Congrès québécois en sciences de la santé

Journée Phare 2016

Programme et résumés

8e Édition

1-2 décembre 2016Hôtel Château-Bromont

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Table des matières

Mot de bienvenue 3

Comité organisateur 4

Notes biographiques

Jean-François Cloutier, PhD 5

Louis Gendron, PhD 6

Pieter Cullis, PhD, FRSC 7

Elena Verdù, MD, PhD 8

Marie-Ève Tremblay 9

Programme de l’événement 10

Présentations orales 13

Présentations par affiches 22

Index des présentateurs 108

Remerciements 109

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Bienvenue !

Bienvenue à cette 8e édition de la Journée Phare. Cette année, la Journée Phare vous accueil dans

le magnifique Hôtel Château-Bromont pour rassembler plus de 250 participants provenant des

diverses universités et centres de recherche du Québec et de l’Ontario. Organisée par un

regroupement formé d’étudiants aux études supérieures de l’Université de Sherbrooke en

collaboration avec des étudiants provenant de l’Université Laval, de l’Université de Montréal, de

McGill University, de l’Université d’Ottawa et accompagné d’un professeur, cette initiative

représente le plus grand rassemblement scientifique organisé par des étudiants gradués. Cette

année, d’éminents conférenciers ont été invités à présenter leurs plus récentes découvertes et plus

de 100 présentations étudiantes y seront présentées à l’oral et par affiche. Notre but est d’offrir une

plateforme d’échanges scientifiques inégalée en recherche en sciences de la santé où étudiants

gradués, professeurs, médecins et conférenciers de grande renommée sont invités à présenter la

recherche de pointe et les innovations en sciences de la santé. Nous désirons ainsi offrir une

opportunité éducationnelle et une valorisation scientifique hors du commun et permettre

l’établissement de réseaux de contacts et les collaborations.

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Membres du comité organisateur :

Le comité organisateur de la Journée Phare est formé d’étudiants dynamiques, dévoués et aux idées

novatrices et soucieux de stimuler l’effervescence de la recherche. Ils travaillent à rendre ce projet

rassembleur des plus ambitieux, rigoureux et complet année après année.

Présidente : Élora Midavaine

Étudiante au doctorat en physiologie, membre du comité depuis 2013

Vice-présidente et responsable des communications : Rebecca Brouillette

Étudiante à la maitrise en physiologie

Responsable des finances : Hugo Giguère

Étudiant au doctorat en pharmacologie, membre du comité depuis 2014

Responsable de la logistique : Erwan Lanchec

Étudiant au doctorat en pharmacologie, membre du comité depuis 2015

Adjoint à la logistique : Kien Tran

Étudiant au doctorat en pharmacologie

Responsable de la promotion : Scarlette Abbou

Étudiante à la maitrise en microbiologie

Conseillère : Catherine Duclos

Étudiante au doctorat en pharmacologie, membre du comité depuis 2012

Conseiller : Julien Malette

Étudiant à la maîtrise en pharmacologie

Représentante étudiant de l’Université Laval : Mandy Ducy

Étudiante au doctorat en médecine moléculaire

Représentante étudiant de l’Université de Montréal : Sarah Pasquin

Étudiante au doctorat en pharmacologie

Représentante étudiant de McGill University : Marie-Julie Allard

Étudiante au doctorat, Integrated Program in Neuroscience

Représentant étudiant de l’Université d’Ottawa : Guillaume Romain

Étudiant au doctorat en biochimie

Professeur associé à la Journée Phare : Eric Frost, PhD,

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Notes biographiques

Pr Jean-François Cloutier est professeur associé dans le département de Neurologie et de

Neurochirurgie de l’Université McGill à Montréal, QC et est titulaire d’une Chaire de Recherche

du Canada en Neurobiologie développementale. Le Pr Cloutier et son équipe de recherche

utilisent des approches moléculaires ainsi que des modèles génétiques murins afin d’identifier les

signaux moléculaires qui guident la trajectoire des neurones en développement. La compréhension

de ces mécanismes vise à développer le traitement des désordres et des blessures neurologiques

nécessitant une régénération axonale. Le Pr Cloutier est éditeur associé du Journal of

Neuroscience, le journal officiel de la Society for Neuroscience (SfN), d’un facteur d’impact de

6.344.

Jean-François

Cloutier, PhD

Éditeur associé de Journal of Neuroscience

McGill

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Notes biographiques

Pr Louis Gendron est professeur dans le département de pharmacologie-physiologie de la Faculté

de médecine et des sciences de la santé de l’Université de Sherbrooke. Il est directeur de l’Axe

Inflammation-Douleur du Centre de Recherche du CHUS. Les recherches du Pr Gendron portent

sur le récepteur opioïde delta, un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) d’intérêt dans le

traitement de la douleur chronique. Son équipe cherche à caractériser le mécanisme d’action, la

régulation et le trafic cellulaire du récepteur opioïde delta, ainsi que ses rôles dans le traitement

de la douleur, de l’anxiété et de la dépression. Le Pr Gendron est également éditeur associé

dans le journal Progress in Neuro-Psychopharmacology & Biological Psychiatry, un journal

scientifique international d’un facteur d’impact de 4.361, publiant des articles en recherche

fondamentale et clinique dans les domaines de la neuropsychopharmacologie et de la psychiatrie

biologique.

Louis Gendron, PhD

Éditeur associé du journal Progress in Neuro-Psychopharmacology & Biological Psychiatry

Université de Sherbrooke

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Notes biographiques

Le Pr Pieter Cullis est professeur dans le Département de Biochimie et de Biologie Moléculaire

à l’University of British Columbia (UBC) à Vancouver depuis 1985. Il est reconnu comme

étant un pionnier dans le domaine des lipides, des membranes biologiques et les systèmes

liposomaux d’administration de médicaments. À travers ses recherches, le Pr Cullis vise à

approfondir notre compréhension de la structure et de la fonction des membranes et ainsi améliorer

les approches thérapeutiques actuelles. Son équipe s’intéresse particulièrement à l’utilisation de

nanoparticules lipidiques afin d’optimiser l’administration de médicaments tels les ARNs

interférents et les médicaments immunostimulants. Le Pr Cullis cherche également à encapsuler

des agents chimiothérapiques conventionnels, afin d’améliorer leur efficacité dans le traitement du

cancer. Chercheur et innovateur scientifique, le Pr Cullis est co-fondateur du Centre for Drug

Research and Development (CDRD) et co-fondateur de plus de 9 compagnies

biotechnologiques. Au cours de cette carrière impressionnante, il a rédigé plus de 360 articles

scientifiques et a obtenu plus de 45 brevets à son nom. De plus, le Pr Pieter Cullis est auteur du

livre intitulé The Personalized Medicine Revolution, paru en février 2015.

Pieter Cullis, PhD,

FRSC

University of British Columbia

Fondateur du Life Science Centre

Directeur fondateur du Centre for Drug Research and Development (CDRD)

Le Pr Pieter Cullis est professeur

dans le Département de Biochimie

et de Biologie Moléculaire à

l’Université de la Colombie-

Britannique (UBC) à Vancouver

depuis 1985. Il est reconnu comme

étant un pionnier dans le

domaine des lipides, des

membranes biologiques et les

systèmes liposomaux

d’administration des

médicaments. À travers ses

recherches, le Pr Cullis vise à

approfondir notre compréhension

de la structure et de la fonction

des membranes et ainsi améliorer

les approches thérapeutiques

actuelles. Son équipe s’intéresse

particulièrement à l’utilisation de

nanoparticules lipidiques afin

d’optimiser l’administration de

médicaments tels les ARNs

interférents et les médicaments

immunostimulants. Le Pr Cullis

cherche également à encapsuler

des agents chimiothérapiques

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Notes biographiques

Dre Elena Verdù est clinicienne-chercheure agrégée dans le département de médecine de

l’Université McMaster, situé au Hamilton en Ontario. Gastro-entérologue de formation, Dre Verdú

explore le rôle du microbiote dans la physiopathalogie des désordres inflammatoires

chroniques, telles les maladies inflammatoires chroniques de l’intestin ou la maladie

cœliaque. Elle étudie notamment comment les bactéries commensales et les composantes

alimentaires interagissent avec les tissus de l’hôte et parviennent à moduler la susceptibilité à

l’inflammation. Son équipe s’intéresse également aux mécanismes par lesquels les bactéries

probiotiques affectent la communication de l’axe cerveau-intestin. Dre Verdú et son laboratoire

utilisent une vaste gamme de modèles moléculaires, de modèles animaux et d’approches

cliniques translationnelles dans leur recherche. Elena Verdú est également titulaire de la Chaire

de recherche du Canada en Inflammation, Microbiote et Nutrition.

Elena Verdù,

MD, PhD

McMaster University

Chaire de recherche du Canada en Inflammation, Microbiote et Nutrition

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Notes biographiques

Marie-Ève Tremblay est professeure adjointe dans le département de médecine moléculaire de

l’Université Laval à Québec, QC. Son équipe de recherche s’intéresse particulièrement au rôle des

cellules microgliales dans l’apprentissage et la mémoire. En effet, des travaux récents suggèrent

que ces cellules immunitaires contribuent de manière dynamique au fonctionnement normal du

cerveau et jouent un rôle jusqu’à maintenant insoupçonné dans le remodelage de la circuiterie

neuronale. Pre Tremblay vise donc à déterminer les mécanismes moléculaires qui sous-tendent ces

nouveaux rôles et à explorer l’implication des microglies dans la pathogénèse de maladies

neurodégénératives, dont la maladie Alzheimer. Ces travaux ont notamment révélé l’existence

d’un nouveau type de cellules microgliales connues sous le nom de « Dark Microglia ». Ces

cellules montrent des signes de stress oxydatif, ce qui leur donne un aspect sombre

lorsqu’observées au microscope électronique et sont abondantes dans des états pathologiques,

notamment dans la maladie Alzheimer. Pre Tremblay a précédemment fait deux post-doctorats

dans les universités Rochester Medical Center et Wisconsin-Madison, et est récipiendaire de la

subvention Banting Research Foundation, attribuée à de nouveaux chercheurs exceptionnels

dans le domaine de la santé ou de la recherche biomédicale se trouvant à leurs premières années

de nomination dans une université canadienne.

Marie-Ève

Tremblay, PhD

Université Laval

Récipiendaire du Banting Research Foundation

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Programme officiel

Jeudi 1 décembre 2016

9h-14h Accès à l’Amérispa à tarif promotionnel (facultatif) (20% de rabais sur le prix régulier pour les 10 premiers participants inscrits pour un accès au spa Amérispa

Château Bromont et 15% de rabais pour les participants suivants, plus de détails sur journeephare.com)

13h00 Arrivée et enregistrement

14h00 Atelier sur la publication d’articles scientifiques Salon AB

Pr Louis Gendron, éditeur associé du journal Progress in

Neuro-Psychopharmacology & Biological Psychiatry

Pr Jean-François Cloutier, éditeur associé de Journal of Neuroscience

17h00 Coquetel de bienvenue Atrium

18h30 Souper-conférence - présenté par Précision Nanosystems Salon AB

Pr Pieter Cullis, Co-fondateur du Center for Drug Research and

Development (CDRD) et de 9 compagnies biotechnologiques

Why be a scientific entrepreneur?

20h30 Soirée festive Atrium

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Vendredi 2 décembre 2016

7h30 Arrivée et enregistrement

8h30 Mot de bienvenue Salon ABC

8h35 Conférence plénière Salon ABC

Pr Pieter Cullis, University of British Columbia

Lipid Nanoparticle Systems for Enabling Gene Therapies

9h35 Pause-café Atrium

9h50 Présentations orales étudiantes Salon ABC

Mathilde Poujol de Molliens, INRS-Institut Armand Frappier

Développement de modulateurs allostériques intracellulaires du récepteur PAC1

Thierry Chénard, Université de Sherbrooke

La modification du métabolisme des adipocytes humain pour la

prévention du diabète de type 2

10h20 Présentations de type blitz de 2 min Salon ABC

Laurence Massenavette, Université de Sherbrooke

Est-ce que les résolvines pourraient diminuer l’inflammation et l’hyperréactivité

utérine associées au travail préterme ?

Marie Dorr, Université Laval

De la compréhension de l’impact du derme sur la réparation des dommages UV-

induits épidermiques à l’identification de molécules permettant de limiter le

développement des cancers cutanés

Fanny Thuriot, Université de Sherbrooke

Validation clinique de Phenovar en tant qu’aide diagnostique pour l’interprétation

de l’exome

Carolin Brand, Université de Sherbrooke

L’interaction entre les protéines NS3 et NS5 du virus du Nil occidental - une

nouvelle cible pour le développement de composés antiviraux?

Francis Houde, Université de Sherbrooke

Paradigme de lésion virtuelle: utilisation de la distance crâne-cortex pour ajuster

l’intensité de la stimulation magnétique transcrânienne

10h35 Session de présentations par affiche n°1 - Affiches nombres paires Knowlton

11h35 Dîner – commandité par Perkin Elmers et Frogga Bio Restaurant de l’hôtel et bistro

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Vendredi 2 décembre 2016

12h35 Session de présentations par affiche n°2 - Affiches nombres impaires Knowlton

13h45 Conférence plénière Salon ABC

Dre Elena Verdu, McMaster University

Metabolic role of the microbiota and the pathogenesis of celiac disease

14h45 Présentations orales étudiantes Salon ABC

Simon Boudreault, Université de Sherbrooke

L’infection virale avec Réovirus modifie l’épissage alternatif de la cellule-hôte

Marc-Antoine de La Vega, Université Laval

Transmission du virus Ebola: La recherche au coeur d'une urgence de santé

publique de portée internationale

Estefania Marin Sierra, McGill University, Université de Montréal

Characterization of the mechanism of action of an anti-IL-6R peptide

in an inflammation- and infection-induced preterm birth

15h30 Pause-café Atrium

15h45 Présentations orales étudiantes Salon ABC

Élie Besserer-Offroy, Université de Sherbrooke

Phosphomimetic lipopeptides as new tools to investigate β-arrestin-mediated

functions

Weronika Jakubowska, Université Laval

Endothélialisation d’un modèle reconstruit 3D de muqueuse vaginale

humaine par la méthode d’auto-assemblage à des fins d’implantation

Morgane Perrotte, INRS-IAF, Université du Québec à Montréal, Canada, Université Laval

L’évolution d’une combinaison de marqueurs plasmatiques liés au stress

oxydatif est associée à l’altération cognitive dans la maladie d’Alzheimer

16h30 Conférence plénière – Présentée par le Centre des Neurosciences de Sherbrooke Salon ABC

Pre Marie-Ève Tremblay, Université Laval

Les microglies sombres : un nouveau phénotype principalement

associé aux états pathologiques

17h30 Mot de la fin et remise de prix de présentation Salon ABC

17h30 Coquetel de réseautage et remise de prix de participation Atrium et Knowlton

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Présentations orales

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1 - La modification du métabolisme des adipocytes humain pour la prévention du diabète de type 2.

Thierry Chénard(1), André Carpentier(2), André Tchernof(3), Rafael Najmanovich(1)

(1) Département de biochimie, FMSS, Université de Sherbrooke, Qc, Canada.(2) Département de médecine, FMSS,

Université de Sherbrooke, Qc, Canada. (3) Département des Sciences des aliments et nutrition, FSAA, Université Laval, Qc,

Canada.

La résistance à l’insuline et la déficience de sécrétion de l’insuline en réponse au glucose sont les deux principales

caractéristiques physiopathologiques du diabète de type 2 (DT2). La résistance à l’insuline précède le

développement du diabète de type 2 et la déficience de sécrétion de l’insuline en réponse au glucose est

considérée comme une condition sine qua non à la présence du DT2. En effet, une réponse normale des cellules

β du pancréas permet de compenser pour la résistance à l’insuline et de maintenir un niveau de glucose sanguin

normal. Les données expérimentales dans les modèles animaux et chez l’humain supportent que la surexposition

des tissues maigres aux acides gras (AG) joue un rôle important dans le développement de la résistance à

l’insuline et de la dysfonction pancréatique. Les tissus adipeux jouent un rôle central dans la régulation des flux

d’AG sanguin. Un problème dans le stockage d’AG dans les tissus adipeux a été associé à une augmentation des

flux circulant d’AG se produisant dans les stages précoce du développement du DT2. Deux mécanismes généraux

gouvernent l’expansion des tissus adipeux nécessaire au stockage des AG: 1) l'hyperplasie cellulaire

(augmentation du nombre d'adipocytes, qui sont alors plus nombreux et plus petits); et 2) l'hypertrophie

cellulaire (augmentation de la taille des adipocytes, qui sont alors moins nombreux et plus gros). Un default

d’hyperplasie, un recrutement de pré-adipocytes et une différenciation en adipocyte mature diminués mène à

une expansion pathologique de type hypertrophique qui contribue au développement du DT2.

Pour analyser les mécanismes pouvant influencer l’expansion des adipocytes et le développement du DT2, nous

avons développé un réseau métabolique d’adipocyte humain en corrigeant les erreurs présentes dans un réseau

publié puis avons réalisé une analyse sur ce réseau pour identifier des gènes ayant le potentiel d’influencer les

mécanismes d’expansion des tissus adipeux (hypertrophie et/ou hyperplasie).

Nous avons réalisé une délétion de gènes in-silico sur notre réseau métabolique d’adipocytes humain,

iTC1390adip, utilisant l’analyse de balance de flux. Cette analyse a permis de prédire l’effet de la délétion génique

sur la production optimal de biomasse et de gouttelette lipidique utilisé comme représentation de l’hyperplasie

et de l’hypertrophie des adipocytes respectivement. Nous avons comparé l’effet des délétion sur la production

de biomasse à des résultats expérimentaux de délétion génique dans différentes lignées cancéreuses pour

évaluer la capacité prédictive de notre réseau et établir un seuil pour la production de biomasse donnant la

meilleure capacité prédictive de l’essentialité des gènes pour une croissance optimale. Suivant l’analyse des

délétion génique, 26 gènes ont été prédits comme ayant le potentiel de réduire la production de gouttelette

lipidique avec peu d’effet sur la production de biomasse donc qui pourrais avoir un effet positif sur l’hypertrophie

des adipocytes. Certains des gènes qui ont été identifié, tels que LCAT et DGAT1, possèdent des résultats

expérimentaux qui supportent nos prédictions alors que d’autres, tels que FAR2 et HSD17B12, pourrais servir de

nouvelles cibles potentiel dans le remodelage des tissus adipeux et dans le traitement du DT2 si leur rôle est

validé expérimentalement. Nous avons aussi utilisé les données d’expressions géniques d’adipocytes viscéraux

et sous-cutanées pour déterminé les voies métaboliques ayant des différences d’expression significative pouvant

être relié à la différence d’importance des différents dépôts dans le développement du DT2. Ces résultats

guideront de nouvelles études in-vivo et in-cellulo pour valider de nouvelles cibles thérapeutiques pouvant

affecter le développement du DT2.

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2 - DÉVELOPPEMENT DE MODULATEURS ALLOSTÉRIQUES INTRACELLULAIRES DU RÉCEPTEUR PAC1

Mathilde Poujol de Molliens (1), Myriam Létourneau (1), Terry Hebert (2), Alain Fournier (1), David Chatenet

(1),

(1) Institut National de la Recherche Scientifique-Institut Armand Frappier

(2) McGill University

Le pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide est capable d’induire une neuroprotection in vitro, mais

également in vivo suite à l’activation de PAC1, un récepteur couplé aux protéines G (RCPG). Ce dernier représente

donc une cible prometteuse pour le traitement des maladies neurodégénératives. Cependant, ce peptide peut

se lier à deux autres RCPGs, i.e. VPAC1 et VPAC2, et entraîner des effets indésirables. La transmission du signal

au niveau intracellulaire est directement associée à des changements structuraux opérés au niveau des boucles

intracellulaires d’un RCPG donné. Ainsi, nous supposons que des peptides dérivés des boucles intracellulaires

(appelés pepducines) de PAC1 pourraient initier, à elles seules, diverses cascades de signalisation par une

reconnaissance spécifique et sélective du PAC1 et une modulation conformationelle de celui-ci. Trois molécules,

dérivées des trois boucles intracellulaires de PAC1, ont été synthétisées puis évaluées pour leur capacité à

promouvoir la survie cellulaire dans un modèle cellulaire parkinsonien. Par la suite, ces différents composés ont

été évalués pour leur capacité à stimuler diverses voies de signalisation associées à PAC1. Nos résultats montrent

que nos molécules sont capables d’assurer la survie cellulaire, et ce, en absence du ligand endogène, bien qu’elles

n’activent pas la phosphorylation de ERK1/2 ni la production d’AMPc ou de calcium. D’autres voies de

signalisation sont à l’étude afin d’identifier les mécanismes moléculaires et cellulaires associés à cette

neuroprotection. La découverte de pepducines activant sélectivement PAC1 représenterait une avancée

importante dans l’étude des mécanismes cellulaires sous-jacents aux maladies neurodégénératives.

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3 - L’infection virale avec Réovirus modifie l’épissage alternatif de la cellule-hôte

Simon Boudreault(1), Philippe Thibault(2), Mathieu Durand(2), Elvy Lapointe(2), Guy Lemay(3), Martin

Bisaillon(1)

(1) Université de Sherbrooke, Département de Biochimie, (2) Université de Sherbrooke, Plateforme de RNomique, (3)

Université de Montréal, Département de microbiologie, infectiologie et immunologie

Les virus sont des experts pour modifier l’homéostasie cellulaire. Que ce soit l’expression des gènes ou la réponse

immunitaire cellulaire, ils sont capables d’influencer de nombreux processus cellulaires dans le but de prendre

avantage sur la cellule-hôte. L’importance de l’épissage alternatif (ÉA) dans la régulation de certains processus-

clés de cette homéostasie est de mieux en mieux connue. D’ailleurs, de récentes évidences démontrent que

certains virus peuvent modifier l’épissage de certains transcrits cellulaires particuliers. Puisque les virus et

l’épissage alternatif peuvent tous deux moduler les processus cellulaires, serait-il possible qu’une infection virale

puisse entraîner des modifications globales de l’ÉA étant jusqu’à présent passées inaperçues ? Pour vérifier cette

hypothèse, des cellules L929 contrôles et infectées avec Réovirus ont été analysées par séquençage d’ARN à haut

débit pour caractériser l’ensemble des événements d’ÉA. Les réovirus sont des virus à ARN double-brin qui

infectent la majorité des mammifères et qui sont inoffensifs chez l’humain. Nos résultats démontrent que l’ÉA

de plus de 2000 événements est modifié, dont 240 statistiquement significatifs (Q<0,05) touchant 194 gènes.

Ces gènes sont enrichis dans les processus liés à la maturation des ARNs et l’épissage alternatif. Nous avons par

la suite investigué la cause de ces changements. L’analyse par spectrométrie de masse de cellules infectées a

permis d’identifier les protéines virales μ2, λ3 et σNS au noyau, suggérant un potentiel rôle dans ce phénomène.

Nous avons aussi regardé l’expression des facteurs d’épissage, dont seulement 10 avait un changement

d’expression de plus de 2 fois suite à l’infection. De manière intéressante, le facteur d’épissage ESRP1 est

surexprimé au-delà de 50 fois suite à l’infection. Une expérience de co-culture a permis de déterminer que la

surexpression d’ESRP1 ne nécessite pas la présence de Réovirus, mais plutôt la réponse immunitaire cellulaire

liée à l’infection. Nous avons démontré que Réovirus peut induire des changements d’épissage alternatifs dans

le noyau de la cellule-hôte et que des déterminants viraux (μ2, λ3 et σNS) et cellulaire (ESRP1) pourraient

participer à cette modulation. Le ou les mécanismes d’action précis permettant à l’infection virale d’induire ce

changement reste à être caractérisés.

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4 - Transmission du virus Ebola: La recherche au coeur d'une urgence de santé publique de portée

internationale

Marc-Antoine de La Vega(1), Derek Stein(2), Alexander Bello(2), Geoff Soule(2), Kaylie N. Tran(2), Kevin

Tierney(2), James Strong(2), Robert Kozak(2), Gary Kobinger(1,3,4)

(1) Département de microbiologie-infectiologie et d'immunologie, Université Laval, (2) Special Pathogens Program, Public

Health Agency of Canada, (3) Department of medical microbiology, University of Manitoba, (4) Department of pathology

and laboratory medicine, University of Pennsylvania

Les évidences épidémiologiques actuelles suggèrent que la transmission du virus Ebola s'effectue principalement

par contact direct avec les fluides corporels d'animaux ou d'individus infectés. Expérimentalement, l'infection de

primates non-humains (PNHs) via l'administration direct du virus Ebola a été démontrée autant par la voie

mucosale (Voies respiratoires supérieures ou inférieures) que parentérale (Intramusculaire, intrapéritonéale et

sous-mucosale). L'infection typique d'un PNH en laboratoire s'effectue par la voie intramusculaire, une voie qui

ne mène pas à un événement de transmission sans contact direct. Seulement une observation anecdotique en

1995 au cours d'une expérience de traitement fut rapportée où un macaque rhésus fut infecté par le virus Ebola

(variant Mayinga) en l'absence de contact direct. Une étude en 2014 n'a cependant pas observé de transmission

entre des macaques rhésus, infecté avec le virus Ebola (variant Kikwit) via la voie intramusculaire, et des

macaques crabier naïfs. Cependant, la transmission inter-espèce du virus Ebola (variant Kikwit) a été documentée

précédemment entre des cochons domestiques infectés et des macaques rhésus naïfs, apportant plus de

questions que de réponses quant à la transmission indirecte du virus. De manière générale, notre compréhension

du virus Ebola dans des conditions expérimentales contrôlées est fragmentaire et incomplète. L'objectif des

présentes études était donc de déterminer les profils de transmission du virus Ebola selon différentes voies

d'infection, autant en présence qu'en absence de contact direct. On rapporte ici la une transmission partielle du

virus Ebola (variant Makona) entre des macaques crabiers infectés, via la voie intratrachéale, et naïfs en présence

et en absence de contact direct. Un nouveau modèle animal de transmission chez le furet y est aussi décrit. Ces

études sont essentielles à notre compréhension de la propagation du virus en situation d'épidémies et pourrait

guider le développement et l'utilisation des mesures de protection pour prévenir l'exposition et freiner la

dissémination du virus.

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5 - Characterization of the mechanism of action of an anti-IL-6R peptide in an inflammation- and

infection-induced preterm birth

Estefania Marin Sierra(1) (2); Christiane Quiniou (2); Mathieu Nadeau-Vallée(2)(3); Xin H.(2); Belarbi L.(2)(3);

Hales B.(1); and Chemtob S.(2) (3)

(1) McGill University, (2) CHUS Sainte-Justine, (3)Université de Montreal

Preterm birth (PTB) is defined as delivery before 37 weeks of gestation and it is a health concern, ranked as the

leading cause of mortality under 5 years old. PTB is difficult to address because of its multifactorial aetiology

where just infection has been determined as a causal link. Current studies have shown that one common process

in PTB is the presence of an inflammatory process. Some studies have shown a significant increase of IL-6 levels

before the onset of PTB and there have been some efforts to use this cytokine as a potential biomarker of PTB.

Some of the detrimental effects on the neonate have been shown to be related to the increasing levels of IL-6 in

amniotic fluid, fetal blood and gestational tissues. Here we present the characterization of an IL-6R antagonist

small peptide designed by our group and named 633, in a mouse LPS-and or IL-6-induced PTB model. During this

work, we showed that 633 can modulate IL-6 signalling by blocking the STAT3 pathway without affecting the Akt

and Erk1/2 pathway. We analyze the efficacy of 633 to reduce IL-6-induced proinflammatory genes ex vivo in

gestational tissues (placenta, uterus and fetal membranes). Peptide 633 showed a dose response inhibitory

effect of IL-6-induced IL-1β, IL-6 and TNFα gene expression in HEK-IL-6R cells and of TNFα gene expression in

mice uterus (IC50 0.76, 2.07, 0.26 and 1.05nM, respectively). We have shown the efficacy of 633 in preventing

IL-6- and LPS-induced PTB in mice, by selectively blocking the gene expression of some PTB inducing proteins in

leukocytes, uterus and fetal membranes; and downregulating the levels of CRP in maternal blood and IL-1β in

amniotic fluid. 633 is also able to increase neonatal survival and rescue neonatal weight. All this results set up

the capacity of 633 to be a potential prophylactic treatment for PTB by reducing the inflammation outcome and

will also encourage research the potential of 633 to reduce neonatal morbidity.

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6 - Phosphomimetic lipopeptides as new tools to investigate β-arrestin-mediated functions

Élie Besserer-Offroy(1,2), Christine E. Mona(1,2), Pierre-Luc Boudreault(1,2), Karine Belleville(1,2), Jean-Michel

Longpré(1,2), Richard Leduc(1,2), Éric Marsault(1,2), and Philippe Sarret(1,2)

(1) Department of Pharmacology-Physiology, Faculty of Medicine and Health Sciences, Université de Sherbrooke

(2) Institut de Pharmacologie de Sherbrooke

Arrestins play key regulatory roles in seven-transmembrane receptors (7TMRs) signal transduction and function.

Over the last decade, β-arrestins’ status changed from molecular adaptor proteins involved in 7TMR

desensitization and internalization to scaffolds for MAP kinase cascades promoting ERK1/2, p38, and JNK

activation. To date, no pharmacological inhibitor targeting selectively β-arrestin signaling has been developed.

