Gram+ Gram-

Coques CoquesBacilles Bacilles

TEST CATALASE TEST OXYDASE

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Cat+ Cat- Cat+ Cat- Oxy+ Oxy- Oxy+ Oxy-

ORIENTATION DE L’IDENTIFICATION

DIAPO4

MACRO-GALERIE

Exploration du:Métabolisme énergétique Métabolisme glucidiqueMétabolisme protidique

Métabolisme énergétique

VFHugh et LeifsonBouillon nitraté

Type respiratoire

Voie d’attaque du glucose

Présence de Nitrate réductase

Différences entre respiration et fermentation

Les bactéries chimiotrophes oxydent des molécules organiques et réduisent des

coenzymes (NAD+, FAD+, NADP+ ...)

Leur réoxydations passent :

- par une chaîne de transporteurs avant de réduire un accepteur final, on parle

de respiration (O2 = respiration aérobie, NO3-, NO2-, SO42-... = respiration anaérobie)

- par une molécule organique interne, on parle de fermentation

Un glucide utilisé prouve que la bactérie peut le faire pénétrer a les enzymes permettant son hydrolyse en ose et possède le métabolisme d'utilisation l'ose.

Mise en évidence : d'un produit ou de l'utilisation du substrat d'une enzyme

Lecture des résultats par acidification ou alcalinisation du milieu et virage d'un indicateur coloré par la mise en évidence d'un produit formé (chromogène) par culture sur un milieu présentant un substrat unique

Métabolisme glucidique

Métabolisme glucidique

Citrate Simmons

Hajna Kligler

Disque ONPG

Mannitol mobilité nitraté

Clark Lubs: VP et RM

Utilisation du citrate comme source unique de C.

Utilisation du glucose, du lactose Production de H2S, de gaz.

Mise en évidence de l’ONPG hydrolase

Utilisation du mannitol +Mobilité.

+ Présence de nitrate réductase.

Type de fermentation:

Acide mixte (RM), Butanediolique (VP).

• On étudie – La capacité d’hydrolyser une protéine– La dégradation de différents acides aminés ou de

dérivés azotés comme l’urée

• Mise en évidence – De produit de réaction enzymatique

• Lecture des résultats– par présence d’un indicateur de pH (LDC,ODC, ADH,

Uréase) – par l’ajout d’un réactif (Tryptophanase)– par l’utilisation d’un produit visible à l’œil nu (TDA)

Métabolisme protidique

Métabolisme protidique

Urée indole

ADH, LDC, ODC

Gélatinase

Présence de l’uréase

Présence de la TDA

Présence d’une tryptophanase ou Production d’indole

Présence de l’arginine dihydrolase

Présence de la lysine décarboxylase

Présence de l’ornithine décarboxylase

Présence d’une protéase

Milieu VF

• OBSOBS: Culture dans tout le tube

• INTINT: Bactéries cultivant en présence et en absence d’O2

• CC°:CC°: Bactéries aéro-anaérobies

Milieu Hugh et Leifson

• OBS:OBS: Virage coloré du vert au jaune en condition aérobie et anaérobie

• INT:INT: Acidification du milieu en condition aérobie et anaérobie

• CC°:CC°: Voie d’attaque du glucose fermentaire sans exclure la voie oxydative

Métabolisme glucidique

Citrate Simmons

Hajna Kligler

Mannitol mobilité nitraté

Clark Lubs: VP et RM

Utilisation du citrate comme source unique de C.

Utilisation du glucose, du lactose Production de H2S, de gaz.

Utilisation du mannitol.

Mobilité.

Présence de nitrate réductase.

Type de fermentation:

Acide mixte (RM), Butanediolique (VP).

Milieu Hajna Kligler : un exempleCulot:Culot:

OBSOBS:Virage du RP du rouge au jaune.

INT:INT: Acidification du milieu donc le Glu a été fermenté en composés acides.

CC°:CC°:Glu+

OBS:OBS:Présence de bulles.

INT:INT: La fermentation du glucose s’accompagne d’une production de gaz provoquant la fragmentation de la gélose.

CC°:CC°: Gaz+

Pente:Pente:

OBS:OBS: Virage du RP du rouge au Jaune.

INT:INT: Acidification du milieu, le glucose est utilisé en 1er mais comme il est en faible quantité la croissance se poursuit grâce à l’utilisation du Lactose.

CC°:CC°: Lac+

Jonction culot-pente:Jonction culot-pente:

Pas de production d’H2S. H2S-

Test ONPG

• OBS:OBS: Apparition d’une coloration jaune

• INT:INT: Hydrolyse de l’ONPG en ONP

• CC°:CC°: Présence de beta galactosidase

Bactérie beta galactosidase +

Citrate Simmons

• OBS:OBS: Absence de culture sur milieu citrate Simmons

• INT:INT: Bactérie ne pouvant pas cultiver avec le citrate comme seule source de C.

