Introduction.– Chez les malades cirrhotiques, les infectionsbacteriennes, notamment induites par les bacteries a Gram-negatif, s’associent plus souvent a un sepsis severe ou a un chocseptique que dans la population generale et s’accompagnent d’untaux de mortalite anormalement eleve. Une difference dans lareponse immunitaire de ces patients aux produits bacteriens telsque le LPS pourrait expliquer cette severite. C’est pourquoi nousavons compare le profil d’expression genique de cellules mono-nuclees du sang peripherique (PBMCs) de malades cirrhotiques etde sujets sains stimulees par LPS.Materiel et methodes.– Apres avis favorable du CPP, nous avonsutilise une biopuce a ADN pour etudier la regulation des 14,851 et15,334 genes respectivement exprimes par les PBMCs de maladescirrhotiques et de sujets sains stimules par LPS ex vivo. Une etudede validation a ete realisee par RT-PCR quantitative (RT-qPCR) enmesurant l’expression de 112 genes d’interet dans une cohortede 63 patients et 15 sujets sains. Enfin, la concentration de l’IFNde type 1 IFN-b dans le surnageant de culture a ete mesuree parElisa.Resultats.– Le profil d’expression genique comprenait un groupe de741 genes regules de maniere similaire dans les PBMCs cirrho-tiques et sains. Parmi eux, 300 genes stimules par LPS etaientimpliques dans la regulation de la proliferation des cellulesmononuclees et la production de cytokines. A l’inverse, les441 genes inhibes par le LPS intervenaient dans la reconnaissancedes produits bacteriens, la migration cellulaire et le compartimentlysosomal, suggerant que l’« immunoparalysie » induite par LPS estune reponse universelle. La comparaison des fonctions des1,356 genes specifiquement regules par LPS dans les PBMCscirrhotiques a celles des 1049 genes specifiquement regules dansles PBMCs sains a permis de definir un phenotype specifique descellules cirrhotiques. A la difference des PBMCs sains, les PBMCscirrhotiques stimules par LPS ne presentaient pas d’induction duprogramme genique dependant des IFNs, critique pour la defenseimmune de l’hote et la resolution de l’inflammation. En RT-qPCR,les genes interferon-dependants non induits par LPS codaient pourdes recepteurs impliques dans la reconnaissance des acidesnucleiques microbiens (TLR3, TLR7 ou DHX58, un RLR) ; deschimiokines (CXCL10, CXCL11) ; des facteurs de transcription(IRF1) ; des GTPases (GBP4 et MX2) et des proteines des famillesIFIT, TRIM et OAS impliquees dans l’immunite intracellulaireautonome. Qui plus est, le LPS stimulait la production d’IFN-b parles PBMCs de sujets sains alors que l’IFN-b etait indetectable dansle surnageant des PBMCs cirrhotiques stimules par LPS.Discussion.– Les PBMCs de malades atteints de cirrhose et de sujetssains presentent des stigmates d’immunoparalysie en reponse a lastimulation par LPS. De plus, les PBMCs cirrhotiques ontspecifiquement un deficit d’induction par le LPS de l’IFN-b etdes genes IFN-dependants impliques dans la defense antimicro-bienne et la resolution de l’inflammation. Ces resultats pourraientexpliquer la severite du sepsis bacterien chez les maladescirrhotiques.

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Le LPS declenche une reponse au stressliee a l’accumulation de proteines malrepliees dans le reticulumendoplasmique (RE) dans les cellulesimmunes de malades cirrhotiquesE. Weiss a,b,*, L. Ouchiha b, M. Fasseu b,P.-E. Rautou c, J. Mantz a,d, R. Moreau b,c,C. Paugam-Burtz a,b,d

a Hopitaux universitaires Paris Nord Val de Seine, Beaujon, AP–HP,departement d’anesthesie reanimations, Clichy, Franceb Inserm U773, centre de recherche biomedicale Bichat-Beaujon, Paris,France

c Hopitaux universitaires Paris Nord Val de Seine, Beaujon, AP–HP,hepatologie, Clichy, Franced Universite Paris-7-Diderot, UFR medecine, Paris, France*Auteur correspondant.

Introduction.– Une reponse pro-inflammatoire au LPS excessive aete mise en evidence dans les cellules immunes de maladescirrhotiques. Elle pourrait etre impliquee dans la surmortalite lieeau sepsis severe et au choc septique de ces malades. Lors decertains stimuli exogenes (ischemie-reperfusion, intoxicationsaigues), une accumulation de proteines mal repliees et nonfonctionnelles dans le RE peut entraıner un stress du RE. Ce stressdeclenche alors une reponse appelee « Unfolded Protein Response »(UPRER) qui implique trois voies (IRE1-XBP1, ATF6 et PERK) etinduit une reaction pro-inflammatoire via NF-kB et JNK, une MAPkinase. Dans les cellules immunes de sujets sains, le lipopoly-saccharise (LPS), l’agent pathogene des bacilles a Gram negatifinhibe l’UPRER. L’effet du LPS sur l’UPRER des cellules immunes demalades cirrhotiques est inconnu. Nous avons donc isole descellules mononuclees du sang peripherique (PBMCs) de maladescirrhotiques et nous avons etudie ex vivo l’effet du LPS ou de latunicamycine, un agent stresseur du RE, sur l’activation de l’UPRER

