Evaluation de l’activité diurétique de 5 plantes utilisées dans le traitement de l’hypertension artérielle en médecine

traditionnelle guinéenne

1FMPOS, Université de Bamako2FMPOS, Université de Conakry

Rokia Sanogo1, Drissa Diallo1 et Aliou Baldé2

Première Journée Thématique de CIDPHARMEF,

Ouagadougou 09 février 2010

Plan

1. Introduction

2. Objectifs

3. Matériel et méthodes

4. Résultats

5. Analyses

6. Conclusion et perspectives

1. Introduction (1)

L’hypertension artérielle (HTA) est un problème de santé publique

En Afrique Maladie cardiovasculaire la plus commune, 36 – 44% des hospitalisations; Mortalité générale de l’adulte, 3 – 7 %;Au Mali, fréquence hospitalière, 31%;En Guinée, prévalence de l’HTA, 43,6% en milieu urbain et 14,9% en milieu rural.

1. Introduction (2)

Large utilisation de la MT et des préparations à base de plantes.

Enquêtes ethnobotaniques en Guinée.

Recettes à base de plantes utilisées dans le traitement de l’HTA

Evaluations ethnotérapeutiques

Sélection de plantes dans la baisse de la pression artérielle.

Rôle des diurétiques dans la prise en charge de l’HTA.

2. Objectifs

Objectif général: Evaluer l’activité diurétique de 5 plantes utilisées dans le traitement de l’HTA en médecine traditionnelle guinéenne.

Objectifs spécifiques: Caractériser les constituants chimiques des extraits Mettre en évidence les constituants antiradicalaires des extraits Déterminer la diurèse de base chez les souris; Evaluer les activités diurétiques et salidiurétiques des extraits

3. Matériel et méthodes (1)

Plantes (Familles) Parties utilisées

Combretum micranthum (Combretaceae) Feuilles

Hymenocardia acida (Hymenocardiaceae) Feuilles

Paullinia pinnata (Sapindaceae) Feuilles

Sattaga bowel Feuilles

Uapaca togoensis  (Euphorbiaceae) Ecorce de tronc

Matériel végétal

3. Matériel et méthodes (2)

1. Combretum micranthum (CM)

Diurétique, Cholagogue et cholérétique

Matériel végétal

3. Matériel et méthodes (3)

2. Hymenocardia acida TULL (HA)

Les œdèmes, HTA, paludisme, maux de ventre, MST.

Matériel végétal

3. Matériel et méthodes (4)

3. Paullinia pinnata  (PP)Les racines, feuilles et graines : diurétiques, les plaies, abcès, paludisme, fièvre jaune, diarrhée et l’ictère. Les feuilles : cardiotoniques émétiques, laxatives et utilisées aussi contre la dysenterie, colique, dartre, carie dentaire, fièvre et vertiges.Les rameaux + feuilles : cardiotoniques, contre hypertension, rhumatisme et vomissement.

Matériel végétal

3. Matériel et méthodes (5)

4. Uapaca togoensis (UT)

Ecorces contre l’ictère,

Rameaux contre le furoncle et pour la fertilité féminine,

Feuilles contre la fatigue.

5. Sattaga bowel (SB)

Matériel végétal

3. Matériel et méthodes (6)

Préparation des Extraits hydroalcooliques à 20% :

1. 2 g de poudre + 20 ml (Ethanol à 30°et 70°)

2. Macération pendant 30 min,

3. Filtration.

CCM (10 extraits)

Activité diurétique (5 extraits EtOH 30°)

3. Matériel et méthodes (7)

Chromatographie sur couche mince (CCM) Support : Plaque de silice 60GF 254, d’épaisseur 0,25 mmDépôt : 10lSystème de solvants : 1.BAW = Butanol : Acide acétique : Eau (60 :15 :25)2.Acétate d’Ethyle : Méthanol : Eau  (100: 13,5 :4)Front de solvant : 10 cm.Observation: UV à 254 nm et à 366 nm. Révélateurs: Réactifs de Godin (Polyvalents), Anisaldéhyde (stérols et triterpènes, génines de saponosides), FeCl3 (substances polyphénoliques); DPPH: 1,1’diphényl-2 picryhydrazyle (Constituants antiradicalaires).Calcul du facteur de rétention (Rf).

3. Matériel et méthodes (8)

Extraits extemporanés: Infusés : Hymenocardia acida à 21% Sattaga bowel 15%Uapaca togoensis 15%Décoctés : Combretum micranthum à 10 % (CM1) Combretum micranthum (Hépatisane à 2%) (CM2) Paullinia pinnata à 21%.

Evaluation de activité diurétique et salidiurétique

3. Matériel et méthodes (9)

Matériel animal

Souris blanches mâle et femelle, de souche OF1,

Poids: 22 à 40 g.

10 lots de 5 souris.