Thus, investigating the role played by β-arrestins in 7TMRs-mediated signaling relies mainly on the use of siRNA-

mediated protein knockdown or on β-arrestin 1 or 2 knockout mice. In the present study, we designed and

synthesized a phosphomimetic peptide based on the C-terminal tail of the vasopressin V2 receptor as it has been

shown to interact with high affinity to both β-arrestins 1 and 2. To ensure intracellular delivery, we attached a

palmitic acid residue at its N-terminal end which promotes plasma membrane anchorage and cell penetration

by a passive flip-flop mechanism. We next investigated the in-vitro modulating efficacy of this N-terminal

lipidated peptide on the β-arrestin recruitment at three distinct class A 7TMRs, namely vasopressin V2 (V2R),

apelin (APJ) and chemokine receptor CXCR4. Using a BRET-based β-arrestin recruitment assay, we found that this

lipopeptide was effective at inhibiting β-arrestin recruitment to class A 7TMRs. Indeed, kinetic assays revealed

that the maximal inhibition occurred after 40 min of incubation and can completely abolish the recruitment of

both β-arrestins 1 and 2 to the receptor, with no isoform selectivity. pA2 values were found to be receptor-

dependent and ranged from 5.2 (6.3 µM) for CXCR4 and APJ to 4.2 (63 µM) for V2R. We further assessed whether

this pepducin-like phosphomimetic peptide exerted agonistic activity on V2R as it mimics the C-terminal tail of

this receptor. We did not observe any intrinsic activity of this lipidated peptide on β-arrestin- and G protein-

dependent pathways, thus suggesting that it does not behave as an allosteric agonist at V2R. Next, we examined

whether this lipopeptide affected the ability of the endogenous ligands, vasopressin, apelin and SDF-1 to

stimulate V2R-induced cAMP accumulation and APJ- or CXCR4-induced Gαi activation, respectively. Our results

revealed that this lipidated peptide did not impact G protein-dependent activation, thus driving biased activity

at 7TMRs. Finally, we demonstrated the in vivo efficacy of this newly designed β-arrestin recruitment inhibitor

by enhancing the analgesic effect of morphine in an acute pain paradigm (tail-flick test). In conclusion, we report

here a new strategy to selectively inhibit β-arrestin recruitment and to help in deciphering the contribution of β-

arrestin-mediated signaling in 7TMR function with an in vitro and in vivo proof of concept.

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7 - Endothélialisation d’un modèle reconstruit 3D de muqueuse vaginale humaine par la méthode

d’auto-assemblage à des fins d’implantation

JAKUBOWSKA, WERONIKA (1) ; Saba, Ingrid (1) ; Chabaud, Stéphane (1); Bolduc, Stéphane (1,2)

1. Centre de recherche en organogenèse expérimentale de l’Université Laval/ LOEX, Centre de Recherche du Centre

Hospitalier Universitaire (CHU) de Québec- Axe Génie tissulaire et Médecine Régénératrice, Hôpital de l’Enfant Jésus,

Québec, Canada

2. Département de chirurgie de l’Université Laval

OBJECTIF : La vascularisation représente un élément critique pour le succès des greffes de tissus reconstruits par

génie tissulaire. La pré-vascularisation de ceux-ci est une option attrayante qui améliore la survie du greffon

grâce au phénomène d’inosculation entre le réseau préformé et le réseau vasculaire de l’hôte. Dans cette étude,

un modèle reconstruit 3D de muqueuse vaginale a été endothélialisé afin d’obtenir un réseau micro-vasculaire

et reproduire fidèlement la morphologie du tissu natif. Cette prévascularisation devrait également augmenter

significativement les chances de succès de l’implantation du tissu reconstruit in vivo chez l’animal. Différentes

techniques de génie tissulaire comme la méthode classique d’auto-assemblage (Self-Assembly ou SA), une

variante par réensemencement (RS) et une technique hybride combinant les deux ont été comparées afin de

déterminer celle qui permettait d’obtenir le meilleur tissu, fidèle à l’architecture vasculaire et possédant les

meilleures propriétés mécaniques.

MÉTHODES : Des fibroblastes (Fb) et des cellules épithéliales ont été extraits à partir d’une biopsie de muqueuse

vaginale humaine prélevée chez une patiente saine âgée de 32 ans. Des équivalents de muqueuse vaginale ont

été reconstruits selon le protocole classique d’auto-assemblage SA. Les Fb de muqueuse vaginale, mis en culture

en présence d’acide ascorbique, produisent leur propre matrice extracellulaire. Ces Fb ont été co-ensemencés

avec des cellules endothéliales dérivées de veines ombilicales (HUVEC). Après quatre semaines de culture, des

cellules épithéliales de muqueuse vaginale ont été ensemencées sur un feuillet stromal, lequel est maintenu

pendant une semaine en immergé. Par la suite, les feuillets, ont été empilés et le tissu élevé à l’interface air-

liquide pour trois semaines additionnelles. La variante RS du protocole classique consiste à réensemencer après

deux semaines de culture des Fb +/- HUVEC sur le stroma en maturation. Les feuillets sont maintenus pour deux

semaines additionnelles toujours en présence d’acide ascorbique. L’épithélialisation est réalisée telle que décrite

précédemment. La technique mixte combine les techniques d’ensemencement RS et SA où deux feuillets de

stroma endothélialisés produits par la méthode RS, dont un est ensemencé avec des cellules épithéliales, sont

ensuite empilés et élevés à l’interface air-liquide.

RÉSULTATS :

Nos méthodes de génie tissulaire reproduisent un modèle in vitro de muqueuse vagina

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8 - L’Évolution d’une combinaison de marqueurs plasmatiques liés au stress oxydatif est associée à

l’altération cognitive dans la maladie d’Alzheimer

Morgane Perrotte(1,2,3), Aurélie Le Page(4), Pamela Camponova(4),Tamas Fulop(4) et Charles

Ramassamy(1,2,3)

(1)INRS-IAF, Laval, Canada. (2)BIOMED, Centre de Recherches Biomédicales, Université du Québec à Montréal, Canada.

(3)INAF, Université Laval, Canada. (4)Institut Gériatrie de Sherbrooke, Canada.

Introduction : À ce jour, le diagnostic de la MA constitue un événement tardif de la maladie. En effet, à ce stade,

le cerveau subi déjà des dommages importants et irréversibles. Le stress oxydatif (SO) est un mécanisme précoce

dans la maladie d’Alzheimer (MA). Les dommages du SO cérébraux surviennent bien avant le stade de démence.

Néanmoins, le lien entre le niveau des marqueurs périphériques du SO et le déclin cognitif est peu étudié.

L’objectif de ce travail consiste à étudier le lien possible entre les scores cliniques et l’évolution d’une signature

plasmatique de marqueurs liés au SO dans la MA.

Méthodes : Les différents biomarqueurs liés au SO seront évalués dans le plasma de patients recrutés à l’Institut

universitaire de gériatrie de Sherbrooke dans le cadre d’une étude clinique longitudinale. Nous disposons

d’échantillons plasmatiques de 24 sujets présentant un déficit cognitif léger (MCI), de 47 patients atteints de la

MA à différents stades et de 24 sujets sains de même âge. La capacité antioxydante est mesurée par

électrochimie (Apollo-4000), les protéines carbonylées et l’apolipoprotéine D et J (apoD et J) sont analysées par

western blot et la quantité de Klotho est dosée par ELISA.

Résultats : La capacité antioxydante est sévèrement diminuée chez les sujets MCI et MA. À l’inverse, les protéines

carbonylées augmentent progressivement chez les patients atteints de la MA à partir du stade léger de la

maladie. Les quantités de Klotho et de l’apoJ augmentent dès le stade MCI en réponse à l’augmentation du SO

périphérique. En revanche, le niveau de l’apoD ne diffère pas entre les groupes. En outre, l’augmentation des

dommages oxydatifs, la diminution de la capacité antioxydante et les protéines de résistance au SO corrèlent

avec les scores des tests cognitifs (Mini Mental State Examination, MMSE et Montreal Cognitive Assessment,

MoCA).

Conclusion : Ces résultats suggèrent que la diminution de la capacité antioxydante augmente avec la progression

de la MA conduisant à une augmentation des protéines carbonylées et des protéines impliquées dans la

résistance au SO (Klotho et apoJ). De plus, ces résultats révèlent le potentiel de l’utilisation d’une combinaison

de marqueurs plasmatiques reliés au SO et à l’altération cognitive comme biomarqueur dans la MA et sa

progression.

Subventions : Fondation INRS-Armand-Frappier ; Chaire Louise André Charron pour la maladie d’Alzheimer

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Présentations par

affiche

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9 - Étude du mécanisme de résistance aux antiviraux chez cytomégalovirus humain

Andréa Allaire (1), Guy Boivin (2) et Martin Bisaillon (1)

(1) Université de Sherbrooke, Département de Biochimie, Sherbrooke, Qc, Canada

(2) Centre Hospitalier de l’Université Laval (CHUL) et Université Laval, Département biologie médicale, Québec, Qc, Canada

Introduction

Le cytomégalovirus humain (HCMV) est un Herpèsvirus causant une infection latente chez 60% des nord-

américains. Sa primo-infection chez les nouveaux-nés et sa réactivation chez les individus immunodéprimés sont

associées à de nombreux cas de morbidité et de mortalité. Il n'existe actuellement aucun vaccin approuvé pour

la prévention de l'infection à cytomégalovirus. Toutefois, des antiviraux sont disponibles pour le traitement de

cette infection. Parmi ceux-ci, on retrouve trois types de molécules : un analogue nucléosidique (ganciclovir), un

analogue nucléosidique monophosphaté (cidofovir) et un analogue du pyrophosphate inorganique (foscarnet).

Cependant, de nombreuses souches résistantes à ces antiviraux sont retrouvées chez certains patients infectés.

Ces souches présentent de nombreuses mutations au niveau du gène viral encodant l’ADN polymérase UL54 du

cytomégalovirus. L’hypothèse de recherche est que ces mutations affectent la liaison des antiviraux à UL54, les

rendant ainsi inefficaces contre le virus. Cette recherche vise à mieux comprendre l’effet des mutations sur la

liaison des antiviraux et donc d’élucider le mécanisme moléculaire de résistance aux antiviraux chez ce

pathogène.

Méthodes

Les protéines recombinantes virales seront exprimées en bactéries (étiquette moléculaire 6-His) et purifiées par

chromatographie d’affinité (colonne de nickel). La liaison des antiviraux sera initialement mesurée par

spectroscopie à fluorescence et ensuite par microcalorimétrie. La liaison d’UL54 à l’ADNsb et au nucléotide sera

mesurée aussi par spectroscopie à fluorescence. Des essais de polymérisation seront également effectués pour

démontrer la capacité des divers antiviraux à inhiber la réaction de polymérisation catalysée par les diverses

versions mutées d’UL54. Ces essais viseront à déterminer l’effet des antiviraux sur les propriétés biochimiques

et enzymatiques des divers mutants d’UL54 (Km, kcat, Vmax, etc.). L’étude d’éventuels changements de

conformation des divers mutants sera réalisée à l’aide du dichroïsme circulaire.

Résultats

Jusqu’à maintenant, l’optimisation de l’expression et de la purification de la protéine recombinante UL54 de type

sauvage et des diverses versions mutées associées à la résistance aux antiviraux a été réalisée. Cela a permis la

production de ces protéines de façon pure et en grande quantité. Par spectroscopie à fluorescence, il a été

possible d’observer que l’affinité d’UL54 de type sauvage et des mutants est similaire pour l’ADNsb. Par contre,

l’affinité des mutants pour le dATP est différente si on la compare avec celle d’UL54 de type sauvage. Des

résultats préliminaires de l’interaction de l’antiviral foscarnet aux diverses formes d’UL54 ont été obtenus aussi

à l’aide du spectrofluorimètre. Ceux-ci semblent indiquer que les mutants d’UL54 associés aux résistances lient

peu ou pas l’antiviral.

Conclusion

Le mécanisme moléculaire de résistance aux antiviraux utilisé pour traiter l’infection à CMV est peu à peu élucidé.

Jusqu’à présent, des modifications concernant la liaison au nucléotide et à l’antiviral semblent être impliquées

dans le mécanisme de résistance.

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10 - Synthesis and Evaluation at the Delta Opioid Receptor of Analogues of Leu-Enkephalin

Peptidomimetics with Improved Pharmacokinetics

Jean-Louis Beaudeau(1), Veronique Blais(2), Brigitte Guérin(3), Louis Gendron(2), Yves Dory(1)

(1) Département de Chimie, Faculté des Sciences, Université de Sherbrooke

(2) Département de Pharmacologie et Physiologie, Faculté de Médecine et Sciences de la Santé

(3) Département de Radiologie et de Médecine Nucléaire, Faculté de Médecine et Sciences de la Santé

Pain is one of the main reasons for medical consulting in the world. Clinical treatments of pain relies mainly on

Mu opioid receptor (MOP) agonists such as Morphine, and are associated with many adverse side effects

(constipation, addiction, dysphoria, euphoria, somnolence…). In the case of patients with chronic pain,

allevement can barely reach 50% efficacy. Studies show that selective activation of the Delta Opioid Receptor

(DOP), could provide good analgesia without the adverse effects linked to traditional opioids. Due to their relative

selectivity (1X to 5X) for DOP over MOP, the simplicity of their structure and synthesis, and their low toxicity,

endogenous peptides such as enkephalins (Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu/Met) are key targets. However, they suffer from

poor blood brain permeability and plasma stability, due to quick degradation by enkephalinases and other less

selective exoproteases.

This issue in mind, several analogues of Leu enkephalin were designed and synthetized in order to improve their

pharmacokinetics profile. Since enzymatic degradation occurs essentially on both end of the sequence, the

modifications were carried on the free ammonium group of Tyr, the carboxylic acid of Leu and the side chain of

Gly2. Their biologic profile toward DOP was then assessed. Preliminary results show nanomolar DOP affinity and

suggest that such strategy could be of interest by improving blood brain permeability and plasma stability, while

keeping good activity at DOP, and could be eventually applied to other opioids.

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11 - A Non-Competitive Inhibitor of Interleukin-1 Receptor Improves Vascular Damage in Retina,

Choroid and Brain of Neonates and Adolescents Induced by Gestational Inflammation in a Murine

Model of Premature Birth.

Alexandra Beaudry-Richard(1,2), Mathieu Nadeau-Vallée(3), Ankush Madaan(3), Marie-Ève Brien(3), Sheetal

Pundir(3), Xin Hou(3), Carlos Rivera(2), Christiane Quiniou(3), Jean-Sébastien Joyal(3), Sylvie Girard(3), Sylvain

Chemtob(1,2,3)

(1) Medicine Faculty Université de Montréal.

(2) Department of ophthalmology HMR Center of Research.

(3) Departments of paediatrics, ophthalmology and pharmacology CHUSJ Research Center.

Preterm birth (PTB) designates delivery before the 37th week of gestation. It affects 1 child out of 10 and is often

accompanied by morbidities having long lasting consequences. Among morbidities, retinopathy of prematurity

(ROP) affects 1 preterm infant out of 5. This pathology is a default in the normal proliferation of retinal blood

vessels and can cause blindness. High oxygen concentration in the air outside the womb and retinal inflammation

are the principal triggers of this condition. The pro-inflammatory cytokine interleukin (IL)-1 is a principal mediator

in the molecular cascade leading to uteroplacental inflammation in response to infection or other pathology and

ensued perinatal injuries, which have been firmly linked to inflammation independently of gestation age. The

goal of this study is to administrate IL-1β in the pregnant uterus to study its effect on retinal and cerebral

development in the progeny. Concomitantly, two IL-1R antagonists, clinically approved Kineret (Anakinra) and

101.10 (Rytvela: non-competitive inhibitor developed by our lab), have been utilized to counteract the action of

IL-1.

Pregnant CD-1 mice were injected in utero at gestational day (G) 16 with IL-1β. Administration of Kineret and

101.10 were given sub cutaneously every 12h from G 16 to 18. Techniques of immuno-enzymology (ELISA), semi-

quantitative immunohistochemistry and immunofluorescence, and visual evoked potentials were carried out at

birth and throughout development.

In mice exposed to intra-uterine inflammation, an inflammatory response in the newborn mouse was revealed

by ELISA. There was also a significant reduction of vascular density in the brain and retina from post-term day

(PT) 1 to PT15, measured by immunohistology. Moreover, visual evoked potentials were abnormals in mice

exposed to IL-1β during gestation. All of these phenotypes were rescued by antenatal administration of 101.10,

whereas Kineret could only protect mice from a few phenotypes.

In conclusion, maternal inflammation induced by IL-1β cause vascular and functional damages in the brain and

eye of progeny. Antenatal administration of 101.10 have a protective effect on all of these phenotypes.

Therefore, we suggest that an antenatal treatment with 101.10 could attenuate vascular morbidities resulting

from maternal inflammation.

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12 - Développement de macrocycles ayant pour cycle le récepteur delta

Dominique Bella Ndong (1), Véronique Blais (2), Brigitte Guérin (3) Louis Gendron (4), Yves Dory (5)

Dominique Bella Ndong (1), Véronique Blais (1), Brigitte Guérin (1) Louis Gendron (1), Yves Dory (1)

La morphine est un opioïde analgésique couramment utilisé quant au traitement de la douleur chronique. Il

produit son effet via l’activation du récepteur opioïdergique mu (MOPr). Cependant, l'activation de ce récepteur

présente différents effets secondaires dont la constipation, la dépendance physique, la dépression respiratoire,

la myosis et l'euphorie. À long terme, ces effets secondaires peuvent s'avérer problématiques en plus de nuire

au style de vie des patients. De récentes études suggèrent le récepteur opioïdergique delta (DOPr) comme

nouvelle cible prometteuse quant au traitement de la douleur chronique: son activation présenterait moins

d'effets secondaires.

Les récepteurs mu et delta ont pour ligands naturels les enképhalines. La met-enképhaline (YGGFM) présente

une meilleure sélectivité pour MOPr tandis que la leu-enképhaline (YGGFL) se lie préférentiellement à DOPr, ce,

via une intéraction hydrophobe entre le récepteur et le ligand endogène. Partant de là, plusieurs études ont été

fait au sein du laboratoire dans le but de comprendre l'importance et les positions relatives des différents

fonctions amides (modélisation, scan des amides, tests d'affinités, western blot) de la leu-enképhaline en vu

d'améliorer son profil pharmacocinétique et pharmacodynamique.

Afin de minimiser la dégradation enzymatique des différents composés et d'optimiser leur sélectivité pour le

récepteur delta ainsi que leur hydrophobicité dans le but de traverser la barrière hémato-encéphalique,

différents macrocycles peptidomimétiques ont été développés. Le but à long terme de cette étude: mettre sur

pied un traitement analgésique ayant pour cible le récepteur delta présentant moins d’effets secondairestout en

ayant un effet analgésique équivalent ou amélioré par rapport à la morphine

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13 - Le PF-4708671, un inhibiteur de la p70 ribosomal S6 kinase 1 (S6K1), régule l’activité de l’AMPK

Vicky Bellemare(1), Michael Shum (2)(3), André Marette(2)(3)

(1) Université de Sherbooke

(2) Université Laval

(3) Centre de recherche de l'institut de cardiologie et de pneumologie de Québec ( CRIUCPQ)

Introduction : La voie mTORC1 (mechanistic target of rapamycin complex 1) et l’un de ses principaux substrats S6K1 (p70 ribosomal S6 kinase) sont suractivés dans l’obésité et le diabète de type 2. Une avenue thérapeutique intéressante serait d’inhiber la voie S6K. Ainsi, nous avons montré dans une récente publication que le PF-4708671 (PF), un inhibiteur sélectif pour S6K1, améliore le métabolisme du glucose in vitro et in vivo. Cependant, nous avons observé des effets de l’inhibition de S6K1 indépendants de l’insuline sur le captage de glucose musculaire et la production hépatique de glucose.

Objectif : La présente étude a pour objectif de déterminer les mécanismes de cet inhibiteur sur le métabolisme du glucose indépendamment de l’insuline.

Résultats : L’inhibition de S6K1 par le PF augmente le captage du glucose basal dans les cellules musculaires L6 et diminue la production hépatique de glucose dans les cellules FAO. Afin d’identifier un mécanisme potentiel indépendant de l’insuline, nous avons mesuré la forme phosphorylée activatrice de l’AMPK (pAMPK Thr172) et la phosphorylation de son substrat ACC (pACC Ser79) dans les cellules musculaires L6. Le PF induit de manière concentration dépendante la pAMPK Thr172 et la pACC Ser79.L’AMPK présente également une période d’activité maximale lors des 45 premières minutes de traitement. Dans les cellules hépatiques, il y a une augmentation de pAMPK Thr172 et de pACC Ser79 de manière dose-dépendante. Lors des traitements temps-dépendants, il y a une augmentation de pAMPK Thr172 durant les 45 premières minutes. De plus, le PF induit une diminution de la phosphorylation de la protéine S6 aux positions Ser235/236 et Ser240 indicatrices de l’activité de S6K1 en fonction du temps et de la dose. Dans les cellules musculaires déficientes pour AMPKα1/α2, le PF induit toujours une augmentation du captage de glucose similaire aux cellules WT.

Conclusion : Les résultats montrent que l’inhibition de S6K1 par le PF-4708671 est associée à une augmentation de l’activité de l’AMPK mais que le captage du glucose musculaire induit par le PF-4708671 n’est pas dépendant de l’AMPK.

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14 - Resolvin D1 regulates bone metabolism

Houda Benabdoune(1,2); Patricia Rondon(2); Qin Shi(2); Julio Fernandes(2); Hassan Fahmi(1,3); Mohamed

Benderdour(1,2)

(1)Pharmacology department, Université de Montréal. Montreal, Quebec, Canada.

(2)Orthopedic research laboratory-Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal. Montreal, Quebec, Canada.

(3)Research Center-Centre hospitalier de l’université de Montréal. Montreal, Quebec, Canada.

PURPOSE

Resolvin-D1 (RvD1) is a derivative of omega-3 fatty acids and a potent anti-inflammatory agent synthesized

during the resolution phase of inflammation. In human cartilage, we recently reported that RvD1 strongly

inhibited a number of factors involved in inflammation, catabolism, oxidative stress, and apoptosis. Thus, the

overall objective of this study is to further investigate its effects on bone metabolism.

METHODS

First, murine macrophages RAW267.4 were used to assess osteoclasts (OC) recruitment and bone resorption.

RAW264.7 cells were incubated with 50 ng/ml LPS with or without RvD1 (0 - 10 µM) for 48 hours. Cell viability

was verified with the MTS test. OC phenotype markers, namely TRAP and cathepsin-K, were assessed by western

blot, enzymatic staining and immunocytochemistry. Levels of TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10, were measured by ELISA,

and PGE2 levels by EIA. NO release was measured by Greiss reaction.

To investigate bone resorption, RAW264.7 cells were seeded in hydroxyapatite plates, then treated with 50

ng/ml LPS with or without RvD1 (0.5 and 1 µM) for 48 hours. Plot formation was assessed by Von Kossa staining.

Second, human osteoblasts (Ob) were obtained from post-surgery discarded trabecular bone of osteoarthritic

(OA) patients who underwent total knee arthroplasty. First passage human OA Ob were treated either with RvD1

(0.1 - 1 µM) alone, or with 20 nM VitD3 with or without RvD1 (0.1 - 1 µM), for 48 hours. Cell viability was

evaluated with the MTS test. Alkaline phosphatase (PAL) activity and osteocalcin (OCN) release was determined

by colorimetric reaction and ELISA, respectively.

RESULTS

In RAW264.7 cells, our results clearly show that RvD1 strongly reduces OC recruitment and activation as indicated

by the inhibition of TRAP and cathepsin K expression as well as TNF-α, IL-1β, IL-6, PGE2 and NO release, as well

as the concurrent enhancement of IL-10 levels. Besides, RvD1 decreases bone resorption through the inhibition

of plots formation in hydroxyapatite matrix. In human OA Ob, RvD1 partially decreases VitD3-induced PAL

activity, while it maintains OCN expression at control levels.

CONCLUSIONS

Our in vitro results clearly show that RvD1 may play an important role in the regulation of bone metabolism.

Additionally to our previous data, our findings suggest that RvD1 presents a novel and original perspective to

musculoskeletal and bone diseases therapy.

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15 - Vulvodynia: exploring the association between pain intensity and psychological and muscular

variables using the modified fear avoidance model

Justine Benoit-Piau(1), Sophie Bergeron(2), Chantale Dumoulin(3), Marie-Hélène Mayrand(4), Samir Khalifé(5),

Guy Waddell(6) and Mélanie Morin(7)

(1) Université de Sherbrooke. (2) Université de Montréal. (3) Université de Montréal. (4) Université de Montréal. (5)

Université McGill. (6) Université de Sherbrooke. (7) Université de Sherbrooke

BACKGROUND: Provoked vestibulodynia (PVD) is a condition that affects up to 12% of women. Despite its high

prevalence, the etiology of PVD remains misunderstood. Many studies evaluated the association between

psychological variables and pain intensity in women with PVD. However, no studies so far have evaluated the

involvement of pelvic floor muscle (PFM) function as a predictor of pain intensity as proposed by the modified

fear-avoidance model (FAM) of Thomtén and Linton.

OBJECTIVE: To investigate psychological variables and PFM function as defined by the modified FAM and their

association with pain intensity among women with PVD.

METHODS: A total of 212 nulliparous women with PVD participated in the study. Validated questionnaires were

used to assess catastrophizing, fear of pain and partner support. They also underwent an evaluation of PFM

function including strength, speed of contraction, flexibility and tonus using dynamometry.

RESULTS: Hierarchical regression analysis showed that the FAM including psychological and PFM variables

significantly explained 27% of pain intensity during intercourse (p<0.001). A higher catastrophization and partner

support as well as a lower PFM flexibility were significantly correlated with higher pain intensity.

CONCLUSION: The findings showed that the addition of muscle variables as suggested by the FAM explained a

higher proportion of pain intensity, confirming that PVD can be partially explained by psychological factors and

PFM function.

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16 - La traduction locale au niveau des SICs régule l’adhésion cellulaire et le potentiel de migration

trans-endothéliale des cellules mésenchymateuses

Jonathan Bergeman(1), Alexia Caillier(1), François Houle(1), Laurence M.Gagné(1) et Marc-Étienne Huot(1)

(1)Centre de recherche sur le cancer de l'Université Laval, Hôtel-Dieu de Québec, Québec, Canada.

L’habileté des cellules cancéreuses épithéliale à transiter vers un phénotype mésenchymateux permet

l’acquisition d’une capacité de migration accrue leur permettant ainsi de quitter l’organe de la tumeur primaire

vers des organes secondaires. Une étude en 2004 a identifié une structure d’adhésion précoce, nommée

Spreading Initiation Centers (SICs), située au-dessus des complexes d’adhésion immatures. Cependant, peu de

travaux ont été réalisés au sujet de la fonction et des voies de signalisation contrôlant ces structures d’adhésion.

Nos résultats indiquent qu’au niveau des SICs, il y a un enrichissement de nombreuses protéines liant l’ARN

connues pour réguler la traduction, mais également un enrichissement d’ARNm. Nous avons mis en évidence la

présence de traduction locale dans les SICs par immunofluorescence à l’aide d’un anticorps dirigé contre la

puromycine, un antibiotique qui affecte la traduction cellulaire par son incorporation dans la chaîne

polypeptidique en cours de synthèse. Nos résultats indiquent que la traduction, qui a lieu majoritairement dans

cette structure, est nécessaire au métabolisme des SICs lors de l’adhésion. Ainsi, l’inhibition de la synthèse

protéique provoque à la fois une diminution de la capacité d’adhésion des cellules mésenchymateuses ou de

celles ayant transité vers ce phénotype, mais affecte également leur capacité d’invasion trans-endothéliale, un

phénomène important dans le développement métastatique.

L’ensemble de nos données montre que les SICs sont des points de contrôle de l’adhésion cellulaire et que la

traduction locale pourrait influencer l’adhérence cellulaire et donc, le potentiel métastatique des cellules

cancéreuses métastatiques.

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17 - ADAP2 favorise l’hypertrophie des cardiomyocytes en culture

Jonathan Berthiaume (1), Hugo Giguère (1), Audrey-Ann Dumont (1), Gino Laberge (1), Mannix Auger-Messier (1)

(1) Université de Sherbrooke

L’organisation du cytosquelette chez différents types cellulaires est reconnue pour être régulée, entre autres,

par l’activité des protéines ArfGAP with dual PH domains (ADAP). À cet effet, notre laboratoire a récemment

démontré que la protéine ADAP1 prévient l’hypertrophie en culture des cardiomyocytes isolés de rats nouveau-

nés (RNVC) par un mécanisme signalétique dépendant des intégrines (manuscrit soumis). La protéine ADAP2,

homologue à ADAP1, est reconnue pour son implication dans le développement de malformations

cardiovasculaires suite à son invalidation génétique. Cependant, le mécanisme par lequel elle exerce son action

reste à ce jour inconnu. Notre but est d’élucider le rôle d’ADAP2 chez les RNVC.

L’expression et la localisation subcellulaire d’ADAP2 dans le cœur de rat adulte ont été déterminées par RT-qPCR

en temps réel et immunobuvardage. La surexpression à l’aide d’adénovirus des formes de type sauvage (gain de

fonction) ou de différents mutants (perte de fonction) d’ADAP2 nous a permis d’en évaluer les effets chez les

RNVC en culture. Une analyse par microscopie confocale à haut débit (Operetta; PerkinElmer) a permis de

mesurer la taille des RNVC et d’en déterminer la morphologie. Nos résultats préliminaires démontrent qu’ADAP2

est exprimée de manière préférentielle à la membrane des cardiomyocytes. De plus, à l’inverse d’ADAP1, ADAP2

exacerbe l’hypertrophie pathologique des RNVC provoquée par une stimulation à la phényléphrine. Cette

hypertrophie semble dépendre de l’activité et de la localisation d’ADAP2 à la membrane cellulaire, ainsi qu’à son

action inhibitrice sur la protéine Arf6. Bien qu’homologues, les protéines ADAP1 et ADAP2 semblent exercer des

actions diamétralement opposées chez les RNVC. Nous voulons donc, par une approche de marquage de

proximité à la biotine exploitant l’ascorbate peroxidase APEX, identifier par spectrométrie de masse les

partenaires d’interactions spécifiques à ADAP1 et ADAP2 chez les RNVC. Nous validerons ensuite l’interactome

cardiaque spécifique des protéines ADAP à l’aide d’approches génétiques (gain et perte de fonction) et de

techniques biochimiques traditionnelles. En somme, nos résultats suggèrent qu’ADAP2 favorise, contrairement

à ADAP1, l’hypertrophie des cardiomyocytes en culture.

