anticorps anti-HBc, anti-HBs, anti-HBe (LEURT, 1998).

1.4.- Cycle de multiplication

La première phase, dite "de réplication" se déroule dans le noyau de l'hépatocyte et

conduit à la libération de virions complets, infectieux et à une forte production d'antigènes

HBs et HBc. Le virus pénètre dans la cellule, débarrassé de son enveloppe grâce à son

"récepteur pour l'albumine". Après décapsidation, l'ADN viral pénètre dans le noyau et


11

devient bicatenaire sur toute sa longueur. Le brin L (-) est transcrit en ARN "pré-génomique"

par une ARN polymérase de l'hôte. Cet ARN s'encapside et quitte le noyau pour le

cytoplasme où l'ADN polymérase virale, qui a une activité transcriptase-réverse, synthétise le

nouveau brin L (-) à partir de l'ARN pré-génomique. Le brin S (+) est alors synthétisé sur la

matrice du brin L (-) nouvellement créé. Le virus est ensuite enveloppé et excrété. La phase

"d'intégration" fait suite à cette première phase de multiplication. L'ADN viral s'intègre dans

le génome de l'hépatocyte qui devient capable de produire l'HBs mais il n'y a plus de

production de virions complets ni d'expression d'antigènes HBc ou HBe: le sérum n'est plus

infectieux. L'étape de "transcription réverse" apparente le VHB aux rétrovirus (FEVERY,

1998).

1.5.- Marqueurs

L'évolution de la présence dans le sérum des antigènes et anticorps a été bien étudiée

dans les différentes formes cliniques de la maladie.

1.5.1.- Hépatite aiguë

- L'Ag HBs apparaît avant l'ictère et persiste pendant la phase aiguë,

- Les IgM anti-HBc apparaissent ensuite pendant la phase clinique.

- L'anti-HBs apparaît plus tardivement quand l'AgHBs disparaît et sa présence signe la

guérison; il persiste longtemps.

- L'Ag HBe est présent lors de la phase aiguë, sa disparition suivie ou non de l'apparition de

l'Ac anti-HBe signe la guérison. Au contraire, la persistance de l'Ag HBe fait redouter une

évolution vers la chronicité.

- Il peut arriver qu'au cours d'une hépatite aiguë, l'Ag HBs ne soit plus décelable et l'Ac anti-

HBs pas encore apparu: dans ces cas, le seul témoin biologique de la maladie est la présence

de l'Ac anti-HBc qui est donc un marqueur très précieux (FEVERY, 1998).

1.5.2.- Porteurs sains

- L'Ag HBs est présent par définition souvent accompagné d'un taux élevé d'anticorps IgG

anti-HBc. La recherche de l'Ag HBe est alors essentielle pour éliminer l'éventualité d'une

hépatite chronique HBe +.


12

- Chez certains porteurs chroniques d'Ag HBs, en cas d'infestations répétées (dialyse,

polytransfusés...), on peut trouver des Ac anti-HBs.

1.5.3.- Hépatite fulminante

On observe la disparition très rapide de l'Ag HBs et l'apparition des Ac anti-HBs à titre

élevé ; parfois Ag et Ac cohabitent.

1.5.5. -Hépatite chronique

L'Ag HBs est présent ainsi que l'Ac anti-HBc mais la recherche d'IgM anti-HBc est

négative. L'Ag HBe est le témoin d'une agression virale signant l'hépatite chronique active.

Dans certains cas d'hépatite chronique, l'Ag HBs n'est pas détecté; en l'absence d'Ac anti-HBs,

qui témoignerait d'une hépatite ancienne guérie, il importe de rechercher l'Ac anti-HBc et l'Ag

HBe dont la présence signe l'hépatite chronique (FEVERY, 1998).

1.5.6. - Convalescents, guéris ou vaccinés

Le stigmate de guérison est la disparition de l'Ag HBs remplacé par l'Ac anti-HBs qui

persiste souvent associé à l'Ac anti-HBc. La présence d'un Ac anti-HBe conforte ce pronostic

favorable. Les sujets vaccinés n'ont que des Ac anti-HBs puisque l'antigène vaccinal est l'Ag

HBs (FEVERY, 1998).

1.5.7. – Marqueurs de la réplication virale

Outre la recherche de l'Ag HBe dans le sérum, il existe plusieurs témoins de la

réplication virale. La recherche de l'Ag HBc dans le foie par immunomarquage et celle de

l'ADN viral imposent une biopsie hépatique et peuvent difficilement être répétés. Par contre

la mise en évidence dans le sérum de l'ADN viral par technique radioimmunologique ou par

hybridation ainsi que la mise en évidence d'une activité ADN polymérase, sans être de

pratique courante, sont utiles pour confirmer une redoutable évolution chronique ou pour

surveiller l'efficacité d'un traitement antiviral (FEVERY, 1998).


13

1.6.- Diagnostic

Le diagnostic précis est sérologique.

1.6.1. - Hépatite aiguë

* IgM anti Hbc: Ces anticorps apparaissent 2 à 4 semaines avant l'ictère (s'il survient) et

disparaissent en 3 mois (ils persistent quelquefois plus longtemps).

* AgHbs: Ils sont détectables 2 à 4 semaines avant l'ictère et disparaissent en 6 mois si le

sujet contaminé fait partie des 90% des individus qui guérissent.

* Anti Hbs: Ils surviennent quand AgHbs décroit, puis disparaît. Ils protègent d'une

réinfection par HBV. Ils persistent à vie le plus souvent mais peuvent s'estomper avec le

temps.

* IgG anti Hbc: Ils apparaissent quand les IgM décroissent et d'ordinaire persistent le plus

souvent. Ils ne sont pas protecteurs (FEVERY, 1998).

1.6.2. - Hépatite chronique

Par définition, AgHbs persiste au-delà de 6 mois.

* Phase réplicative: AgHbs +, AgHbe +, DNA HBV + (chez les virus B dits "mutants de

core"; AgHbe -, antiHbe +, DNA HBV +), IgG anti Hbc +.

* Phase de séroconversion: AgHbs +, passage de AgHbe + à AgHbe -, apparition de anti

Hbe, disparition du DNA HBV.

* Phase non réplicative: AgHbs +, AgHbe -, anti Hbe +, DNA HBV -, IgG anti Hbc +. Le

passage de AgHbs à anti Hbs est possible pendant les 2 dernières phases (spontanément, cette

évolution se produit dans 1% des cas par an). Le "porteur sain" a des transaminases normales,

Aghbs +, AgHbe -, DNA HBV-. Il est contagieux. Il n'a pas toujours un foie normal à la

biopsie.

1.7. – Traitement

L'hépatite aiguë "simple" ne se traite pas. L'hépatite fulminante requiert la

transplantation. Le but du traitement de l'hépatite chronique B est la suppression de la

réplication virale, si possible avant que le stade de cirrhose ne soit atteint. Seule la phase


14

réplicative mérite donc une thérapie particulière. Actuellement, l'interphéron alpha est le seul

traitement reconnu de l'hépatite chronique B. Il permet la séroconversion AgHbe vers anti

Hbe chez 40% des sujets traités pendant 6 mois. D'autres médicaments (famciclovir,

lamivudine) dont l'efficacité est en cours d'évaluation, seuls ou associés, promettent des

résultats meilleurs. La vidarabine est moins utile que l'interféron (FEVERY, 1998).