et sur la reponse inflammatoire.Patients et methodes.– Apres accord du CPP et recueil duconsentement, les PBMCs de 18 patients ont ete cultives enpresence de milieu seul, de tunicamycine (10 mg/mL) et/ou LPS(1 mg/mL). L’induction de huit genes des voies de l’UPRER, septgenes cibles de l’UPRER et 11 cytokines inflammatoires a etemonitoree par RT-qPCR. La production de cytokines et l’activationdes voies NF-kB et MAP kinase ont respectivement ete mesureespar cytometric bead array et western blotting.Resultats.– La tunicamycine activait efficacement l’UPRER puis-qu’elle induisait ses genes cibles et ses composants. La tunicamy-cine augmentait aussi l’expression des genes pro-inflammatoiresTNF, IL1B et IL12B d’un facteur 3 et IL6 d’un facteur 30 en activantles voies NF-kB et MAP kinase. La production des cytokinescorrespondantes etait aussi significativement augmentee enpresence de tunicamycine : 652 vs 129 pg/ml pour TNF-a et22,391 vs 1,007 pg/mL pour IL-6. Le LPS stimulait l’UPRER : ilinduisait les composants des ses trois voies de signalisation (XBP1S,XBP1U, ATF6A, EIF2K1, EIF2K2 et EIF2S1) et ses principaux genescibles tels que HSPA5, HSP90 et EDEM qui codent pour des proteineschaperones aidant au repliement des proteines. Le LPS augmentaitl’induction de toutes les cytokines pro-inflammatoires en stimu-lant les voies NF-kB et MAP kinase. Enfin, le LPS n’inhibait pas l’UPRinduite par la tunicamycine.Discussion.– La stimulation par LPS de cellules immunes demalades cirrhotiques entraıne une reponse au stress liee al’accumulation de proteines mal repliees dans le RE. En stimulantl’inflammation, cette reponse pourrait jouer un role dans lareponse immunitaire au LPS excessive caracteristique des maladescirrhotiques. L’effet de chaperones « chimiques » facilitant lerepliement des proteines sur la reponse immunitaire au LPS de cesmalades pourrait etre teste.

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Comparaison de deux techniques depurification sanguine extracorporelledans un modele de rat en chocseptiqueC. Monard a,*, T. Rimmele a, A. Chuasuwan b,Z. Peng b, M. Kaynar b, J.A. Kellum b

a Anesthesie-reanimation, hospices civils de Lyon, hopital Edouard-Herriot, Lyon, Franceb University of Pittsburgh, Critical Care Medicine, Pittsburgh, Etats-Unis*Auteur correspondant.

Sepsis experimental / Annales Francaises d’Anesthesie et de Reanimation 32S (2013) A337–A341 A339

Introduction.– La purification sanguine extracorporelle est propo-see comme traitement adjuvant immunomodulateur du chocseptique. Les progres recents dans le domaine des membranesd’epuration extrarenale ont permis le developpement de nouvellestechniques. Ces therapies sont tres peu comparees entre elles dansla litterature medicale. L’objectif de cette etude etait de comparerla mortalite de rats en choc septique apres hemofiltrationhautement adsorbante versus apres hemoperfusion.Materiel et methodes.– A j0, 36 rats sous anesthesie generale etaientplaces en choc septique (ligature ponction caecale sans antibio-tique). Dix-huit heures apres l’induction du choc septique, ilsetaient randomises en trois groupes afin de beneficier grace a descircuits extracorporels miniatures soit d’une seance de quatreheures d’hemofiltration hautement adsorbante (membraned’hemofiltration adsorbant les endotoxines, (Oxiris1, Gambro)),soit d’une seance de quatre heures d’hemoperfusion (cartouche debilles adsorbant les cytokines (CytoSorb1, CytoSorbents)), soitd’une seance de quatre heures de circulation extracorporelle sanselement de purification sanguine (groupe temoin).Le critere de jugement principal etait la survie a sept jours (test delog-rank). Par ailleurs, des dosages de cytokines (TNF, GMCSF, IFN-g, IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12) sur echantillonssanguins etaient realises par technique LuminexTM au debut et a lafin de chaque seance.Resultats.– Douze rats ont ete inclus dans le groupe hemofiltration,11 dans le groupe hemoperfusion et 11 dans le groupe temoin(deux rats sont morts avant la randomisation). La survie globale aj7 etait de 66 % dans le groupe hemofiltration hautementadsorbante (8/12), 45 % dans le groupe hemoperfusion (5/11) et18 % dans le groupe temoin (2/11). La mortalite etait significative-ment reduite dans le groupe hemofiltration hautement adsorbantepar rapport au groupe temoin (p = 0,011). Les courbes de survie deKaplan Meier en fonction de la technique de purification sontrepresentees sur la Fig. 1. L’ensemble des dosages de cytokines nemontrait pas de difference significative des profils d’evolutionentre les trois groupes.