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18 - Rôle de Rnt1p au cours de la transcription.

Mélodie Berthoumieux (1), Michelle Scott (1) et Sherif Abou Elela (1)

(1) Université de Sherbrooke

Rnt1p est une ARNase III (DICER et DROSHA chez l’humain) spécifique de l’ARN double brin présente chez la

levure, dont le substrat canonique est une structure secondaire de l’ARN, une tige-boucle, possédant une

Guanine en deuxième position de sa tétraboucle, chez Saccharomyces cerevisiae. Rnt1p est connue entre autre

pour son implication dans la maturation de l’ARN ribosomal. Par contre le clivage effectué par Rnt1p sur un ARN

messager (ARNm) va libérer une extrémité 3’ non polyAdénylée et une extrémité 5’ non capée.

L’extrémité 3’ non polyAdénylé va être dégradée par l’exosome nucléaire ce qui va réduire directement

l’expression du gène.

L’extrémité 5’ libre va être reconnue et dégradée par l'exoribonucléase Rat1p, ce qui va induire la terminaison

de la transcription. La dégradation du transcrit naissant par Rat1p est connu pour provoquer le décrochage de la

Polymérase d’ARN II (RNAPII) et ainsi provoquer la fin de la transcription. Ce mode de terminaison de la

transcription semblait réservé à un petit nombre de transcrits qui échoue à la polyadénylation classique.

La plupart des analyses précédentes ont été effectuées sur des ARNs/gènes uniques à la fois. Notre but est de

comprendre les effets globaux de la protéine Rnt1p et par quels mécanismes (liaison à l’ARN, clivage de l’ARN,

liaison à des cofacteurs) ces effets sont dépendants.

J’ai donc produit des données de séquençage haut débit :

1. d’immuno précipitation de la chromatine de liée à Rnt1p ou à la RNAPII (WT et rnt1Δ)

2. d’ARN (WT et rnt1Δ).

Les analyses de ces expérimentations montrent que le clivage et/ou la liaison de Rnt1p peut impliquer un effet

sur la transcription (distribution de la RNAPII) selon le type de substrats (petits ARNs non codants, ARNs

messager) et des effets diverses sur le niveau d’expression de l’ARN selon la localisation du site de liaison/clivage

de Rnt1p. De façon intéressante la liaison de Rnt1p semble intervenir sur des séquences suivant des gènes/ARN

non codants fortement exprimés.

Ces résultats suggèrent qu’en plus de provoquer la dégradation directe d’un petit nombre d’ARNm, Rnt1p est

un mécanisme de sauvegarde de la transcription. C’est-à-dire qu’il va protéger les gènes qui suivent des gènes

fortement exprimés, d’erreur de terminaison de la transcription et d’encombrement stérique du brin matrice.

Car de tels évènements pourraient diminuer ou complétement éteindre l’expression des gènes qui suivent.

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19 - De nouveaux partenaires d’interaction pour l’exosite de la caspase-7

Marie-Anne Bilodeau-Laforest (1), Alexandre Desroches (1) et Jean-Bernard Denault (1)

(1) Institut de Pharmacologie de Sherbrooke, Département de Pharmacologie-Physiologie, Faculté de médecine et des

sciences de la santé, Université de Sherbrooke

Les caspases sont des peptidases à cystéine impliquées dans la réaction inflammatoire et qui sont au cœur de la

voie de signalisation de l’apoptose, ou mort cellulaire programmée. Lors de l’apoptose, les caspases initiatrices

(caspases 2, 8, 9 et 10) sont activées par des signaux internes ou externes à la cellule. Une fois activées, celles-ci

activeront par protéolyse les caspases exécutrices (caspases 3, 6, et 7). À première vue, la caspase-3 et la caspase-

7 clivent le même éventail de substrats pour mener à la mort cellulaire, mais avec une efficacité différente; la

caspase-7 possède une activité intrinsèque plus faible que celle de la caspase-3. Toutefois, la caspase-7 clive plus

efficacement les substrats PARP-1, impliqué dans la réparation de l’ADN, et p23, la cochaperonne d’Hsp90. Le

domaine N-terminal de la caspase-7 peut se lier à certains substrats et permet d’augmenter son affinité et ainsi

son efficacité de clivage pour ces substrats; cette partie de la protéase se nomme l’exosite.

Hypothèse : Parmi les substrats de la caspase-7, d’autres que PARP-1 et p23 utilisent l’exosite pour être clivés

plus efficacement.

Objectif : Identifier le répertoire des substrats de la caspase-7 utilisant son exosite pour leur clivage.

Méthode : Des mutants de la caspase-7 (la caspase-7 sauvage, un mutant de l’exosite et un mutant catalytique)

ont été incubés avec des extraits cellulaires de cellules HCT116 CASP7 KO marqués avec différents isotopes dans

les acides aminés arginine et lysine (méthode SILAC). Ces échantillons ont été mélangés et analysés par

spectrométrie de masse en tandem.

Résultats : 865 peptides sur les 24 441 peptides identifiés proviennent du clivage par la caspase-7 et parmi ceux-

ci, 148 peptides étaient plus abondant dans l’échantillon traité avec la caspase-7 sauvage qu’avec le mutant de

l’exosite.

Conclusion : Ces 148 peptides correspondent à presqu’autant de protéines différentes potentiellement clivées

grâce à leur liaison à l’exosite de la caspase-7.

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20 - Un Knock-In conditionnel pour l’étude du rôle, des fonctions et de la régulation du récepteur

opioïdergique Delta.

Auteurs: Khaled. ABDALLAH(1), Veronique. BLAIS(1), Francis. Nadeau(1), Francis. Bergeron(1), Kelly.

BRADBURY(3), Kimberly. FONTES(3), Jean-Luc. PARENT(2), Catherine. M.CAHILL(4), James. BOULTER(5), Louis.

GENDRON(1);

(1) Dépt. de Pharmacologie-Physiologie; (2) Dépt. de Médecine, Université de Sherbrooke; (3) Bishop's University,

Sherbrooke, QC; (4) Dept. of Anesthesiology and perioperative care school of medicine, University of California-Irvine,

Irvine, CA; (5) Dept. of Psychiatry & Biobehavioral Science, Univ. of California, Los Angeles, CA.

La stimulation du récepteur opioïdergique Delta (DOPr) dont l’activation entraîne moins d’effets secondaires que

son homologue Mu (MOPr) représente une cible intéressante pour le développement de nouvelles thérapies

visant à soulager la douleur chronique et les troubles émotionnels. Bien que les agonistes traditionnels

produisent un effet analgésique faible chez les animaux sains ou dans des modèles de douleur aigüe, nous avons

observé une augmentation de son pouvoir analgésique chez les animaux en stade de douleur chronique

(inflammatoire, neuropathique ou de douleur induite par le cancer des os). Cet effet analgésique accru est

concomitant avec une translocation du récepteur DOPr du compartiment intracellulaire à la membrane

cellulaire. Afin d’étudier les rôles du DOPr in vivo et les mécanismes cellulaires et moléculaires régulant son

routage cellulaire, nous avons généré un modèle de souris génétiquement modifiées dans lequel un épitope Flag

a été introduit en N-terminal. Une cassette de terminaison translationelle (« translational STOP cassette ») a

aussi été insérée en amont du codon d’initiation. En absence de recombinaison, ces souris (STOP::Flag-DOPr)

présentent un génotype de souris knockout. Cependant, lorsqu’accouplé avec une souris Zp3-Cre, les souris

expriment le récepteur Flag-DOPr à la place du récepteur endogène (Flag-DOPr knock-in). Une caractérisation

exhaustive nous a permis de déterminer que le récepteur avec l’épitope Flag était exprimé à des niveaux

similaires et dans les mêmes zones du cerveau que sa forme endogène. De plus, les effets comportementaux

observés suite à la stimulation avec différents agonistes delta sont similaires aux animaux sauvages. Ces souris

génétiquement modifiées constituent donc un nouveau modèle pour les études sur DOPr. Dans notre

laboratoire, elles seront notamment utilisées afin d’élucider le rôle de DOPr dans le contrôle de la douleur

thermique.

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21 - Plateforme de synthèse de peptides et de sondes d'imagerie

Marc-André Bonin, Marie-Reine Lefebvre

Université de Sherbrooke

Ce service se spécialise dans la synthèse de peptides qui ne peuvent être obtenus de source commerciale, soit

de catalogues ou de services de synthèse commerciaux. La plateforme de chimie peptidique et de sondes

d'imagerie offre un service de synthèse et de purification de peptides en utilisant des méthodes de synthèse en

phase liquide classique, ou sur phase solide. Cette dernière est privilégiée pour la production à faible échelle

(jusqu’à 1g) de peptides allant jusqu’à 45 aa. Notre plateforme unique est équipée de synthétiseurs peptidiques

automatisés Tribute (Protein Technologies) nous permettant d’effectuer des synthèses avec rapidité et

atteignant un niveau de pureté exceptionnel, en utilisant la technologie de groupement protecteur Fmoc. Cette

technologie permet la synthèse en lots sur support solide de résine. La synthèse en phase solide est suivie des

étapes de clivage, de purification et lyophilisation. Nous effectuons également des analyses de pureté par

spectrométrie de masse sur un appareil UPLC-MS disponible au Laboratoire du Pr. Éric Marsault. De plus, la

plateforme est utilisée à des fins de formation pour initier les étudiants et le personnel de recherche aux

rudiments de la chimie/synthèse peptidique. Nous effectuons la synthèse de peptides avec des acides aminés

non naturels (configuration D, N- ou C-alpha-méthylés et autres) ainsi que la synthèse de MAP (multiple antigenic

peptide) pour l’immunisation. Nous sommes en mesure de desingner et de produire des peptides autement

complexes pour des utilisations en imagerie par fluorescence, par IRM et par TEP. En effet, nous avons une

bonne expertise dans l'incorporation de dérivés fluorescents divers (fluorophores, quenchers) et de chelatant

(DOTA, NOTA, DTPA) dans nos peptides, ce qui permet de les utiliser dans plusieures modalités d'imagerie. Des

projets de bioconjugaison peuvent aussi être réalisés par la plateforme.

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22 - Clinical outcomes and predictive factors associated with peripheral nerve field stimulation for

low back pain.

Bordeleau Martine(1), Cottin Sylvine(1), Gallani Nevair(1), Prudhomme Michel(1), Cantin Léo(1).

(1) Université Laval

OBJECTIF: Low back pain (LBP) as been identified as the greatest contributor to disability worldwide by the Global

Burden of Disease 2010 Study. Successful use and safety of peripheral nerve field stimulation (PNFS) for LBP have

been reported in some prospective controlled trials. The aim of PNFS is to delivers electrical stimulation via

electrodes introduced in the hypodermal layer of the skin, near, or within areas affected by neuropathic chronic

LBP. We hypothesized that PNFS would be an effective procedure to treat patients with chronic LBP. Our

objective was to evaluate clinical outcomes in a long-term follow-up of patients implanted with a PNFS system

for LBP and to identify predictive factors of good outcome.

METHODS: We performed a cohort study on 30 consecutive patients treated by PNFS for chronic LBP at the

Hospital of Enfant-Jesus. Efficacy outcome included the percentage of pain reduction and self-administered

questionnaires (BPI, ODI, SF-36 v2, CESD-R, PGIC, PCS) assessed before implantation and 6, 12, 24 months after

surgery. Adverse effects were also collected in patient’s medical record. Generalized estimating equations were

used to compare clinical outcomes at different follow-up times and multiple linear regression analysis was

performed to identify potential predictors of pain relief.

RESULTS: Among these patients, 37% were suffering from low back pain without surgery history, and 50% had

failed back surgery syndrome. In 67% of cases, the pain was localised in the back, but also reach the leg(s) in 33%

of patients. At all follow-up assessments, the mean topographical coverage of the pain area by paresthesia was

more than 90%, and the average of pain relief was more than 50%. The results show a significant relief of pain

intensity and severity, and significant improving of patient's functional capacity and quality of life. These results

were maintained two years after implantation. When adjusting for age, the company, the percentage of

coverage, the initial score at pain catastrophisation scale, and the average of initial pain, none of these factors

seem to be a good predictor of pain relief. No severe or very severe side effects were reported.

CONCLUSION: This study provides support for PNFS as effective treatment option for patients with intractable

LBP.

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23 - Évolution postpartum de l’atteinte glomérulaire induite par un trouble hypertensif de la

grossesse

M Bouchard(1), M Lavoie(1), J Moreau(2), J Rodrigue(1), A Ouellet(1), P Geraldes(1), AM Côté(1)

(1) Université de Sherbrooke. (2) CRCHUS

Introduction: Les troubles hypertensifs de la grossesse (THG) peuvent induire une atteinte glomérulaire qui est

diagnostiquée par l’apparition de la protéinurie. La perte de cellules épithéliales glomérulaires dans l’urine

(podocyturie) ainsi que l’albuminurie seraient des marqueurs plus sensibles de l’atteinte glomérulaire dans les

THG. À long terme, le risque de maladie rénale est plus élevé chez les patientes ayant eu un THG. L’objectif de

cette étude est d’évaluer la récupération postpartum de l’atteinte glomérulaire dans cette population.

Méthodes: Parmi 149 patientes recrutées pour un THG, 79 ont acceptées d’être suivies postpartum, soit à 6

semaines puis à 3, 6 et 12 mois postpartum. Lors de ces visites, la tension artérielle systolique (TAS) et diastolique

(TAD) a été mesurée et un échantillon urinaire prélevé. Une partie a été envoyée au laboratoire hospitalier pour

les analyses des ratios protéine/créatinine (RPC) et albumine/créatinine (RAC) alors que la podocyturie a été

mesurée au Centre de recherche par immunofluorescence (IF) à l’aide de la podocine, un marqueur spécifique

des podocytes. Des analyses de comparaisons multiples ont été effectuées par test de Wilcoxon avec correction

de Bonferroni.

Résultats: Tel qu’attendu, la tension artérielle et la protéinurie diminuent de manière significative 6 semaines

postpartum en comparaison au recrutement (médianes respectivement pour TAS et TAD: 149 et 95 mmHg vs

121 et 81 mmHg, p<0.001; pour RPC: 0.19 vs 0.05 g/g, p<0.001,). La podocyturie ainsi que l’albuminurie

diminuent aussi significativement (décompte de podocyturie en IF : 529.4 vs 92.5 cellules/mmol créatinine,

p=0.001; pour RAC: 6.40 vs 1.45 mg/mmol,p<0.001). Au cours des suivis à 3, 6 et 12 mois postpartum, il n’y a

plus aucune différence pour ces marqueurs glomérulaires. Cependant, chez 3 patientes avec hypertension

chronique, la podocyturie demeure présente 12 mois postpartum.

Conclusions: L’atteinte glomérulaire induite par un THG récupère rapidement postpartum pour la majorité des

patientes. La persistance de la podocyturie chez certaines d’entre elles pourrait indiquer un risque accru de

maladie rénale à long terme. Ces données indiquent qu’il est possible de documenter l’évolution postpartum de

marqueurs d’atteinte glomérulaire plus sensible qui pourraient mener à une meilleure prise en charge des

femmes ayant eu un THG et à risque futur de maladie rénale.

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24 - L'IL-33 augmente l'expression des récepteurs aux cystéinyl-leukotriènes dans les lymphocytes T

périphériques humains

Marie Boudaud (1), Sylvie Turcotte (1), Jana Stankova (1), Marek Rola-Pleszczynski (1)

(1) Université de Sherbrooke, FMSS, Département de pédiatrie, Division d'Allergologie/Immunologie

L’asthme est une maladie inflammatoire des voies aériennes caractérisée par des difficultés respiratoires dues à

une obstruction réversible des bronches. Le choix thérapeutique de première intention est l’administration de

glucocorticoïdes, pour leur effet anti-inflammatoire et immunosuppresseur. Néanmoins, leur mode d’action

n’est pas spécifique et présente donc divers effets secondaires. De plus, il existe plusieurs profils cliniques

d’asthme ne répondants pas tous de façon favorable aux traitements proposés. Une nouvelle cible thérapeutique

a donc été proposée : l’interleukine(IL)-33.

Au cours d’une réaction asthmatique, l’IL-33 est libérée abondamment par les cellules épithéliales des voies

aériennes et les cellules endothéliales pulmonaires. Elle est reconnue par les leucocytes qui expriment son

récepteur spécifique ST2 et la chaine IL-1RAcP responsable de la transduction du signal vers l’activation des voies

des MAPK. Ce signal conduit à la synthèse et relâche de diverses cytokines dont l’IL-5 et l’IL-13, initiant le profil

immun et symptomatique de la pathologie. Ces leucocytes surexpriment aussi les récepteurs aux cystéinyl-

leucotriènes CysLT1 et CysLT2. Les cystéinyl-leucotriènes (LTC4, LTD4 et LTE4) sont de puissants agents broncho-

constricteurs et médiateurs de l’inflammation, agissant à la fois comme chimio-attractants et régulateurs de la

synthèse de cytokines.

Dans cette étude, nous avons exploré la régulation de l’expression des récepteurs CysLT1 et CysLT2 par l’IL-33

dans des lymphocytes périphériques humains isolés à partir du sang de donneurs sains.

Les niveaux d’expression des ARNm codants pour CysLT1 et CysLT2 ne sont pas affectés par le traitement à l’IL-

33. En revanche, les analyses par cytométrie en flux montrent que l’IL-33 augmente le niveau d’expression

protéique de CysLT1 dans les lymphocytes T CD4+ et B, suggérant une régulation traductionnelle ou post-

traductionnelle de ce récepteur. Dans ce sens, l’influx calcique et la migration cellulaire en réponse au LTD4 sont

augmentés dans les lymphocytes T stimulés à l’IL-33. L’augmentation d’expression de CysLT1 par l’IL-33 est

bloquée en présence d’un anticorps spécifique du récepteur ST2 ou d’inhibiteurs pharmacologiques des voies

des MAPK (p38, MEK1/2 et JNK).

Ces résultats démontrent la régulation de l’expression du récepteur CysLT1 par l’IL-33 dans les lymphocytes

périphériques, et renforcent le choix de l’axe IL-33/ST2 comme cible thérapeutique dans la pathologie de

l’asthme allergique.

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25 - Un potentiel peptide candidat antagoniste du Neuromédine U Récepteur 2

(NmU-R2) pour prévenir le travail préterme.

Amarilys Boudreault (1,2), Christiane Quiniou (1), Xin Hou (1), Mathieu Nadeau-Vallée (2), Sylvain Chemtob

(1,2)

(1) Départements de Pédiatrie, Ophtalmologie et Pharmacologie, Centre de Recherche du CHU Sainte-Justine, Mtl, CA H3T

1C5 (2) Faculté de Médecine, Université de Montréal, Mtl, CA H3C 3J7

Soixante-quinze pourcent des naissances prématurées (avant 37 semaines de gestation) sont dûes au travail

préterme dans lequel les contractions myométriales sont causées par les protéines activatrices de l’utérus qui

sont davantage induites en présence d’inflammation. De plus, naître prématurément augmente fortement les

risques de mortalité et morbidité néonatales et/ou de complications à long terme. Pour le moment, les

tocolytiques (agents inhibant les contractions) ne sont pas efficaces pour prolonger la gestation de plus de 48h

et causent de nombreux effets indésirables. Nous avons récemment découvert que le neuropeptide

neuromédine U (NmU) favorise la contraction utérine en induisant la relâche intracellulaire de calcium via le

neuromédine U récepteur 2 (NmU-R2). Ce système utérotonique impliqué dans le travail préterme vient d’être

bien étudié par notre laboratoire. Par la suite, nous avons cherché à caractériser cinq petits peptides

antagonistes du NmU-R2, conçus dans notre laboratoire, afin de choisir le meilleur candidat pour le

développement d’un nouveau tocolytique. Nos résultats montrent que : 1) les peptides 3 et 5 inhibent davantage

la contraction utérine ex vivo (inhibition de 40-50%) ainsi que la relâche de calcium in vitro (inhibition de 50-

60%); 2) ces peptides inhibent la relâche de calcium de façon dose-dépendante (IC50 des courbes dose-réponse

: 0.63nM pour le peptide 3 et 23nM pour le peptide 5); 3) la phosphorylation de Erk et Akt est inhibée de manière

dose-dépendante par ces peptides. Nos résultats montrent que deux peptides sur cinq ont de meilleures

propriétés antagonistes contre NmU-R2, mais que les résultats sont plus constants avec le peptide 5. Ce dernier

est donc le meilleur candidat et constitue un potentiel agent tocolytique contre NmU-R2 pour prévenir le travail

préterme.

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26 - Les RSG, une nouvelle famille de molécules à potentiel antipsoriasique

Joël Boutin(1), Marie-France Côté(1), Sébastien Tremblay(2), Stéphane Gobeil(1) et René C.-Gaudreault(2).

(1)CRCHU de Québec, CHUL, Québec, Canada.

(2) CRCHU de Québec, Hôpital Saint-François d’Assise, Québec, Canada

Le psoriasis est la maladie auto-immune la plus répandue dans le monde, affectant 4,6 % des Canadiens. Les

personnes atteintes développent sur leur peau des plaques rouges squameuses qui s’accompagnent de douleur

et de démangeaison chroniques. Le psoriasis résulte de l’hyperactivité du système immunitaire touchant les

kératinocytes de l’épiderme ; ces derniers arrêtent de se différencier et prolifèrent de façon anarchique. À ce

jour, il n’existe pas de traitement adéquat pour contrôler les symptômes de la maladie. Nous avons développé

une famille de molécules, les RSG, qui ont montré un potentiel antipsoriasique dans un modèle de peau

reconstituée. De plus, leurs propriétés physico-chimiques permettent de prédire qu’elles pourraient être

absorbées à travers la peau. Nous émettons donc l’hypothèse que les RSG constituent une nouvelle classe de

médicaments tropiques pour traiter cette maladie. Les objectifs de ce projet sont de caractériser le mode

d’action des RSG in vitro, d’optimiser leur potentiel thérapeutique, puis d’en démontrer l’efficacité dans un

modèle murin.

Nous avons évalué le potentiel anti-inflammatoire des RSG sur un modèle cellulaire de psoriasis ; des

kératinocytes HaCaT incubés en présence des cytokines IL-17A et TNF-α. La combinaison de ces deux cytokines

induit une réponse pro-inflammatoire et simule un état psoriasique. Le niveau de production de cytokines

comme IL-6 et TNF-α fut quantifié par RT-qPCR. Nous avons découvert que la molécule RSG4 à 10 µM agit comme

anti-inflammatoire en diminuant la quantité d’ARN de TNF-α de ~65 % et d’IL-6 de ~50 %. Nous avons ensuite

montré par ELISA que cela se traduisait par une diminution de plus de 70 % de la sécrétion d’IL-6. Nous évaluons

et optimisons présentement les relations structure-activité en criblant par ELISA une chimiothèque de dérivés.

Nous avons identifié des RSG réduisant la sécrétion d’IL-6 de façon similaire à la curcumine et à l’ibuprofène. IL-

6 induit l’hyperprolifération des kératinocytes dans le psoriasis en plus d’être impliqué dans d’autres maladies

immunitaires, comme l’arthrite rhumatoïde.

Prochainement, nous testerons les effets thérapeutiques de la RSG la plus prometteuse sur des souris

psoriasiques, dont les lésions seront induites par une crème d’imiquimod 5 %. En conclusion, nos données

indiquent que les RSG ont des propriétés anti-inflammatoires en diminuant notamment la sécrétion de l’IL-6 et

qu’elles constituent un tout nouveau médicament antipsoriasique.

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27 - L’interaction entre les protéines NS3 et NS5 du virus du Nil occidental - une nouvelle cible pour

le développement de composés antiviraux?

Carolin Brand(1), Kevin Votaw(2), Martin McCullagh(2), Brian Geiss(3) and Martin Bisaillon(1)

(1) Département de Biochimie, Université de Sherbrooke, Sherbrooke, Canada

(2) Department of Chemistry, Colorado State University, Fort Collins, USA

(3) Department of Microbiology, Immunology and Pathology, Colorado State University, Fort Collins, USA

Les flavivirus, tels que le virus du Nil occidental, le virus de la dengue, le virus de la fièvre jaune et le virus Zika

sont des virus d'ARNsb transmis par des moustiques. Étant donné des épidémies plus fréquentes et plus sévères,

les flavivirus constituent une préoccupation croissante de santé publique. Ils peuvent causer des maladies

neurologiques graves, et des dizaines de milliers de décès par année au niveau mondial sont associés aux

infections par des flavivirus. À ce jour, il n’y a pas de traitement antiviral disponible malgré de nombreux efforts

de recherche pour développer des inhibiteurs d’enzymes virales. Ici, nous cherchons à caractériser l'interaction

entre les protéines virales NS3 et NS5 qui forment le complexe de réplication en vue de cibler cette interaction

pour la découverte de nouveaux composés antiviraux.

Un modèle d'interaction des protéines NS3 et NS5 du virus du Nil occidental a été créé par arrimage manuel à

partir de structures cristallographiques des protéines individuelles de flavivirus apparentés, et ce modèle a

ensuite été soumis à des simulations de dynamique moléculaire. Des interactions potentielles entre les deux

protéines ont été identifiées, et les résidus impliqués dans ces interactions ont été mutés. Les effets des

mutations sur l’interaction entre NS3 et NS5 ainsi que sur le niveau de réplication virale ont été mesurés. Une

région particulière sur la surface de la protéine NS3 a été identifiée comme jouant un rôle important dans la

réplication virale. Un criblage virtuel pour des composés qui peuvent lier cette région sera effectué, et la capacité

de ces composés à interférer avec la formation du complexe de réplication virale et donc avec la réplication du

génome viral sera évaluée.

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28 - New insight on experimental data using a streamlined, naive protocol for molecular dynamics

analysis

Laurent Bruneau Cossette (1,2), Jérôme Cabana (1,2), Philippe Sarret (2), Éric Marsault (2), Pierre Lavigne (1)

(1) Université de Sherbrooke. (2) Institut de pharmacologie de Sherbrooke

Hidden Markov Models (HMMs) and time-lagged Independent Component Analysis (tICA) are simple,

informative and accurate tools for the analysis or Molecular Dynamics (MD) data. They provide accurate

information on both the thermodynamics (populations of states) and kinetics (timescales of state transitions) of

proteins. However, they are relatively new: HMMs lack the analysis tools and validation that Markov State

Models already have and tICAs, like PCAs, are hard to interpret.

The use of both techniques in a single set of tools, complemented with naive model selection criteria, macrostate

analysis, residue contribution analysis and data display tools, provides new insight on experimental results on

the structure of AT1-R, a GPCR. It has been found that AT1-R conformations, a few μs after ligand binding, are

distributed in three macrostates, and that these macrostates could correspond to different signaling behaviors.

The transitions between macrostates show major contributions from highly conserved residues, most likely

involved in ligand binding and signaling. The information provided by this set of tools could be used to explore

further the dynamics of AT1-R, as well as other GPCRs, in targeted structural and dynamics research (e.g.

mutants, docking).

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29 - Mitacs – Faciliter l’innovation coopérative

Jérôme Cabana

Mitacs

Mitacs est un organisme à but non lucratif œuvrant à l’échelle nationale dans le but de créer des partenariats de

recherche entre l’académie, l’industrie et le monde. Nous aidons à développer des relations de recherche basées

sur des objectifs communs et préparons les étudiants gradués à leur transition vers une carrière professionnelle.

L’intention est simple : déployer le talent issu des universités canadiennes dans l’économie canadienne afin de

stimuler l’innovation.

Pour les entreprises, un projet Mitacs offre un levier financier facilitant l’accès au meilleur talent de recherche

au pays afin de répondre à leurs besoins et d’intensifier leurs activités en R&D. Pour les professeurs, ceci inclut

du financement pour la recherche et permet d’établir des partenariats durables soutenus par des buts communs.

Pour les étudiants et chercheurs postdoctoraux, un tel projet comprend un stage dans l’entreprise leur

permettant d’acquérir de l’expérience au-delà du milieu universitaire, d’améliorer leurs possibilités d’emploi et

de développer leurs réseaux professionnels.

Mitacs offre également des ateliers de formation permettant aux étudiants d’acquérir des compétences

transversales qui procurent un avantage concurrentiel sur le marché du travail.

----

Mitacs is a nonprofit organization working Canada-wide to create research partnerships between academia,

industry, and the world. We help develop research relations based on common objectives and prepare grad

students for the transition toward their professional career. The idea is simple: deploy the talent originating from

Canadian universities into the Canadian economy to stimulate innovation.

For businesses, a Mitacs project offers a financial leverage allowing them to easily access top research talent in

Canada to answer their needs and increase R&D capacity. For professors, this includes a research grant and

allows to build strong partnerships supported by shared goals. For students and postdoctoral researchers, the

project includes an internship within the company allowing them to acquire experience outside of academia,

improve their employability and develop their professional networks.

Mitacs also offers workshops allowing students to acquire translational skills that provide a competitive

advantage on the job market.