1.7.1. - Prévention

L'administration de gammaglobulines anti Hbs protège 6 semaines. 90% des sujets

vaccinés (par le vaccin recombinant ou celui dérivé du plasma) gardent un taux protecteur

d'anti Hbs (>10mUI/ml) pendant 5 ans au moins. 3% des sujets immunocompétents ne

répondent pas au vaccin maintenant disponible mais tireront sans doute bénéfice de ceux qui

sont à l'étude. Les enfants nés de mères porteuses de AgHbs reçoivent à la naissance à la fois

les immunoglobulines et le vaccin (FEVERY, 1998).

1.7.2. – Vaccination

Depuis 1972, on sait que la présence d'anticorps sériques anti-HBs a un effet

protecteur. En 1975, ont mis au point un vaccin (HEVAC B® de l'Institut Pasteur) dont

l'antigène vaccinant n'était ni un virus tué, ni un virus atténué, mais une fraction de virus

correspondant à l’enveloppe porteuse de l’antigène HBs, dénuée de pouvoir infectieux mais

très immunogène. Ce vaccin était préparé à partir de plasmas de porteurs sains de particules

purifiées d'antigène HBs de 22 nm. Les vaccins de "seconde génération" font aujourd'hui

appel aux techniques du génie génétique. La partie du génome du virus qui code pour les

protéines de surface du virus est sélectionnée puis transplantée dans une cellule hôte (levure

ou cellule animale). La cellule hôte en se répliquant produire alors les protéines d'enveloppe S

et pré-S suivant les gènes utilisés. Cet antigène est ensuite purifié à partir des cultures

cellulaires. Il existe actuellement trois vaccins produits par génie génétique (ENGERIX B®,

RECOMBIVAX®, GENHEVAC®). On pratique deux injections par voie intramusculaire à

trois semaines ou un mois d'intervalle avec rappel après 6 mois. La protection serait assurée

pendant dix ans (FEVERY, 1998).

La vaccination est indiquée chez toute personne soumise au risque d'hépatite B:


15

personnel hospitalier soignant, malades hémodialysés, personnel des centres de transfusion,

techniciens de laboratoire, nouveau-nés de mère HBs positives, populations résidant dans les

contrées à haute endémicité ou voyageurs s'y rendant. On considère comme protecteur un taux

d'anticorps anti-HBs supérieur à 10 µl/ml (FEVERY, 1998).

Chapitre II: Transaminases

17

2.1. - Classification des enzymes

Pour rationaliser les appellations des enzymes,un système de nomenclature des

enzymes a été adapté par un accord international. Ce système classe toutes les enzymes dans

une des six catégories principales basées sur le type de réaction catalysée (tableau 3). Chaque

enzyme n'est alors identifiée que par un code numérique de classification à quatre nombres

(HAMES et al, 2000)

Tableau 3: Classification internationale des enzymes (HAMES et al., 2000)

Classes Nom Type de réaction catalysée Exemple

1 Oxydoréductases Transfert des éléctrons

A+B � A+B Alcool Déshydrogénase

2 Transférases Transfert de groupements

Fonctionnels A-B+C � A+B-C

Hexokinase Transaminase

3 Hydrolases Réactions d'hydrolyse

A-B+H2O � A-H+B-OH Trypsine

4

Lyases Clivages C-C,C-O,C-N et d'autres liaisons formant souvent une double liaison A-B � A=B+x-y II Xy

Pyruvate décarboxylase

5

Isomérases Transfert de groupes à l'intérieur d'une molécule A-B � A-B II II Xy Xy

Malate isomerase

6 Ligases Ligases couplée à l'hydrolyse de

l'ATP A+B�A-B

Pyruvate carboxylase

2.2. -Transamination

2.2.1. -Découverte

En 1927 MOYLE-NEEDHAM avait déjà signalé que dans le muscle,les acides

aspartique glutamique pouvaient donner naissance a des diacides non azotés, sans formation

d'ammoniaque, ni d'urée, ni d'azote amidé ou purique,et sans variation de la teneur totale en

azote aminé (BISERTE et al., 1981). Il ne pouvait donc s'agir que d'un transport du groupe


18

aminé. BRAUNSTIEN et KRISTGMANN (1973) ont étudie systématiquement cette réaction

de transfert de la fonction NH2 dans le muscle et ont décrit ce nouveau processus métabolique

des aminoacides sous le nom de transamination (BISERTE et al., 1981).

2.2.2. - Définition

La transamination catalysée par une aminotransférase à coenzyme phosphate de

pyridoxal(PLP), est une réaction de transfert réversible du groupement aminé entre un acide

aminé et un acide α-cétonique: l'acide aminé donneur du groupement aminé est transformé en

acide α-cétonique, l'acide α-cétonique accepteur du groupement aminé est transformé en acide

aminé. L'acide α-cétonique, accepteur est presque toujours l'α-cétoglutarate qui est transformé

en glutamate (MOUSSARD, 1999). Les transaminases (ou aminotransférases) sont des

enzymes qui catalysent le transfert de radicaux NH2 sur un acide cétonique. Il existe dans le

sérum une transaminase glutamo-oxaloacétique (GOT) ou aspartate aminotransférases et une

transaminase glutamo-pyruvique (GPT) ou alanine aminotransférases . Les concentrations

plasmatiques de la GOT et de la GPT sont habituellement inférieures à 40 Ul/l chez le sujet

normal. Ces enzymes sont contenus en abondance dans différents tissus: le foie, les muscles

(en particulier le myocarde) et les reins (BENHAMON et al., 1981).

• La L-aspartate aminotransférase (E.C.2.3.1.1., GOT) : Elle est une enzyme qui existe

sous deux formes moléculaires localisées différement à l'intérieur de la cellule, l'une dans le

cytoplasme, l'autre dans la matrice mitochondriale. Elle catalyse la synthèse et la dégradation

de l'acide aspartique et de l'acide glutamique par l'intermédiaire des 2 oxoacides

correspondants, l'acide oxaloacétique et l'acide 2-oxoglutarique. Le fonctionnement de la

GOT nécessite la présence d'un cofacteur, le phosphate de pyridoxal, dérivé de la vitamine B6.

Cette enzyme est présente dans le foie, mais aussi dans de nombreux autres organes, en

particulier dans le myocarde, les muscles squelettiques et les reins. La demi-vie plasmatique

de l'enzyme est de 17±heures en moyenne. Elle diffère pour chaque forme moléculaire de la

GOT; la vitesse de disparition de la GOT plasmatique après injection est de 6 heures pour

l'isoenzyme mitochondriale contre 4 à 5 jours pour l'isoenzyme cytoplasmique (AGNERAY

et al., 1988).

• La L-alanine aminotransférase (E.C.2.6.1.2.; GPT+

): C’est une enzyme spécialement localisée dans le foie, mais en la trouve aussi dans les reins


19

et d'autre organes. Elle catalyse le transfert réversible du groupement aminé de la L-alanine

sur le 2-oxoglutarate avec formation de pyruvate et de glutamate et utilise le phosphate de

pyridoxal comme cofacteur. La demi-vie plasmatique de l'enzyme est de 47±10 heures en

moyenne (AGNERAY et al., 1988).

