Plate-forme de Recherche Clinique en CYTOMIQUE

Biomarqueurs cellulaires innovants CPER: Innovations thérapeutiques et Technologies de

la Santé (ITTS-CIC-B)

Plateau technique au sein du Pôle Laboratoires du CHUN (Pr F Plenat) dédié à la recherche clinique et translationnelle Mutualisation des compétences Complémentarités humaines et technologiques Ouverture régionale et interrégionale

Ensemble type « Flow cytometry core facility » Cytométrie en flux multiparamétrique Cell Search Veridex Image Stream System (Amnis)

Charte et soumission IBiSA

Cytométrie de flux multiparamétrique

Navios (Beckman Coulter) Software Kaluza

CMF 3 lasers 10 couleurs Laboratoire d’Immunologie (Pr GC FAURE, Pr MC BENE, Dr M de

CARVALHO) Service d’Hématologie biologique (Pr T LECOMPTE, Dr V

LATGER) Unité de thérapie cellulaire et tissulaire (Pr JF STOLTZ, Pr A

DALLOUL) Anatomopathologie (Pr F PLENAT, Dr K MONTAGNE)

CancéropoleCytométrie de flux multiparamétriqueEvénements rares et populations discrètes

Onco-Hématologie NoE European Leukemia Net STIC DHOS Maladie résiduelle (LAL, LAM) Maladie Résiduelle LLC Myélodysplasies Projet INCA SIGLAM Phase périphérique des LMNH

Réponse immunitaire anti-tumorale et thérapie cellulaire Tregs, cellules dendritiques, cellules NK

Microparticules et cellules endothéliales

Cytométrie de flux multiparamétrique (2)MC Béné, au nom du GEIL, GTLLF, GOELAMSMoelle normaleMaladie résiduelle

valorisation démarche détection et quantification d’événements rares au sein des « bermudes »

CD34 CD45

CD13 SSC

Cytométrie de flux multparamétrique (2) Réponse immunitaire anti-

tumorale spécifique (M de Carvalho, P Eschwege + …) Antigènes candidats (cancer

prostate) Problématique: événements rares

+ caractérisation multiparamétrique phénotypique et fonctionnelle de sous populations cellulaires

Signatures cytokiniques Transfert de l’expérience

acquise dans la réponse spécifique anti-mycobacterium tuberculosis et anti-adenovirus

Cytométrie de flux multiparamétrique (3) Microparticules, thrombose et cancer (V Latger-

Cannard, Th Lecompte)

Standardization of platelet-derived microparticle counting using calibrated beads and a Cytomics FC500 routine flow cytometer: a first step towards multicenter studies? Robert S, Poncelet P, Lacroix R, Arnaud L,

Giraudo L, Hauchard A, Sampol J, Dignat-George F.

J Thromb Haemost. 2009 Jan;7(1):190-7. Epub 2008 Oct 18.

Cell Search Veridex® Combinaison de méthodes

Immunologiques spécifiques Séparation immunomagnétique Quantification en imagerie photonique automatisée

Standardisation et automatisation de la phase préparative

Très grande sensibilité (5 évts/tube de 7,5mL) soit #10-7 outil de choix pour l'étude des cellules

endothéliales circulantes en recherche clinique.

Validation antérieure en recherche clinique pour les cellules tumorales circulantes pour des études pronostiques.

Capacités d’isolement des cellules en vue d’études moléculaires complémentaires

Projets Cell Search Cancéropole et au-delà…

Cellules Tumorales Circulantes (CTCs) Sein (CIC Cancérologie CHU-CLCC E Luporsi –

GSK/NOVARTIS – INCA?) Poumon

AO Cancer 2009 Région Lorraine, Nancy Y Martinet, JM Vignaud comparaison ISET STIC Nice, Strasbourg P Oudet, M Beau-Faller

Prostate (Nancy Urologie: J Hubert, P Eschwege; Paris: S Loric LIBM) Validation clinique en réseau interrégional, national, voire

européen (IMI?) Cellules Endothéliales Circulantes (CECs)

Thérapies antiangiogéniques Inflammations: sepsis (CPRC S Gibot) Neuroectodermoses: Sclérose tubéreuse de Bourneville (J

Hubert, Necker)

Cell search CTCs (1) CERONC – Poumon (Y Martinet, E Quoix,

M Beau-Faller, P Oudet) Evaluation de l’intérêt clinique de la détection

des cellules tumorales circulantes dans le cancer bronchique métastatique

Avec ajout de marqueurs d’intérêt (X) Isolement des cellules en vue d’études

moléculaires CERONC – Prostate (P Eschwege, J

Hubert, D Peiffert) Evaluation préthérapeutique

Cell Search CECs (2) Projet Sepsis

CPRC CHU Nancy (Pr S Gibot, GCF) Quantification des CEC Isolement des CECs pour études

moléculaires Projet STB (Sclérose Tubéreuse de Bourneville)

Evaluation des CECs comme biomarqueurs d’angiogénèse pour l’évaluation et le suivi des tumeurs vasculaires rénales

Demande en cours ASTB, PHRC maladies rares (GCF, Pr J Hubert, Necker – D Joly, Lyon – O Rouvière)

Imagerie en fluxImage stream X AMNIS®

Le système AMNIS®, système d’imagerie en flux combinant cytométrie en flux et imagerie photonique

Observation directe, de la localisation précise, cellule par cellule, des marqueurs fluorescents utilisés pour identifier: membrane, organites intracellulaires, noyau.

Parmi les applications réalisables en simultané Marquages membranaires multiples et colocalisation de

marqueurs de surface Marquages nucléaires (FISH en suspension) Translocation nucléaire, apoptose Etudes fonctionnelles Coopérations cellulaires (synapse immunologique)

Image stream X AMNISApplications…. etc

Biologie cellulaire – Immunologie

Cancérologie

Cycle Cellulaire

Signalisation Cellulaire Analyse Morphologique

Mort cellulaire

Dommage de l’ADN

Interactions cellulaires

Plate-forme de recherche clinique en CYTOMIQUE

Biomarqueurs cellulaires innovants CPER: Innovations thérapeutiques et Technologies de

la Santé (ITTS-CIC-B)

Plateau technique au sein du Pôle Laboratoires du CHUN (Pr F Plenat; REDIF: Pr Th Lecompte; CIC-B Pr GC Faure) dédié à la recherche clinique Mutualisation des compétences Complémentarités humaines et technologiques Ouverture régionale et interrégionale

Ensemble type « Flow cytometry core facility » Cytométrie en flux multiparamétrique Cell Search Veridex Image Stream System (Amnis)

Charte et soumission IBiSA

R3

MONOMONOMONO

T CELLT CELLT CELL

MONOMONOMONO

T CELLT CELLT CELL

1e50 1e4-1e3 1e3 1e6

Intensity_A-750 CD3

1e5

1e6

1e4

-1e3

0

1e3

Inte

nsity

_PE

CD

14

9_BF 6_SSC 7_DAPI 2_FITC NFkB 3_PE CD14 4_PETR CD45 11_AF647 CD16 12_A750 CD3

325

718

969

1246

9_BF 6_SSC 7_DAPI 2_FITC NFkB 3_PE CD14 4_PETR CD45 11_AF647 CD16 12_A750 CD3

316

943

1142

3592

Monocytes

T cells

NF-kB translocation in whole blood subsets