__________________________

Jérôme Cabana, PhD

Spécialiste, développement des affaires

Mitacs | Université de Sherbrooke

819-620-8120 | jcabana@mitacs.ca

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30 - In vivo targeting of a suppressor mutation in type 1 tyrosinemia

Sophie Carter (2), Alexis Duringer (1,2), Jérémy Loehr (1,2), Caroline Huard (2), Robert M Tanguay (1,3), Yannick

Doyon (1,2)

(1) Université Laval, Québec, Qc, Canada; (2) Centre de recherche du CHU de Québec-Université Laval, (3) Institut de

Biologie Intégrative et des Systèmes (IBIS)

Type 1 tyrosinemia is caused by a deficiency of the enzyme fumarylacetoacetate hydrolase (FAH), which catalyzes

the final step in the degradation of tyrosine. Loss of FAH gene expression results in incomplete metabolism of

tyrosine leading to severe hepato-renal symptoms and a high risk of hepatocarcinomas. Strategies aimed at

replacing FAH with a working copy have been developed leading to a reduction of tyrosine levels. However,

integration frequencies remain low, which is a concern for the development of carcinomas. We hypothesized

that creating a suppressor mutation in the homogentisate 1,2-dioxygenase (HGD) gene could rescue the

phenotype of tyrosinemic mice with high frequency. We identified and validated SaCas9, StCas9 and Cpf1 gRNA

against different exons of HGD. Most efficient gRNAs were cloned into a single AAV vector comprising a liver

specific HLP promoter and the nuclease. Different doses of AAV8 were injected through the tail vein of 8 weeks

old WT mice. Hepatic gene disruption was quantified by surveyor assay 1 month following the injection.

Preliminary experiments showed disruption frequencies of up to 25%. These results suggest the feasibility of a

single vector strategy to target HGD. Therapeutic effects remain to be evaluated in FAH -/- mice.

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31 - Additive neuroprotective effects of interleukin-1 receptor antagonist combined to hypothermia

in a rat model of lipopolysaccharide plus hypoxic-ischemic encephalopathy.

Mathilde Chevin (1), Clémence Guiraut (1), Guillaume Sébire (1,2)

1 Laboratoire de neurologie, Département de pédiatrie, Institut de recherche du Centre Universitaire de Santé McGill,

McGill University, QC, Canada.

2 Laboratoire de neurologie, Département de pédiatrie, Université de Sherbrooke, QC, Canada

Introduction: Neonatal encephalopathy (NE) which affects 2-9/1000 term newborns leads to life threatening

symptoms, and can cause permanent brain injury such as cerebral palsy (CP). The two main risk factors of NE are

perinatal infection-inflammation and hypoxia-ischemia (HI). Hypothermia (HT) provides a partial

neuroprotection in moderate to severe NE from HI origin. Such neuroprotective effect of HT remains unclear

when NE result from inflammation combined to HI. Otherwise, the anti-inflammatory interleukine-1 receptor

antagonist (IL-1Ra) has a well-proved neuroprotective effect in preclinical models of perinatal inflammation

and/or HI. We hypothesize that the combination of mild HT plus IL-1Ra results in additive or synergistic

neuroprotection.

Objectives: We characterized neuroprotective effects of HT on rat pups exposed to lipopolysaccharide (LPS)+HI

in term of expression of cerebral inflammatory markers and prevention of cerebral damage. Then, we tested the

added value of IL-1Ra administration to the neuroprotective effect of HT in NE.

Material and methods: We used a rat model of LPS+HI-induced NE at postnatal (P) day 12. P12 corresponds to

the level of cerebral development of the human full term newborn. Inflammation was induced by injecting

intraperitoneally (ip) with 200 µg/kg of LPS from E.coli. Four hours (h) later, the right common carotid artery was

ligated, then hypoxia was induced (8% O2, 1 h 30 min). Finally, rat pups were submitted to HT (32° +/- 0.5°C, 4

h). IL-1Ra (12.5 - 200 mg/kg q12 h) was injected ip from P12 to P14.

Results: HT alleviated brain injury in the LPS+HI-exposed cerebral neocortex and hippocampus. This protective

effect only occurred in the brain areas affected by ischemic penumbra, but not core injury. This neuroprotective

effect did not result from a down-regulation of the neuroinflammatory response mediated by IL-1β or TNF-α. HT

increased neuronal superoxide dismutase-1 (SOD-1) and glutathione peroxidase-1 (GPX-1) expression, which is

responsible for clearing free superoxide radicals. IL-1Ra (50 mg/kg) reduced core injury of pups exposed to

LPS+HI.

Conclusion: Our results demonstrate a neuroprotective effect of HT on LPS+HI-induced NE. IL-1Ra (50 mg/kg) has

an added value to the neuroprotective effect of HT. This project could open new therapeutic avenues to prevent

CP.

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32 - Étude de la perméabilité de macrocycles semi-peptidiques

Christian Comeau(1), Grégoire Leclair(2), Éric Marsault(1)

(1) Université de Sherbrooke

(2) Université de Montréal

La chimie peptidique est une chimie aujourd'hui très développée et facile d'accès. Pourtant, il n'existe que peu

de médicaments peptidiques ayant atteint l'échelle commerciale et la majorité d'entre eux doivent être

administrés par injection. Il y a deux raisons principales à leur faible biodisponibilité orale. D'abord, les protéines

sont facilement reconnues et métabolisées avant même de se rendre à l'intestin. Puis, même en y parvenant,

leur perméabilité à travers la barrière intestinale est limitée par leur faible lipophilicité.

Les peptides cycliques présentent des avantages pharmacocinétiques: leur conformation plus rigide tend à

réduire leur clivage par certaines protéases et la cyclisation tête-à-queue évite d'exposer les fonctions amine et

acide terminales qui sont ionisées au pH physiologique. Les liens amides restent toutefois une source importante

de polarité et il a été observé que la N-méthylation induit de meilleures perméabilités. L'exemple le plus

marquant étant la ciclosporine, un produit isolé de source naturelle qui comporte plusieurs amides N-méthylées

et qui montre une bonne biodisponibilité orale. Les dérivés N-alkylés de la glycine (appelés peptoïdes) présentent

ce même avantage.

Il a également été démontré que la possibilité de former des ponts H intramoléculaires dans un milieu lipidique,

telle la membrane cellulaire, peut effectivement «masquer» la polarité des amides. Cette possibilité de

changement conformationnel lors du passage entre milieu hydrophile et milieu lipophile a été décrit comme la

clé de la perméabilité des peptides cycliques.

Combinant ces deux aspects, ce projet s'articule autour de la synthèse et de l'évaluation de la perméabilité de

macrocycles semi-peptidiques incorporant à la fois un peptoïde et un chaînon aliphatique. La grandeur du cycle

reste constante à 15 atomes, avec la séquence Chaînon-Ala-Leu-Phe. Pour varier la structure, les acides aminés

sont remplacés un à un par leur équivalent peptoïdique et on change la position et la stréréochimie du méthyl

porté par le chaînon. En incluant les macrocycles sans peptoïde et le chaînon sans méthyle, il s'agit d'une librairie

de 36 composés.

La perméabilité sera évaluée par essais PAMPA et Caco-2. Les résultats de cette étude systématique apporteront

des données expérimentales importantes pour le développement du modèle de perméabilité des peptides

cycliques. La construction d'un tel modèle pourrait donner aux peptides un accès à la voie d'administration orale.

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33 - Synthèse et caractérisation de sondes fluorescentes activables pour la détection de l’inflammation pulmonaire

Manar Hammood (1), Marc-André Bonin (1), Éric Marsault (1)

(1) Université de Sherbrooke

La myéloperoxydase est un enzyme oxydant très fort produit par les cellules inflammatoires, principalement les neutrophiles, comme mécanisme de défense contre un pathogène. Une élévation de niveau de la MPO dans les poumons est nuisible pour le tissu pulmonaire à long terme. La détection de cet enzyme serait à l’intérêt de la médecine préventive et curative. Afin de remplacer la biopsie qui pourrait être invasive et douloureux pour les patients, une sonde fluorescente a été synthétisée au cours de ce projet. L’activation de la sonde sur une microplaque par l’HOCl produit par la MPO démontre une augmentation d’environ 50 fois de la fluorescence en présence de 60 µM d’HOCl. Les effets de pH du tampon utilisé ont été évalués. À pH 7.4 la sonde semble avoir l’activité optimale, tandis qu’à pH 6 et 6.5 le signal de la fluorescence est plus faible. Suite à l’induction de la voie MPO chez les neutrophiles, une augmentation de la fluorescence est observée en essaie in cellulo à l’aide de technique de cytométrie en flux (FACs).

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34 - Les acides gras trans laitiers atténuent l’expression des gènes inflammatoires induite par le TNF-

α dans les cellules endothéliales HUVECs et les cellules d’hépatome HepG2

Marine S. Da Silva, Pierre Julien, Olivier Barbier et Iwona Rudkowska

Endocrinologie et Néphrologie, Centre de recherche du CHU de Québec, Université Laval

L’inflammation systémique chronique peut endommager le tissu vasculaire et le foie. La consommation d’acides

gras trans (AGT) a été associée à l’augmentation du risque de maladies cardiovasculaires et de la stéatose

hépatique. Cependant, l’effet des AGT sur l’inflammation demeure controversé.

Objectif: Déterminer in vitro l’effet des AGT sur l’expression des gènes liés à l’inflammation.

Méthodes: Des cellules endothéliales de la veine ombilicale (HUVECs) et des cellules de carcinome

hépatocellulaire (HepG2), stimulées avec du TNF-α, ont été incubées 24h avec : 1- des AGT naturellement

présents dans les produits laitiers, soit l’acide trans-palmitoléique (tPA, 25–50–150 μM), l’acide trans-vaccénique

(tVA, 25– 50–150 μM) ou un mélange de tPA et de tVA (50/150 μM); 2- un AGT industriel, l’acide élaïdique (EA,

25–50–150 μM). L’expression des gènes inflammatoires a été déterminée par RT-PCR. La composition en acides

gras des membranes cellulaires a été déterminée par chromatographie en phase gazeuse.

Résultats: Les AGT s’incorporent de façon spécifique dans les membranes, représentant 15-20% des acides gras

totaux dans les HUVECs et 3-8% dans les HepG2. Les AGT laitiers ont réduit considérablement l’expression des

gènes TNF, VCAM-1 et SOD2 dans les HUVECs (-95%), ainsi que TNF et IL-8 dans les HepG2 (-50%). L’EA a

également diminué l’expression des gènes dans les HUVECs (-90%), mais pas dans les HepG2.

Conclusion: Des concentrations physiologiques d’AGT laitiers atténuent l’expression des gènes inflammatoires

dans les HUVECs et HepG2. Ces données montrent que les effets des AGT seraient différents selon la source

alimentaire et le tissu considéré.

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35 - Temporal contribution of the CCL2/CCR2 chemokine axis to chronic inflammatory pain elucidated

by dicer substrate small interfering RNA

Marc-André Dansereau(1), Ashley M Jacobi(2), Scott S Rose(2), Mark A Behlke(2), Jean-Michel Longpré(1), and

Philippe Sarret(1)

(1) Institut de Pharmacologie de Sherbrooke, Université de Sherbrooke, Sherbrooke, QC, Canada J1H 5N4; (2) Integrated

DNA Technologies Inc., Coralville, IA, USA

There is now compelling evidence suggesting that chemokines, and especially CCL2 and its cognate receptor

CCR2, contribute to the development and maintenance of chronic pain. However, due to the chemokine

redundancy and lack of selective antagonists, classical pharmacological approaches did not provide specific

insights into the regulation of chemokines in different chronic pain paradigms. In this study, we thus investigated

the temporal contribution of the CCL2/CCR2 axis to mechanical hypersensitivity in a chronic inflammatory pain

model by using specific 27-mer double-stranded dicer substrate small interfering RNA (DsiRNA). DsiRNA were

encapsulated into lipid nanoparticles (LNPs) with the NanoAssemblr™ system from Precision NanoSystems Inc.

LNPs containing DsiRNA targeting either CCL2 or CCR2 were intrathecally (i.t.) administered to Sprague Dawley

rats at different time points before or after intraplantar administration of complete Freund’s adjuvant (CFA).

CFA-induced mechanical hypersensitivity was measured using von Frey hairs. Firstly, LNPs containing the Dil

fluorescent dye intrathecally injected between L5 and L6 vertebrae were shown to be up-taken by L4-L6 dorsal

root ganglia (DRG). However, no fluorescence staining was detected in the corresponding L4-L6 spinal cord

segment. Accordingly, western blot analysis demonstrated that knockdown of the target protein by LNPs

containing DsiRNA only occurred in DRG tissue. Secondly, repeated i.t. injections of 5 µg of DsiRNA against CCL2

or CCR2 48 h and 24 h before CFA administration completely prevented CFA-induced mechanical hypersensitivity

up to day 5 post-CFA. Finally, when injected 24 h and 48 h after CFA, DsiRNA against CCR2 also reverted the

mechanical hypersensitivity up to day 5 post-CFA, while DsiRNA against CCL2 only exerted a significant anti-

allodynic action up to day 3. Interestingly, while the mechanical hypersensitivity was present on days 7-10 post-

CFA, animals treated on days 1 and 2 post-CFA with DsiRNA against either CCR2 or CCL2 exhibited a significantly

higher mechanical threshold on day 14 post-CFA than rats treated with non-targeting control DsiRNA. These

experiments thus reveal, through the development of nanoparticle-encapsulated DsiRNA, that the CCR2/CCL2

axis expressed at the DRG level contribute in a time-dependent manner to the generation of chronic

inflammation-induced pain. These results further support the use of RNAi-based gene therapy as a highly specific

alternative to classical pharmacological approaches to treat central pathologies such as chronic pain.

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36 - Caractérisation du protéome de RAB21 et son rôle dans la carcinogenèse

Tomas Del Olmo(1). Steve Jean(1)

(1) Université de Sherbrooke

RAB21 est une petite GTPase impliquée dans l’étape de triage du trafic membranaire. RAB21 régule

spécifiquement l'internalisation des intégrines β1, le recyclage du récepteur à l'EGF ainsi que le flux

autophagique. RAB21 régule trois sentiers jouant un rôle, respectivement, dans la migration, la prolifération et

la survie cellulaire (chacun essentiel au développement tumorale). Les fonctions de RAB21 dans les cellules

tumorales (hormis celle associée aux intégrines) n'ont pas été étudiées. Les partenaires protéiques de RAB21

sont méconnus.

Nous avons généré quatre lignées Hct-116, modèle cellulaire d’étude du cancer du côlon, exprimant chacune

l’une des protéines de fusion suivante : GFP:RAB21WT, GFP:RAB21CA (Constitutivement Actif), GFP:RAB21DN

(Dominant Négatif) ou APEX2:RAB21WT. Ces lignées ont été générées grâce au système FLP/FRT. De plus,

l’expression de ces protéines est induite par traitement à la doxycycline à des niveaux proches de la protéine

endogène. Les mêmes modèles ont été générés dans la lignée HeLa, modèle cellulaire du cancer du col de

l’utérus. Nous avons réalisé des édutes de spectrométrie de masse dans chacune de ces lignées afin d’identifier

l’ensemble des partenaire de RAB21. Le SILAC (Stable Isotope Labeling by Amino Acids), une étude de

protéomique quantitative qui est en cours au laboratoire nous a permettra de définir des partenaires spécifiques

à à chacune des fonctions de RAB21. Des études fonctionnelles sur les partenaires de RAB21 nous permettrons

de définir leur importance dans chacune de ses fonctions.

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37 - La caspase-7 interagit avec plusieurs domaines de PARP-1

Alexandre Desroches (1), Éric Marsault (1) et Jean-Bernard Denault (1)

(1) Université de Sherbrooke, Institut de Pharmacologie de Sherbrooke, Département de Pharmacologie-Physiologie.

INTRODUCTION:

Les caspases sont des protéases à cystéine qui, par le clivage de nombreux substrats clés, sont impliquées dans

l’apoptose et l’inflammation. Un de ces substrats clés est PARP-1, une enzyme qui détecte des bris à l'ADN. Nous

avons découvert que la caspase-7 possède un exosite dans son domaine N-terminal qui interagit avec PARP-1.

Un exosite est un domaine d'interaction avec le substrat qui se trouve en dehors de la pochette catalytique et

qui a pour effet d'augmenter l'efficacité d’une enzyme. Malgré cette découverte, les déterminants de cette

interaction exosite-substrat sont encore méconnus.

MÉTHODES:

Afin de caractériser l’interaction entre la caspase-7 et PARP-1, des mutants de délétion du domaine N-terminal

de la caspase-7 liés à la GST ont été générés. L’affinité des mutants pour PARP-1 a été évaluée grâce à des essais

de précipitation à la GST. Par la suite, des mutants de délétion de PARP-1 ont été générés afin d'identifier le ou

les domaines de PARP-1 qui interagissent avec l'exosite. Les mutants ont ensuite été testés dans des essais de

clivage. L’efficacité de clivage de la caspase-7 sur les deux formes de PARP-1 (automodifiée ou non) a également

été testée.

RÉSULTATS:

Premièrement, les mutants de délétion du domaine N-terminal de la caspase-7 nous ont permis de déterminer

que le module minimal de l’exosite se trouve entre les résidus 34 à 47 de la caspase-7. Par la suite, les essais de

clivage sur les mutants de délétion de PARP-1 nous ont permis d’identifier les domaines Zn3 et BRCT comme

étant ceux qui interagissent avec l’exosite. Finalement, c'est la forme non modifiée de PARP-1 qui est

préférentiellement clivée par la caspase-7.

CONCLUSION:

En somme, nos travaux permettent de mieux comprendre comment les caspases reconnaissent et interagissent

avec leurs substrats. De plus, puisque peu d'exosites ont été identifiés, nos études permettent de mettre en

évidence l'importance de ces domaines d'interactions dans la sélection de substrats par les protéases.

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38 - Caractérisation fonctionnelle d’isoformes et de mutants de la protéase à sérine TMPRSS6

identifiés dans le foie et les cellules HepG2 et Hep3B.

Sébastien Dion (1,3), François Béliveau (1,3), Antoine Désilets (1,3), Louis-Philippe Morency (2,3), Rafael

Najmanovich (2,3,4), Richard Leduc (1,3)

(1) Département de pharmacologie-physiologie, Faculté de médecine et des sciences de la santé, Université de Sherbrooke.

(2) Département de biochimie, Faculté de médecine et des sciences de la santé, Université de Sherbrooke.

(3) Institut de Pharmacologie de Sherbrooke, Université de Sherbrooke.

(4) Département de Pharmacologie et Physiologie, Faculté de Médecine, Université de Montréal

TMPRSS6 (matriptase-2) est une enzyme protéolytique de la famille des protéases à sérine transmembranaires

de type II dont l’expression se fait essentiellement au niveau des cellules hépatocytaires du foie. TMPRSS6 agit

comme régulateur négatif de l’expression d’hepcidine, hormone essentielle dans l’homéostasie du fer sécrétée

par les hépatocytes, en clivant l’hémojuvéline (HJV) à la surface cellulaire. L’analyse de données publiquement

accessibles issues du séquençage de l’ARN (RNA-seq) provenant de foies humains et des lignées d’origine

hépatique HepG2 et Hep3B (hépatocarcinomes) a permis d’identifier des différences dans l’expression des

variants transcriptionnels de TMPRSS6. En effet, les variants présents au niveau du foie permettent d’exprimer

principalement une isoforme constituée de 802 acides aminés (aa) (76%) ainsi qu’une de 824 aa (13%). Au niveau

des lignées HepG2 et Hep3B, l’isoforme de 802 aa est majoritairement exprimée. Également, nous avons identifié

la présence d’une mutation (V795I) dans la lignée HepG2, une lignée cellulaire couramment utilisée en recherche

biomédicale. De plus, cette mutation a été répertoriée chez des patients souffrant d’anémie de type IRIDA. La

caractérisation de ce mutant et d’un autre mutant de TMPRSS6 retrouvé dans certains cas d’IRIDA (G603R) a été

réalisée. L’expression des isoformes de 811 et 802 aa et des mutants V795I et G603R à la surface cellulaire a été

analysée par cytométrie en flux dans des cellules HEK293 transfectées. Dans le même modèle, l’internalisation

des isoformes de 811 et 802 aa a été analysée par microscopie confocale. Également, l’activité enzymatique des

isoformes et des mutants a été mesurée et des immunobuvardages de type western ont été réalisés afin de

vérifier l’activation de TMPRSS6. L’impact des différentes mutations de TMPRSS6 a été analysée in silico à l’aide

d’un modèle d’homologie de séquence basé d’après la structure de la matriptase. Notre étude démontre que

l’isoforme de 802 aa est exprimée à la surface cellulaire, tout comme les mutants V795I et G603R. Ces mutants

présentent une faible activité enzymatique dans le milieu cellulaire comparativement à l’isoforme de 802 aa de

type sauvage. Cette caractérisation soulève beaucoup de questions quant à la pertinence de l’utilisation de la

lignée cellulaire HepG2 pour l’étude des fonctions de TMPRSS6 en plus d’apporter une meilleure compréhension

des impacts des mutations V795I et G603R dans certains cas d’IRIDA.

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39 - De la compréhension de l’impact du derme sur la réparation des dommages UV-induits

épidermiques à l’identification de molécules permettant de limiter le développement des cancers

cutanés

Marie M Dorr (1,2) et Patrick J Rochette (1.2.3)

(1) Axe Médecine Régénératrice, Centre de Recherche du CHU de Québec – Université Laval, Hôpital du Saint-Sacrement,

Québec, Qc, Canada

(2) Centre de Recherche en Organogénèse Expérimentale de l'Université Laval/LOEX, Université Laval, Québec, Qc, Canada.

(3) Département d’Ophtalmologie et ORL - chirurgie cervico-faciale, Université Laval, Québec, Qc, Canada.

La peau humaine est exposée aux rayons ultraviolets (UV). Ces rayons induisent des dimères cyclobutylique de

pyrimidines (CPD), les dommages à l’ADN responsables des mutations causant les cancers cutanés. Une

réparation efficace des CPD est donc primordiale. Le derme influence la réparation des CPD épidermiques, mais

les mécanismes responsables restent incompris. Ce projet vise à déterminer l’impact des composants dermiques

sur la réparation des CPD épidermiques. Notre modèle est une peau humaine reconstruite par génie tissulaire

selon la technique d’auto-assemblage du LOEX. Nos résultats confirment que le derme améliore

significativement la réparation des CPD épidermiques, et montrent que les composants de la matrice

extracellulaire seuls sont insuffisants pour influencer la réparation. Ceci suggère que le derme exerce son impact

sur les kératinocytes via des molécules sécrétées. Un modèle de co-culture derme et kératinocytes, à l’aide d’un

support perméable, permettra de confirmer l’impact du sécrétome des fibroblastes sur la réparation

épidermique. L’étude de l’expression de 105 cytokines a permis d’identifier 9 molécules sécrétées 3 à 200 fois

plus par les fibroblastes que les kératinocytes, et dont le niveau est augmenté suite aux UV. Ces cibles seront

testées sur des kératinocytes afin de déterminer qu’elle est leur influence sur l’efficacité de réparation des CPD.

La découverte de molécules induisant une réparation plus efficace des CPD épidermiques pourrait permettre le

développement de nouveaux outils pour accélérer cette réparation et donc limiter les étapes d’initiation des

cancers les plus répandus que sont les cancers cutanés.

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40 - Réponse cellulaire à un stress génotoxique induit par une irradiation chronique aux ultraviolets

Marie-Catherine Drigeard Desgarnier1,2, Roxanne Bérubé1,2, Patrick J. Rochette1,2,3

1 Axe Médecine Régénératrice, Centre de Recherche du CHU de Québec – Université Laval, Hôpital du Saint-Sacrement,

Québec, Qc, Canada

2 Centre de Recherche en Organogénèse Expérimentale de l'Université Laval/LOEX, Université Laval, Québec, Qc, Canada.

3 Département d’Ophtalmologie et ORL - chirurgie cervico-faciale, Université Laval, Québec, Qc, Canada.

CONTEXTE ET OBJECTIFS : Nous sommes quotidiennement exposés aux rayonnements ultraviolet (UV). Cette

exposition provoque la formation de dommages à l’ADN, tel que le très mutagène dimère cyclobutilique de

pyrimidines (CPD) responsable des cancers cutanés. Néanmoins, ces dommages activent la voie de réponse

cellulaire aux dommages (DNA damage response : DDR) afin de détecter et de signaler le dommage à la voie

signalétique la plus appropriée. Bien que la DDR soit activement étudiée, peu de travaux se sont intéressés à

l’influence d’une pré-stimulation des cellules avec une irradiation chronique aux rayons UV sur la réponse au

stress. Nous pensons qu’en soumettant nos cellules à des doses chroniques sous létales d’UV (Chronic Low UV

dose : CLUV), elles seront conditionnées à mieux répondre à un stress aigüe.

MÉTHODES : Des fibroblastes dermiques sont soumis à un régime CLUV de 75 J/m² d’UVB toutes les 12 heures,

pendant 15 irradiations. Douze heures après la dernière irradiation, les cellules sont soumises ou non à une dose

aigüe d’UV. Des cellules irradiées en aigüe sont aussi analysées à titre comparatif. Des analyses ont été menées

afin d’étudier la réparation de l’ADN, le niveau de dommage, et les conséquences génomiques et protéomiques.

RÉSULTATS : Nos résultats montrent que la pré-stimulation à la CLUV améliore la réparation des CPD. En effet,

seulement 30% des dommages persistent 24h après l’irradiation lorsque les cellules sont pré-stimulées alors que

50% des CPD subsistent après une dose aigüe. Cette amélioration est supportée par une augmentation

transcriptomique et protéique de DDB2 et XPC, deux protéines cruciales dans la réparation des CPD. De plus, la

chromatine semble plus décondensée suite à une CLUV afin de permettre une meilleure réparation des

dommages.

Cependant, la CLUV provoque une accumulation de CPD qui demeurent non réparés. Nos analyses suggèrent

que ces dommages seraient tolérés par le génome, et qu’ils sont retrouvés préférentiellement au niveau de

l’hétérochromatine. Néanmoins, ces dommages semblent favoriser l’instabilité chromosomique puisque l’on

retrouve une augmentation d’échanges de chromatide sœur.

CONCLUSIONS : Nos résultats suggèrent qu’une pré-stimulation par la CLUV pourrait avoir un effet protecteur

contre la néoplasie induite par les UV.

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41 - Elabela, un nouvel agoniste du récepteur APJ, améliore l'homéostasie des fluides et réduit le

dysfonctionnement cardio-rénal dans un model murin d’insuffisance cardiaque aiguë.

Lauralyne Dumont (1), David Coquerel (2), Xavier Sainsily (3,4), Frédéric Chagnon (2), Alexandre Murza (3,4),

Robert Dumaine (3), Philippe Sarret (3,4), Éric Marsault (3,4), Dan Salvail (5), Mannix Auger-Messier (2) et

Olivier Lesur (2)

(1) Département de médecine – Service de cardiologie, FMSS, CRCHUS, Université de Sherbrooke, Sherbrooke,

(2) Département de Médecine, Faculté de Médecine et des Sciences de la Santé, Université de Sherbrooke

(3) Département de Pharmacologie et Physiologie, Faculté de Médecine et des Sciences de la Santé, Université de

Sherbrooke

(4) Institut de Pharmacologie de Sherbrooke

(5) IPS Therapeutique Inc

L’instabilité hémodynamique caractérise la dysfonction cardio-rénale induite en insuffisance cardiaque aiguë

(ICA). En plus de réguler les fonctions physiologiques du coeur et des reins, nous avons récemment démontré

que l’infusion d’Apelin-13 (APL-13) confère une importante cardioprotection dans un modèle d’ICA

expérimental. Bien que l’APL-13 semble être l’isoforme apélinergique circulante la plus abondante du système

cardiovasculaire, ses effets protecteurs pourraient être partagés par Elabela (ELA), l’autre ligand endogène,

récemment découvert, du récepteur APJ. ELA est principalement exprimé dans les tissus rénaux et semble

réguler, comme l’APL-13, la physiologie cardiaque et rénale. Toutefois, le potentiel thérapeutique d’un apport

d’ELA exogène durant une ICA est encore inconnu.

Nous avons ainsi voulu déterminer l’effet cardio-rénal et l’impact thérapeutique d’ELA comparativement à l’APL-

13 chez des rats septiques. Pour ce faire, l’ICA et l’inflammation systémique ont été induits à l’aide d’un modèle

expérimental de choc septique provoqué par la ligature et ponction du caecum (CLP). Lorsqu’administrées par

infusion i.v. continue, APL-13 et ELA préservent l‘index cardiaques mesuré par échographie et prolongent

significativement la survie des rats en condition de CLP. Toutefois, seuls les rats CLP traités à l’ELA ont présenté

un meilleur remplissage du ventricule gauche comme le montre l’augmentation de la vitesse de l'onde E ainsi

que la normalisation du volume diastolique du ventricule gauche. Ceci est associé à une amélioration du volume

plasmatique et du bilan hydrique ainsi qu’à la réduction de la dysfonction rénale comme en témoigne

l’augmentation de la clairance de la créatinine et la diminution urinaire de KIM-1 et de microalbumine. Ces

résultats valident le potentiel thérapeutique d’une approche pharmacologique ciblant le récepteur APJ pour

l’amélioration hémodynamique des états inflammatoires aigus avec dysfonction cardio-rénale.

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42 - Identification de l’interactome des MAPK p38α et p38γ chez les cardiomyocytes par une approche

d’APEX

Audrey-Ann DUMONT (1), Mannix AUGER-MESSIER(1)

(1) Département de médecine – Service de cardiologie, FMSS, CRCHUS, Université de Sherbrooke, Sherbrooke, QC, Canada

L’activité de la MAPK p38 influence le développement de l’insuffisance cardiaque. Il est connu que l’isoforme

p38α diminue la contractilité et augmente la mort cellulaire des cardiomyocytes. Dans ce contexte, les

mécanismes d’actions de p38α ne sont pas entièrement résolus. De plus, la fonction de l’isoforme p38γ,

exprimée tout aussi abondamment dans les cardiomyocytes, reste à déterminer. Il est donc pertinent d’identifier

les partenaires d’interaction stables et transitoires des p38α et p38γ afin d’en définir les mécanismes d’action

dans le coeur.