2.3. - Mécanisme d'action de transaminase

Les transaminases travaillent avec un coenzyme important à connaître, qui est le

phosphate de pyridoxal.

A- Phosphate de pyridoxal

En 1944, SNELL a établi que le coenzyme (ou groupement prosthétique) de toute les

aminotransférases est le phosphate de pyridoxal (PLP) qui provient de la pyridoxine

(vitamineB6).

Figure 1- Phosphate de pyridoxal (BISERTE, 1977)

Le phosphate de pyridoxal existe sous deux formes, le pyridoxal-5-phosphate (PLP), et la

pyridoxamine-5-phosphate (PMP).


20

Figure 2- Deux formes du phosphate de pyridol (PELMONT, 1993)

Le PLP possède une fonction aldéhydique, le PMP une fonction amine. Le PLP est

représente sous deux formes: une forme libre et une forme liée à l'enzyme sur une chaîne

latérale de lysine par une liaison classique en chimie (base de schiff) (PELMONT, 1993).

B- Mécanisme de transamination

Les enzymes à PLP (comme les aminotransférases) forment, avec leurs substrats, des

intermédiaires covalents qui sont des bases de schiff. En l'absence de substrat,le groupement

aldéhydique du PLP est sous forme de base de schiff, lié au groupement ε-amine d'un résidu

particulier de lysine du site actif. Une nouvelle liaison par base de schiff est formée par

addition d'un acide aminé substrat. Le groupement α-aminé du substrat acide aminé déplace le

groupement ε-aminé de la lysine du site actif. La base de schiff acide aminé PLP qui est

formée reste étroitement liée à l'enzyme par des interactions multiples, non covalentes.


21

Base de schiff formé entre Base de schiff formé entre

le phosphate de pyridoxal Le phosphate de pyridoxal

et l'enzyme. et l'acide aminé substrat.

Figure 3- Mécanisme de transamination (BISERT, 1977)

SNELL et BRAUNSTEIN ont proposé, il y a déjà plus de quarante ans, un mécanisme de

réaction pour la transamination (figure 3) dont il a été montré qu'il était généralement valide.

La base de schiff, entre le substrat acide aminé et le PLP, appelée aldimine, perd un proton à

partir de son carbone α et forme un intermédiaire quinonoϊde. La reprotonation fournit une

cétimine qui contient une double liaison entre N et Cα du substrat, alors que l'aldimine

contient une double liaison entre N et C du carbonyle de PLP (STRYER, 1992).

Figure 4- Mécanisme d'action proposé pour les réactions de transamination

(STRYER, 1993)

La cétimine est ensuite hydrolysées en un acide α-cétonique et phosphate de

pyridoxamine. Ces étapes constituent la moitié de la réaction de transamination.


22

Acide aminé + E-PLP <====> Acide α-cétonique + E-PMP

La seconde moitié se produit par la réversibilité de la voie indiquée ci-dessus.

Un second acide α-cétonique réagit avec le complexe enzyme-phosphate de

pyridoxamine (E-PMP) pour fournir un second acide aminé et régénérer le complexe enzyme-

phosphate de pyridoxal (E-PLP) (STRYER, 1992).

Acide α-cétonique 2 + E-PMP <====> Acide aminé2 + E-PLP

La somme de ces réactions partielles est:

Acide aminé +acide α-cétonique2 <====>Acide aminé2 +acide α-cétonique

Exemple: Donc dans le cas d' aspartate aminotransférase on aura selon (PELMONT 1993) le

schéma suivant:

Aspartate + enzyme – PLP <====> Oxaloacétate + enzyme ,PMP

2-oxoglutarate + enzyme,PMP <====> Glutamate + enzyme -PLP

Aspartate + 2-oxoglutarate <====> Oxaloacétate + Glutamate

Acide aminé + acide α-cétonique2 <===> Acide α-cétonique + acide aminé2

Examinons le mécanisme d'action de l'aminotransférase. On a représenté de façon

simplifiée une seule demi-réaction en 5 schémas.

Figure 5- Schéma d'une demi-réaction de transamination (Action de l'aspartate

aminotransférase) (PELMONT, 1993)


23

Figure 6- La réaction globale d'une transamination (HAMES et al, 2000).

2.4. - Intérés semiologique des transaminases (BENHAMON, 1981)

2.4.1. - Atteints hépatiques

Pratiquement toutes les affections hépatiques imposent un dosage des transaminases.

Les plus importantes sont:

• Les hépatites aigues: l'élévation des de GOT et de GPT est toujours très importante comme

le montre la figure 6. Les caractéristiques de cette élévation sont les suivantes. Elle est déjà

très nette avant l'apparition de l'ictère. Elle atteint environ 600 Ul/l pour la GPT et 400 Ul/l

pour la GOT en pleine phase ictérique. Elle permet de suivre d'une manière très précise

l'évolution de la maladie et constitue un excellent signe précoce d'une rechute éventuelle.

L'élévation du taux des transaminases est le seul signe permettant le diagnostic des hépatites

anictériques.

• Les hépatites chroniques: l'augmentation du taux des transaminases est un signe constant,

mais les valeurs obtenues demeurent inférieures à celles observées dans les hépatites aigues,


24

elle traduit cependant l'atteinte parenchymateuse par nécrose cellulaire.

2.4.2. -Obstructions biliaires

Le taux des transaminases augmente nettement et se situe aux environs de 100 Ul/l, le

retour à la valeur normale est cependant rapide, plus rapide que dans le cas des hépatites

aigues (Fig. 6).

0 1 2 3 4 5 semaines

Figure 7- Evolution des taux sériques de GOT et GPT au cours de l'hépatite aigue

(BENHAMON, 1981)

2.5. - Différent cas d'apparition de la transaminase dans le sang

La GPT est libérée dans la circulation sanguine en grande quantité en cas de nécrose

cellulaire: c'est avant tout une enzyme de cytolyse. Les augmentations très importantes de la

GPT (plus de 15 fois la limite supérieure) s'observent:

- Dans les hépatites toxiques: il n'est pas rare d'observer des activités 100 fois supérieures à la

normale, mais la GPT se normalise rapidement lorsque le sujet est soustrait à l'agression.

- Dans les hépatites virales: l'activité de la GPT peut être multipliée par 10 ou 100 fois.

L'augmentation de la GPT est présente dés la phase prés ictérique et persiste pendant toute la

durée de la maladie (deux à six semaines).

- Dans une hépatite virale commune,la GPT augmente progressivement, atteint un pic, puis


25

retourne à la normale pendant la phase de guérison (KAMOUN et FREJAVILLE, 1977).

L'augmentation très importante des transaminases à une très grande valeur diagnostique pour:

- Une hépatite cytolytique lors d'un ictère.

- Les hépatites anictèriques.

- L'hépatite virale à la phase préictérique lors d'une épidémie.

L'absence de parallélisme entre l'élévation de la GPT et l'étendue de la nécrose

hépatique ne permet en aucun cas de formuler un pronostic sur la seule courbe de la GPT. En

effet, certaines hépatites graves, rapidement mortelles, n'ont pas d'augmentation notable des

transaminases, et les formes avec fortes élévations initiales de la GPT présentent souvent des

évolutions bénignes.

