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presentation of the clinical research flow cytometry core facility of CHU Nancy
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Plate-forme de Recherche Clinique en CYTOMIQUE
Biomarqueurs cellulaires innovants CPER: Innovations thérapeutiques et Technologies de
la Santé (ITTS-CIC-B)
Plateau technique au sein du Pôle Laboratoires du CHUN (Pr F Plenat) dédié à la recherche clinique et translationnelle Mutualisation des compétences Complémentarités humaines et technologiques Ouverture régionale et interrégionale
Ensemble type « Flow cytometry core facility » Cytométrie en flux multiparamétrique Cell Search Veridex Image Stream System (Amnis)
Charte et soumission IBiSA
Cytométrie de flux multiparamétrique
Navios (Beckman Coulter) Software Kaluza
CMF 3 lasers 10 couleurs Laboratoire d’Immunologie (Pr GC FAURE, Pr MC BENE, Dr M de
CARVALHO) Service d’Hématologie biologique (Pr T LECOMPTE, Dr V
LATGER) Unité de thérapie cellulaire et tissulaire (Pr JF STOLTZ, Pr A
DALLOUL) Anatomopathologie (Pr F PLENAT, Dr K MONTAGNE)
CancéropoleCytométrie de flux multiparamétriqueEvénements rares et populations discrètes
Onco-Hématologie NoE European Leukemia Net STIC DHOS Maladie résiduelle (LAL, LAM) Maladie Résiduelle LLC Myélodysplasies Projet INCA SIGLAM Phase périphérique des LMNH
Réponse immunitaire anti-tumorale et thérapie cellulaire Tregs, cellules dendritiques, cellules NK
Microparticules et cellules endothéliales
Cytométrie de flux multiparamétrique (2)MC Béné, au nom du GEIL, GTLLF, GOELAMSMoelle normaleMaladie résiduelle
valorisation démarche détection et quantification d’événements rares au sein des « bermudes »
CD34 CD45
CD13 SSC
Cytométrie de flux multparamétrique (2) Réponse immunitaire anti-
tumorale spécifique (M de Carvalho, P Eschwege + …) Antigènes candidats (cancer
prostate) Problématique: événements rares
+ caractérisation multiparamétrique phénotypique et fonctionnelle de sous populations cellulaires
Signatures cytokiniques Transfert de l’expérience
acquise dans la réponse spécifique anti-mycobacterium tuberculosis et anti-adenovirus
Cytométrie de flux multiparamétrique (3) Microparticules, thrombose et cancer (V Latger-
Cannard, Th Lecompte)
Standardization of platelet-derived microparticle counting using calibrated beads and a Cytomics FC500 routine flow cytometer: a first step towards multicenter studies? Robert S, Poncelet P, Lacroix R, Arnaud L,
Giraudo L, Hauchard A, Sampol J, Dignat-George F.
J Thromb Haemost. 2009 Jan;7(1):190-7. Epub 2008 Oct 18.
Cell Search Veridex® Combinaison de méthodes
Immunologiques spécifiques Séparation immunomagnétique Quantification en imagerie photonique automatisée
Standardisation et automatisation de la phase préparative
Très grande sensibilité (5 évts/tube de 7,5mL) soit #10-7 outil de choix pour l'étude des cellules
endothéliales circulantes en recherche clinique.
Validation antérieure en recherche clinique pour les cellules tumorales circulantes pour des études pronostiques.
Capacités d’isolement des cellules en vue d’études moléculaires complémentaires
Projets Cell Search Cancéropole et au-delà…
Cellules Tumorales Circulantes (CTCs) Sein (CIC Cancérologie CHU-CLCC E Luporsi –
GSK/NOVARTIS – INCA?) Poumon
AO Cancer 2009 Région Lorraine, Nancy Y Martinet, JM Vignaud comparaison ISET STIC Nice, Strasbourg P Oudet, M Beau-Faller
Prostate (Nancy Urologie: J Hubert, P Eschwege; Paris: S Loric LIBM) Validation clinique en réseau interrégional, national, voire
européen (IMI?) Cellules Endothéliales Circulantes (CECs)
Thérapies antiangiogéniques Inflammations: sepsis (CPRC S Gibot) Neuroectodermoses: Sclérose tubéreuse de Bourneville (J
Hubert, Necker)
Cell search CTCs (1) CERONC – Poumon (Y Martinet, E Quoix,
M Beau-Faller, P Oudet) Evaluation de l’intérêt clinique de la détection
des cellules tumorales circulantes dans le cancer bronchique métastatique
Avec ajout de marqueurs d’intérêt (X) Isolement des cellules en vue d’études
moléculaires CERONC – Prostate (P Eschwege, J
Hubert, D Peiffert) Evaluation préthérapeutique
Cell Search CECs (2) Projet Sepsis
CPRC CHU Nancy (Pr S Gibot, GCF) Quantification des CEC Isolement des CECs pour études
moléculaires Projet STB (Sclérose Tubéreuse de Bourneville)
Evaluation des CECs comme biomarqueurs d’angiogénèse pour l’évaluation et le suivi des tumeurs vasculaires rénales
Demande en cours ASTB, PHRC maladies rares (GCF, Pr J Hubert, Necker – D Joly, Lyon – O Rouvière)
Imagerie en fluxImage stream X AMNIS®
Le système AMNIS®, système d’imagerie en flux combinant cytométrie en flux et imagerie photonique
Observation directe, de la localisation précise, cellule par cellule, des marqueurs fluorescents utilisés pour identifier: membrane, organites intracellulaires, noyau.
Parmi les applications réalisables en simultané Marquages membranaires multiples et colocalisation de
marqueurs de surface Marquages nucléaires (FISH en suspension) Translocation nucléaire, apoptose Etudes fonctionnelles Coopérations cellulaires (synapse immunologique)
Image stream X AMNISApplications…. etc
Biologie cellulaire – Immunologie
Cancérologie
Cycle Cellulaire
Signalisation Cellulaire Analyse Morphologique
Mort cellulaire
Dommage de l’ADN
Interactions cellulaires
Plate-forme de recherche clinique en CYTOMIQUE
Biomarqueurs cellulaires innovants CPER: Innovations thérapeutiques et Technologies de
la Santé (ITTS-CIC-B)
Plateau technique au sein du Pôle Laboratoires du CHUN (Pr F Plenat; REDIF: Pr Th Lecompte; CIC-B Pr GC Faure) dédié à la recherche clinique Mutualisation des compétences Complémentarités humaines et technologiques Ouverture régionale et interrégionale
Ensemble type « Flow cytometry core facility » Cytométrie en flux multiparamétrique Cell Search Veridex Image Stream System (Amnis)
Charte et soumission IBiSA
R3
MONOMONOMONO
T CELLT CELLT CELL
MONOMONOMONO
T CELLT CELLT CELL
1e50 1e4-1e3 1e3 1e6
Intensity_A-750 CD3
1e5
1e6
1e4
-1e3
0
1e3
Inte
nsity
_PE
CD
14
9_BF 6_SSC 7_DAPI 2_FITC NFkB 3_PE CD14 4_PETR CD45 11_AF647 CD16 12_A750 CD3
325
718
969
1246
9_BF 6_SSC 7_DAPI 2_FITC NFkB 3_PE CD14 4_PETR CD45 11_AF647 CD16 12_A750 CD3
316
943
1142
3592
Monocytes
T cells
NF-kB translocation in whole blood subsets
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