Jeûne de 18h, accès libre à l’eau

3. Matériel et méthodes (10)

Cage métabolique, 3600M021 (Ugo Basile, Italie)

3. Matériel et méthodes (11)

Détermination de la diurèse de base Lot de 5 souris  Sans surcharge hydrique Avec surcharge hydrique (50ml/kg). Recueil de l’urine pendant 6h

3. Matériel et méthodes (12)

Détermination de l’activité diurétique (Colot 1972).

Principe : Mesure de l’excrétion urinaire chez les souris mise en surcharge saline.

Lots traités: Lot témoin, eau distillée (25 ml /Kg) Lot Furosémide (20 mg dans 25 ml/Kg) Lots extraits secs ETOH à 30° dose/kg dans 25 ml Extraits extemporanés liquides des 5 plantes (25 ml /Kg)

3. Matériel et méthodes (13)

Détermination de l’activité diurétique (Colot 1972)

Mode opératoire : 1. Administration des traitements: Extraits EtOH sec et aqueux extemporanés, Furosémide et Eau distillée. 2. Surcharge saline (solution de NaCl à 1,8 % à 50 ml/kg)3. Mise des 5 souris d’un même lot dans la cage métabolique4. Paramètres notés : Temps de la première miction Volume d’urine excrété par heure pendant 6h pH de l’urine Concentrations urinaires des ions sodium et potassium.

3. Matériel et méthodes (14)

Estimation de l’activité diurétique selon Kau et coll. 1984:

Excrétion urinaire volumétrique (E.U.V) = (VE/VA) x 100VA = volume administré et VE = volume excrété.

1. EUV < 80% = activité antidiurétique ; 2. EUV comprise entre 80 - 110% = Pas d’activité ; 3. EUV comprise entre 110 - 130% = Faible activité ; 4. EUV comprise entre 130 - 150% = Modeste activité;5. EUV > 150% = Importante activité.

Action diurétique selon Howlader et coll. 2006: EUV traité/ EUV Témoin NaCl,

3. Matériel et méthodes (15)

Détermination de l’activité salidiurétique (Colot 1972).Principe : Effet d’un diurétique sur la natriurie et la kaliurie chez les animaux mis

en surcharge hydrique.Lots traités: Lot témoin, eau distillée (25 ml /Kg) Extraits extemporanés liquides des plantes à activité diurétique (25 ml /Kg) Lot Furosémide (20 mg dans 25 ml/Kg)Mode opératoire : 1. Administration des traitements 2. Surcharge hydrique (Eau distillée à 50ml/kg). 3. Mise des 5 souris du même lot dans la cage métaboliqueParamètres notés :Volume d’urine pendant 4 heures.Détermination de la concentrations des ions sodium et potassium.

Activité salidiurétique a été exprimée comme rapport Na+ / K+.

4. Résultats (1) Constituants chimiques et antiradicalaires

Anisaldéhyde

FeCl3

Godin

DPPH

4. Résultats (2) Constituants chimiques et antiradicalaires

FeCl3

Godin

DPPH

1.Sattaga bowel  (SB) 2.Uapaga togoensis (UT)3.Hymenocardia acida (HA)4. Paullinia pinnata (PP)5.Combretum micranthum (CM)

4. Résultats (3)

Lots de 5 souris Volumes en 6h

Diurèse de base sans surcharge hydrique 1,60 à 3,75 ml

Diurèse de base avec surcharge hydrique 6,36 à 8,70 ml

Diurèse sous surcharge saline sans traitements 6,95 à 8,50 ml

Diurèse sous surcharge saline + traitements 7,75 à 16,70 ml

Tableau N°1: Comparaison des volumes urinaires

4. Résultats (4)

Traitements TPM en min

EUV en % (Estimation)

Témoin NaCl 46 106,50 (Pas d’activité)

CM 69 mg/kg 46 49,32 (Antidiurétique)

HA 53 mg/kg 40 94,78 (Pas d’activité)

PP 54 mg/kg 35 167,49 (Importante activité)

SB 41 mg/kg 44 137,32 (Modeste activité )

UT 43 mg/kg 34 95,61(Pas d’activité)