Une activité plus élevée des transaminases sériques s'observe avec une relative

fréquence dans les hépatites à évolution prolongée. Des élévations persistantes de la GPT a la

sixième semaine doivent faire redouter l'hépatite chronique, et une réascension tardive indique

une rechute.

- Dans les anoxies hépatiques (secondaires à une défaillance cardiorespiratoire aigue, à un

collapsus cardiovasculaire, à une embolie ou une ligature de l'artère hépatique propre).

- Dans certains poussées de l'hépatite chronique agressive.

- Dans certains hépatites mononucléosiques (rarement).

Dans toutes ces étiologues, la transaminase oxaloacétique est également élevée mais à

des taux plus modestes. Les augmentations modérées de la GPT (inférieures à 10 fois la limite

supérieure de la normale) sont observées dans:

- Les cirrhoses éthyliques et biliaire primitives (valeurs multipliées par 5 au 10),

- Les hépatites chroniques actives,

- Les cancers secondaires ou primitifs du foie.

- La cholestase, surtout lorsqu'elle est prolongée (mais des valeurs de la GPT supérieure à 10

fois la limite supérieure de la normale sont tout à fait exceptionnelles).

Des augmentations de la GPT peuvent être observées en dehors des maladies

hépatobiliaires comme le cas d'une pancréatite aigue ou un infarctus du myocarde (KAMOUN

et FREJAVILLE, 1977). La GOT est augmentée dans toutes les circonstances ou la GPT est

augmentée et dans certaines circonstances particulières ou la GPT est au contraire en général


26

normal.

En dehors des affections hépatobiliaires la GPT augmente:

- Dans l'infarctus du myocarde.

- Après chirurgie cardiaque et traumatisme du myocarde.

- Après traumatisme des muscles squelettique.

- Dans certaines maladies musculaires.

- Dans la pancréatite aigue (KAMOUN et FREJAVILLE, 1977).

2.6.- Méthode de dosage des transaminases

2.6.1.- Mesure de l’activité des enzymes

Dans l’état actuel des techniques d’analyse enzymatique‚ il n’est pas courant de doser

une enzyme en tant que substance définie. Les méthodes immunologiques permettront peut-

être dans l’avenir d’effectuer le dosage direct de l’enzyme en tant que protéine (AUDIGIE,

1992�. En général‚ le dosage des enzymes se fait de manière indirecte‚ en évaluant une

propriété proportionnelle à la concentration d’enzyme:

- Soit une propriété physique: C’est la méthode calorimétrique‚qui consiste à mesurer la

quantité de chaleur dégagée lorsque l’on ajoute du substrat en excès à un milieu adéquat

contenant l’échantillon d’enzyme à doser. Cette technique est très rarement utilisée

(AUDIGIE, 1992�.

- Soit une propriété cinétique: C’est la mesure de l’activité‚la mesure est faite dans les

conditions où cette dernière est proportionnelle à la concentration d’enzyme (AUDIGIE,

1992�.

Le cas classique ou la détection de l’activité enzymatique se fait par

spectrophotomètre. Cette activité peut-être détectée et mesurée en déterminant la vitesse de

réaction en présence de concentration saturante du substrat (DURAND, 1982�.

2.6.1.1.- Détermination directe

A un volume donné de mélange réactionnel comprenant le ou les substrats et cofacteur

de l’enzyme en milieu tamponné et thermo staté‚ est ajouté un aliquote de l’échantillon à


27

doser. Dans le cas le plus simple‚ la variation de concentration en fonction du temps d’un des

réactifs est directement calculée à partir de la variation d’absorbance due à ce réactif. La

variation de concentration du composé en fonction du temps dépend de l’activité enzymatique

présente dans l’échantillon et donc permet la mesure de celle-ci (DURAND 1982�.

2.6.1.2.- Cas des réactions couplées

Lorsque le produit d’une réaction enzymatique est difficilement accessible à la

mesure‚ on utilise une ou plusieurs réactions enzymatiques complémentaires‚couplées les

unes aux autres. La dernière doit faire intervenir un produit final facilement mesurable. Les

systèmes couplés sont généralement conçus pour aboutir à des réactions indicatrices bien

connues et optimisées. Dans ce domaine‚ l’utilisation des coenzymes pyridiniques et des

peroxydases est très générale:

• Coenzymes nicotiniques : L’intérêt de ces coenzymes provient du fait que les spectres

dans l’ultra violet des formes oxydées et réduites sont très différent. En suivant la variation de

densité optique à 340 nm en mesure l’apparition ou la disparition de la forme réduite

(MARTIN 1995�.

• Les peroxydases : Ces enzymes sont surtout utilisées dans les réactions indicatrices des

dosage de substrat, à l’inverse des réactions enzymatiques ou l’on utilise des déshydrogénases

à NAD (MARTIN, 1995�.

2.6.2.- Technique

2.6.2.1.- Méthodes de mesure de la vitesse moyenne dite méthode "2 points"

C’est le procédé classiquement utilisé en méthodes manuelles. Il consiste à laisser

l’enzyme catalyser la réaction pendant une durée fixe‚ à arrêter son action‚ puis à évaluer la

quantité de substrat transformé ou de produit apparu (MARTIN, 1995�.

2.6.2.2.- Méthodes de mesure de la vitesse instantanée dite méthode cinétique

Ce procédé, qui s’adapte parfaitement à l’analyse automatique, consiste à suivre

l’évolution de la réaction en fonction du temps. La substance dont on mesure la vitesse de

disparition ou l’apparition doit posséder une propriété spectrale spécifique dans l’ultra-violet

ou le visible ; l’enregistrement des variations d’absorbance en fonction du temps est la


28

technique la plus simple, la plus rapide, la plus spécifique. Le couple NAD+/NADH ou

NADP+/NADPH est usuellement employé (MARTIN, 1995�.

2.6.3.- Standardisation des méthodes, les méthodes optimisées

Les résultats de la mesure de l’activité d’une enzyme ne peuvent être comparés que si

les conditions opératoires sont identiques. Des efforts sont donc faits en en vue de

standardiser les techniques de dosage. Les conditions des méthodes conventionnelles sont

choisies optimales. Concentration des substrats, des coenzymes, concentration et constitution

du tampon, pH, utilisation d’effecteurs, à fin d’obtenir des activités plus élevées. Les

méthodes standardisées sont dites alors optimisées (MARTIN, 1995�. Actuellement des

recommandations sont disponibles pour la détermination d’activités: GOT, GPT, LDH, GLD,

CK, PAL, GGT (AGNERAY et al., 1990�.

2.6.4.- Quelques schémas des méthodes recommandées de détermination de l’activité

transaminasique (AGNERAY et al., 1990d

Les méthodes de détermination de l’activité transaminasique connues de nos jours se

regroupent comme suit:

• Alanine aminotransférase (GPT) (Méthode recommandée par l’I.F.C.C; 1986).

Méthode cinétique U.V 30 °C –Tampon Tris-(hydroxyméthyl)-aminométhane

100mmol/l ; pH = 7.30 ; L-Alanine 500 mmol/l ; Pyridoxal 5’phosphate 0.1 mmol/l ;

NADH.H+ 0.18mmol/l; Lactate déshydrogénase 20µkat/l; 2-Oxoglutarate 15mmol/l.

• Alanine aminotransférase (GPT)(Méthode recommandée par la S.F.B.C.1982).