En couplant ces deux isoformes de MAPK p38 avec l’ascorbate peroxidase (APEX), nous avons effectué un essai

de proximité en surexprimant ces protéines chez les cardiomyocytes isolés de rats nouveau-nés (RNVC). En

présence de biotine-phénol et de peroxyde d’hydrogène, l’APEX étiquette les protéines de l’environnement

immédiat. Nous avons optimisé l’expression des protéines de fusion (p38α-APEX et p38γ-APEX), la réaction de

marquage à la biotine des protéines à proximité ainsi que leur purification sur billes-streptavidine. La localisation

des p38α/γ-APEX a été validée pour être similaire à l’endogène et les protéines biotinylées chez les

cardiomyocytes ont été observées par microscopie confocale. Un essai kinase confirme la préservation de

l’activité des protéines p38-APEX suite à une réaction de biotinylation. L’analyse par spectrométrie de masse

permet d’identifier les partenaires d’interaction communs et distincts des isoformes p38α et p38γ en conditions

basale ou stimulée au sorbitol (temps et concentration optimisés) chez les cardiomyocytes. Ces résultats sont

susceptibles de repousser les limites de nos connaissances de l’action cardiaque des MAPK p38.

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43 - Plateforme RNomique de l'Université de Sherbrooke

Elvy Lapointe (1), Mathieu Durand (1), Philippe Thibault (1)

(1) Université de Sherbrooke

La Plateforme Rnomique de l'Université de Sherbrooke offre un vaste éventail de services de RT-PCR, de

séquençage de prochaine génération et de bioinformatique à la communauté de recherche au Canada et ailleurs.

La plateforme a été créée en 2006.

Nous avons développé une plateforme computationnelle et expérimentale automatisée pour les recherches à

grande échelle basée sur la RT-PCR. Les applications principales sont pour des études comparatives d'expression

de gène par RT-PCR quantitative en temps réel (qRT-PCR), et pour l'annotation et l'analyse d'épissage alternatif

par RT-PCR en point final couplée avec l'électrophorèse microcapillaire (ASPCR). Nous faisons la conception,

l'exécution et l'analyse de milliers de réactions qRT-PCR et ASPCR par jour de façon routinière.

Notre service de séquençage est complet, depuis la préparation de la bibliothèque jusqu'à l'analyse et la

présentation des données. Nous offrons une gamme de services à moyen débit avec la plateforme Illumina

MiSeq. Les requêtes pour un séquençage plus profond sont référées aux centres génomiques partenaires pour

le processus de séquençage lui-même, alors que nous prévalons sur la préparation de la bibliothèque et l'analyse

des données.

Les services complémentaires incluent l'isolement de l'ARN et de l'ADN, et le contrôle de la qualité à partir de

source provenant de cultures cellulaires ou de tissus, ainsi que d'un soutien bioinformatique complet pour la

conception expérimentale et l'analyse des données. Les clients peuvent accéder à leurs résultats et à toutes les

données expérimentales via un portail Web sécurisé, où plusieurs modules informatiques sont disponibles pour

optimiser l'analyse et la présentation des données. Le personnel expert de la plateforme est également

disponible pour consultation directe à toutes les étapes de chaque projet. La plateforme développe

continuellement de nouveaux essais et protocoles bioinformatique pour répondre aux besoins de sa clientèle en

expansion.

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44 - Nouveaux acides aminés α,α-disubstitués pour l’exploration du récepteur APJ

Marco Echeverria(1), Alexandre Murza(1), Xavier Sainsily(1), Laurent Bruneau-Cossette(1), David Coquerel(1),

Louise Simard(2), Jean-Michel Longpré(1), Olivier Lesur(1), Mannix Auger-Messier(1), Philippe Sarret(1), Claude

Spino(2), Éric Marsault(1)

(1) Institut de Pharmacologie de Sherbrooke, Faculté de médecine et des sciences de la santé, Université de Sherbrooke,

Sherbrooke, QC, Canada, (2) Département de Chimie, Faculté des sciences, Université de Sherbrooke, Sherbrooke, QC,

Canada

Le récepteur APJ est une protéine à 7 domaines transmembranaires faisant partie de la famille des récepteurs

couplés aux protéines G (RCPG). L'apéline est son ligand endogène, il s'agit d'un peptide de 13 acides aminés. Le

système apélinergique est un acteur clé impliqué dans l'homéostasie hydrique, le système cardiovasculaire, plus

précisément la pression sanguine et la contractilité myocardique. De ce fait, le récepteur APJ pourrait jouer un

rôle important dans la pathophysiologie de l’insuffisance cardiaque et représente une cible prometteuse pour

de nouvelles thérapies. Le système apéline/APJ est localisé dans les tissus périphériques, principalement au

niveau du cœur, des reins, du poumon et du système gastro-intestinal. D'un point de vue structural, nous posons

l’hypothèse d'une poche hydrophobe en C-terminal du récepteur APJ capable de loger de gros groupements

aromatiques. La synthèse de résidus spécifiques en C-terminal de l’apéline nous permettrait d’obtenir une

signalisation biaisée, c’est-à-dire dépendante ou indépendante des protéines G. Nous avons utilisé une

méthodologie permettant la synthèse asymétrique d'acides aminés α,α-disubstitués (1) impliquant l'utilisation

du p-menthylaldéhyde comme auxiliaire chiral. Suivant les résultats récemment obtenus (2), le dérivé apéline-

13 avec en C-terminal le résidu α-Me-D-Tyr(OBn) a été synthétisé et a permis d'améliorer l'affinité en-dessous

de 10 pM. Récemment, l'analogue modifié par le résidu dibenzylglycine a donné une affinité en dessous de 10

pM également, et a démontré être le premier peptide avec une signalisation biaisée en faveur du recrutement

de la ß-arrestin2 (52 nM vs 4.9 nM). Ces premiers résultats suggèrent que ce type de modifications chimiques en

C-terminal favoriseraient un biais signalétique en plus d'une haute affinité pour APJ. Ces composés représentent

donc de puissants outils pharmacologiques pour mieux comprendre le rôle du système apélinergique dans notre

modèle animal de choc septique.

1. Roy et al, Organic Letters, 2006, 8, 939-942

2. Murza et al, J Med Chem., 2015, 58 (5), 2431-2440

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45 - Use of a non-invasive Trojan horse strategy to improve the delivery of opioid pain relief

medications to the brain

Émilie Eiselt1, Valérie Otis1, Karine Belleville1, Alain Larocque2, Anthony Régina2, Jean-Michel Longpré1,

Michel Demeule2, Louis Gendron1 and Philippe Sarret1

1Department of Pharmacology and Physiology, Institut de Pharmacologie de Sherbrooke, Université de Sherbrooke,

Sherbrooke, QC, Canada J1H 5N4; 2Angiochem Inc., 201 President Kennedy Avenue, PK-R220, Montréal, QC, Canada H2X

3Y7

The blood brain barrier (BBB) is the primary interface between the bloodstream and the brain parenchyma and

represents a restrictive diffusion barrier for a large number of pharmaceutical drugs, including morphine and its

active metabolite morphine-6-glucuronide (M6G). Indeed, despite its recognized analgesic action, only a small

fraction of subcutaneous (s.c.) administered morphine reaches the brain. There is also compelling evidences

suggesting that the antinociceptive potency of M6G and morphine are almost equally potent after systemic

administration, whereas the analgesic potency of M6G has been shown to be 100-fold higher than morphine

after intracerebral injection. However, the brain penetration of M6G is significantly lower than morphine, thus

limiting its usefulness in pain management. Here, we created new chemical entities by the conjugation of the

Angiopep-2 peptide (An2), a 19–amino acid peptide that crosses the BBB by LRP1 receptor-mediated

transcytosis, with either morphine or M6G. The resulting new drug conjugates were then evaluated for their

ability to penetrate the BBB, to exert superior analgesic activity compared to unconjugated molecules and to

limit advert events, such as constipation. Using an in vivo brain perfusion paradigm, we first demonstrated

improved brain uptake of these new chemical entities compared with that of unconjugated M6G and morphine.

This increased BBB permeability was accompanied by an improvement in their analgesic efficacy in rat tail-flick

assays. Indeed, intravenous (i.v.) administration of the An2-M6G conjugate exerted greater and more sustained

analgesic activity than equivalent doses of either morphine or M6G. Likewise, i.v. or s.c. An2-morphine induced

a time- and dose-dependent antinociceptive effect that was more prolonged when compared with unconjugated

morphine. We finally assessed the effects of these new chemical entities on the gastrointestinal tract motility

using the charcoal meal test in rats. While s.c. An2-morphine significantly reduced the intestinal transit time, s.c.

An2-M6G exhibited a reduced constipation profile, as compared to morphine. In summary, we have developed

new brain-penetrant opioid conjugates exhibiting improved analgesia to side-effect ratios. These results thus

strongly support the use of An2 carrier peptides as an innovative BBB targeting technology to deliver effective

drugs such as M6G for the management of pain.

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46 - Ressemblances entre les femmes atteintes de vestibulodynie provoquée primaire et secondaire

: Morphométrie et fonction des muscles du plancher pelvien

Félix Fontaine(1), Chantale Dumoulin(2), Sophie Bergeron(2), Marie-Hélène Mayrand(2), Samir Khalifé(3), Guy

Waddell(1), Mélanie Morin(1)

(1) Université de Sherbrooke, (2) Université de Montréal, (3) McGill University Health Centre

Contexte: La vestibulodynie provoquée (VP), caractérisée par une douleur à l’entrée du vagin lors des relations

sexuelles, est une affection touchant près de 15% des femmes. Récemment, des études ont suggéré une possible

différenciation entre deux sous-groupes en fonction du moment d’apparition de la douleur. La VP dite primaire

(VP1) est présente dès la première relation sexuelle, ou insertion de tampon, alors que la VP secondaire (VP2)

survient après plusieurs relations sexuelles sans douleur. L’étude de la pathophysiologie de ces sous-groupes a

révélé des différences en ce qui a trait à la tolérance à la douleur ainsi qu’aux variables psychologiques et

génétiques. Toutefois, malgré une implication démontrée des muscles du plancher pelvien (PP) dans la VP,

aucune étude n’a évalué si la morphométrie ou la fonction de ces muscles différaient entre les femmes atteintes

de VP1 et VP2. Objectifs: Comparer les caractéristiques morphométriques et dynamométriques des muscles du

plancher pelvien chez les femmes atteintes de VP1 et VP2. Méthodes: L’échographie transpérinéale 3D/4D et le

spéculum dynamométrique ont permis l’évaluation de la morphométrie et de la fonction des muscles du PP,

respectivement. Les paramètres évalués par l’analyse morphométrique, au repos et à la contraction, furent les

suivants : l’angle du plan des releveurs, l’angle anorectal, les diamètres antéropostérieurs et transverses ainsi

que l’aire du hiatus urogénital. Les paramètres évalués par l’analyse dynamométrique furent les suivants : tonus,

force, vitesse de contraction et endurance. Au total, 212 femmes atteintes de VP (VP1=75, VP2=137) ont

participé à l’étude. Résultats: Aucune différence significative n’a été observée entre les femmes atteintes de VP1

et VP2 quant aux caractéristiques morphométriques ou dynamométriques du PP. Conclusion: Notre étude

suggère que les femmes atteintes de VP1 et VP2 ne peuvent être différenciés par la morphométrie ou la

dynamométrie des muscles du PP et que l’implication de ceux-ci dans la VP n’est pas influencée par le moment

d’apparition de la douleur.

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47 - Dégradation de chimiokines inflammatoires par le récepteur CXCR3

Mélanie Girard (1)(2), Francois Guité-Vinet (1), Nikolaus Heveker (1)(2)

(1) Université de Montréal, (2) Centre de recherche du CHU Sainte-Justine

Les chimiokines sont des protéines sécrétées dans le milieu extracellulaire qui provoquent la migration par

chimiotaxie de cellules qui expriment des récepteurs de chimiokines à leur surface vers des gradients croissants

de chimiokines. CXCR3 est un récepteur de chimiokines responsable du recrutement des lymphocytes T aux tissus

inflammés où sont sécrétées les chimiokines Monokine induced by gamma interferon (MIG), Interferon-gamma

induced protein 10 (IP-10) et Interferon-inducible T-cell alpha chemoattractant (ITAC). Les gradients de ces

chimiokines sont induits en condition d'inflammation afin de provoquer le recrutement de leucocytes et doivent

être éliminés afin de terminer la réaction immunitaire. Une mauvaise régulation des gradients de chimiokines a

une importance particulière dans les maladies auto-immunes et inflammatoires où un recrutement excessif de

leucocytes cause des dommages aux tissus affectés. Les récepteurs de chimiokines atypiques (ACKRs)

contribuent à réguler les niveaux de chimiokines en provoquant leur internalisation et leur dégradation. Nous

avons montré que les lymphocytes T activés sont capables de dégrader IP-10 et ITAC via CXCR3, suggérant que

la dégradation de chimiokines pourrait jouer un rôle dans la régulation des gradients qui permettent la migration

des cellules T vers les sites d'inflammation. De plus, sachant que CXCR3 est aussi exprimé par des cellules

épithéliales, nous avons testé la capacité d'une variété de lignées épithéliales CXCR3+ à médier la dégradation

d'IP-10 et ITAC via CXCR3. Nos résultats jusqu'à présent semblent indiquer qu'il s'agit d'un mécanisme propre

aux cellules T. De plus, nous avons trouvé que l'expression de l'isoforme A de CXCR3 et de la b-arrestine sont

requis pour la dégradation d'IP-10 et ITAC. Globalement, cette découverte suggère que CXCR3 participe à la

régulation de la migration des lymphocytes T via la modulation des gradients de chimiokines pro-inflammatoires

IP-10 et ITAC.

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48 -

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49 - Existe-t-il une relation entre la douleur et l’anxiété chez les aînés souffrant de douleur musculo-

squelettique ?

Harvey Marie-Philippe(1,2), Lorrain Dominique(1,3), Daguet Inès(4), Martel Marylie(1,2), Houde Francis(1,2),

Séguin Mario(2,5) et Léonard Guillaume(1,2)

(1) Centre de Recherche sur le Vieillissement; Université de Sherbrooke

(2) Faculté de Médecine et des Sciences de la Santé; Université de Sherbrooke

(3) Département de psychologie; Université de Sherbrooke

(4) Département de Biologie; Université Claude Bernard Lyon 1

(5) Neurochirurgie; Centre hospitalier Universitaire de Sherbrooke

Introduction: Plusieurs études suggèrent qu’il existe une relation entre la douleur et l’anxiété. Peu d’études ont

cependant évalué la relation entre ces deux variables chez les aînés. L’objectif de la présente étude était (1)

d’évaluer la relation entre la douleur et l’anxiété chez les aînés souffrant de douleur chronique d’origine musculo-

squelettique et, (2) de déterminer si un traitement de neurostimulation, ciblant la douleur, pouvait réduire

l’anxiété.

Méthodes: 19 aînés (âge moyen 69 ± 8 ans) souffrant de douleur chronique ont pris part à cette étude

randomisée et à double insu. Les participants recevaient cinq séances quotidiennes consécutives de tDCS

anodique appliqués au cortex moteur primaire (2 mA, 20 minutes) ou cinq séances de tDCS simulée. Avant et

après les traitements, l’intensité de la douleur et l’anxiété étaient évaluées à l’aide d’échelle visuelle analogue

(ÉVA) et de l’inventaire d’anxiété de Beck (BAI), respectivement.

Résultats: D’une part, les résultats préliminaires indiquent qu’il existe une relation positive entre l’intensité de

la douleur et l’anxiété des aînés avant les traitements de neurostimulation (r = 0.46 ; p < 0,05). D’autre part, la

diminution de douleur engendrée par la tDCS permet d’atténuer l’anxiété (p < 0,05).

Conclusion: Les présents résultats suggèrent que l’association observée entre la douleur et l’anxiété dans la

population générale est également présente chez les aînés souffrant de douleur chronique musculo-

squelettique. De façon intéressante, il appert que le soulagement de la douleur, via l’utilisation d’une technique

de neurostimulation, peut contribuer à réduire significativement l’anxiété ressentie par les aînés.

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50 - LA SIGNALISATION DU RÉCEPTEUR OPIOÏDERGIQUE DELTA FAVORISE LA RESILIENCE AU STRESS

CHRONIQUE CHEZ LA SOURIS APRÈS LE PARADIGME DE DÉFAITE SOCIALE.

Mathilde S. Henry (1), Nathalie Vernoux (1), Louis Gendron (2), Guy Drolet (1) & Marie-Ève Tremblay (1)

(1) Centre de recherche du CHU de Québec, Université Laval, Québec, Canada (2) Département de Pharmacologie-

Physiologie, Faculté de médecine et des sciences de la santé, Université de Sherbrooke, Centre de Recherche du CHU de

Sherbrooke, Centre d'excellence en neurosciences de l'Univeristé de Sherbrooke, and Institut de Pharmacologie de

Sherbrooke, Sherbrooke, Quebec, Canada

Il existe une grande variabilité entre les individus dans leur capacité à résister à un stress. La résilience au stress

chronique est un processus complexe qui fait intervenir de nombreuses structures cérébrales et systèmes de

neurotransmetteurs. Parmi les systèmes neuropeptidergiques, nous proposons l’hypothèse que la signalisation

enképhalinergique (ENK) s’effectuant via les récepteurs opioïdergiques Delta (DOR) est spécifiquement

impliquée dans la résilience au stress chronique. OBJECTIF. Le but de cette étude est d’identifier et de

caractériser la contribution fonctionnelle de la transmission ENK agissant via les DOR dans le développement de

la résilience au stress chronique. MÉTHODES. Le modèle de stress chronique de défaite sociale permet d’étudier

cette résilience au stress en mimant les perturbations sociales imprévisibles de la vie quotidienne. Dans cette

expérience, un individu « victime » est placé dans le vivarium d’un « agresseur » durant 5 minutes par jour

pendant 10 jours. Au 11e jour, on évalue le niveau d’anxiété des « victimes » avec un test d’interaction sociale

qui permet de distinguer deux groupes : les résilients et les vulnérables au stress chronique. Les animaux

(contrôles et stressés) sont traités (ou non-traités pour les témoins) quotidiennement avec un agoniste de DOR,

le SNC80 (s.c. 10 mg/kg), 1 heure avant la défaite sociale. Le niveau de corticostérone plasmatique est évalué par

ELISA pour confirmer la libération d’hormones de stress et donc l’efficacité du paradigme de stress. Les niveaux

des ARNm des ENK, des DOR et du facteur-neurotrophique-derivé-du-cerveau (BDNF) qui est stimulé par la

signalisation ENK, sont quantifiés dans différentes zones du cerveau recevant des projections ENK par

hybridation in situ radioactive. RÉSULTATS. L’administration du SNC80 induit un phénotype de résilience chez la

plupart des individus stressés. Les niveaux d’ARNm des ENK sont augmentés chez les individus résilients par

rapport aux vulnérables dans le noyau basolatéral de l’amygdale (BLA). Les niveaux d’ARNm des DOR et du BDNF

sont augmentés chez les individus résilients par rapport aux vulnérables dans la région CA1 de l’hippocampe.

CONCLUSIONS. Nos résultats indiquent qu’un dialogue privilégié entre la BLA et le CA1 de l’hippocampe

s’exerçant par l’entremise de la transmission ENK (via les DOR et le recrutement du BDNF en aval) participerait

au développement d’une résilience au stress chronique.

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51 - Rôle des mécanismes endogènes du contrôle de la douleur dans la névralgie du trijumeau et

relation avec le traitement.

France Héroux MD (1), David Mathieu MD(1), Serge Marchand PhD(1), Guillaume Léonard PhD(1)

(1) université de SHerbrooke

La névralgie du trijumeau (NT) idiopathique se caractérise par des épisodes brefs de douleur dans le territoire du

nerf crânien V, parfois associée d’une douleur continue (forme atypique = NTA). L’hypothèse étiologique la plus

accepté est la présence d’une boucle vasculaire qui comprime le nerf entraînant une démyélinisation local. Par

contre, dans les études on démontre que plusieurs personnes possèdent une boucle vasculaire sans développer

de névralgie et qu’un certain pourcentage des patients avec NT ou NTA n’ont pas de compromis neurovasculaire.

C’est également ce que nous constatons chez nos patients. Nous croyons que d’autres facteurs contribuent au

développement de la névralgie du trijumeau. De plus en plus d’études s’intéressent au lien entre l’atteinte des

systèmes de contrôle inhibiteur et le développement de douleur chronique en chirurgie. Léonard G. et al (CHUS),

ont démontré la présence d’anomalie du système de contrôle inhibiteur diffus chez les patients avec NTA. Nous

croyons qu’une meilleure compréhension des mécanismes de contrôle de la douleur dans la NT et NTA pourrait

aider à mieux caractériser les patients répondeurs aux différents types de traitements chirurgicaux.

Objectifs

Mesurer les mécanismes de contrôle de la douleur chez des patients atteints de NT et NTA, réfractaires aux

traitements médicaux

Mesurer l’impact du traitement chirurgical sur ces mécanismes et évaluer la corrélation avec la réponse clinique.

Vérifier si les niveaux d’anomalies préopératoires de ces mécanismes sont prédictifs de la réponse aux

traitements chirurgicaux.

Méthodologie

Les patients seront soumis à une séance expérimentale de 2h en préopératoire et à 3 mois post-opératoire. Nous

allons mesurer les mécanismes excitateurs (sommation temporelle) et inhibiteurs (CIDN) en produisant une

douleur thermique sur un bras (stimulus test : sommation temporelle) qui sera répétée suite à l’immersion du

bras opposé dans un bain d’eau froide (stimulus conditionnant : CIDN). Pour évaluer la réponse aux traitements

chirurgicaux, les patients devront remplir des questionnaires validés.

Résultats attendus

Mieux comprendre les différents profils de patients répondeurs aux traitements chirurgicaux (exemple de cas).

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52 - Paradigme de lésion virtuelle: utilisation de la distance crâne-cortex pour ajuster l’intensité de la

stimulation magnétique transcrânienne

Francis Houde (1), Véronique Thivierge (1), Guillaume Léonard (1).

(1) Centre de recherche sur le vieillissement, Université de Sherbrooke.

Introduction: Dans une étude récente réalisée dans notre laboratoire, nous avons montré qu’une lésion virtuelle

(perturbation temporaire de l’activité cérébrale) du gyrus temporal supérieur (GTS), réalisée à l’aide de la

stimulation magnétique transcrânienne (TMS), prévenait l’exagération du rappel de l’aspect désagréable de la

douleur. Puisque l’intensité de stimulation TMS diminue rapidement entre le crâne et le cortex de la région ciblée

et que celle-ci varie d’un individu à l’autre, nous avons voulu analyser, rétrospectivement, l’influence de cette

variable anatomique sur les résultats de notre précédente étude.

Méthodes: 20 participants ont reçu une lésion virtuelle au niveau du GTS à 120% du seuil moteur (SM; intensité

TMS minimale engendrant une contraction musculaire dans le muscle controlatéral lors d’une stimulation du

cortex moteur) suite à un paradigme de douleur électrique. L’aspect désagréable de la douleur a été évalué grâce

à une échelle visuelle analogue (ÉVA; 0 à 10) immédiatement après et lors du rappel, 2 mois plus tard. La distance

crâne-cortex (obtenue grâce à l’imagerie par résonance magnétique anatomique) a été utilisée pour distinguer

les participants qui ont été sous-stimulés de ceux qui ont été sur-stimulés. L’efficacité de la lésion virtuelle et la

variabilité des rappels (ÉVA rappel - ÉVA initiale) furent ensuite comparées entre les deux groupes.

Résultats: Les participants ayant été sous-stimulés (n = 10) ont un rappel plus variable de l’aspect désagréable

(moyenne = 0.00 ± 2.67) que ceux qui ont été sur-stimulés (n = 10; moyenne = -1.04 ± 1.29). Malgré que le rappel

moyen ne soit pas statistiquement différent selon les groupes (p = 0.282), les participants sur-stimulés montrent

une plus faible variabilité de leur rappel douloureux (p = 0.048).

Conclusion: Les présents résultats montrent qu’il est pertinent de prendre compte de la distance crâne-cortex

afin d’ajuster les stimulations lorsqu’on effectue une lésion virtuelle dans une région non-motrice. Plus

précisément, une sous-stimulation amènerait une plus grande variabilité des rappels douloureux

comparativement à une sur-stimulation lorsqu’on stimule au niveau du GTS.

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53 - TNFα governs the sensitivity of LPA-induced cytokine/chemokine secretion to signalling

inhibitors in human synovial fibroblasts

Weili Hui(1), Chenqi Zhao(2), Sylvain G. Bourgoin(3)

(2) Université Laval.

Background: Autotaxin is an abundant protein in synovial fluids from rheumatoid arthritis (RA) patients that

produces extracellular lysophosphatidic acid (LPA). We previously observed that stimulation of synovial

fibroblasts from RA patients (RAFLS) with LPA induces the synthesis of various cytokines/chemokines including

IL-8, IP-10, MCP-1, IL-6 and RANTES. Activation of the MSK-CREB signalling axis contributes to LPA-mediated

secretion of IL-8. Incubation of RAFLS with TNFα for several hours prior to LPA addition greatly enhances

cytokine/chemokine secretion, which led us to investigate potential crosstalk among the signalling pathways

induced by LPA and TNFα in RAFLS.

Results: We report here that (1) inhibition of p38MAPK, ERK1/2, Rho Kinase, PI3K or NF-κB alone significantly

decreased LPA-induced IL-8 secretion. These data suggest that signalling through PI3K and NF-κB may also

partially contribute to cytokine/chemokine secretion. (2) After pre-conditioning with TNFα, LPA-induced IL-8

secretion became insensitive to inhibition by the inhibitors of p38MAPK, ERK1/2, and of Rho Kinase. (3) Inhibition

of at least two pathways was necessary to reduce LPA-induced cytokine/chemokine secretion by RAFLS pre-

conditioned with TNFα, the most potent being simultaneous inhibition of p38MAPK and ERK1/2 signalling. (4)

Interestingly, TNFα pre-conditioning also enhanced phosphorylation of MSK, which was reduced significantly by

the ERK1/2 inhibitor alone or in combination with other inhibitors downstream of LPA receptor signalling.

Conclusion: These data suggest that signalling through NF-κB, PI3K, Rho-kinase and MAPK possibly upstream of

MSK activation plays a role in LPA mediated cytokine/chemokine secretion. TNFα sensitizes cells to LPA but

renders LPA-induced cytokine/chemokine secretion insensitive to pharmacological inhibitors. This may have

important clinical implications for the use of drugs targeting the MAPK pathways for the treatment of RA

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54 - Effet de la vitesse sur le patron locomoteur de la souris

Nicolas Josset(1), Maxime Lemieux(1), Marie Roussel(1), Sebastien Couraud(1), Frederic Bretzner(1,2).

(1) CRCHU de Québec, CHUL, Axe neurosciences

(2) Faculté de médecine, Dpt. de psychiatrie et neurosciences, Université Laval.

Alors que la plupart des animaux quadrupèdes sont capables d’ajuster leur patron locomoteur à leur vitesse,

allant de la marche, au trot, jusqu’au galop, nous ne savons toujours pas si la souris peut galoper. Compte tenu

de l’utilisation intensive des souris mutantes pour étudier le circuit neuronal locomoteur, nous avons étudié le

patron locomoteur chez la souris et ainsi déterminé si la souris peut galoper.

9 souris C57BL/6 ont été filmées avec des caméras à haute fréquence lors d’une marche sur tapis roulant allant

de 5cm/s à 150 cm/s. 2 souris ont été implantées avec des électrodes pour enregistrer l’activité

électromyographique durant la marche.

L’analyse de la coordination entre les membres, ainsi que la durée du cycle de marche nous a permis de

caractériser 8 patrons locomoteurs chez la souris. À basse vitesse, la souris va utiliser la marche latérale ou le

trot. Ce dernier devient omniprésent à vitesse intermédiaire, reflétant probablement le patron de marche le plus

efficace pour la souris. À haute vitesse, la souris se met à galoper en utilisant le galop transverse puis rotatoire.

À très haute vitesse, la souris fait des demi-bonds, caractérisés par une synchronisation des pattes postérieures

et une alternance des pattes antérieures, vient ensuite le bond avec une synchronisation des pattes postérieures

et antérieures. Nous avons aussi identifié deux nouveaux patrons locomoteurs: le saut, qui présente une

synchronisation des pattes postérieures et une absence de coordination des membres antérieurs, et la marche

asymétrique, qui ressemblent au galop transverse.

Les souris sont donc capables de galoper et de bondir à haute vitesse, et présente une grande variété de patrons

locomoteurs selon leur vitesse.

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55 - Oxidized vitamin C catalyzed S-homocysteinylation

Grace Ahuie Kouakou,(1)Hicham Berrougui (1), Abdelouahed Khalil(1) and Klaus Klarskov(1)

(1) Université Sainte Anne

Vitamin C (AA, ascorbic acid; ascorbate ion at physiological pH) is a well-known oxidative stress scavenger of

organisms. In this process, ascorbate is oxidized by the loss of one electron to give initially an ascorbyl free radical

(SDA), which subsequently undergoes oxidation to dehydroascorbate (DHA). Under physiological conditions,

both SDA and DHA are recycled back to ascorbate through the action of several enzymes including NADH-

cytochrome b5 reductase, thioredoxin reductase, protein disulfide isomerase, glutaredoxin-1 (thioltransferase),

and certain glutathione-S-transferases. Homocysteine (Hcy) is an amino acid that is not incorporated into the

amino acid sequence of peptides and proteins. Hcy is produced from methionine and is a homologue of cysteine

that differs by an additional methylene bridge. A high blood level of homocysteine (Hcy) is a recognized risk factor

for several major oxidative stress related pathologies such as cardiovascular diseases and neurological diseases.