• CC°:CC°: Bactérie Citrate -

Milieu Mannitol mobilité Nitraté

• OBS:OBS: Virage coloré du rouge au jaune

• INT:INT: Acidification du milieu Utilisation du mannitol

• CC°:CC°: Bactérie Man+

• OBS:OBS: Trouble autour de la piqûre centrale.

• INT:INT: Diffusion de la bactérie dans la gélose

• CC°:CC°: Bactérie Mob+• OBS:OBS: Coloration rouge après ajout de

Réactif de Griess

• CC°:CC°: Bactérie a transformé les nitrates du milieu en nitrites Bactérie NRB+

• INT:INT: Présence de nitrites.

Test RM

Test VP

+RM

+Naphtol+NaOH

Milieu Clark Lubs

Test RM

• OBS:OBS: Coloration rouge

• INT:INT: Acidification du milieu Utilisation du glucose et production d’acides mixtes pH<4.5

• CC°:CC°: Bactérie RM+ réalisant la fermentation acide mixte

Test VP

• OBS:OBS: Absence de Coloration rouge vif en surface

• INT:INT: Présence d’acétoine

• CC°:CC°: Bactérie VP+ réalisant la fermentation butanediolique

Métabolisme protidique

Urée indole

ADH, LDC, ODC

Présence de l’uréase

Présence de la TDA

Production d’indole

Présence de l’arginine dihydrolase

Présence de la lysine décarboxylase

Présence de l’ornithine décarboxylase

Milieu urée-indole

Ensemencé avec la bactérie

TDA -

TDA +

INDOLE -

INDOLE +

Lecture directe de l’uréase

UREASE -

UREASE +

+ FeCl3

+Kovacs

Test uréase Test TDA Test Indole

Milieu Urée Indole

Test uréase

• OBS:OBS: Milieu orangé

• INT:INT: Absence de dégradation de l’urée

• CC°:CC°: Bactérie uréase-

Test TDA

• OBS:OBS: Milieu jaune

• INT:INT: Pas de production d’acide indole pyruvique, la bactérie ne possède pas la tryptophane désaminase.

• CC°:CC°: Bactérie TDA-

Test Indole

• OBS:OBS: Coloration rouge vif en surface

• INT:INT: Production d’indole grâce à la présence chez la bactérie d’une tryptophanase.

• CC°:CC°: Bactérie indole+

ADH LDC ODC

ADH, LDC, ODC

Test ADH

• OBS:OBS: Coloration jaune du milieu

• INT:INT: Les bactéries ont acidifié le milieu à partir du glucose mais ne l’ont pas réalcalinisé en utilisant l’arginine, les bactéries ne possèdent pas d’arginine dihydrolase.

• CC°:CC°: Bactérie ADH-

Test LDC

• OBS:OBS: Coloration violette du milieu

• INT:INT: Les bactéries ont acidifié le milieu à partir du glucose puis réalcalinisé en décarboxylant l’acide aminé la lysine

• CC°:CC°: Bactérie LDC+

Test ODC

• OBS:OBS: Coloration violette du milieu

• INT:INT: Les bactéries ont acidifié le milieu à partir du glucose puis réalcalinisé en décarboxylant l’ornithine.

• CC°:CC°: Bactérie ODC+

• Bactéries: Bacille Gram-, oxydase-, AAF, voie d’attaque fermentative, NR+.

– Enterobactérie

• Glc+, Lac+, H2S-, Gaz+, Man+, Mob +, ODC+, LDC+, ADH-, Ind+ uré-, TDA-, RM+, VP-,.

-- -- +/-+/- -- ++-- -- -- +/-+/- - - HH22SS

-- ++++-- -- -- -- -- -- - - PDAPDA

++-- ++-- -- -- ++-- -- - - UréeUrée

+ *+ *++++-- ++++--++++++Mob.Mob.

-- +++/-+/- -- +/-+/- ++++++++- - CitrCitr

+ *+ *-- -- -- -- ++++++-- - - VP (Acétoïne)VP (Acétoïne)

+/-+/- +++/-+/- +/-+/- -- -- +/-+/- -- -- ++IndoleIndole

++-- -- +/-+/- -- ++++++++++ONPGONPG

-- -- -- -- -- -- ++++++++LactLact

++++++++++++++  ++

++++GlcGlc

Yersin

ia

Providencia

Proteu

s

Shigella

Salm

onella

Serratia

Klebsiella

Entero

bacter

Citro

bacter

Escherichia

Escherichia