Méthode cinétique U.V 30 °C –Tampon Tris-(Hydroxyméthyl)-aminométhane

100mmol/l ; PH = 7.50; Pyridoxal 5’phosphate 0.1mmol/l; NADH.H+ 0.18 mmol/l; Lactate

déshydrogénase 20 µkat/l; L-Alanine 500 mmol/l; 2-Oxoglutarate 15mmol/l.

• Alanine aminotransférase (GPT )(Méthode recommandée par la D.G.K.C.,1972).

Méthode cinétique U.V 25 °C –Tampon phosphate 80 mmol/l ; pH = 7.40; L-Alanine 800

mmol/l ; NADH.H+ 0.18 mmol/l; Lactate déshydrogénase 20 µkat/l; 2-Oxoglutarate

15mmol/l.

• Aspartate aminotransférase (GOT) (Méthode recommandée par l’I.F.C.C., 1986).

Méthode cinétique U.V 30 °C -Tampon Tris-(hydroxyméthyl)-aminométhane 80mmol/l;


29

pH = 7.80; L-Aspartate 200 mmol/l; NADH.H+ 0.18mmol/l; Pyridoxal 5’phosphate

0.1mmol/l; Malate déshydrogénase 7 µkat/l; Lactate déshydrogénase 10µKat/l; 2-

Oxoglutarate 12mmol/l.

• Aspartate aminotransférase (GOT)(Méthode recommandée par la S.F.B.C.,1982).

Méthode cinétique U.V 30 °C -Tampon Tris-(hydroxyméthyl)-aminométhane 80

mmol/l; pH = 7.80; L-Aspartate 200 mmol/l; NADH.H+ 0.18 mmol/l; Pyridoxal 5’phosphate

0.1mmol/l; Malate déshydrogénase 10 µkat/l; Lactate déshydrogénase 15 µkat/l; 2-

Oxoglutarate 12 mmol/l.

• Aspartate aminotransférase (GOT) (Méthode recommandée par la D.G.K.C., 1972).

Méthode cinétique U.V 25 °C -Tampon phosphate 80 mmol/l; pH = 7.40; L-Aspartate

200 mmol/l; NADH.H+ 0.18 mmol/l; Malate déhydrogénase 10 µkat/l .Lactate

déshydrogénase 20 µkat/l; 2-Oxoglutarate 12 mmol/l.

Chapitre III: Matériels et méthodes

31

3.1.- Présentation de la zone d'étude

La zone d’étude pour le présent travail est la cuvette de Ouargla. Elle est situé à une

altitude de 157 mètres par rapport au niveau de la mer. Elle comprend actuellement 21

communes regroupées en dix daïra. Chaque commune est constituée de quartiers certaines

sont composées de populations urbaines et d’autres nomades sédentarisés (ANONYME,

1995).

3.2.- Choix du site et enquête

L'étude se veut un recensement de l’hépatite. Dans l’ensemble, cette enquête au sein

du service d’hématologie de l’hôpital MOHAMED BOUDIAF, se divise en deux parties, la

première est un travail pratique dans le laboratoire qui consiste au dosage des transaminases,

et en seconde étape une étude rétrospective. Elle permet de rechercher l’intérêt du dosage des

transaminases au cours des atteintes de l’hépatite B. Elle se complète par une consultation des

listes des sujets atteints auprès du service d’hématologie du centre. Cette étude s’est déroulée

de mars à août 2006.

L’approche méthodologique choisie, permet de caractériser la situation de la maladie

dans la cuvette de Ouargla. Elle permet de rechercher, de déterminer la fréquence et

l'évolution de cette maladie dans le temps. Il faut noter que la cuvette de Ouargla n’a qu'un

seul hôpital pourvu des dossiers des malades de l’hépatite.

3.3.- Matériels

3.3.1.- Matériel biologique

Il est constitué par du sang. Le plasma non hémolysé est recueilli des patents dans des

tubes héparine en vu de leur étude. A cet effet le patient doit se présenter le matin à jeun.


32

3.3.2.- Appareillage

Il se compose de:

• Spectrophotomètre semi automatique de type EKMA INC AE600,

• Centrifugeuse de type JOUAN,

• Micropipettes fixes de 500µL et de 50 µL,

• Portoirs.

A cet ensemble il faut ajouter

• Embouts bleus, et embouts jaunes,

• Tubes héparines en plastique,

• Tubes à hémolyse en verre,

• Eau distillée,

• Gants.

3.2.3.- Réactifs

a/- Réactifs utilisés pour le dosage de GPT

- 2-Oxoglutarate 12 m mol/l.

- L-Aspartate 200 m mol/l.

- MDH 545 Ul/l.

- LDH 909 Ul/l.

- NADH ≥ 0.18 m mol/l.

- Tampon Tris (7.80) 80 m mol/l.

b/- Réactifs utilisés pour le dosage de GOT

- α- cétoglutarate 176 m mol/l.

- L- Aspartate 660 m mol/l.

- LDH ≥ 1650 U/l.

- NADH 2.64 m mol/l.

- Tampon Tris (7.80) 121 m mol/l.


33

3.4.- Mode opératoire

3.4.1.-Prélèvement : Il a lieu chez les patients qui se présentent au service d’hématologie. Il

est effectué à jeun dans des tubes héparines.

3.4.2.- Enregistrement: Tout tube de prélèvement arrivant au laboratoire est accompagné

d’une demande d’analyse où sont précisés les tests à pratiquer. Le nom et le prénom du

patient, le service et la date sont notés sur le tube. Ces informations sont consignées sur un

registre de laboratoire comme archive.

3.4.3.- Centrifugation: Une centrifugation de l’échantillon à 4000 tours par minute pendant

10 minutes est effectuée.

3.4.4.- Dosage: Méthode enzymatique cinétique recommandée par l’I.F.C.C. est réalisée.

a/- Dosage de GOT

- Principe: Comme ni le substrat, ni le produit de l’ASAT dont on mesure l’activité ne

possèdent des propriétés spectrale particulières, la réaction principale catalysée par cette

enzyme, est couplée à une 2ème réaction appelée indicatrice, cette dernière est catalysée par

une déshydrogénase, dont le substrat est le produit de la 1èreenzyme.

• Réaction principale

ASAT

1

L-Aspartate + 2-Oxoglutarate Oxaloacétate +L-Glutamate.

2

Le dosage consiste à utiliser le sens (1) de la réaction et évaluer la quantité

d’oxaloacétate formée. On utilise pour cela la réaction enzymatique suivante comme réaction

indicatrice.

• Réaction indicatrice

MDH

Oxaloacétate + NADH+H+ L-Malate + NAD+


34

L‘enzyme est la malicodéshydrogénase qui fonctionne en présence de NAD réduit, la

quantité de NAD oxydé (NAD+) est proportionnelle à la quantité d’acide oxaloacétique

présent, donc à l’intensité de l’activité transaminasique GOT recherchée. La transformation

de la forme réduite du coenzyme en sa forme oxydée, est très facile à mesurer, puisque ce

coenzyme dans l’ultra violet, un spectre caractéristique qui dépend de son état d’oxydation

spécialement intéressant à la longueur d’onde de 340 nm.