Discussion.– Dans ce modele animal de choc septique, l’initiationd’une technique de purification sanguine semble ameliorer lasurvie a j7. L’explication physiopathologique ne parait pas etredirectement liee a une epuration massive de cytokines del’inflammation. La meilleure survie a ete obtenue avec l’hemofil-tration hautement adsorbante, technique « hybride » permettantd’associer non seulement purification sanguine (epuration desendotoxines) mais aussi suppleance renale, contrairement al’hemoperfusion qui est une technique de purification sanguineexclusive. Cette double action est possiblement responsable de labonne reponse au traitement puisque l’incidence de l’acute kidneyinjury etait probablement non negligeable chez ces rats septiques.

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Role de l’axe CX3CR1/CX3CL1 dans lamigration et la mobilite monocytaireau cours du sepsisB. Glenn Chousterman a,b,*, A. Boissonnas a,F. Licata a, J. Adam c, L. Fiette d, D. Payen b,C. Combadiere a

a Laboratoire immunite et infection, Inserm UMRS-945, UPMCuniversite Paris 06, Paris, Franceb Departement d’anesthesie–reanimation–SMUR, EA3509, universiteParis VII–Denis Diderot, hopital Lariboisiere, AP–HP, Paris, Francec Laboratoire de biopathologie, histocytopathologie et biobanque,institut Gustave-Roussy, universite Paris-Sud, Villejuif, Franced Laboratoire histopathologie humaine et modeles animaux, InstitutPasteur, Paris, France*Auteur correspondant.

Introduction.– Le recepteur aux chimiokines (RCh) CX3CR1 est undeterminant majeur de la migration et de l’activation des monocytes(Mo) au cours des processus inflammatoires. Nous avons etudie leseffets de la modulation de cet axe au cours du sepsis.Materiel et methodes.– Nous avons etudie les effets de la modulationdu Rch CX3CR1 dans des modeles murins de sepsis (injectionintraperitoneale de LPS et ponction sur ligature cæcale (CLP)) enutilisant des lignees de souris C57BL6 sauvages (WT), invalideesgenetiquement pour le recepteur (CX3CR1–/–), injectees avec unantagoniste (F1) ou injectees avec l’agoniste naturel du recepteur(CX3CL1 ou Fractalkine, FKN). Nous avons etudie les effets de cesdifferentes conditions sur la mortalite� les lesions anatomopatho-logiques renales et les evolutions des populations leucocytaires parcytometrie en flux. Nous avons egalement analyse en microscopiebiphotonique la mobilite et le comportement des Mo a l’aide derapporteurs fluorescents (CD115-CFP, CX3CR1-GFP, CCR2-RFP). Unevaleur de p < 0,05 etait consideree comme significative, les tests entredifferents groupes ont ete ajustes pour comparaisons multiples.Resultats.– Le deficit du recepteur CX3CR1 est associe a uneaugmentation de la mortalite apres CLP (p < 0,05) et apresinjection de LPS (p < 0,05). Ce phenotype est retrouve lors del’injection de F1 alors que l’injection de la FKN est associee a deseffets opposes. En histologie, la deficience en CX3CR1 est associee aune majoration des lesions tissulaires renales (p < 0,001). Le deficitdu recepteur n’entraıne pas de modifications majeures del’infiltration leucocytaire tissulaire dans les 24 h suivant la CLP.En microscopie biphotonique, on observe une augmentationimportante du nombre de cellules adherentes et des temps decontact Mo-parois vasculaire six heures apres CLP chez les sourisWT (p < 10�4). Comparativement au groupe WT, les sourisCX3CR1–/– et le groupe F1 presentent une diminution de l’adhesionvasculaire des Mo (p < 0,001) alors que dans le groupe FKNl’adhesion et les temps de contact sont augmentes (p < 0,001).Discussion.– Les monocytes semblent jouer un role protecteur surla survenue de lesions renales et la mortalite via leur adhesion auxparois vasculaires par un mecanisme CX3CR1 dependant. L’utilisa-tion d’un agoniste de ce recepteur, la fractalkine, pourrait etre unepiste therapeutique prometteuse.

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Insuffisance renale chronique etsepsis : evaluation hemodynamique etde la reaction inflammatoire dans unmodele experimental murinB. Dehedin a,b,*, J. Maizel a,b, E. Secq a,b,E. Zogheib a,b, S. Dupont a, I. Six a, H. Dupont a,b,M. Slama a,b, Z. Massy a,c,d

a Inserm 1088, Paris, Franceb CHU d’Amiens, Amiens, France

Sepsis experimental / Annales Francaises d’Anesthesie et de Reanimation 32S (2013) A337–A341A340