Activité diurétique des extraits EtOH 30°

4. Résultats (5)

Lots Volume d’excrétion urinaire dans le temps

Valeurs exprimées en ml

1h 2h 3h 4h 5h 6h

TEau 0,50 4,60 6,00 7,70 8,10 8,70

TNaCl 2,50 3,50 5,40 6,40 6,40 6,95

Dec.CM1ns 2,00 7,75 8,75 9,25 9,25 9,50

Dec.CM2* 2,60 9,10 10,56 11,88 11,95 11,95

Inf. HA* 1,20 6,40 8,76 11,75 12,25 13,50

Déc. PP ns 0,50 3,40 5,50 7,50 7,75 7,75

Inf SB ns 1,63 5,00 7,50 9,69 11,20 11,40

Infusé UT 3,15 6,00 10,63 11,75 12,10 13,50

Furos** 11,50 15,50 16,50 16,50 16,70 16,70

Tableau N°2: Effets diurétique des extraits extemporanés

4. Résultats (6)

4. Résultats (7)

HA: Effet de l'extrait extemporané sur l'excrétion urinaire

0

2

4

6

8

10

12

14

16

1 2 3 4 5 6

Temps en heure

Vo

lum

es

en

ml

HA

Témoin NaCl

Temoin eau

4. Résultats (8)

PP: Effet de l'extrait extemporané sur l'excrétion urinaire

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

1 2 3 4 5 6

Temps en heures

Vo

lum

e e

n m

l

PP

Témoin NaCl

Temoin eau

4. Résultats (9)

SB: Effet extrait extemporané sur l'excretion urinaire

0

2

4

6

8

10

12

1 2 3 4 5 6

Temps en heures

SB

Témoin NaCl

Temoin eau

Vo

lum

e e

n m

l

4. Résultats (10)

Furosémide 20mg/kg: Effet sur l'excrétion urinaire

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

1 2 3 4 5 6

Temps en heures

Vo

lum

e e

n m

l

Furosémide

Témoin NaCl

Temoin eau

4. Résultats (11)

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

EU

V e

n %

en

6h

TEau TNaCl SB CM1 CM2 HA UT1 UT2 PP Furos

Traitements

Activité diurétique des extraits extemporanés et du Furosémide

4. Résultats (12)

Lots traités avec 25 ml/kg

EUV % Action diurétique*

Témoin NaCl 107,58 ---

Infusé SB à 15% 171,42 1,58

CM 1 à 30% 106,98 0,99

CM 2 à 2% 133,81 1,24

HA à 21% 198,82 1,84

UT à 15% 155,35 1,44

PP à 21% 099,74 0,92

Furosémide 20mg/kg 199,52 1,85

4. Résultats (13)

--------------------------------------------------------------------------------Lots/doses TPM min pH Na+ K+ ---------------------------------------------------------------------------------Témoin eau 39 6,32 79 46Témoin NaCl 32 6,95 125 45Infusé SB 20 6,71 180 46Déc.CM 36 6,95 150 27Infusé HA 45 6,52 165 35Infusé UT 36 6,30 157 31Déc.té PP 42 6,20 160 36Furosémide 12 5,92 133 28-----------------------------------------------------------------------------------

4. Résultats (14)

Activité salidiurétique des extraits extemporanés de 4 plantes et du Furosémide

-----------------------------------------------------------------------------------------Lots /25 ml/kg VE/4h Na+ K+ Na+/K+-----------------------------------------------------------------------------------------Témoin eau 4,25 22 23 0,95Déc. CM à 2% 4,00 12 28 0,42Infusé HA à 21% 9,0 38 31 1,18Infusé SB à 15% 7,00 16 12 1,33Infusé UT à 15% 8,85 11 11 1,00Furosémide 20mg/kg 10,6 43 22 1,95------------------------------------------------------------------------------------------

5. Analyses (1)

1. Constituants anti-DPPH

Dans tous les extraits des EtOH 30° et 70°

2. Avec les extraits EtOH 30° sec aux doses testées

Pas d’activité diurétique, sauf avec Paullinia pinnata et Sattaga bowel.

3. Avec les extraits extemporanés : Elimination d’urine importante dans les 2 1ères heures pour Combretum micranthum. Activité diurétique importante de Sattaga bowel, de Hymenocardia acida  et de Uapaga togoensis.

5. Analyses (2)

Meilleure activité diurétique avec le décocté dilué de Combretum micranthum Premières mictions rapides avec Sattaga bowel Faible activité salidiurétique de Sattaga bowel et de Hymenocardia acida par rapport au Furosémide.

Résultats CM HA PP SB UT

1 Anti-DPPH 5 3 2 4 1

2. Activité diurétique

ETOH - - 5 2 -

Ext H2O 3 5 - 4 -

TPM 4 - - - -

Elim 2ème h 4 - - - -

Elimination NA+ 2 4 3 5 2

Comparable Furosémide - 4 - - -

3. Activité salidiurétique - 1 - 1 -

Scores 18 17 10 16 3

Récapitulatif

6. Conclusion et perspectives (1)

Conclusion Les extraits les plus actifs ont été:

Hydroalcooliques

1. Paullinia pinnata

2. Sattaga bowel.

Aqueux extemporanés

1. Combretum micranthum

2. Hymenocardia acida

3. Sattaga bowel

6. Conclusion et perspectives (2)

Perspectives Etudier la relation dose – effet des extraits extemporanés et hydroalcooliques; Procéder à un fractionnement bioguidé afin d’identifier les fractions riches en constituants anti-DPPH et à activités diurétiques et salidiurétiques.

6. Conclusion et perspectives (3)

Perspectives

Renforcement du plateau technique Cages métaboliques pH mètrePhotomètre de flamme Kits de dosage d’autres paramètres Plaques de CCM

7. Remerciements

Prof. Aliou Baldé, pour la confiance

Prof. Flabou Bougoudogo et Prof. Drissa Diallo pour l’accueil de l’étudiante au DMT de l’INRSP.

CIDPHARMEF, pour m’avoir permis de participer à cette journée.