COOH COOH COOH COOH

׀ ׀ ׀ ׀

CH2 CH2 GOT CH2 CH2

׀ ׀ ׀ ׀

CH-NH 2 + CH2 C=O + CH2

׀ ׀ ׀ ׀

COOH C=O COOH COOH

׀

COOH

Aspartate α-Cétoglutarate Oxaloacétate Glutamate


COOH

MDH ׀

CH2

׀

C=O

+NADH,H+ NAD ׀

COOH

Oxaloacétate

COOH

│ CH2

│

CHOH │ COOH

Malate


35

- Préparation des réactifs

Ajouter au contenu du flacon la quantité d’eau distillée indiquée sur l’étiquette.

Mélanger doucement et laisser incuber pendent 20 minutes à température ambiante. La

conservation se fait à + 4°C, jusqu’à la date de péromption du coffret, après reconstitution, 30

jours de +2 à +8 °C.

- Mode opératoire

• Programmation de l’appareil :

- Volume d’aspiration 500 µl

- Trajet optique 1 cm

- Longueur d’onde 340 nm

- Température 37°C

Introduire dans un tube à hémolyse 500µl du réactif (par la micropipette de 500µl), et

50µl du plasma héparine (par la micropipette de 50µl).

• Mélanger, et lire au spectrophotomètre.

• Le résultat (concentration de GOT en Ul/l s’affiche sur l’écran de l’appareil).

• Le résultat imprimé parallèlement à l’affichage.

b/- Dosage de GPT

- Principe: Comme la GOT, le dosage de la GPT (ALAT), nécessite deux réactions, la

première est la réaction principale, catalysée par la GPT, la deuxième est la réaction

indicatrice catalysée par une déshydrogénase qui fonctionne en présence de NAD réduit.


ALAT

1

L-Alanine + α-Cétoglutarate Pyruvate + L-Glutamate

2

Le dosage consiste à utiliser le sens (1) de la réaction et à évaluer la quantité du

pyruvate formé en utilisant la réaction enzymatique suivante.


36


LDH

Pyrivate + NADH+H+ Pyruvate + Lactate + NAD+

L’enzyme est le lactate déshydrogénase.



- Préparation des réactifs: Ajouter au contenu du flacon la quantité d’eau distillée indiquée

sur l’étiquette. Mélanger doucement et laisser pendant 20 minutes à température ambiante. La

conservation a lieu à + 4 °C, jusqu’à la date de péremption du coffret ; après reconstitution 30

jours de + 2 à + 8 °C.

- Mode opératoire : Le mode opératoire est le même que celui utilisé pour le dosage de

GOT.

CH3 COOH CH COOH ׀ ׀ ׀ ׀

CH-NH2 CH2 GPT C=O CH2

׀ ׀ ׀ ׀ COOH + CH2 COOH + CH2

׀ ׀ C=O CH-NH2

׀ ׀ COOH COOH

L-Alanine α-cétoglutarate pyruvate L-glutamate

CH3 CH3

׀ LDH ׀ C=O CHOH

׀ ׀ COOH COOH NADH+H+ NAD+

Pyruvate Lactate

Chapitre IV: Résultat et déscution

39

4.1.- Résultats

L’étude statistique comprend plusieurs répartition, selon le sexe, selon l’âge et les

concentrations de GOT et GPT. Ceci permet de déceler si elles existent les différences entre

les résultats obtenus selon le facteur sexe, le facteur âge et l’enzyme dosée (GOT ou GPT).

Elle porte aussi sur une recherche étiologique qui montre l’intérêt du dosage des

transaminases comme moyen de diagnostic des atteintes hépatiques et un cas particulier, voir

l’intérêt de cet examen dans le suivi de ces atteintes.

Les résultats du tableau 4 laissent remarquer que dans les échantillons examinés, sur

les 120 patients, il se retrouve 40% ayant une concentration de GOT supérieure à la normale,

et 60% dont la concentration de GOT demeure normale. Parmi les patients présentant un de

GOT élevé sur les 48 cas enregistrés, on note 32 hommes et 16 femmes. Durant cette étude les

hommes semblent plus disposés à présenter GOT élevé par rapport aux femmes.

Tableau 4: Répartition des patients selon le taux de GOT

Paramètres Concentration normale Concentration élevée

Nombre de patients Pourcentage Nombre de patients Pourcentage

Hommes 32 26.67 32 26.67

femmes 40 33.33 16 13.33

Total 72 60 48 40

Parallèlement les résultats du tableau 5 montrent que sur les échantillons des 120

patients, 36.67% ont une concentration de GPT supérieure à la normale, et 63.33% qui on une

concentration de GPT normale. Sur un total de 44 patients présentant un GTP élevé on note de

même 31 hommes et 13 femmes.

Tableau 5: Répartition des patients selon leur taux de GPT

Paramètres

Concentration normale Concentration élevée

Nombre des patients Pourcentage Nombre des patients Pourcentage

Hommes 33 27.5 31 25.83

Femmes 43 35.83 13 10.84

Total 76 63.33 44 36.67


40

Toutefois la répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GOT, la figure 8

montre que 60% des patients ont des taux de GOT inférieurs ou égaux à 40 µl/l, 17.5% des

patients ont des taux de GOT allant de plus de 40 à 100 µl/l, donc de plus d’une foie la

normale à 2.5 la normale, ce qui signifie qu’ils ont un syndrome de cytolyse modéré ; 15.83%

des patients ont des taux de GOT allant de plus de 40 à 100 µl/l, donc de 2.5 à 5 fois la

normale. Ce qui signifie qu’ils ont un syndrome de cytolyse peu important et seulement

6.67% des patients ont des taux de GOT supérieurs à 200µl/l, donc plus de 5 fois la normale.

Ce qui signifie qu’ils ont un syndrome de cytolyse important.

0

10

20

30

40

50

60

concentration deGOT(Ul/l)

Figure 8- Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GOT.

Pour la répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GPT, la figure 9

montre de même que 63.33% des patients ont des taux de GPT inférieurs ou égaux à 45 µl/l,

19.17% des patients ont des taux de GPT allant de plus de 45 à 112.5Ul/l donc de plus d’une

foie la normale à 2.5 la normale. Ce qui signifie qu’ils ont un syndrome de cytolyse modéré,

10.83% des patients ont des taux de GPT allant de 112.5 à 225 Ul/l, donc de 2.5 la normale;

ce qui signifie qu’ils ont un syndrome de cytolyse peu important ; mais 6.67% des patients ont

des taux de GPT supérieurs 225 µl/, donc plus de 5 fois la normale, ce qui signifie qu’ils ont

un syndrome de cytolyse important.

Pourcentage

concentration


41

0

10

20

30

40

50

60

70

45 45-112,5

112,5-225

225

concentration deGPT

Figure 9- Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GPT.

Au des résultats du tableau 6(voir l’annexe), il n’existe pas une différence significative

entre les valeurs de GOT selon le sexe ; donc le taux de GOT ne diffère pas selon le sexe.