However, the mechanism(s) by which hyperhomocysteinemia induces endothelial and neurological dysfunction

is still unknown. Since Hcy efficiently reduces DHA to AA, we investigated if in this process DHA induces peptide

and protein S-homocysteinylation. With cysteine containing peptides we demonstrate that DHA catalyses S-

homocysteinylation as a function of time, indicating a possible direct link between oxidative stress represented

by DHA and homocysteine. Using a combination of tandem mass spectrometry coupled with liquid

chromatography, we show that DHA also catalyses S-homocysteinylation of reduced insulin and paraoxonase-1.

The latter protein is associated with the high-density lipoprotein complex and has been suggested to play a role

in its protection against oxidative stress. The biological importance of these modifications remains to be

elucidated

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56 - Identification de biomarqueurs prédictif de la régression du cancer colorectal suite aux thérapies

préopératoire

Vincent Lacasse (1), Dominique Lévesque (1), Chang-Shu Wang (2), François Michel Boisvert (1)

(1) Département d’Anatomie et de biologie cellulaire, Pavillon de Recherche Appliqué sur le Cancer, Université de

Sherbrooke, Sherbrooke, Québec, Canada.

(2) Département de médecine nucléaire et de radiobiologie | Département de Radio-oncologie, Faculté de médecine et des

sciences de la santé, Université de Sherbrooke, Sherbrooke, Québec, Canada

Le cancer colorectal est souvent découvert tardivement avec une tumeur localement avancé envahissant

complètement la paroi du rectum (T3), des tissus à la périphérie (T4), présentant parfois des métastases dans les

ganglions lymphatiques régionaux (N1 ou N2). Le traitement standard est une radiothérapie avec une

chimiothérapie. Cette étape de réduction est importante, car elle augmente le taux de résection complète à la

chirurgie, améliore la survie et la qualité de vie des patients. Alors qu'une réponse positive peut être observée

dans 55% des patients, 45% des patients avec le même stade de tumeur et ayant été traités avec la même

approche répondent défavorablement. Les facteurs actuellement utilisés en clinique ne peuvent prédire la

réponse du patient au traitement. Cela porte à penser qu'il y a des facteurs intrinsèques qui sont impliqués dans

les processus inflammatoires suite au traitement.

Nous avons investigué le profil d’expression protéique de l’adénocarcinome colorectal afin d’évaluer s’il existe

une corrélation avec la réponse thérapeutique. Les tissus prélevés lors des biopsies pré-traitement sont analysés

par spectrométrie de masse puis comparé selon leur réponse au traitement. Les analyses ont jusqu’à maintenant

identifié plus de 4,000 protéines par échantillons. Trois groupes se distinguent déjà de par leurs expressions

protéiques, notamment une modulation des voies de réparation de l’ADN dans les patients qui répondent moins

bien à la radiothérapie (Nibrin, MSH2 et MSH6). Cette méthode permettra la découverte de nouveaux

biomarqueurs par l’analyse les voies de signalisation dérégulées dans ce type de cancer.

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57 - Characterisation of two novel target mRNAs of the sRNA RyhB in Escherichia coli

Nadia Larabi, David Lalaouna, Hubert Salvail, Eric Massé (1)

(1) Université de Sherbrooke

RyhB is a small RNA (sRNA) that coordinates the bacterial response to iron starvation in Escherichia coli. During

starvation, RyhB is strongly expressed and pairs with its target mRNAs whose product constitute non-essential

Fe-using proteins. This pairing triggers their rapid degradation by the RNA degradosome. This allows iron to be

redirected to essential metabolic pathways, re-establishing cellular iron homeostasis. RyhB can also stimulate

the expression of genes involved in iron uptake pathways by increasing mRNA level.

In this study, the combination of microarray and MAPS (MS2 Affinity Purification – RNA sequencing) data led us

to the discovery of two new RyhB targets, zapB and yncE. Firstly, we demonstrated that zapB, a cell division

factor, is down-regulated by RyhB. In vivo data suggest that the sRNA blocks translation of zapB, in addition to

inducing mRNA degradation. Secondly, we identified yncE as a positive target. Transcription of yncE is repressed

by the Ferric-uptake regulator Fur and iron, which also down-regulates RyhB. Our results showed that yncE is

dually regulated by RyhB and Fur. Discovery and characterisation of two new RyhB targets further extends this

sRNA targetome.

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58 - Les microglies et leurs rôles aux synapses chez le singe parkinsonien

Cynthia Lecours (1,4), Dave Gagnon (2,5), Martin Parent (2,5), Léo Cantin (3,5), Thérèse Di Paolo (1,4) et Marie-

Ève Tremblay (1,5)

(1) Axe de Neurosciences, Centre de recherche du CHU de Québec, (2) Institut universitaire en santé mentale de Québec

(IUSMQ), (3) Département de chirurgie, (4) Faculté de pharmacie et (5) Faculté de médecine, Université Laval, Québec.

La maladie de Parkinson est caractérisée par la dégénérescence progressive des neurones dopaminergiques de

la substance noire compacte qui innervent le striatum. Cela conduit à un défaut de libération de dopamine

notamment au niveau du putamen. Dans ce projet, des analyses post-mortem sont réalisées chez des singes

cynomolgus (Macaca fascicularis) rendus parkinsoniens suite à l’administration d’une neurotoxine, la 1-méthyl-

4-phényl-1,2,3,6-térahydropyridine (MPTP). Ces singes sont comparés à des animaux en santé, du même âge,

servant de témoins. Des sections transversales du striatum ont été immunomarquées avec un anticorps dirigé

contre IBA1, qui marque spécifiquement les microglies. Les sections ont ensuite été analysées en microscopie

optique. Nos analyses quantitatives démontrent que les microglies sont plus abondantes dans le putamen de

singes rendus parkinsoniens, comparativement aux singes contrôles. De plus, le corps cellulaire et les

prolongements des microglies occupent une surface plus grande chez les singes parkinsoniens. Ces changements

morphologiques nous poussent à émettre l’hypothèse selon laquelle les cellules microgliales seraient en mesure

d’établir davantage de contacts synaptiques dans un striatum privé axones dopaminergiques. Cette hypothèse

sera vérifiée grâce à l’utilisation de la microscopie électronique qui nous permettra, non seulement de

caractériser l’aspect phagocytaire des microglies, mais également de quantifier leurs interactions directes avec

les varicosités axonales sérotoninergiques qui auront été marquées à l’aide d’un anticorps dirigé contre le

transporteur membranaire de la sérotonine. À terme, notre projet permettra d’obtenir des évidences

morphologiques directes du rôle joué par les microglies dans la réorganisation de l’innervation sérotoninergique

du striatum qui survient suite à la dégénérescence des afférences striatales dopaminergiques qui caractérise la

maladie de Parkinson, un changement qui semble impliqué dans l’expression des symptômes moteurs de la

maladie ainsi que dans l’expression des dyskinésies induites par son traitement pharmacologique.

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59 - L’ACIDE AMINÉ PHE-6 JOUE UN RÔLE SIGNIFICATIF DANS L’ACTIVITÉ BIOLOGIQUE DU PACAP, UN

PEPTIDE NEUROPROTECTEUR

Laura Lee-Gosselin (1), Myriam Létourneau (1), David Chatenet (1) et Alain Fournier (1)

(1) INRS – Institut Armand-Frappier, 531 boul. des Prairies, Laval, QC

Le pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) possède des propriétés neuroprotectrices dans des

modèles de dégénérescence neuronale. Il est présent sous deux isoformes de 27 et 38 acides aminés, passe la

barrière hémato-encéphalique et ses actions sont médiées via trois récepteurs (PAC1, VPAC1 et VPAC2). Notre

objectif est de concevoir des dérivés du PACAP capables d’activer sélectivement le récepteur PAC1, responsable

de l’activité neuroprotectrice. Des études ont suggéré que la phénylalanine-6 (Phe-6) est un pharmacophore-clé

du PACAP. Nous avons donc évalué la relation entre l’affinité et l’activité biologique de ce peptide et les

propriétés physicochimiques du résidu de la position 6 en le remplaçant par différents dérivés tryptophanyles

obtenus par arylation du noyau indole. D’une part, des tests d’affinité ont été effectués sur des cellules CHO

exprimant l’un ou l’autre des récepteurs. D’autre part, l’activité biologique a été déterminée par des mesures de

mobilisation calcique sur des cellules CHO exprimant PAC1. Les résultats suggèrent que l’aromaticité et/ou

l’hydrophobicité en position 6 sont déterminantes pour la liaison et l’activation de PAC1. Toutefois, il semble que

la chaîne latérale du résidu doive respecter certaines limites au niveau de sa dimension, car les substitutions de

l’indole ont eu un impact défavorable sur l’affinité. Nos travaux antérieurs avaient montré que l’hydrophobicité

était essentielle pour la position 6, probablement pour le maintien d’une structure secondaire appelée « N-

capping ». L’étude actuelle supporte cette observation et confirme l’apport significatif de la position 6 pour

l’activité biologique PAC1-dépendante.

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60 - L'hypertension induit l'inflammation cérébrale

Stéphane Lique (1), Diane Vallerand (1), Mélissa Beauvillier (1), Sonia Duchemin (1), Michaël Boily (1), Nathalie

Haupert (1), Hélène Girouard (1).

(1) Département de pharmacologie, Faculté de médecine, Université de Montréal

L'inflammation chronique et l'hypertension sont associées aux dysfonctionnements d'ordre cognitifs et aux

pathologies neurodégénératives, tel que la maladie d'Alzheimer. L'angiotensine II (AngII) est une hormone

peptidique impliquée dans le développement et le maintien de l'hypertension. L'AngII est aussi impliquée dans

l'inflammation systémique et cérébrale entre autre par la production de cytokines pro inflammatoires (CPI)

circulantes. La relation de cause à effet entre hypertension et inflammation est à double sens mais le rôle de la

pression dans l'induction de l'inflammation cérébrale par l'AngII par rapport à l’effet strictement hormonal reste

à élucider. Notre étude a démontré par immuno buvardage sur des homogénats de cerveaux de souris C57BL/6

qu’une perfusion chronique (7 jours) d'AngII à une dose hypertensive (1,000 ng/kg/min) double l’expression de

la GFAP (marqueur de l'astrogliose) et augmente de 1.6 fois l’expression d'Iba-1 (marqueur de la microgliose)

comparativement au groupe témoin (p<0.05). Les données d'immunofluorescence sur tranches d'hippocampe

ont confirmé que l’AngII augmente de 1.9 fois et 1.4 fois les niveaux de GFAP et d'Iba 1, respectivement,

comparativement aux témoins (p<0.05). Pour évaluer l'interdépendance entre les effets hypertensifs et pro

inflammatoires de l'AngII, nous avons évalué l’effet de la pression en administrant soit : 1/ une dose d'AngII

subpressive (200 ng/kg/min); 2/ l'AngII (1,000 ng/kg/min) avec l'hydralazine (150 mg/L dans l'eau de boisson).

L'hydralazine est un vasodilatateur direct qui normalise la pression artérielle sans inhiber le système rénine

angiotensine. Nos résultats démontrent que l'AngII à dose hypertensive stimule la production de TNF α dans le

plasma et l'hippocampe (p<0.05). Cette augmentation n'est pas observée avec la dose subpressive d'AngII et le

traitement quotidien à l'hydralazine prévient l’augmentation de production de TNF α. Par conséquent, nos

résultats suggèrent que le contrôle de la pression pourrait réduire l'inflammation cérébrale et ainsi prévenir la

progression des maladies neurodégénératives associées.

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61 - Stabilisation de DEPTOR par KDM4A, un nouveau mécanisme de régulation de la voie

métabolique mTOR

Laurence M.Gagné (1), Frédérick A. Mallette (2) et Marc-Étienne Huot (1)

(1) Centre de recherche sur le cancer de l'Université Laval. (2) Centre de recherche hôpital Maisonneuve-Rosemont,

Université de Montréal

Les gliomes de bas grade présentant des mutations hétérozygotes dans les enzymes Isocitrate déshydrogénase

(IDH1 et IDH2) mènent à la production de 2-Hydroxyglutarate (2HG) au détriment de l’α-Kétoglutarate (αKG). De

plus, ces gliomes présentent très tôt une activité accrue de mTOR et ce, de façon PTEN indépendante. Un criblage

par ARN d’interférence ciblant des enzymes αKG dépendantes a permis l’identification de KDM4A, une lysine

déméthylase, comme un nouveau régulateur de mTOR. Cette nouvelle régulation se passe par l’interaction entre

KDM4A et DEPTOR, un inhibiteur de mTOR. Nos résultats montrent que les niveaux protéiques de DEPTOR sont

diminués lorsque KDM4A est inhibé ou absent. Comme il est connu que DEPTOR est dégradé par le protéasome

lorsqu’il y a de faibles quantités de nutriments dans la cellule, nous avons validé que KDM4A pouvait également

réguler la dégradation de DEPTOR par le protéasome. Nous avons déterminé que le domaine catalytique de

KDM4A est important pour l’ubiquitination de DEPTOR. Pour ce qui est de DEPTOR, nous avons identifié des

lysines clés dans son domaine PDZ qui participe à sa régulation. Nous chercherons donc maintenant à connaître

comment celles-ci modulent l’activité et la dégradation de DEPTOR. Ainsi, nos résultats montrent que KDM4A

influence la stabilité de DEPTOR par l’ubiquitination de ce dernier l’amenant à sa dégradation par le protéasome.

Cette nouvelle régulation de DEPTOR influence directement les niveaux d’activité de mTOR, protéine importante

dans le développement tumoral.

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62 - Targeting gaps in the quality of care for patients with diabetes in community chronic care

programs

Madar * H, Brown C, Baillargeon JP, Langlois MF

(1) Université de Sherbrooke.

To evaluate strengths and gaps in the care offered for chronic diseases in the community health centers (Centres

de santé et de Service Sociaux - CSSS) of the Eastern Townships (Québec) and design a new integrated program,

the objective of this study was to determine the technical quality of care for diabetes.

A cross-sectional study, using a random sample of patients (n=1120/2122) who participated in 7 CSSS chronic

disease programs between April 2012 and April 2013, was done. Chart review was performed to evaluate

technical quality of care scores (indicators received vs expected) using validated indicators for diabetes

prevention (anthropometric measures, lifestyle evaluation and counseling) and care (monitoring of clinical

parameters, interventions, achieving therapeutic targets).

From our sample, 462 individuals (41%) had diabetes. They were 65.5 ± 10.7 years, had a BMI of 33.3 ±7.5 kg/m2

and an average of 4.1 ±1.7 comorbidities. The score for prevention was 60.5%. The global score for diabetes was

50%; the subscore for monitoring was 65%, which was significantly higher than scores for interventions (28%)

and target achievement (54%) (p<0.001); and 41% had A1c7%, 30% had LDL<2 and 33% had BP<130/80.

In response to this evaluation, our new regional “Agir Sur Sa Santé” program for the prevention and management

of chronic cardio-metabolic disease replaced the disease-based programs in 2014. Standardized evaluation

protocols, collective medical orders to decrease clinical inertia, and group and individual motivational techniques

to improve self-management support are all components incorporated in the program to improve quality of care.

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63 - Optimisation de la stimulation électrique pour mesurer la mobilisation calcique des

cardiomyocytes isolés de rats nouveau-nés.

Julien Malette(1), Gino Laberge(2), Mannix Auger-Messier(2), Guylain Boulay(1)

(1) Départment de pharmacologie-physiologie de l'Université de Sherbrooke. (2) 2Département de médecine du Centre de

recherche du CHUS, Université de Sherbrooke.

Le maintien de l’homéostasie calcique cellulaire est nécessaire pour assurer, entre autres, la contractilité des

cardiomyocytes dans le cœur. L’étude des mécanismes signalétiques régulant la mobilisation calcique

bénéficierait de l’optimisation des paramètres de stimulation en culture des cardiomyocytes de rats nouveau-

nés (RNVC). Afin de pallier à ce manque méthodologique actuel, nous avons déterminé les paramètres de

stimulation électrique devant être ajustés pour évaluer les variations de concentrations calciques induites en

conditions basales ou en réponse à une stimulation à l’Angiotensine II (AngII). Nous avons développé une

méthode d’imagerie calcique chez les RNVC cultivés sur lamelle de verre, puis montés dans une chambre de

perfusion munie d’électrodes couplées à un stimulateur électrique. Les concentrations de calciques

intracellulaires sont détectées avec la sonde Fura-2. La modulation de la fréquence (0.3-2Hz), la durée (2-4ms)

et l’intensité (5-12V) de la stimulation électrique permet d’imposer un rythme d’oscillations calciques constant

et reproductible. Les conditions de stimulation électrique (0.3Hz, 4ms et 10V), la composition des tampons

d’incubation, les densités d’ensemencement des RNVC ont été optimisées. L’ajout d’AngII modifie rapidement

le profil d’oscillations calciques de façon importante (accélérées et concentration calcique basale augmentée) ou

modérée (pics dédoublés) tel qu’observé chez 32% et 14% des RNVC, respectivement. L’optimisation des

paramètres de stimulation électrique dans ce modèle cellulaire est susceptible d’aider à élucider de nouveaux

mécanismes de régulation de la mobilisation calcique chez les cardiomyocytes.

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64 - Synthèse de nouveaux agents de perméation pour le transport des médicaments

Etienne Marouseau(1), Albane Neckebroeck(1), Heidi Larkin(1), Antoine Le Roux(1), Leonid Volkov(2), Christine

Lavoie(1), Eric Marsault(1)

(1) Institut de Pharmacologie de Sherbrooke, Université de Sherbrooke

(2) Plateforme de biophotonique du CRC, CHUS Fleurimont

Les transporteurs riches en guanidiniums sont des agents de pénétration cellulaire très prometteurs pour de

nombreuses classes de molécules et qui peuvent même acheminer celles-ci au travers de la barrière hémato-

encéphalique. Malgré leur mécanisme d'entrée dans la cellule, relativement peu connu, leurs propriétés en font

des agents prometteurs pour cibler certaines lignées cellulaires ou viser sélectivement les cellules cancéreuses.

Ce projet propose la synthèse de nouveaux transporteurs pour essayer de comprendre les interactions et

mécanismes à l'oeuvre dans la perméation de ces transporteurs. La synthèse, modulaire, vise à pouvoir diversifier

facilement la structure et s'articule autour de la préparation en solution des sous-monomères du transporteur.

Leur assemblage sur phase solide permet de les fonctionaliser pour y attacher les fonctions guanidines et

conjuguer le cargo. Suite à la synthèse d'un premier sous-monomère, et en attendant d'en obtenir d'autres, les

transporteurs issus de celui-ci ont été testés en perméation et en cytotoxicité. Les premiers résultats confirment

la dépendance de la perméation vis à vis de la présence des glycosaminoglycanes. Ils vont nous mener à étudier

comment la structure du sous-monomère change les propriétés du transporteurs et à réaliser des tests

fonctionnels pour étudier le mécanisme.

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65 - MIEUX COMPRENDRE L’INTERACTION ENTRE LA DOULEUR ET LE SYSTÈME MOTEUR EN

COMBINANT LA STIMULATION MAGNÉTIQUE TRANSCRANNIENNE ET

L’ÉLECTROENCEPHALOGRAPIHE

Marylie Martel (1), Marie-Philippe Harvey (1), Francis Houde (1), Philippe Goffaux (2) et Guillaume Léonard (1)

1 Centre de recherche sur le vieillissement, Université de Sherbrooke, Sherbrooke, Québec, Canada

2 Centre de recherche du Centre hospitalier universitaire de Sherbrooke, Sherbrooke, Québec, Canada

Objectif: L’interaction entre la douleur et le système moteur est bien connue en clinique et en réadaptation. Le

but de la présente étude était de mieux comprendre les mécanismes corticaux impliqués dans cette interaction.

Méthodes: Dix-neuf participants sains ont participés à l’étude. L’effet de la douleur (induite à l’aide d’une crème

de capsaïcine) sur l’activité cérébrale ainsi que sur l’excitabilité corticale du système moteur a été mesuré à l’aide

de l’électroencéphalographie (EEG) et de la stimulation magnétique transcrânienne (TMS), respectivement.

Résultats: L’analyse des données EEG a permis de révéler une augmentation de l’activité du cortex moteur

primaire en présence de douleur, lorsque comparé à la condition initiale (sans douleur), mais seulement chez les

participants qui présentaient simultanément une diminution de leur représentation corticale motrice (mesuré

avec la TMS; t=4,45, p<0,05). Ces participants ont également montré une plus grande connectivité entre le cortex

moteur et le cuneus que les participants dont la douleur n’a pas affectée la somatotopie du cortex moteur

(t=3,58, p<0,05). Conclusion: Ces résultats suggèrent qu’une douleur expérimentale induit, chez certains

individus, une altération de la représentation corticale motrice. Les connexions entre le cortex moteur et le

cunéus seraient vraisemblablement impliquées dans la survenue de ces changements cortico-moteurs.

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66 - La spectrométrie de masse en tandem et la podocyturie: un nouvel outil analytique pour le

monitoring des problèmes rénaux?

Tristan Martineau, Michel Boutin, Christiane Auray-Blais

Service de génétique, Département de pédiatrie, Faculté de médecine et des sciences de la Santé, Université de Sherbrooke,

Sherbrooke, QC, Canada

Introduction

La présence de podocytes urinaires (podocyturie) est l’un des signes hâtifs d’anomalies rénales. Présentement,

la mesure de la protéinurie (>30 mg protéines/mmol créatinine dans l’urine) et l’évaluation du débit de filtration

glomérulaire (<60 mL/min/1.73 m2) sont les principaux outils utilisés pour évaluer les dommages rénaux.

Cependant, ces signes peuvent se présenter tardivement et/ou être absents, ce qui peut mener à une

confirmation tardive du diagnostic chez les patients. Actuellement, les méthodes développées pour l’analyse de

la podocyturie restent complexes, fastidieuses et offrent des réponses très variables selon le technicien.

Objectifs

Le but principal du projet est de développer et valider une méthode simple et robuste par spectrométrie de

masse en tandem (MS/MS) pour l’analyse simultanée des protéines spécifiques à la podocyturie dans l’urine. Les

objectifs secondaires sont d’étudier la podocyturie au niveau de: 1) la prééclampsie; 2) la maladie de Fabry; et

3) maladies rénales chroniques et d’établir des valeurs normales chez les contrôles.

Méthode

Un standard interne peptidique lourd pour chaque protéine analysée est ajouté à 1 mL d’urine. L’aliquot est

traité et digéré par trypsination dans un tampon d’ammonium bicarbonate afin de générer des peptides

spécifiques aux protéines des podocytes qui seront analysés par MS/MS. Les peptides produits sont purifiés à

l’aide de colonnes d’extraction en phase solide (Oasis MCX, Waters Corp.) pour retirer les sels et réduire l’effet

de matrice. Après l’évaporation, les échantillons sont resuspendus dans 100 L d’eau + 0,5% d’acide formique et

injectés dans un système de chromatographie liquide (UPLC Acquity I-Class) couplé à un spectromètre de masse

en tandem Xevo TQ-S (MS/MS, Waters). Les ions sont produits par électronébulisation positive et quantifiés par

analyse de réactions multiples.

Résultats

La digestion enzymatique a lieu dans un volume minimal de 1mL d’urine pour assurer un maximum de sensibilité

de détection, soit une urine évaluée à 1 ng/mL de podocine. Une podocine recombinante est analysée pour

déterminer la sensibilité de l’ensemble des peptides en MS/MS. L’ion précurseur doublement chargé m/z 671.4

et l’ion fragment simplement chargé m/z 831.4 du peptide APAATVVDVDEVR est la transition la plus prometteuse

pour la quantification de la podocine dans l’urine. L’analyse du profil peptidique de la podocalyxine recombinante

est en cours, de même que le développement de standards internes.

Conclusion/Perspectives

L’analyse de la podocine par le peptide APAATVVDVDEVR est prometteuse. Nous visons à valider la méthode qui

facilitera le diagnostic de la prééclampsie, de la maladie de Fabry et des problèmes rénaux chroniques et assurera

un meilleur monitoring des patients. Un transfert technologique vers le domaine clinique sera effectué.

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67 - Est-ce que les résolvines pourraient diminuer l’inflammation et l’hyperréactivité utérine

associées au travail préterme ?

Laurence Massenavette, Marie-Ève Roy-Lacroix, Jean-Charles Pasquier, Éric Rousseau

Université de Sherbrooke

Objectif : Les infections intra-utérines induisent un statut inflammatoire et elles sont souvent mises en cause

dans le travail préterme. Diminuer l’inflammation dans la sphère utérine serait donc une stratégie thérapeutique

pour retarder le travail et prolonger la grossesse. Les résolvines sont des dérivés endogènes des oméga-3

impliqués dans la résolution de l’inflammation. Ces dernières pourraient avoir un effet tocolytique indirecte,

mais efficace. Les objectifs spécifiques du projet sont : 1) Comprendre les changements physiopathologiques qui

affectent les propriétés fonctionnelles de l'utérus en conditions pro-inflammatoires chez les femmes enceintes

et 2) Résoudre le statut inflammatoire par l’entremise de la résolvine D2 (RvD2) dans le but de diminuer l’activité

contractile du myomètre.

Méthodes : Des prélèvements utérins sont réalisés lors de césariennes électives sur des femmes à terme (N=10).

Des bandelettes utérines sont disséquées et incubées en conditions contrôle, pro-inflammatoire (TNFα 20 ng/ml

+ LTB4 100 nM) et certaines ont également été traitées avec 300 nM de RvD2 pendant 6h (n = 8 à 14/ groupe).

Des mesures de tensions mécaniques ont été effectuées dans des bains à organe isolé afin de quantifier les

activités contractiles dans nos trois groupes de tissus en réponse à des concentrations croissantes d’ocytocine.

Les niveaux d’expression des enzymes qui produisent la RvD2, soient la 15 et la 5-lipoxygénase (LO) ainsi que son

récepteur le GPR18 ont été quantifiés par immunobuvardage de type Western dans des homogénats, des

fractions cytosoliques et microsomales de myomètre.

Résultats : Les paramètres décrivant les contractions spontanées dans les différentes conditions ne sont pas

statistiquement modifiés. Toutefois, en comparaison aux bandelettes en conditions proinflammatoires, les aires

sous la courbe des contractions phasiques en réponse à différentes concentrations d’ocytocine (3-300 nM) sont

significativement diminuées en présence de RvD2. Ces résultats démontrent une diminution de la réactivité

pharmacologique des fibres utérines en présence de RvD2. Les analyses d’immunodétection ont révélé la

présence de la 15-LO et la 5-LO ainsi que du GPR18 dans le tissu utérin humain à terme.

Conclusion : La résolvine D2 est susceptible de diminuer l'inflammation induite par le TNFα et le LTB4 et la

contractilité du myomètre à terme. Ces résultats permettent de mieux cerner le mode d’action et l’intérêt

clinique potentiel des résolvines en obstétrique.

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68 - Analgesic efficacy of the pharmacological- and siRNA-based inhibition of the CCR2 chemokine

receptor in bone cancer pain

E. Midavaine (1), A. Jacobi (2), S. Rose (2), M. Belkhe (2), J. Longpré (1), and P. Sarret (1)

(1) Université de Sherbrooke, Sherbrooke, QC, Canada, (2) Integrated DNA Technologies Inc, Coraville, IA,

USA

Alors que la détection précoce et les algorithmes thérapeutiques ont grandement augmenté le taux de rémission

du cancer du sein, une nouvelle problématique émerge peu à peu, soit la formation de métastases. L'apparition

de métastases osseuses survient chez plus de 75% des femmes atteintes du cancer du sein et s'accompagne de

douleurs d'intensité modérée à élevées chez la majorité de ces patientes. L'étiologie de ces douleurs étant très

complexe et multifactorielle, plus de 50% des femmes demeurent réfractaires aux traitements analgésiques

actuels. Le récepteur CCR2 étant impliqué dans la signalisation douloureuse et dans la formation des métastases

osseuses, notre objectif consiste à déterminer l'effet analgésique et anticancéreux de cibler le récepteur CCR2

par des outils pharmacologiques et géniques.

Nous avons validé l’efficacité de trois antagonistes au récepteur CCR2 (RS 504393, V-13-001242 et AZ889) dans

des essais de signalisation cellulaire. Nous avons également testé ces antagonistes ainsi que des DsiRNA contre

le récepteur CCR2 dans des essais de prolifération cellulaire in vitro sur des cellules cancéreuses ainsi que dans

un modèle de douleur aiguë induite par le CCL2. Un modèle syngénique de métastases osseuses du cancer du

sein, qui consiste en l'implantation chirurgicale de 30 000 cellules de carcinome mammaire dans le fémur de

rates Sprague-Dawley, a ensuite été utilisé afin de tester l’efficacité des composés dans un contexte de douleur

chronique. Alors que les composés pharmacologiques montrent une efficacité similaire dans un modèle de

douleur aiguë, un traitement chronique aux DsiRNA, encapsulés dans des nanoparticules lipidiques, est parvenu

à un renversement complet de l’allodynie mécanique dans un modèle de douleur chronique comparativement

aux antagonistes qui montrent une efficacité très limitée. En revanche, les antagonistes montrent un potentiel

anticancéreux supérieur au DsiRNA. En conclusion, cibler le récepteur CCR2 émerge comme une cible

prometteuse afin de soulager la douleur cancéreuse osseuse et suggère des effets anticancéreux notables.

