Les réponses macro et micro-circulatoires et la production de NO

hépatique induits par le choc septique chez la souris.

Edouard LEROY L3 (S6) Licence Sciences et Technologies

mention Biologie, parcours PhysiologieUE « conduite de projet »

Maître de stage : Jeanne-Marie Bonnet-Garin1

Tuteur universitaire : Robert Bonvallet2

2UCBLBatiment Raphael Dubois 43 Boulevard du 11 NOVEMBRE 1918 69622 VILLEURBANNE CEDEX

1ENVLlaboratoire de Physiologie,INSERM ERI 22 : Agressions vasculaires et réponses tissulaires.1,avenue Bourgelat69280 Marcy l'Etoile

• Sepsis = réponse systémique à une infection bactérienne, endotoxique ou fongique

• Choc septique = défaillance circulatoire aiguë• Pronostic vital = sombre : hypotension général et baisse de la

perfusion des organes résistantes aux solutés de remplissage et aux dérivés adrénergiques

• Monoxyde d’azote (NO) impliqué :– 3 NO synthases dont 1 inductible. La NOS inductible s’active lors

du sepsis– Perrella et al. : TGF-β permettrait de diminuer les effets délétère

du NO• Etude sur les effets du TGF-β (thèse en cours de rédaction)

– Première partie : réponses marcro et micro-circulatoires et la production de NO hépatique induites par le choc septique chez la souris, provoqué par une administration de LPS

Problématique - contexte théorique :

Hypothèses :• L’administration de lipopolysaccharides (LPS), endotoxines de

bactéries à Gram négatif, provoque un sepsis puis un choc septique.

• Le sepsis puis le choc septique provoque une diminution du débit.

• La cinétique de la chute de débit n’est pas la même au niveau de la circulation générale et de la perfusion tissulaire.

• La production de NO hépatique augmente après l’administration de LPS.

Méthodes

Procédure chirurgicale

– Induction : richesse du mélange à 2%– Entretien : richesse du mélange à 0,6%

Anesthésie : Isoflurane/O2

Installation

Préparation chirurgicale :

Laparotomie

– Dilacérer le péritoine – Installer la sonde débitmétrique

Appareillage de l’animal :

Induction du choc septique

• Administration de LPS (QSP 0,1 mL) : – G1 (n=3) : 60 mg/kg– G2 (n=2) : 80 mg/kg– G3 (n=3) : 100 mg/kg

• Administration de sérum physiologique (NaCl 9‰) :– G0 (n=4) : 0,1 mL

Paramètre enregistré :

Le débit aortique

Tests statistiques :

• Kruskal-Wallis : test d’identité non paramétrique (pour plus de 2 échantillons)

• Mann-Whitney : test d’identité non paramétrique (pour 2 échantillons)

Résultats :

•Durée de la survie des animaux•Évolution du débit aortique en fonction du

temps après administration du produit (sérum physiologique ou LPS)

Durée de la survie des animaux après administration de LPS

Temps (min) Grpe (dose reçue)

42 G1 (60 mg/kg) 72 G1 (60 mg/kg) 107 G1 (60 mg/kg) 74 G2 (80 mg/kg) 61 G2 (80 mg/kg) 41 G3 (100 mg/kg) 54 G3 (100 mg/kg) 97 G3 (100 mg/kg)

Figure 1. Tableau présentant les durées de survie des animaux après l’administrationde LPS et en fonction de la dose de reçue.

G1 : 74 min ± 9G2 : 68 min ± 7G3 : 64 min ± 17

Résultats présentés : moyennes ± SEM (Standard Error of the Mean = écart type ÷ racine carré de l’effectif)

Réponse macro-circulatoire à l’administration de LPS

**

*

Discussion

• Modèle animale :– L’anesthésie :

• est induite rapidement• provoque un faible biais (12 % ± 7 de diminution

observée dans le groupe témoin)– Les effets du LPS sont observés rapidement– Le coût initial et d’entretien est faible– Il est possible d’obtenir des animaux

transgéniques pour effectuer des investigations plus poussées sur la voie du TGF-β

• Intérêt des lipopolysaccharides :– Effets systémiques rapides– Effets durables entrainant la mort de l’animal

•Choix anesthésique :–Induction avec une richesse du mélange

Isoflurane/02 à 2 %–Entretien avec une richesse du mélange

Isoflurane/02 à 0,6 %

=> Richesse plus faible que dans la littérature (sans diminuer le confort de l’animal) permet de diminuer le biais dû aux effets de l’Isoflurane

Avancées et perspectives• Avancées :–Intérêt du modèle murin confirmé–Intérêt du LPS confirmé–Protocole anesthésique affiné• Perspectives :

– Résultats, en parallèle, de la perfusion hépatique– Résultats de la production de NO hépatique–Utilisation de souris KO pour le TGF-β dans certains

tissus– Test d’un médicament (Tamoxifène®) activateur de la

voie du TGF-β

Amélioration du pronostic vital des patients en état de choc septique

MERCI DE VOTRE ATTENTION