Tableau 10: Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GPT selon le

sexe

Femmes Hommes

Nombre 13 31

Moyenne 178.05 186.09

Il en est de même au vu des résultats du tablea10, qu’il n’existe pas une différence

significative entre les valeurs de GPT selon le sexe, d’où le taux de GPT ne diffère pas selon

le sexe. Toutefois la répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GOT selon

l’age, la figure 10 montre des patients appartenant à la tranche d’âge de 5 à 15 ans présentent

6.25 % des malades ayant des valeurs pathologiques de GOT avec une moyenne de

47.33Ul/l ; des patients appartenant à la tranche d’age de 15 à 25 ans représentent 25% avec

une moyenne de 180.17Ul/l, des patients appartenant à la tranche d’âge de 25 35 ans

représentent 27.08% avec un moyenne de 110.76Ul/l et des patients appartenant à la tranche

d’âge de 35 à 45 ans représentent 20.83% avec un moyenne de178.72Ul/l. Toutefois les

patients appartenant à la tranche d’age de 45 à 65 ans représentent 16.66% avec un moyenne

de 231 Ul/l. Donc le taux de GOT augmente avec l’age.

Pourcentage

concentration


42

0

50

100

150

200

250

5 -15 ans

15 -25ans

25 -35ans

35 -45ans

45 -65ans

concentration deGOT

Figure 10- Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GOT selon l’age.

Pour la répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GPT selon l’âge, la

figure 11 montre des patients appartenant à la tranche d’âge de 5 à 15 ans représentent un

pourcentage de 4.34% des malades ayant des valeurs pathologiques de GPT avec une

moyenne de 73.5Ul/l, des patients appartenant à la tranche d’âge de 15 à 25 ans représentent

28.26% avec une moyenne de 189.28Ul/l, des patients appartenant à la tranche d’âge de 25 à

35 ans représentent 28.26% avec un moyenne de 129.08Ul/l et des patients appartenant à la

tranche d’âge de 35 à 45 ans représentent 19.56% avec un moyenne de 219.54Ul/l. Les

patients appartenant à la tranche d’âge de 45 à 65 ans représentent 16.66% avec un moyenne

de 222.12 µl/l. De même le taux de GPT augmente avec l’âge.

pourcentage

age


43

0

50

100

150

200

250

5-15ans

25-35ans

45-65ans

concentratin deGPT(Ul/l)

Figure 11- Répartition des patients ayant des valeurs pathologiques de GPT selon l’âge

Pour la recherche étiologique, la sérologie virale l’hépatite B est diagnostiquée par des

tests sérologiques spécifiques de l’infection à HBV. Mais l’hépatite C est diagnostiquée par

exclusion puisqu’il n’ y a pas de marqueurs sérologiques spécifiques pour l’hépatite non-A,

non-B (AGNERAY 1988). En cas d’hémochromatose le taux de fer sérique est élevé,

l’hyperferritinémie (>1000g/l) traduit ne surcharge importante en fer et la saturation de la

transferrine est alors toujours franchement élevé (souvent supérieure à 80%) (WILLE ,1994).

La Biopsie du foie est utilisé pour identifier la cause ou le stade d’une maladie du foie.

La fibrose s’exprime par des scores (KNODELL ou METAVIAL). Le stade le plus grave

étant la cirrhose. Toutefois pour BOUVINOT et al (1995), les médicaments métabolisés par le

foie, ou leur métabolite intermédiaire, peuvent être à l’origine de lésions hépatiques (donc

élévation des transaminases).

Le tableau 10 (voir l’annexe) montre les résultats de la recherche étiologique chez les

48 patients ayant des concentrations de GOT sériques supérieurs à la normale. L’enquête

étiologique a permis de constater que 56.25% (27 patients) ont l’hépatite B. Cette forme

d’hépatite gagne de plus en plus les malades présentant cette pathologie.

pourcentage

age


44

Tableau 11: Répartition des patients selon les résultats de la recherche étiologique

Nombre de patients Pourcentage

Hépatite C et hémochromatose. 4 8.33

Hépatite C, hémochromatose

et L.B et/ou c.v.o

1 2.08

Hépatite B 27 56.25

Hémochromatose et prise

médicamenteuse

1 2.08

L.B et/ou c.v.o et prise

médicamenteuse

2 4.17

Prise médicamenteuse 3 6.25

Causes non déterminées 10 20.83

La figure 12 laisse apparaître selon l’âge les résultats de l’enquête. Plus de 77% des

malades ont un age entre 20 et 40 ans. Les patients concernés par la présente étude viennent

des localités du Ksar, de Bamendil, Sokra, Beni Thour.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Ksar Bamendil Sokra BeniThour

≤20 ans

20- 40ans

≥40 ans

Figure 12- Répartition des malades d’hépatite B selon l’age et les zones

zones

pourcentage


45

Les résultats de la figure 13 montre que la majorité des malades de l’hépatite (surtout

l’hépatite B) sont des hommes avec un pourcentage de 88.89 %. Ce constat est presque

identique dans toutes les zones.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

ksar Ruissat Hdeb Sokra ex-ITAS Ifri

Hommes

Femmes

Figure 13- Répartition des malades d’hépatite B selon le sexe et les zones

4.2.- Discussion

Il est connu que le foie représente un organe cible au cours de la maladie hépatique,

son atteinte peut être multifactorielle, par fois intriquée avec même un effet potentialisation,

qui aggrave la dégradation de la fonction hépatique et aboutit à une insuffisance

hépatocellulaire grave, voire fatale. La présente étude recherche une méthode pour surveiller

d’une manière continue la fonction hépatique par le dosage des transaminases sérique, ce

marqueur peut renseigner sur l’importance de cette atteinte et orienter dans la recherche

étiologique.

Sur les 120 patients, 40% donc un tiers présente un taux élevé de GOT, ce qui

représente une proportion importante parmi les malades suivis. La comparaison des résultats

de dosage de la GOT sérique selon le sexe a montré qu’il n y a pas une différence

significative entre l’élévation des transaminases sériques entre les deux sexes ce qui est

pourcentage

zones


46

confirmé par ARNAL et GIROT (2000). La répartition des taux sériques de la GOT selon

l’âge des patients a montré que plus l’âge avance plus le taux sérique et la GOT est élevé.

Ceci s’expliqué par le fait que le patient hépatique reçoit d’autant plus de transfusion

sanguines qu’il avance dans l’âge, et ces transfusions répétées peuvent être sources de

complications hépatiques à savoir hépatite B et C et hémochromatose responsable de

l’augmentation des transaminases en particulier lorsqu’il y a association des deux (BACHIR

et BEAUVAIS, 1992).

La recherche étiologique effectuée pour les patients ayants des valeurs pathologiques

élevées de GOT sérique a montré qu’effectivement ces patients souffrent de différentes

atteintes hépatiques, il y a 56.25% qui ont une hépatite B, 10.41% qui on une hépatite C,

4.16% qui on une hémochromatose. 12.49% ont une toxicité hépatique due aux médicaments.

Il y a 6.24% qui présente une lithiase biliaire ou c.v.o.

Il a été montré que la consommation de médicaments hépatotoxiques (antalgiques,

anti-inflammatoires non stéroïdiens, morphine, hyréa …) entraîne une augmentation variable

des transaminases et qu’il existe certainement une relation dose-dépendante. Néanmoins la

recherche étiologique a été négative chez 10 patients des taux de GOT modérément élevés.

Cette situation semble en rapport avec des crises hépatiques transitoires ou un syndrome de

bile épaisse, ou une prise médicamenteuse non précisée.