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69 - Implémentation de l’évaluation de la contribution de l’entropie conformationnelle à l’énergie de

liaison estimée par le logiciel d'arrimage moléculaire FlexAID

Louis-Philippe Morency(1)(2), Francis Gaudreault(1)(2), Rafael Najmanovich(1)(2)

(1) Université de Sherbrooke

(2) PROTÉO

La prédiction du mode de liaison observé expérimentalement entre un ligand et une biomacromolécule est une

finalité de l’arrimage moléculaire, une technique bio-informatique cruciale au domaine de la reconnaissance

moléculaire. Elle est utilisée pour étudier les interactions moléculaires impliquées dans les mécanismes

biologiques essentiels à la cellule en modélisant la pose observée entre les molécules qui y sont impliquées. Pour

clarifier, une pose constitue une conformation d’un récepteur, i.e. un polymère d’acides aminés ou nucléiques,

complexé avec un ligand Actuellement, les méthodes d’arrimage moléculaire sont spécialisées à évaluer les

interactions moléculaires d’une seule pose, c’est-à-dire une seule conformation, et elles performent à prédire la

fraction enthalpique de la différence d’énergie libre causée par sa formation. Conséquemment, les techniques

existantes d’arrimage moléculaire échouent à modéliser efficacement les contributions de nature entropique,

qui jouent un rôle clé dans les évènements de reconnaissance moléculaire. À la lumière de ces constats, nous

avons décidé d’implémenter l’entropie conformationnelle dans la fonction de pointage de FlexAID, un logiciel

d’arrimage accessible, compétitif et non biaisé que nous développons. Cette implémentation estimera l’entropie

conformationnelle d’un mode de liaison afin de guider le processus d’optimisations de FlexAID vers

l’identification des modes de liaison de nature entropique qui seraient autrement ignorés.

Les résultats actuels sur l’Astex Diverse Set indiquent que l’implémentation de l’entropie conformationnelle

augmente la précision de FlexAID dans la prédiction du mode de liaison. FlexAID sauvegarde désormais les

modes de liaison prédits d’une façon dynamique, une nouveauté qui permet à l’utilisateur de mieux visualiser le

mécanisme moléculaire étudié. En somme, nous croyons que FlexAID pourra attaquer des problèmes biologiques

et pharmacologiques complexes qui ne peuvent être abordés par les méthodes actuelles d’arrimage moléculaire,

p. ex. les modes de liaison allostériques et ceux où l’entropie est une composante principale de la liaison.

FlexAID est disponible en tant que code source, exécutables pré-compilée ou à travers la NRGsuite, une interface

graphique intégrée au logiciel de visualisation moléculaire PyMOL permettant l’utilisation de FlexAID d’une façon

interactive et intuitive — http://bcb.med.usherbrooke.ca/flexaid.

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70 - L'homéostasie de l'hème chez Schizosaccharomyces pombe : une ouverture vers la clinique.

Thierry Mourer(1), Simon Labbé(1)

(1) Université de Sherbrooke

L’hème est un micronutriment essentiel aux organismes vivants. Cependant, les mécanismes moléculaires

gouvernant son acquisition sont peu documentés. À l’aide de l’organisme modèle Schizosaccharomyces pombe

(S.Pombe) nous avons découvert une toute nouvelle protéine, Shu1, permettant l’acquisition d’hème exogène.

En carence de fer, Shu1 se localise à la membrane plasmique et lie une molécule d’hème exogène avec une haute

affinité. Après liaison, Shu1 pénètre dans la voie d’endocytose et délivre l’hème au compartiment vacuolaire.

Subséquemment, l’hème est expulsé de la vacuole pour nourrir les hémoprotéines cellulaires. Cette voie de

nutrition en hème est conservée chez les levures filamenteuses, pathogènes de l’homme. Les orthologues de

Shu1 chez Candida albicans, Rbt5 et Pga7, présentent une forte similarité avec Shu1 et sont connus comme des

transporteurs d’hème de très haute affinité. De plus, Rbt5 et Pga7 sont des acteurs majeurs de la pathogénicité

dans un modèle de candidose murin. Nous avons démontré que ces marqueurs moléculaires (Rbt5 et Pga7) sont

fortement exprimés dans une souche septicémique de Candida albicans. La résolution expérimentale de la

structure tridimensionnelle de Shu1 par spectroscopie RMN ainsi que son analyse par criblage informatique

contre une librairie de composés organiques permettront d’identifier des ligands alternatifs à la molécule

d’hème. La capacité de ces ligands à lier Shu1, Rbt5 et Pga7 sera analysée in vitro par titration calorimétrique

isotherme. Nous testerons ensuite les meilleurs composés avec des essais d’atténuation de croissance fongique

sur une souche de S.Pombe auxotrophe pour l’hème mais exprimant Shu1 ou Rbt5/Pga7. La découverte de

ligands entrant en compétition avec l’hème et empêchant la croissance fongique permettra le développement

d’un antifongique novateur. L’ensemble de ces travaux nous permettra de mieux comprendre les mécanismes

homéostatiques de la molécule d’hème et de répondre au besoin grandissant en antifongiques pour lutter contre

les levures pathogènes de l’homme résistantes aux traitements classiques.

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71 - Les dommages à l'ADN : sources de cancers, ressources des anti-cancéreux

Alexia Muguet (1), Antonio Conconi (1)

(1) Université de Sherbrooke

Les cellules sont soumises à de nombreux stress qui peuvent endommager la molécule support de l'information

génétique, l'ADN. Les dommages à l'ADN crées ont trois principaux devenir possibles : a) ils sont supprimés via

la mort de la cellule, b) ils sont éliminés par réparation de l'ADN, c) ils persistent et entrainent des mutations de

l'information génétique. Selon où cette mutation se situe dans le génome, la cellule peut devenir cancéreuse.

Les dommages à l'ADN sont donc des sources potentielles pour le développement de cancer. Pourtant, un grand

nombre d'agent anti-cancéreux utilisés en chimio-thérapie ont pour but de créer des dommages à l'ADN. Cela n

'est pas insensé ! Et c'est en comprenant la réponse cellulaire face à l'agression de son identité génétique que

l'on peut comprendre l'origine de certaines cancers mais également trouver des voies de recherche pour le

développement d'agent anti-cancéreux.

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72 - Caractérisation d’anticorps IgY reconnaissant la structure 3D de la deuxième boucle

extracellulaire du récepteur NTS1 de la neurotensine

Marie-Edith Nepveu-Traversy (1,2), Sandra Morissette (3), Pierre-Luc Boudreault (1), Karyn Kirby (1), Billy

Breton (3), Éric Marsault (1), Simon Gaudreau (2), Philippe Sarret (1)

(1) Institut de Pharmacologie de Sherbrooke, Sherbrooke, Québec, Canada.

(2) Immune Biosolutions, Sherbrooke, Québec, Canada.

(3) Domain Therapeutics, Montréal, Québec, Canada

Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPGs) sont des cibles thérapeutiques grandement étudiées puisqu’ils

sont impliqués dans de nombreux processus biologiques et pathologiques à fort potentiel thérapeutique.

Toutefois, il s’avère difficile de produire des anticorps capables de détecter et moduler efficacement ces

protéines membranaires ayant peu d’épitopes accessibles à leur surface. Une technique innovatrice combinant

l’utilisation de poules, espèce génétiquement éloignée des espèces de mammifères ciblés en recherche (humain,

souris, rat), et l’utilisation de peptides macrocycliques mimant les structures tridimensionnelles des boucles

extracellulaires des RCPGs, a permis de produire des anticorps IgY détectant spécifiquement un de ces

récepteurs, le récepteur NTS1. Il est impliqué dans la transmission du message douloureux, la régulation de la

température corporelle, la pression artérielle et pourrait avoir un rôle dans l’apparition de certains cancers.

Les résultats obtenus démontrent que deux des anticorps IgY produits avec les peptides macrocycliques (Y00129

et Y00238) permettent la détection spécifique du récepteur NTS1 de rat et ce, à l’aide de plusieurs techniques.

De plus, l’anticorps Y00238 s’avère être un antagoniste bloquant diverses voies de signalisation engendrées par

l’activation de NTS1 par la neurotensine, soi β-arrestin2, Gαp, GαoB, Gαi2, Gα13 et Gαz.

En conclusion, cette technique permet non seulement la production d’anticorps IgY capables de reconnaître les

structures tridimensionnelles des RCPGs, dans ce cas-ci, la boucle ECL2 du récepteur NTS1 de rat, mais également

de moduler l’activité du RCPG. Il s’agit d’un atout majeur dans le développement d’anticorps thérapeutiques

ciblant l’activité des RCPGs.

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73 - Involvement of the histone variant H2A.Z C-terminal docking domain in genomic localization and

transcriptional activation

Hannah Neumann(1), Luc Gaudreau(1)

(1) Université de Sherbrooke

The eukaryotic genome is organized as chromatin that consists of repeated nucleosomes, and which represents

a barrier to gene transcription. The incorporation of histones variants alters the chromatin structure and creates

specialized chromatin regions, which can be permissive to transcription. The highly conserved H2A.Z, a histone

variant of H2A, has thoroughly been studied. In the budding yeast S. cerevisiae, H2A.Z has shown to be involved

in positive and negative regulation of transcriptional activation. Moreover, the special function of H2A.Z in gene

expression resides in its C-terminal docking domain, the most divergent region between the structures of H2A

and H2A.Z histones. The H2A.Z-containing nucleosomes present an extended acidic patch formed by the amino

acids around the H2A.Z αC helix in the docking domain and an amino acid of histone H2B. This acidic patch is

thought to provide a binding platform for nuclear proteins and thereby modulate nucleosome remodeling

activities.

In this study, we aim to investigate the functional role of H2A.Z C-terminal docking domain in gene induction and

genome-wide localization of the histone variant. In order to study the function of the H2A.Z C-terminal region,

we used a chimeric protein named ZA-rII’ which contains a transcriptional activation domain (rII') that can mimic

the key interactions with the H2A.Z acidic patch leading to transcriptional activation. First, we confirmed that the

H2A.Z special function in gene induction resides in its C-terminal region because the ZA-rII’ fusion could efficiently

restore full activation of the GAL1 gene in S. cerevisiae. Unlike recent studies, we show that specific incorporation

and eviction of H2A.Z from promoters is not dependent on its C-terminal region. Given the role of the H2A.Z C-

terminal in gene induction, we use a proteomic approach to screen for protein ‘interactors’ of the C-terminal tail

using the BioID (proximity-dependant biotin identification) method optimized for application in yeast.

Thus, we propose a model for the role of H2A.Z in transcriptional activation where the C-terminal region of H2A.Z

is not essential for proper localization at promoters, but absolutely essential once H2A.Z is incorporated into

chromatin to recruit appropriate interacting partners, which we will identify by the BioID method, leading to

transcriptional activation.

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74 - Identification et caractérisation de GAPs spécifique à RAB21

Caroline Normandin (1), Steve Jean (1)

(1) : Université de Sherbrooke

L’autophagie est un processus permettant le recyclage et la dégradation de composés cellulaires. Ce mécanisme

de survie est induit en condition de stress. L’autophagie dépend d’évènements de transport vésiculaire. Ces

évènements permettent entre autres l’apport de membrane plasmique et le transport de composants cellulaires,

tel que des protéines, requis pour le flux autophagique. Le trafic membranaire est régulé par des petites GTPases

de la famille des Rabs. Les Rabs sont inactives lorsque liées au GDP et elles sont actives lorsque liées au GTP. Les

Guanine Nucleotide Exchange Factors (GEFs) sont des régulateurs positifs de ces RABs, alors que les GTPases

Activating Proteins (GAPs) sont des régulateurs négatifs. RAB21 est une protéine G impliquée dans la régulation

de l’autophagie. En effet, RAB21 régule VAMP8, une SNARE, qui permet la fusion de l’autophagosome avec le

lysosome, une étape limitante dans le processus autophagique. De plus, l’activité de RAB21 est modulée lors

d’une carence en nutriment, suggérant un rôle important d’une GAP dans ce processus. Jusqu’à maintenant,

aucune GAP spécifique à RAB21 n’a été identifiée. Pour en identifier une, un criblage génétique dans les yeux de

drosophile a été réalisé sur les 27 GAPs connues de cette espèce. Ce criblage utilisant le système Gal4-UAS

permet la codéplétion de RAB21 et de chaque GAP. Seule la GAP OATL1 a montré un sauvetage complet du

phénotype de RAB21, indiquant qu’OATL1 est potentiellement une GAP spécifique à RAB21. Nous validons

présentement le rôle d’OATL1 sur RAB21 par des essais fonctionnels chez les mammifères et la drosophile.

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75 - Implication de la protéine Str3 dans l'assimilation d’hème chez la levure Schizosaccharomyces

pombe.

Vincent Normant (1), Thierry Mourer (1) et Simon Labbe (1)

(1) Département de Biochimie, Université de Sherbrooke

La molécule d’hème est un groupement prosthétique qui est requis par de nombreuses protéines impliquées

dans des processus cellulaires vitaux. En excès, l’hème libre est toxique car elle peut très facilement causer des

dommages aux membranes ou participer à la formation d’espèces réactives à l’oxygène. Son homéostasie doit

donc être rigoureusement régulée. Pour obtenir l’hème de façon exogène, les organismes ont développé une

panoplie de stratégies afin de l’acquérir. De plus, pour plusieurs organismes incluant les levures pathogènes, il a

été montré que leur capacité à acquérir l’hème est souvent en lien direct avec leur habilité à infecter l’hôte.

Chez l’organisme modèle, Schizosaccharomyces pombe, il a été découvert que la protéine de surface

Shu1 est impliquée dans l’acquisition d’hème. Une souche délétée pour le gène hem1+ n'est plus capable de

synthétiser de l’hème. Elle doit donc recourir à l'acquisition d’hème exogène pour survivre. Une souche délétée

pour les gènes hem1 et shu1 n'est pas capable de croître en présence d'une faible quantité d’hème (0,075µM)

dans le milieu de culture. Nous avons observé que si cette concentration excède 0,15µM, la souche est capable

de croître, suggérant l'existence d'un deuxième transporteur d’hème. Chez S. pombe, la protéine Str3 est prédite

pour être un transporteur de type MFS (Major Facilitator Transporter). Cependant, son ligand reste à ce jour

inconnu. Une souche délétée pour les gènes hem1 shu1 et str3 présente une incapacité de croître en présence

de 0,15µM d’hème, montrant ainsi l'importance de str3+ à cette concentration d’hème. Le gène str3+ est induit

en condition de carence de fer et est réprimé en présence de fer par le facteur de transcription Fep1. La protéine

Str3 se localise à la surface cellulaire. Par ailleurs, elle a la capacité de lier de l’hème in vitro. Enfin, la présence

de Str3 à la surface cellulaire permet l’entrée dans la cellule de Zinc-Mésoporphirine (ZnMP), un analogue

fluorescent de l’hème. Cette étude met en évidence l'existence d'un deuxième transporteur d’hème chez S.

pombe.

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76 - The role of IL-15 trans-presentation in antigen cross-presentation

Sakina Orkhis(1), Diwakar Bobbala(1), Subburaj Ilangumaran(1), Alfredo Menendez(2) and Sheela

Ramanathan(1)

Immunology Division(1), Departments of Pediatrics1 and Microbiology(2), Faculty of Medicine and Health Sciences,

Université de Sherbrooke

Interleukin-15 (IL-15) is a pro-inflammatory cytokine that is required for the survival and activation of memory

CD8+ T cells, NK cells, innate lymphoid cells, macrophages and dendritic cells. IL-15 is implicated in the

pathogenesis of various autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis, inflammatory bowel disease,

psoriasis and autoimmune type 1 diabetes (T1D). IL-15 receptor (IL-15R) consists of a specific α chain, the β chain

that is shared with IL-2R and the common γ chain. IL-15 is unique in the manner in which it binds and signals

through its receptor subunits. IL-15 that is complexed with IL-15Rα binds to the βγ receptor complex present on

the responding cell to mediate its biological effects, through a process referred to as trans-presentation. The

trans-presented IL-15 is essential to mediate the biological effects on T lymphocytes and NK cells. We show that

in vitro, neither IL-15 nor IL-15Rα is required for cross-presentation of bacterial antigens. However IL-15, but not

IL-15Rα is required for cross-presentation of antigens derived from intracellular pathogens in vivo. Our findings

provide insight into the complexities of IL-15 signaling in the initiation and maintenance of CD8+ T cell-mediated

immune responses.

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77 - Régulation de l’inflammation chronique par les médiateurs inflammatoires au niveau des tissus

adipeux dans l’obésité

V. Rakotoarivelo(1), M. Mayhue(1) M.F. Langlois(2)(3),*et S. Ramanathan1, (1)(3)*

(1)Départements de pédiatrie et médecine, (2)FMSS, Université de Sherbrooke, (3)Centre de Recherche Clinique, Centre

Hospitalier Universitaire de Sherbrooke, Sherbrooke, QC, Canada. * Equal senior authorship

L’obésité étant une surcharge pondérale reflète l’évolution de la société vers un déséquilibre énergétique,

altérant ainsi la qualité de vie. Bien plus important encore, l’obésité est un important facteur de risque et source

de plusieurs maladies telles que le diabète de type 2, l’hypertension, les maladies du foie et les maladies

cardiovasculaires. L’ampleur que le phénomène de l’obésité prend guide la recherche fondamentale à

comprendre et à approfondir ses différents aspects. En effet, ces maladies que l’on regroupe sous le nom de

maladies cardiométaboliques sont fortement associées au facteur pathogénique de l’inflammation chronique,

laquelle se met en place durant l’évolution de l’obésité. Les tissus adipeux hébergent différentes populations

immunitaires, tels que les macrophages et les lymphocytes qui peuvent s’activer et secréter des médiateurs

inflammatoires tels que les chimiokines qui par leur tour, vont maintenir un bassin de recrutement de ces cellules

immunitaires. Toutefois, il est important de comprendre si cette inflammation chronique est la cause ou la

conséquence de ces maladies cardiométaboliques. Dans notre étude, nous disposons de sérum, de tissus

adipeux viscéral et sous-cutané de patients. Ces derniers comprennent les personnes ayant un poids santé ou

obèses, dont certains souffrent du diabète des type 2 et d’autres sont considérés comme étant nos patients

contrôles. En effectuant une première analyse par cytokine array, nous avons obtenu un profil d’expression des

différentes chimiokines au niveau systémique et au niveau des tissus. Ceci nous permet de comprendre comment

ces chimiokines secrétées lors de l’évolution de l’obésité influencent l’évolution de la pathologie du diabète.

L’analyse du niveau d’expression des gènes au niveau des tissus adipeux va nous permettre d’apporter une

lumière quant à l’origine de ces chimiokines, et d’expliquer si cette inflammation chronique est spécifiques aux

tissus ou systémique.

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78 - Implication du récepteur aux hydrocarbures aromatiques (AhR) dans le contrôle de la réponse

immunitaire

Guillaume Ricaud(1), Debbie Lim(1), Isabelle Perreault(2) et Jacques Bernier(1)

(1) Laboratoire d’immunomodulation, INRS — Institut Armand-Frappier, Laval, QC

(2) Chirurgie - Service de plastie, Université de Montréal, Montréal, QC

Le récepteur aux hydrocarbures aromatiques (AhR), a été d’abord décrit comme senseur moléculaire auquel se

lient de nombreux polluants environnementaux comme les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAPs) et

les hydrocarbures aromatiques halogénés (HAHs). Il a été montré que l’activation du AhR par des toxiques,

comme le TCDD, induisait une immunosuppression. Récemment il a été démontré que la différenciation des

cellules T CD4+ était influencée par des ligands du AhR présents dans le milieu environnant des cellules.

L’activation de l’AhR serait en autre responsable du maintien de l’équilibre entre les cellules Th17

proinflammatoire et lymphocytes T régulateurs, immunosuppresseurs. Notre hypothèse est que l’activation du

AhR suite à une exposition occupationnelle aux HAPs/HAHs ou bien la présence d’une forte concentration de

ligands endogènes dans certaines maladies, corrélera avec une modification du profil des cellules T. Pour vérifier

l’exactitude de notre hypothèse, nous avons étudié le profil des cellules T CD4+ chez des pompiers exposés à des

produits de combustion et des patients ayant subi une brulure sévère. Chez les pompiers, l’exposition à des

ligands exogènes issus des combustions incomplètes de matière organique peut potentiellement entrainer une

activation de l’AhR. D’autre part, chez les grands brûlés, l’augmentation de certains ligands endogènes,

conséquence du traumatisme, peuvent également induire cette activation. L’activation du AhR par des ligands

dans les sérums de pompiers et des ligands endogènes dans les sérums de patients grands brûlés sera confirmée

à l’aide d’un système rapporteur XRE-luciférase. Nos résultats montrent que la population de cellules Th17, Th22

et Treg chez les pompiers est augmentée par rapport au groupe témoin. De plus, le traitement avec le sérum de

pompier induit une forte augmentation de l’activité du AhR. Pris ensemble, ces résultats indiquent que les ligands

présents dans les sérums de pompiers pourraient expliquer l’augmentation des populations Th17, Th22 et Treg

chez ce groupe. Chez les grands brûlés, nous observons aussi une modulation des Th17 et la présence de ligands

à différent temps à la suite du traumatisme. La perturbation de l’immunité résultant d’une suractivité du AhR

pourrait modifier la mise en place d’une réponse chez des sujets en détresse immunitaire, mais également

favoriser le développement de maladies auto-immunes à la suite d’une exposition occupationnelle.

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79 - Functional contribution of the mesencephalic locomotor region to locomotor control

Marie Roussel (1, 2), Nicolas Josset (1, 2), David Lafrance-Zoubga (2), Maxime Lemieux (2), Frédéric Bretzner

(3).

(1) co-premiers auteurs

(2) Centre de recherche du CHU de Québec-Université Laval

(3) Dpt. de psychiatrie et neurosciences, Faculté de Médecine, Université Laval

Recently, electrical stimulation of the Mesencephalic Locomotor Region (MLR) has been shown to improve

locomotor recovery in hemi-lesioned rodents. Although the anatomical correlates of the MLR has been initially

identified as the cuneiform nucleus (CnF), a cluster of glutamatergic neurons, and the pedonculopontine nucleus

(PPN), a cluster of glutamatergic and cholinergic neurons, there is still an on-going debate about the exact

anatomical correlate of this supraspinal locomotor center.

Using adult VGluT2+ or ChAT+cre transgenic mice expressing Channelrhodopsin 2, optical cannulas were

implanted chronically above the CnF or PPN, and wires were implanted in hindlimb flexor and extensor muscles

for electromyographic (EMG) recordings. Kinematic and EMG recordings were performed at rest and during

treadmill locomotion upon photostimulations.

Photostimulations of glutamatergic CNF or PPN neurons initiated episodes of locomotion at rest. During

on-going locomotion, photostimulations of glutamatergic CnF or PPN evoked short-latency excitatory responses

in hindlimb flexor and extensor muscles during the swing phase, and inhibitory responses in extensor muscles

during the stance phase. Interestingly, photostimulations of glutamatergic CnF neurons applied within a step

cycle shortened the duration of the step cycle and extensor burst, thus resetting the locomotor rhythm and

switching gaits from a slow trot to a fast gallop or full-bound.

In contrast to glutamatergic populations, photostimulations of cholinergic PPN neurons failed to evoke

episodes of locomotion in mice kept at rest. However, these photostimulations evoked excitatory motor

responses in extensor muscles at rest and during treadmill locomotion. They also increased the duration of the

step cycle and extensor burst, thus slowing-down the locomotor rhythm and consequently switching the gait

from a trot to slow-walking gaits, such as lateral or out-of-phase walks.

In summary, glutamatergic CnF and PPN neurons initiate and modulate the locomotor pattern, and accelerate

the rhythm, while cholinergic PPN neurons decelerate it.

Grants : Canadian Institutes of Health Research, Parkinson Disease of Canada and Wings for Life.

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80 - New actors of the regulated secretory pathway involved in pain modulation

Mélisange Roux (1), Myriam Lemire (1), Jean Lainé (1), Jean-Michel Longpré (1), Ashley M. Jacobi (2), Scott D.

Rose (2), Mark A. Behlke (2), Philippe Sarret (1)

(1) Département de pharmacologie-physiologie, FMSS, Université de Sherbrooke

(2) Integrated DNA Technologies Inc., Coralville, IA, USA.

Export of neo-synthesized G protein-coupled receptors (GPCRs) from intracellular compartments to the cell

surface represents a crucial checkpoint in controlling the level of functional receptors available at the plasma

membrane and the magnitude of the cellular response elicited by a ligand. Among GPCRs, we previously

demonstrated that activation of the neurotensin receptor 2 (NTS2) produces strong analgesia in different animal

pain models. Despite its therapeutic potential, previous studies have shown that NTS2 is poorly expressed on the

plasma membrane under basal conditions, but rather stored within the Golgi intracellular sorting compartment.

In order to characterize the underlying mechanisms promoting the cell surface recruitment of NTS2, we first

screened for interaction partners using a yeast two-hybrid system. This assay identified secretogranin III (SgIII),

involved in the formation of regulated secretory vesicles as an NTS2-binding partner. The molecular association

between SgIII and NTS2 was further supported by co-immunoprecipitation and GST pull-down assays, as well as

by subcellular co-localization studies. As part of this project, we wished to further dissect the role of SgIII in NTS2

receptor function. To this aim, 27-mer Dicer-substrate siRNAs (DsiRNA) used to knockdown SgIII were evaluated

in the acute tail-flick nociceptive test, in which intrathecal injection of the NTS2-selective agonist, JMV-431

induces a dose-dependent antinociceptive response. Rats, pre-treated 48h and 24h prior behavioral experiments

with DsiRNA targeting SgIII, exhibited a 70% decrease of the JMV-431 induced analgesia. This result seems

specific to NTS2 since the injection of SgIII DsiRNA did not affect the antinociceptive effects of morphine or

deltorphine, acting respectively on µ opioid (constitutive secretory pathway) and δ opioid (regulated secretory

pathway) receptors. In conclusion, these results demonstrate that the sorting of NTS2 through its interaction

with SgIII along the regulated secretory pathway drives NTS2-mediated spinal analgesia.

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81 - La ventilation liquidienne totale dans la prise en charge de la détresse respiratoire néonatale

secondaire au déficit en surfactant (étude préliminaire).

Michaël Sage (1), Claudia Forand-Choinière (1), Philippe Micheau (1), Jean-Paul Praud (1), Étienne Fortin-

Pellerin (1)

(1) Université de Sherbrooke

Introduction : La prise en charge respiratoire des nouveau-nés prématurés avec déficit en surfactant nécessite

souvent une ventilation mécanique gazeuse (VG). Cette ventilation, indispensable à la survie du patient à court

terme, vient aggraver le pronostic à long terme en provoquant des lésions pulmonaires appelées « Ventilator

induced Lung Injury » (VILI) pouvant mener à la dysplasie broncho-pulmonaire. La ventilation liquidienne totale

(VLT), où la ventilation alvéolaire est effectuée par l’entremise d’un perfluorocarbone (PFC) liquide oxygéné,

possède l’avantage de permettre une ventilation à des pressions inspiratoires plus faibles. De plus, le PFC a des

propriétés anti-inflammatoires. La VLT pourrait s’avérer être un outil intéressant pour la prévention de la

dysplasie broncho-pulmonaire. Hypothèse : La VLT permet le maintien des échanges gazeux sans altérations

hémodynamiques dans un modèle néonatal ovin de déficit induit en surfactant. Méthode : Quinze agneaux (2 à

4 jours de vie, 3,3 ± 0.8 kg) nés à terme ont été anesthésiés, curarisés et instrumentés pour le suivi des gaz du

sang artériel (PaO2, PaCO2) et des pressions artérielles systémiques (PAS) et pulmonaires (PAP). Des lavages

pulmonaires de 10 ml/kg de salin ont été effectués jusqu’à l’obtention du critère d’admissibilité (PaO2 ˂ 100

mmHg avec FiO2 100%). Puis, les agneaux ont été randomisés et traités durant 2 h par l’un ou l’autre des

traitements, soit VLT (n=8) ou VG (n=7). Résultats : Les valeurs de PaO2, PaCO2, pH, PAS et PAP ne présentaient

pas de différence significative entre les deux groupes après l’insulte, après stabilisation et à la fin de la période

de traitement (p > 0.05). Les valeurs de gazométrie, la PAS et la PAP obtenues après deux heures de ventilation

étaient acceptables tant dans le groupe VLT que VG respectivement (PaO2 = 122 ± 25 mmHg vs 120 ± 38 mmHg

(p = 0.90); PaCO2 = 57 ± 4 mmHg vs 48 ± 12 mmHg (p = 0.07); , (p = 0.60) PAS= 50 ± 15 mmHg vs 57 ± 14 mmHg

(p=0,37) et PAP = 32 ± 4 mmHg vs 29 ± 2 mmHg (p= 0,44) ). Conclusion : Les résultats montrent la possibilité

d’utiliser la ventilation liquidienne totale pour la prise en charge initiale des nouveau-nés atteints d’un déficit en

surfactant. L’analyse des marqueurs inflammatoires est présentement en cours afin d’évaluer l’impact des deux

traitements sur l’inflammation pulmonaire. Ce projet pilote nous permet d’envisager une étude pré-clinique sur

un modèle d’ovins prématurés.

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82 - Conception rationnelle d’analogues peptidiques macrocycliques de la neurotensine 8-13

Marc Sousbie(1,2), Élie Besserer-Offroy(1,2), Jean-Michel Longpré(1,2), Philippe Sarret(1,2), Richard Leduc(1,2),

Éric Marsault(1,2)

(1) Institut de Pharmacologie de Sherbrooke, (2) Faculté de Médecine et des Sciences de la Santé, Département de

Physiologie-Pharmacologie, Université de Sherbrooke

Dans le système nerveux central, la neurotensine (un tridécapeptide) qui active les récepteurs couplés à la

protéine G (RCPG) NTS1 et NTS2, qui ont un effet antinociceptif (1). Ces récepteurs sont par conséquent

considérés comme une bonne cible pour le développement de traitements alternatifs de la douleur chronique.

Celle-ci est en effet encore principalement traitée par la morphine ou autres dérivés opiacés, malgré leurs effets

indésirables largement documentés. (2).

Le ligand endogène de NTS1 et NTS2 étant un peptide, sa demi-vie in vivo et sa biodisponibilité sont très faibles,

ce qui limite grandement son utilisation comme outil pharmacologique et a fortiori comme médicament. Afin

d'améliorer ceci, nous avons décidé de produire des analogues macrocycliques de NT 8-13 (les 6 acides aminés

N-terminaux de la neurotensine, la plus courte séquence qui conserve toute l'activité). (3).

Les peptides macrocycliques sont en effet connus pour avoir de nombreux avantages (d'un point de vue

pharmacologique) par rapport à leurs équivalents linéaires. Ces avantages sont conférés par la restriction de

conformation que la macrocyclisation impose. Du côté pharmacocinétique, les macrocycles peptidiques sont

habituellement plus résistants aux protéases, et ont donc une demi-vie étendue. De plus, le nombre réduit de

liaisons rotatives et la plus haute tendance à former des ponts H intramoléculaires peut améliorer l'absorption

de molécules à masse relativement élevées (4).

Du côté pharmacodynamique, le nombre réduit de degrés de liberté des macrocycles par rapport aux peptides

linéaires diminue la perte d'entropie lors de la liaison au récepteur, ce qui la facilite (si le macrocycles est dans

une conformation proche de celle adoptée au sein de la poche de liaison (5). Nos efforts ont jusqu'ici étés

concentrés sur la conception de macrocycles imitant la conformation de la neurotensine liée au récepteur.

La disponibilité du cristal de NTS1 de rat avec NT 8-13 comme ligand (6) est apparu comme une opportunité pour

utiliser la modélisation moléculaire pour supporter la conception rationnelle de nos composés. Nous avons donc

produit un modèle d'homologie de NTS1 humain et l'avons utilisé pour amarrer nos macrocycles et évaluer leur

capacité à adopter la bonne conformation dans le site de liaison. Couplée à un essai d'affinité par déplacement

de la neurotensine radiomarquée, cette stratégie nous a permit de concevoir et d'améliorer plusieurs séries de

macrocycles peptidiques. Ceci a mené à un macrocycle ayant une affinité de 40 nM pour NTS1 (comparé à 1 nM

pour NT 8-13) avec une surface polaire réduite et une demi-vie étendue dans le plasma.

Nous pensons que ce premier "hit" va ouvrir une porte vers des macrocycles ayant des propriétés

pharmacologiques bien plus intéressantes que le peptide endogène neurotensine. Références

1) P. Dobner, CMLS 2005

2) I. Kissin, Anasthesia and analsesia, 2010

3) M.R. Brown et al. J. Biol. Chem. 1977

4) J. G. Beck et al. JACS 2012

5) E. Marsault & M. L. Peterson, J. Med. Chem. 2011

6) R. Grisshammer et al. Nature 2012

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83 - A model for epithelial and mesenchymal conversion in TNBC: Identification of duel Wnt and YAP sensitivity within both breast cancer stem cell populations

Andrew Sulaiman (1) and Lisheng Wang (1,2,3)

(1) Department of Biochemistry, Microbiology and Immunology, Faculty of Medicine, University of Ottawa, Canada (2)

Regenerative Medicine Program, Ottawa Hospital Research Institute, Ottawa, Ontario K1H 8L6, Canada

(3) Ottawa Institute of Systems Biology, University of Ottawa, 451 Smyth Road, Ottawa, Ontario K1H 8M5, Canada

Breast cancer stem cells (BCSCs) are associated with resistance to chemotherapy, radiotherapy and poor clinical

prognosis. BCSCs exist in mesenchymal (epithelial-mesenchymal transition, EMT) or epithelial states

(mesenchymal-epithelial transition, MET), characterized by CD44+/CD24- or ALDH+ respectively. These BCSC

populations are able to convert into one another and are essential drivers for metastasis, secondary tumor

formation and relapse. Unfortunately, conventional chemotherapy has been found to enrich BCSCs. Thus, the

development of clinically relevant low-dosage inhibitors that specifically targets both BCSC populations may be

crucial for successful clinical treatment. Here we demonstrated that both mesenchymal and epithelial TNBC

(triple negative breast cancer) BCSCs are vulnerable to dual Wnt and YAP inhibition. Clinically relevant

concentrations of ICG-001 (Wnt inhibitor targeting CBP/p300) and simvastatin (YAP inhibitor) inhibit both bulk

and BCSC populations, leading to decreased colony forming capacity and cell proliferation and increased

apoptosis in TNBC cell lines and clinical samples. This work suggests a new approach for the effective targeting

of both EMT/MET BCSC populations through dual Wnt and YAP inhibition.

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84 - L'administration sous-aigue d'érythropoïétine systémique réduit les lésions ischémiques

cérébrales d'une manière dépendante de l'âge.

Peter Thériault (1), Audrey Le Béhot (1), Ayman ElAli (2) and Serge Rivest (1)

(1) Neuroscience Laboratory, CHU de Québec Research Center and Department of Molecular Medicine, Faculty of Medicine,

Laval University, Québec City, QC, Canada

(2) Neuroscience Laboratory, CHU de Québec Research Center and Department of Psychiatry and Neuroscience, Faculty of

Medicine, Laval University, Québec City, QC, Canada

L'ischémie cérébrale (IC), occasionnée par un accident vasculaire cérébral (AVC), est associée à la

neuroinflammation, à la mort neuronale et à la perte d’intégrité de la barrière hémato-encéphalique (BHE).

Actuellement, la forme recombinante de l'activateur de type tissulaire du plasminogène (rtPA), le seul traitement

aigu approuvé pour l'IC, augmente le risque subséquent d'hémorragie intracérébrale et est peu efficace dans la

dégradation d’un thrombus riche en plaquettes. Par conséquent, le développement de thérapies plus sures et

plus efficaces est très attendu. Or, des effets neuroprotecteurs suite à l'administration d'érythropoïétine (EPO)

ont été rapportés dans des modèles murins d’IC. Toutefois, ces études précliniques antérieures n'ont pas évalué

les effets de l'EPO dans l’IC focale induite par un thrombus riche en plaquettes, et ne considèrent pas l'impact de

l'âge sur l’efficacité du traitement. Dans notre étude, nous avons effectué une occlusion de l'artère cérébrale

moyenne en induisant la formation d'un thrombus riche en plaquettes dans des souris C57BL/6 chimériques

âgées de 5 (c.-à-d. jeunes) et 20 (c.-à-d. âgés) mois, dans lesquelles les cellules souches hématopoïétiques de la

moelle osseuse portent la protéine fluorescente verte (GFP). L’EPO recombinante humaine (rhEPO) a été

administrée 24 heures suivant l'occlusion et les populations de monocytes dans la circulation sanguine, soit pro-

inflammatoires (Ly6CHigh) et patrouilleurs (Ly6CLow), ont été étudiées par cytométrie en flux, 3 heures après

l'administration de rhEPO. Vingt-quatre heures après le traitement rhEPO, la mort neuronale et l’intégrité de la

BHE ont respectivement été évalué via la quantification des cellules neuronales positives pour le Fluoro Jade B

(FJB), ainsi que des immunoglobulines (IgG) sériques extravasées au cerveau. La neuroinflammation a été

déterminée par la quantification de l’infiltration des cellules dérivées de moelle osseuse positives pour GFP,

l’évaluation du recrutement des cellules microgliales et la mesure de la sécrétion de monocyte chemotactic

protein-1 (MCP-1), dans la lésion ischémique cérébrale. Nos résultats suggèrent que les propriétés anti-

inflammatoires de rhEPO ont significativement restreint les lésions ischémiques cérébrales dans notre modèle

d’IC, en réduisant la mort neuronale et limitant la perte d’intégrité de la BHE chez les jeunes animaux, mais pas

chez les animaux âgés, indiquant ainsi que les effets neuroprotecteurs de rhEPO sont dépendants de l'âge. En ce

sens, les futures études visant à développer de nouvelles thérapies pour l'IC devront prendre en considération

ce facteur pouvant affecter leur efficacité.

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85 - Dissection génétique de DSCAM dans le circuit locomoteur spinal

Louise Thiry(1), Frédéric Bretzner(1,2)

(1) Centre de recherche du CHU de Québec, CHUL, Axe Neurosciences

(2) Faculté de Médecine, Dpt. de Psychiatrie et Neurosciences, Université Laval

DSCAM est une molécule d’adhérence cellulaire associée au Syndrome de Down, qui est impliquée dans le

développement du circuit neural. Récemment, nous avons montré que les souris mutantes DSCAM2J (mutation

systémique) présentent des problèmes de coordination locomotrice, qui sont associés à des changements

anatomiques et neurophysiologiques dans le circuit interneuronal spinal. À l’aide de la technologie cre-lox, nous

proposons ici d’identifier et de caractériser la contribution de différentes populations interneuronales du circuit

locomoteur spinal affectées par la mutation de DSCAM. Pour cela, nous avons étudié la locomotion à l’aide de

moelles épinières néonatales isolées et de souris adultes ayant une mutation conditionnelle de DSCAM dans les

interneurones excitateurs ou inhibiteurs (vGluT2-cre;DSCAMf/f ou VGAT-cre;DSCAMf/f). Par rapport aux souris

sauvages adultes (DSCAMff), les souris VGluT2-cre;DSCAMff couraient plus vite et exprimaient des patrons

locomoteurs de course. Les moelles épinières isolées de souris néonatales VGluT2;DSCAMf/f présentaient

également des épisodes de synchronisation dans les activités des racines ventrales gauches et droites durant la

locomotion fictive. Enfin, nos expériences de traçage rétrograde dans ces moelles épinières isolées nous

permettront d’évaluer s’il y a une réorganisation anatomique du circuit interneuronal spinal. En résumé, la

mutation conditionnelle de DSCAM dans les interneurones excitateurs spinaux semble récapituler le phénotype

observé chez la souris mutante DSCAM2J.

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86 - VALIDATION CLINIQUE DE PHENOVAR EN TANT QU’AIDE DIAGNOSTIQUE POUR

L’INTERPRÉTATION DE L’EXOME

Fanny Thuriot (1), Caroline Buote (1), Laura Dempsey-Nunez (1), Marie Edmont (1), Elaine Gravel (1), Yannis

Trakadis (2), Bruno Maranda (1), Valérie Désilets (1), Sébastien Chénier (1), Pierre-Étienne Jacques (3),

Sébastien Lévesque (1)

(1) Université de Sherbrooke, Département de Pédiatrie, Sherbrooke, Québec, Canada

(2) Université McGill, Département de Génétique médicale, Montréal, Québec, Canada

(3) Université de Sherbrooke, Département de Biologie, Sherbrooke, Québec, Canada

Bien que l’hétérogénéité des désordres génétiques nous limite dans l’identification du gène causal avec les

approches diagnostiques conventionnelles, le séquençage de l’exome a permis d’accroitre le nombre de

diagnostics posés récemment. Par contre, le grand nombre de variants identifiés par cette méthode pose un défi

significatif dans l’interprétation clinique. Nous avons donc élaboré PhenoVar : un logiciel qui intègre les données

phénotypiques et génotypiques pour nous retourner une courte liste de diagnostics potentiels. Jusqu’à présent,

nous avons analysé l’exome de 45 patients présentant des dysmorphismes incluant ou non des désordres

neurodéveloppementaux dont l’étiologie des maladies n’a pas été déterminée avec les analyses bio-

informatiques conventionnelles. Cette analyse a été faite en utilisant PhenoVar en parallèle avec une analyse

manuelle. PhenoVar nous permet de diminuer de 6 fois le temps d’analyse comparé à l’analyse manuelle (15

minutes vs 90 minutes) et de diminuer le nombre de diagnostics potentiels (20 vs 30). Nous avons trouvé le

diagnostic de 18 patients avec les 2 méthodes, ce qui offre un rendement de 40%. Il est à noter que plus de 90%

des diagnostics ont été trouvés dans les 10 premiers diagnostics suggérés par PhenoVar. Finalement, PhenoVar

est très utile lors de la réanalyse périodique des patients. En effet, un diagnostic a été établi avec la réanalyse

d’un patient avec un résultat initialement négatif. La mise à jour des bases de données a permis de relier le

Schaaf-Yang syndrome à une mutation tronquante dans le gène MAGEL2.

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87 - Étude des effets inotropes positifs de l'apéline sur des cardiomyocytes de rat adulte

Ouellet É-A., Tiffinger A., Coquerel D., Chagnon F., Marsault É., Auger-Messier M., Sarret P., Lesur O., Dumaine

R.

Université de Sherbrooke

L’hypertrophie cardiaque, principalement associée à l’hypertension artérielle, engendre une perte de la force de

contraction des ventricules et, conséquemment, une réduction du débit sanguin menant à l’insuffisance

cardiaque. Les traitements actuels de l’insuffisance consistent soit à augmenter la contractilité cardiaque

(ouabaine, digitale) ou à diminuer la pression artérielle périphérique (β-bloqueurs, bloqueurs calciques,

diurétiques). Cependant, comme la plupart de ces médications induisent des effets contractiles similaires au

niveau vasculaire et cardiaque, ceci limite sévèrement leur efficacité. Afin de diminuer l’hypertrophie, la

médication devrait idéalement réduire la pression artérielle tout en augmentant la contractilité cardiaque.

L’apéline, un peptide endogène récemment découvert possède à la fois des propriétés vasodilatatrices et

augmente la contractilité cardiaque. Notre objectif dans cette étude est de déterminer les mécanismes impliqués

dans les effets inotropes cardiaques de l’apéline et de composés mimétiques synthétisés par notre groupe de

recherche sur cette molécule. Nous avions précédemment démontré que l’apéline augmente de 35% l’amplitude

du courant sodique cardiaque, ce qui indirectement peut induire une augmentation de calcium intracellulaire en

réduisant son extrusion via l’échangeur Na/Ca. Afin de tester cette hypothèse nous avons mis au point une

technique de microscopie confocale qui permet la mesure simultanée du degré de corréler la longueur des

contractions de cardiomyocytes ventriculaires de rats avec la quantité de calcium intracellulaire relargué.

Nos résultats préliminaires indiquent que l’effet inotrope positif de l’apéline est dû à une augmentation de la

concentration de calcium intracellulaire et une sensibilisation des filaments contractiles.

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88 - Influence des androgènes sur la susceptibilité à la fibrillation auriculaire chez les souris mâles

Anh-Tuan Ton(1), Anique Ducharme(1) et Céline Fiset(1)

(1) Université de Montréal - Institut de Cardiologie de Montréal

La prévalence de la fibrillation auriculaire (FA) est décrite comme étant plus importante chez l’homme que chez

la femme avec une prépondérance de 2 pour 1. La FA est associée à un remodelage électrophysiologique

caractérisé par un changement dans la fonction des canaux ioniques et/ou une diminution de la vitesse de

conduction électrique à travers le tissu cardiaque. Bien que la FA soit l’arythmie cardiaque la plus fréquente au

sein de la population, les mécanismes cellulaires pouvant expliquer ces différences liées au sexe demeurent mal

connus. Ainsi, le but de ce projet est d’identifier les substrats électrophysiologiques impliqués dans la plus haute

prévalence de la FA chez l’homme.

Dans une première série d’expériences, des études de stimulations électriques programmées ont été menées

dans le but d’induire une FA chez des souris mâles, femelles et mâles orchiectomisées (ORC) âgées de 5 mois.

Ces expériences ont montré une plus grande prévalence de FA chez les souris mâles (52%, n=21)

comparativement aux souris femelles (25%, n=24), confirmant les données cliniques humaines. Les souris ORC

ont une incidence plus faible de FA (38%, n=16) que les souris mâles, suggérant un rôle des androgènes dans ce

phénomène. Pour vérifier si le substrat électrophysiologique pro-arythmogène était différent entre souris mâles

et femelles, des expériences de patch-clamp ont été effectuées pour mesurer les courants ioniques sodiques et

potassiques sur des myocytes auriculaires gauches. Les enregistrements ne montrent pas de différence et ne

peuvent expliquer la plus haute prévalence de FA chez les souris mâles. Des analyses complémentaires ont été

réalisées pour mesurer l’expression de l’ARNm de certains gènes connus pour leur implication dans le

remodelage associé à la FA. Ainsi, le gène de la connexine 40 est trois fois moins exprimé chez les mâles

comparativement aux femelles et ORC.

En résumé, comme chez l’homme, la susceptibilité à la FA est plus grande chez les souris mâles et serait

probablement médiée par les androgènes. Cette susceptibilité ne serait pas liée à une différence de courants

ioniques entre mâles et femelles mais serait due à une expression plus faible de Cx40 chez les mâles. Cela pourrait

en effet contribuer à un retard de conduction électrique pro-arythmogène augmentant ainsi la susceptibilité à

la FA.

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89 - Macrocycle mimics active conformation of pyr-apelin-13

Kien Tran(1), Alexandre Murza(1), Xavier Sainsily(1), Jérôme Côté(1), Philippe Sarret(1) and Éric Marsault(1)

1 Institut de Pharmacologie de Sherbrooke, Faculté de médecine et des sciences de la santé, Université de Sherbrooke,

Sherbrooke, QC, Canada

Apelinergic system has been identified recently as important actor in the regulation of cardiovascular function,

fluid homeostasis (through Arginine Vasopressin) and energy metabolism. Unfortunately, the predominant form

of endogenous ligand, pyr-apelin-13, has a very short half-life (around 4 minutes) which limits the scope of many

studies. Until now, the 3D structure of apelin receptor is not available, design new ligands represent one of the

most challenging step to validate the therapeutic value of this system. To contribute a promising solution for this

issue, here we used macrocyclic approach to probe the inner space of receptor and localize supplementary

pharmacophore location.

By using “rolling loop scan”, we showed that the apelin receptor has a large binding cavity which can accept even

a 17 members ring moiety. Two regions of pyr-apelin-13 have probably a turn-like structure is C-terminus and N-

terminus. Moreover, the middle amino acids of this ligand were thought to bind with a flexible surface when a

rigid macrocyclic is not tolerated. Several derivatives showed a signaling pattern identical with apelin, some of

them block the proteolytic sites and become a potential lead for next generation of apelinergic ligand.

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90 - Comparaison de méthodes de capture des d'acides nucléiques sanguins sur puce.

Dominic Tremblay(1), Daniel Brassard(2), Denis Charlebois(3), Teodor Veres(2), Matthias Geissler(2)

(1) Université de Sherbrooke. (2) Conseil national de recherches du Canada. (3) Agence spatiale canadienne.

La microfluidique est une technologie émergente qui permet de manipuler des liquides à travers des canaux de

petite taille. À la base du concept du «laboratoire sur puce», cette technologie permet de réduire de façon

importante les volumes nécessaires à la réalisation d’expériences. La microfluidique centrifuge tire avantage de

la force centrifuge générée par une plateforme rotative afin d’initier et de contrôler l’écoulement des liquides

dans la puce. Des efforts ont été consentis afin d’améliorer les performances d’une puce d’extraction des acides

nucléiques à partir d’échantillons de sang humain. Le protocole d’extraction des trousses commerciales inclut

plusieurs étapes dont la lyse du sang, la capture des acides nucléiques sur une matrice de silice, le lavage et la

remise en suspension de l’ADN. La matrice de capture représente un élément central autant pour la fabrication

que pour le fonctionnement de la puce. Différentes catégories de filtres composés de fibres de verre ainsi que

des billes de silice ont été testés afin de comparer le rendement de capture d’ADN avec celui de plusieurs

trousses commerciales. Les filtres ont généralement donné des résultats plus constants et supérieurs à ceux

obtenus avec les billes et supérieurs à ceux des trousses commerciales.

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91 - Characterization of new stable NTS2-selective neurotensin analogs

Mélanie Vivancos(1), Roberto Fanelli(2), Marie Orliaguet(1), Jerome Coté(1), Élie Besserer-Offroy(1), Alexandre

Murza(1), Jean-Michel Longpré(1), James B. Thomas(3), Jean Martinez(2), Florine Cavelier(2), & Philippe

Sarret(1)

(1) Department of Pharmacology and Physiology, Institut de Pharmacologie de sherbrooke, Université de Sherbrooke,

Sherbrooke, Qc, Canada, J1H 5N4;

(2) IBMM, UMR-CNRS-5247, Université de Montpellier, Place Eugène Bataillon, 34095 Montpellier, France;

(3) Center for Drug Discovery, RTI International, P. O. Box 12194, Research Triangle Park, North Carolina 27709, United

States

The tridecapeptide neurotensin (NT) has emerged as an important modulator of nociception transmission

exerting its biological activity by interacting with class A G protein-coupled receptors, namely NTS1 and NTS2.

Over the past few decades, much research effort has been directed at designing stable and selective NT

compounds acting at the NTS1 receptor site. However, binding of NT to NTS1 not only induces analgesia but also

results in hypotension and hypothermia, which may represent barriers to adequate pain management.

Importantly, as opposed to NTS1, there is now substantial evidence supporting that NTS2-selective agonists may

mediate analgesia without exerting changes in blood pressure or body temperature. Here, our goal was thus to

design and characterize novel NT analogs with high affinity and selectivity toward NTS2. To this aim, we

synthesized a series of NT(8-13) analogs harboring site-specifically modified natural or unnatural amino acids

and reduced amide bonds. Binding studies demonstrated that the substitution of the aromatic residue in position

11 by a positively charged amino acid (Lys) as well as incorporation of a reduced amide bond between Lys8-Lys9

(called JMV-5964) improved the selectivity by more than 100-fold toward NTS2 (4500 nM and 28.7 nM for NTS1

and NTS2, respectively) and greatly increased the plasma stability, with half-life exceeding 2 hours. Additional

modification of this compound by replacement of the Leu13 residue with the more hydrophobic

(trimethylsilyl)alanine (TMSAla) non-natural amino acid (designed as JMV-5966) resulted in improved affinity for

both NTS1 and NTS2 receptors (166 nM and 1.38 nM, respectively). In the acute thermal tail-flick test, we found

that intrathecal (i.t.) injection of JMV-5966 at a dose of 30 µg/kg produced a significant and sustained analgesic

response for up to 1 hour compared to saline–treated rats while JMV-5964 had no analgesic effect at the

equimolar dose tested. Both JMV-5964 and JMV-5966 did not produce hypothermia at the effective analgesic

dose and were not effective in inhibiting carbachol-induced ileal smooth muscle relaxation. Finally, the in vivo

NTS2-selectivity of JMV-5966 was demonstrated with the NTRC-844 compound, acting as a potent NTS2-selective

antagonist. Indeed, a significant reversal of the analgesic effects on thermal hypersensitivity was observed when

30 µg/kg of JMV-5966 was injected i.t. in the presence of an excess of NTRC-844. In conclusion, these results

reinforce the importance to develop new stable NTS2-selective agonists to improve pain control and reduce the

peripheral effects of NT related to NTS1 activation.

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92 - La protéine phosphatase SHP-2 prévient la sénescence cellulaire dans les cellules épithéliales

intestinales normales.

Vanessa Vaillancourt-Lavigueur (1), Jessica Gagné Sansfaçon (1), Geneviève Coulombe (1),et Nathalie Rivard

(1).

(1) Département d'anatomie et de biologie cellulaire, FMSS, Université de Sherbrooke.

Introduction: La protéine tyrosine phosphatase SHP-2 est connue pour réguler de nombreuses fonctions

cellulaires, y compris la croissance, la différenciation et la survie. De manière intéressante, une mutation gain-

de-fonction (résidu E76K) dans le gène encodant SHP-2 a été trouvée dans certains cancers colorectaux. Nous

avons donc récemment généré un modèle murin exprimant spécifiquement dans l’épithélium intestinal cette

forme constitutive active de SHP-2 (souris Shp-2 CEI-E76K). Nous avons observé que ces souris présentaient une

hyperplasie intestinale. De plus, l’expression de cette forme mutante augmente fortement la charge tumorale

chez la souris ApcMin/+ (Gagné-Sansfacon et al., Oncotarget. 2016). Cependant, les mécanismes moléculaires

impliqués dans ces effets restaient à élucider.

Méthodes: Des cellules épithéliales intestinales humaines non-immortalisées (HIEC) ont été infectées avec des

lentivirus codant pour un shARN dirigé contre SHP-2. L’impact sur la prolifération a été analysé par marquage de

la SA-β-galactosidase et par des analyses d’immunobuvardages de protéines régulatrices de voies de

signalisations et du cycle cellulaire. Nous avons aussi analysé ces différents marqueurs dans les tumeurs des

souris ApcMin/+; Shp-2IEC-E76K versus ApcMin/+. (Xu D, Liu X, Yu WM, Meyerson HJ, Guo C, Gerson SL and Qu

CK.)

Conclusion: Ces résultats suggèrent que SHP-2 protège les cellules épithéliales intestinales d’un stress

oncogénique entrainant la sénescence

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93 - PEG-Enzyme for neurodegenerative diseases treatment

Ahlem Zaghmi(1,2), Andrea Greschner(1), Charles Ramassamy(2), Marc A Gauthier(1)

(1) INRS-Énergie Matériaux Télécommunications, Varennes, Québec, Canada

(2) INRS-Institut Armand Frappier, Laval, Québec, Canada

Glutamate, as the major excitatory neurotransmitter in the central nervous system, is involved in many aspects

of normal brain function including learning, memory and behavior (Campos-Peña et al., 2014, Hynd et al., 2004).

During neurodegenerative diseases (Alzheimer’s disease, ...) the high levels of glutamate, induces excitotoxicity

and leads to neuronal death and loss of cognitive function. Some studies have suggested that reducing blood

levels of glutamate could induce efflux from the brain to the blood thereof leading to the decrease in the cerebral

concentrations (Boyko et al., 2014, Ruban et al., 2014).

Our hypothesis is that the use of enzyme-polymer bio-conjugates could be interesting for the treatment of

neurodegenerative diseases . The glutamate dehydrogenase (GDH) via its catalytic activity, will consume the

excess glutamate and the biocompatible polymer selected, which is polyethylene glycol (PEG), will increase the

duration of circulatory half-life.

We propose, therefore, to synthesize conjugates GDH-PEG, to validate the maintenance of enzymatic activity

and check their therapeutic efficacy.

For this purpose, we conjugate PEG on the surface of the GDH (by using 2 ratios), we validate the reaction by

visualization of our bio conjugates by SDS PAGE and by separating them with Size exclusion chromatography.

After that we characterize the number of PEG per GDH by NMR and we evaluate the enzymatic activity before

and after bio-conjugation.

Our results demonstrate that the use of different Ratio allows us to have variable number of PEG grafted on the

surface of our enzyme. After PEGylation, we showed that the enzyme activity is maintained.

Currently, we are doing in vitro and in vivo tests in rat’s models to evaluate the effectiveness of the elimination

of the excess toxic glutamate from the cerebrospinal fluid.

Index

Page | 108

Allaire A, p.23

Beaudeau J, p.24

Beaudry-Richard A, p.25

Bella Ndong D, p.26

Bellemare V, p.27

Benabdoune H, p.28

Benoit-Piau J, p.29

Bergeman J, p.30

Berthiaume J, p.31

Berthoumieux M, p.32

Besserer-Offroy É, p.19

Bilodeau-Laforest M, p.33

Blais V, p.34

Bonin M, p.35

Bordeleau M, p.36

Bouchard M, p.37

Boudaud M, p.38

Boudreault A, p.39

Boudreault S, p.16

Boutin J, p.40

Brand C, p.41

Bruneau Cossette L, p.42

Cabana J, p.43

Carter S, p.44

Chénard T, p.14

Chevin M, p.45

Comeau C, p.46

Cyr-Lafleur T, p.

Da Silva M, p.48

Dansereau M, p.49

de La Vega M, p.17

Del Olmo T, p.50

Desroches A, p.51

Dion S, p.52

Dorr M, p.53

Drigeard Desgarnier M, p.54

Dumont L, p.55

Dumont A, p.56

Durand M, p.57

Echeverria M, p.58

Eiselt E, p.59

Fontaine F, p.60

Girard M, p.61

Hammood M, p.47

Harvey M, p.63

Henry M, p.64

Héroux F, p.65

Houde F, p.66

HUI W, p.67

Jakubowska W, p.20

Josset N, p.68

Kouakou A, p.69

Lacasse V, p.70

Larabi n, p.71

Lecours C, p.72

Lee-Gosselin L, p.73

Lique S, p.74

M.Gagné L, p.75

Madar H, p.76

Malette J, p.77

Marin Sierra E, p.18

Marouseau E, p.78

Martel M, p.79

Martineau T, p.80

Massenavette L, p.81

Midavaine E, p.82

Morency L, p.83

Mourer T, p.84

Muguet A, p.85

Nepveu-Traversy M, p.86

Neumann H, p.87

Normandin C, p.88

Normant V, p.89

Orkhis S, p.90

Perrotte M, p.21

Poujol de Molliens M, p.15

Rakotoarivelo V, p.91

Ricaud G, p.92

Roussel M, p.93

Roux M, p.94

Sage M, p.95

Sousbie M, p.96

Sulaiman A, p.97

Thériault P, p.98

Thiry L, p.99

Thuriot F, p.100

Tiffinger A, p.101

Ton A, p.102

TRAN K, p.103

Tremblay D, p.104

Vaillancourt-Lavigueur V, p.105

Vivancos M, p.106

Zaghmi A, p.107

Le comité de la Journée Phare 2016 tient à remercier tous les présentateurs et participants. Nous tenons également à remercier nos généreux partenaires et commanditaires qui nous permettent de faire de cet événement une réussite.

Au plaisir de vous revoir l’année prochaine !

Platine

Or

Argent

Bronze

Remerciements

Laboratory

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