Conclusion Générale

48

Les transaminases sont des marqueurs biologiques, dont le dosage est simple,

reproductible et facile à interpréter. Elles peuvent être un paramètre qui oriente vers une

atteinte hépatique ; mais également le suivi de ces malades. Toute fois leur augmentation peut

être transitoire, lors d’une crise vaso-cclusive ou une hépatite virale aigue, ou céder à l’arrêt

d’un médicament toxique.

La constatation d’un taux constamment élevé doit amener à une recherche étiologique

notamment une hémochromatose ou une hépatite virale post-transfusionnelle ; mais

également la recherche d’une cause en rapport avec la maladie notamment une hépatite B.

Le dosage régulier des transaminases au centre d’hématologique de l’hôpital

MOHAMED BOUDIAF à Ouargla a permis de dépister un certain nombre d’étiologie. Cette

étude statistique et analytique montre la possibilité d’une surveillance itérative et régulière de

la fonction hépatique par le dosage des transaminases. La vulgarisation de la technique

méconnue auprès du public de la localité de Ouargla est recommandée pour ce type

pathologie. Ceci permet d’éviter un problème de cette santé publique demeurant endémique

pour la région.

REFERENCES BIBILIOGRAFIQUES

1-AGNERAY J., FERARD G., FRUCHART J. C., JARDILIER J. C., METAIS P., REVL A.,

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2-AGNERAY J., FERARD G., FRUCHART J.C., JARDILIER J.C., METAIS P., REVL A.,

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biochimiques, tome 2, 3ème édition, Doin éditeur, Paris :123 – 125.

4-BENHAMON J. P., CHRETIEN J., COLOARC.M, CONTAMIN.F, ESCANDRE.J.P,

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biochimie médicale 2 : Métabolisme et régulation . : Masson. Paris :33-34.

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1982. BORDAC. Paris: 82 -96.

7-HAMES .B.D, HOOPER .N .M, HOUGHTON.J.D, 2000. L’essentiel en biochimie. Port

royal livres. Paris : 54 – 122.

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9-Laboratoire centrale de l’hôpital MOUHAMED BOUDIAF. (Pratique 6 mois)

10-MARTIN.A, introduction de laboratoire de biochimie médicale.Paris: Ellipses, 1995.

11-PELMONT .J Enzymes, 1993, office des publications universitaire:48 – 133.

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Annexe

Annexe 1 : Répartition de l’hépatite B dans le monde :( www.chu-rouen.fr)

Annexe 2 : Virus de l’hépatite B : (fr.encarta.msn.com)

Annexe 3: La structure du virus de l’hépatite B : (www.hepnet.com)

Annexe

Annexe 4: Recueil des résultats.

Mois Patients Sexe Age GOT GPT Mars 1 H 28 12 8 2 F 20 10 7 3 H 51 80 125 4 H 46 20.1 32.5 5 F 18 30.2 20.01 6 H 35 108.1 57.7 7 H 45 98.2 68.9 8 F 30 15 20 9 H 53 30 21 10 H 40 92 115 11 F 8 4 16 12 F 25 134 109 13 F 45 170 103 14 H 17 7 06 15 H 24 199 123 16 H 22 109 74 17 H 28 273 181 18 H 27 656 540 19 H 40 703 1158 20 H 25 99 240 Avril 21 F 11 42 28 22 F 39 40 17 23 H 18 24 18 24 F 54 854 871 25 H 24 51 34 26 H 45 40 38 27 F 15 7 18 28 F 60 60 70 29 H 23 121 170 30 F 36 12 8 31 H 43 28 14 32 F 17 17 30 33 H 40 211 141 34 F 42 19 23 35 F 43 20 17 36 H 47 06 23 37 F 20 127 136.1 38 H 43 28 37 39 H 57 182 103 40 F 18 57 80 Mai 41 F 12 16 20 42 H 43 23 28 43 H 15 32 38 44 F 7 31 36 45 F 19 27 30 46 F 30 26 32

Annexe

47 H 47 19 24 48 H 14 53 84 49 F 60 30 40 50 F 37 10 28 51 H 25 12 22 52 F 23 30 40 53 H 65 12 27 54 F 44 134 118 55 F 10 36 27 56 H 26 172 132 57 F 24 130 142 58 F 15 47 63 59 H 21 525 293 60 H 45 37 26 Juin 61 H 25 27 31 62 H 55 10 17 63 H 14 16 20 64 F 23 20 24 65 H 23 10 12 66 F 12 10 14 67 F 7 13 18 68 F 28 22 24 69 F 48 107 89 70 H 16 36 39 71 F 20 12 15 72 F 21 20 22 73 F 5 10 12 74 F 13 20 25 75 F 22 10 11 76 F 35 16 13 77 F 14 14 11 78 H 26 15 20 79 H 28 19 23 80 F 18 150 175 Juillet 81 H 13 8 12 82 H 6 9 14 83 F 22 14 20 84 H 36 118 116 85 F 10 10 16 86 H 5 8 12 87 H 24 77 75 88 H 5 10 14 89 H 55 59 82 90 F 13 7 10 91 F 10 8 12 92 H 29 288 696 93 F 38 23 33 94 H 32 56 73

Annexe

95 H 45 138 93 96 F 17 31 32 97 H 52 10 5 98 H 30 54 85 99 H 27 5 33 100 F 7 5 18 Août 101 F 53 327 300 102 H 33 172 132 103 F 53 179 137 104 F 13 11 15 105 H 21 61 61 106 F 22 124 25 107 H 22 19 21 108 F 28 163 83 109 H 36 185 110 110 F 31 34 65 111 H 19 20 33 112 F 45 76 20 113 H 27 85 76 114 H 44 47 63 115 H 10 27 30 116 H 38 21 24 117 H 29 87 290 118 F 16 18 20 119 F 27 17 19 120 H 28 48 50

Annexe

Tableau 6: répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GOT :

≤40 (Ul/l) 40-100 (Ul/l) 100-200 (Ul/l) >200 (Ul/l)

Nombre 72 21 19 8

Pourcentage (%) 60 17.5 15.83 6.67

Tableau 7: Répartition des patients en 4 tranches selon leur taux de GPT :

≤45 45-112.5 (Ul/l) 112.5-225Ul/l >225

Nombre 76 23 13 8

Pourcentage (%) 63.33 19.17 10.83 6.67

Tableau 8: Répartition des patients ayant les valeurs pathologiques de GOT selon l’age :

5-15 ans 15-25 ans 25-35 ans 35-45 ans 45-65 ans

Nombre 3 12 13 10 8

Pourcentage

(%)

6.25 25 27.08 20.83 16.66

Moyenne

(Ul/l)

47.33 180.17 110.76 178.72 231

Tableau 9: Répartition des patients ayant les valeurs pathologiques de GPT selon l'age:

5-15 ans 15-25 ans 25-35 ans 35-45 ans 45-65 ans

Nombre 2 13 13 9 8

Pourcentage

(%)

4.34 28.26 28.26 19.56 16.66

Moyenne

(Ul/l)

73.5 189.28 129.08 219.54 22.12

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UNIVERSITE KASDI MERBAH OUARGLA...Co-promoteur: Mr. DADA MOUSSA K. Biochimiste. Hôpital Mohamed Boudiaf. Examinateur : Melle. MIMOUNI YAMINA Ass. . Université. Ouargla Année Universitaire